黑皮质素4受体(mc4r)是异源三聚体g蛋白偶联受体，其通过活化第二信使系统包括腺苷酸环化酶来转导信号。在下丘脑核及其他神经元和非神经元组织中的表达、控制进食行为和能量稳态，mc4r整合由α-促黑色素细胞激素(α-msh)提供的激动剂(减少食欲)信号和由刺鼠相关肽(agpr)提供的拮抗剂(促进食欲)信号。来自mc4r的信号通过次级效应神经元调节进食行为。
技术实现要素：
本发明部分基于新型mc4r激动剂的发现。它们可用于例如治疗与肥胖相关的病症。肥胖病症包括例如多基因和单基因肥胖病症，包括病态肥胖。肥胖的治疗导致主要是由于脂肪量丧失的体重减轻，所述脂肪量丧失经常是由于与食欲减少相关的药物疗法以及能量消耗的增加或正常化。由于降低的血压和/或心率，并存病的改善可包括减少的胰岛素抵抗和心血管参数中的改善。
相应地，在一个方面，本发明的特征在于式i或ii的化合物(或其药学可接受的盐)。式i具有下述结构。
一般结构：
aaa、bbb＝选自cys、hcys、pen；能够建立二硫桥
或
能够建立内酰胺桥的glu、asp、lys、om、dpr、dbu
xxx＝asn、gln、ser、thr
yyy＝lys、arg、d-lys、d-arg
a1＝h、ac
a2＝oh、nh2
ac是酰基，例如乙酰基。
在实施例中，mc4r激动剂是下述结构(式ii)的化合物或其药学可接受的盐：
其中xxx是asn、gln、ser或thr，
其中a1是h或ac，
其中a2是oh或nh2，和
其中yyy是lys、arg、d-lys或d-arg。
在实施例中，mc4r激动剂选自下述化合物(或其药学可接受的盐)中的一种或多种：
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在另一个方面，本发明提供了在有此需要的受试者中引发来自黑皮质素受体的激动剂效应的方法，所述方法包括给所述受试者施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了通过施用如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来治疗状况或病症例如与肥胖相关的状况的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来治疗伴有重量增加的代谢疾病或医学状况例如肥胖、进食障碍和普拉德-威利综合征的方法。尽管不希望受理论束缚，但认为激动剂抗肥胖效应从黑皮质素受体引发。在前述方法的进一步方面，所治疗的疾病或状况是肥胖。在前述方法的再进一步方面，所治疗的疾病或状况是进食障碍。
在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。在一个优选的实施例中，本发明提供了通过经由施用有效量的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂或拮抗剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来降低食欲而不损害体重的方法。在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来降低食物消耗同时降低体重的方法。在另一个方面，本发明提供了用于增加或正常化能量消耗，例如促进和/或实现由于受试者中的脂肪量减少的重量减轻的方法。
在实施例中，所述状况或病症是肥胖，例如普拉德-威利综合征。在实施例中，施用该激动剂以降低有此需要的受试者的食物摄入或降低体重。
在一个实施例中，本文所述的方法包括：改进或改善与本文描述的病症相关的临床症状或指标，所述病症例如肥胖、ii型糖尿病、前驱糖尿病状况、6％以上的血红蛋白a1c(hb1ac)的血液水平、高胰岛素血症、高脂血症、胰岛素不敏感或葡萄糖耐受不良；延迟、抑制或预防肥胖和/或肥胖相关适应症的进展；或者部分或完全延迟、抑制或预防肥胖或肥胖相关适应症的发作或发展。
在实施例中，所述方法包括以单位剂量将激动剂施用于受试者，所述单位剂量适合于注射例如皮下注射、例如经口施用、栓剂介导的施用或经由通过皮肤吸收的化合物施用、鼻内施用或舌下施用。
在实施例中，日剂量为0.1mg至10mg。在实施例中，日剂量为约0.1mg至约7.5mg。在实施例中，日剂量为约0.1mg至约5mg。在实施例中，日剂量为约0.1mg至约2.5mg。在实施例中，日剂量为约0.1mg至约2mg。在实施例中，日剂量为约0.1mg至约1mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约10mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约7.5mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约5mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约2.5mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约2mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约1.5mg。在实施例中，日剂量为约0.2mg至约1mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约10mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约7.5mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约5mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约2.5mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约2mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约1.5mg。在实施例中，日剂量为约0.3mg至约1mg。在实施例中，日剂量为约0.25mg(例如0.25mg)至约0.5mg(例如0.5mg)。在实施例中，日剂量为约0.5mg(例如0.5mg)至约0.75mg(例如0.75mg)。在实施例中，日剂量为约0.25mg(例如0.25mg)。在实施例中，日剂量为约0.5mg(例如0.5mg)。在实施例中，日剂量为约0.75mg(例如0.75mg)至约1.25mg(1.25mg)。在实施例中，日剂量为约1mg(例如1mg)。在实施例中，日剂量为约1.25mg(例如1.25mg)至约2mg(例如2mg)。在实施例中，日剂量为约1.5mg(例如1.5mg)。在实施例中，日剂量为约2mg(例如2mg)。
在实施例中，该方法包括将激动剂以适合于注射例如皮下注射的单位剂量施用于受试者。
在实施例中，单位剂量包含约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2mg的激动剂。
在实施例中，单位剂量设置在递送装置例如注射器(例如预填充注射器)、可植入装置、无针皮下注射装置、输液泵(例如可植入输液泵)或渗透递送系统内。
在实施例中，激动剂例如通过皮下注射皮下施用。
在实施例中，激动剂例如通过经口给药或其他途径在例如0.1mg至100mg、1mg至500mg或10mg至1000mg的剂量范围内全身施用，以获得有效的治疗浓度。
在实施例中，激动剂例如通过经口给药或其他途径以剂量范围为0.1mg至100mg、1mg至500mg、10mg至1000mg的剂量范围形式全身施用，以获得有效的治疗浓度。
在实施例中，激动剂经过至少3周的时期每天施用，所述时期例如至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40周或更长时间，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更长时间，或至少1、2、3、4年或更长时间。
在实施例中，受试者是肥胖例如严重肥胖的。
在实施例中，受试者患有早发性严重肥胖。
在实施例中，受试者是摄食过量的。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有大于25kg/m2(例如≥25、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50kg/m2或更大)的体重指数(bmi)。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有大于35kg/m2(例如≥36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50kg/m2或更大)的体重指数(bmi)。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有大于40kg/m2(例如≥41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55kg/m2或更大)的体重指数(bmi)。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有大于45kg/m2(例如≥46、47、48、49、50、51、52、53、54、55kg/m2或更大)的体重指数(bmi)。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有高于第85-95百分位数的bmi。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者已失败了一种或多种先前疗法，例如锻炼、饮食、手术包括束带胃成形术(例如垂直束带胃成形术)或减肥手术、或行为疗法。
在实施例中，与施用激动剂之前相比，在施用激动剂后，受试者具有较低的体重。
在实施例中，与治疗前受试者的重量相比，激动剂的施用导致在治疗1周后约0.5kg至3kg、或治疗2周后约1kg至6kg、或治疗4周后约2kg至12kg、或治疗8周后约4kg至24kg、或治疗16周后约8kg至48kg的受试者重量减轻。
在实施例中，例如经过1-2周或更长的治疗时期、2-4周或更长的治疗时期、4-8周或更长的治疗时期、8-16周或更长的治疗时期、16-32周或更长的治疗时期、或者32-64周或更长的治疗时期，激动剂的施用导致以约0.5-1kg/周、1-2kg/周，例如约2kg/周的速率的受试者重量减轻。
在实施例中，例如在1-2周或更长的治疗、2-4周或更长的治疗、4-8周或更长的治疗、或8-16周或更长的治疗之后，与治疗前受试者的饥饿水平相比，激动剂的施用导致饥饿水平的降低(例如likert饥饿量表上的较低得分，例如低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10点的较低得分)，例如导致受试者的饥饿消除(例如likert饥饿量表上的0分)。
在实施例中，例如与对照静息能量消耗(ree)(例如治疗前受试者中的ree或例如具有类似治疗前bmi的受试者中的预定的ree，例如当表示为ree/kg瘦体重时)相比，例如经过24小时、一周或者30天或更长的时期，激动剂的施用导致受试者中的ree中没有可检测/显著的降低。
在实施例中，例如与对照静息能量消耗(ree)(例如治疗前受试者中的ree或与例如具有类似治疗前bmi的受试者中的预定的ree相比，当表示为ree/kg瘦体重时，例如在通过禁食已达到类似水平的体重减轻后)相比，例如经过24小时、一周或者30天或更长的时期，激动剂的施用导致受试者中的ree中的增加。
在实施例中，与对照(例如治疗前受试者的食物摄入)相比，激动剂的施用导致受试者的食物摄入减少，例如其中食物摄入是每日食物摄入或者经过24小时或一周的时期的食物摄入。
在实施例中，与对照(例如治疗前受试者的食物摄入或预定的食物摄入水平)相比，激动剂的施用导致至少100千卡路里，例如至少100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、1000千卡路里或更多的食物摄入减少，例如其中食物摄入是每日食物摄入或者经过24小时或一周的时期的食物摄入。
在实施例中，激动剂的施用导致至少5kcal/kg/天，例如5、10、20、30、40、50、60、70、80或90或更多kcal/kg/天的食物摄入减少。在实施例中，食物摄入的减少是相对于在基线时的食物摄入。在实施例中，例如对于约l岁的儿科患者，基线食物摄入为至少100kcal/kg/天。在实施例中，例如对于例如在青春晚期的儿科患者，基线食物摄入为至少40kcal/kg/天。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与对照(例如治疗前受试者的腰围)相比，激动剂的施用导致受试者的腰围减小。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与对照(例如治疗前受试者的腰围)相比，激动剂的施用导致至少2cm(例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10cm或更多)的受试者的腰围减小。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，激动剂的施用导致受试者的血压(例如舒张压和/或收缩压)没有可检测的增加。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，激动剂的施用导致受试者的血压(例如舒张压和/或收缩压)降低。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，激动剂的施用导致受试者的收缩压降低至少1-3mmhg(例如至少1、2、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7mmhg或更多)。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，激动剂的施用导致受试者的舒张压降低至少4mmhg(例如至少4、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10mmhg或更多)。
在实施例中，受试者是哺乳动物，例如人。
在一个实施例中，激动剂通过可植入装置、无针皮下注射装置、输液泵(例如可植入输液泵)或渗透递送系统递送。
在实施例中，激动剂例如通过皮下注射皮下施用。
在一个方面，本文提供了本文所述的激动剂的单位剂量，其中单位剂量含有0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5mg的激动剂。
在实施例中，单位剂量含有0.5mg激动剂。
在实施例中，单位剂量含有1.0mg激动剂。
在实施例中，单位剂量含有1.5mg激动剂。
在实施例中，单位剂量适合于注射，例如皮下注射。
在实施例中，单位剂量设置在适合于注射例如皮下注射的递送装置中。
在实施例中，单位剂量设置于适合于注射例如皮下注射的注射器或笔型注射器中。
根据本文所述的任何方法，在实施例中，改善的症状包括以下中的一种或多种：
(a)体重降低；
(b)腰围减少；
(c)饥饿水平的降低；
(d)食物摄入水平的降低；
(e)静息能量消耗的降低缺乏或增加；
(f)胰岛素抗性的降低；
(g)睡眠呼吸暂停的降低；或
(h)与代谢综合征相关的症状的减少。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管下文描述了合适的方法和材料，但在本发明的实践或测试中可使用与本文描述的方法和材料类似或等价的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献全文以引用的方式并入。另外，这些材料、方法和例子仅是说明性而不是限制性的。标题、副标题或者编号或标有字母的元素，例如(a)、(b)、(i)等仅呈现用于易于阅读。在本文件中标题或者编号或标有字母的元素的使用不要求步骤或元素按字母顺序执行，或者步骤或元素必须彼此离散。根据说明书和附图以及权利要求，本发明的其他特征、目的和优点将是显而易见的。
具体实施方式
定义
如本文使用的，“约”和“大约”一般意指鉴于测量的性质或精确度，关于所测量的数量的可接受的误差程度。示例性的误差程度在给定值或值的范围的20百分比(％)内，通常在10％内，并且更通常在5％内。
当术语在本文中使用时，“获得(acquire)”或“获得(acquiring)”指通过“直接获取”或“间接获取”物理实体、值或了解，得到物理实体的拥有，或者基因型或核酸或多肽的值(例如数值)或了解(例如基因型或核酸或多肽的序列或突变状态的了解)。“直接获取”意指执行物理过程(例如执行合成或分析方法)，以获得物理实体、值或了解。“间接获取”指从另一方或来源(例如直接获得物理实体、值或了解的第三方实验室)接收物理实体、值或了解。直接获取物理实体包括执行包括物理物质(例如原材料)中的物理变化的过程。示例性变化包括由两种或更多种原材料制备物理实体，剪切或碎裂物质，分离或纯化物质，将两种或更多种分离的实体组合成混合物，执行包括破坏或形成共价键或非共价键的化学反应。直接获取值或了解包括执行包括样品或另一种物质中的物理变化的过程。例子包括执行分析过程，其包括物质例如样品、分析物或试剂(在本文中有时称为“物理分析”)中的物理变化，执行分析方法，例如包括以下中的一种或多种的方法：从另一种物质中分离或纯化物质，例如分析物、或其片段或其他衍生物；将分析物、或其片段或其他衍生物与另一种物质例如缓冲剂、溶剂或反应物组合；或例如通过在分析物的第一个原子和第二个原子之间破坏或形成共价键或非共价键，改变分析物、或其片段或其他衍生物的结构；或例如通过在试剂的第一个原子和第二个原子之间破坏或形成共价键或非共价键，通过改变试剂、或其片段或其他衍生物的结构。
如本文使用的，术语“肥胖”指受试者具有在由疾病控制中心(centerfordiseasecontrol)定义为“肥胖”(参见例如url.cdc.gov/obesity/defining.html和www.cdc.gov/obesity/childhood/defining.html，于2015年8月19日末次访问)的范围内的体重指数(bmi)，或受试者具有如通过来自美国国立卫生研究院(nationalinstitutesofhealth)的“clinicalguidelinesontheidentification，evaluation，andtreatmentofoverweightandobesityinadults”限定的体重指数(bmi)。通过将例如以千克(kg)计的受试者重量除以例如以米(m)计的受试者身高的平方来获得bmi。例如，bmi为30kg/m2或更高的成年人视为肥胖。例如，bmi为25.0至29.9kg/m2的成年人视为超重；bmi为18.5至24.9kg/m2的成年人视为具有正常或健康重量范围；并且bmi小于18.5kg/m2的成年人视为体重过轻。例如，具有5英尺9英寸的身高与203磅或更多的体重的成年人视为肥胖。对于儿童和青少年，肥胖指具有处于相同年龄和性别的儿童和青少年的第85至第95百分位数或以上的bmi的受试者。
“严重肥胖的”受试者或患有“严重肥胖”的受试者指具有35kg/m2或更高，例如40kg/m2或更高的bmi的受试者。例如，严重肥胖的受试者超过理想(正常、健康)体重超过100％。
如本文使用的，例如，如在早发性肥胖中的“早发性”指在成年期之前，例如在儿童期过程中，例如当受试者小于18岁或更年幼时(例如18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1岁或更年幼，或在青春期过程中，例如当儿童小于12岁时或当儿童小于6岁时)，在受试者中发生的发作(例如病症，例如本文所述的病症，例如肥胖的一种或多种症状的首次发生)。
如本文使用的，术语“代谢综合征”指一起发生且增加冠状动脉疾病、中风和2型糖尿病风险的一组症状。根据美国心脏协会(americanheartassociation)和美国国家心脏、肺和血液研究所(nationalheart，lung，andbloodinstitute)，如果受试者具有下述体征中的三种或更多种，则存在代谢综合征，也称为综合症x)：
1)血压等于或高于130/85mmhg；
2)空腹血糖(葡萄糖)等于或高于100mg/dl；
3)大腰围(围绕腰的长度)：
-男性-40英寸或更多；
-女性-35英寸或更多；
4)低hdl胆固醇：
-男性-40mg/dl以下；
-女性-50mg/dl以下；
5)甘油三酯等于或高于150mg/dl。
代谢综合征可通过测试受试者的血压、血糖水平、hdl胆固醇水平、ldl胆固醇水平、总胆固醇水平和甘油三酯水平来诊断。
如本文使用的，术语“激动剂”指天然存在的或合成的任何化学化合物，其在与其靶例如mc4r相互作用(例如结合)时，将mc4r的信号传导活性上升到其基础水平以上。激动剂可为超级激动剂(即能够产生比对靶受体的内源性激动剂更大的最大应答，并且因此具有多于100％的功效的化合物)、完全激动剂(即在受体占据和活化后引发最大应答的化合物)、或部分激动剂(即可活化受体但无法引发受体系统的最大应答的化合物)。
如本文使用的，“治疗”包括实现下述结果中的一个或多个：例如与对照(例如治疗前的体重或预定的体重)相比，减少体重(如例如通过体重指数(bmi)和/或体重测量的)；例如与对照(例如治疗前的腰围或预定的腰围)相比，减少腰围；例如与对照(例如治疗前的饥饿水平或预定的饥饿水平)相比，减少饥饿水平；例如与对照(例如治疗前的静息能量消耗(ree)或预定的ree)相比，增加ree；例如与对照水平(例如治疗前或预定的食物摄入)相比，降低食物摄入；改进或改善与本文描述的病症相关的临床症状或指标，所述病症例如肥胖、ii型糖尿病、前驱糖尿病状况、6％以上的血红蛋白a1c(hb1ac)的血液水平、高胰岛素血症、高脂血症、胰岛素不敏感或葡萄糖耐受不良；延迟、抑制或预防肥胖和/或肥胖相关适应症的进展；或者部分或完全延迟、抑制或预防肥胖或肥胖相关适应症的发作或发展。延迟、抑制或预防肥胖的进展包括例如延迟、抑制或预防具有正常重量的受试者至肥胖的进展。在实施例中，对照是在通过本文描述的mc4r激动剂治疗之前测量的参数的值或预定的值。术语“治疗”还包括部分或完全减少冠状动脉疾病、中风和与代谢综合征相关的2型糖尿病的风险，以及改进或改善与代谢综合征相关的代谢综合征的临床症状或体征，例如上文列出的五种指标中的任何一种或多种。例如，术语“治疗”包括延迟、抑制或预防与代谢综合征相关的参数包括胰岛素抵抗、葡萄糖清除以及心血管疾病的参数包括心率和血压的进展。
如本文使用的，“抑制(inhibition)”或“抑制(inhibit)”可包括某个参数，例如本文所述的参数的减少。例如，参数例如活性的抑制可为由该术语包括的至少5％、10％、20％、30％、40％或更多。因此，抑制无需是100％。
“预防性治疗”指肥胖发作前的治疗，以预防、抑制或减少其发生。
如本文使用的，术语“受试者”指哺乳动物，例如人。受试者还可指需要兽医治疗的动物，例如伴侣动物(例如犬、猫等等)、农场动物(例如牛、绵羊、猪、马等等)和实验室动物(例如大鼠、小鼠、豚鼠等等)。
如本文使用的，术语“突变”可指与野生型序列相比的基因或其片段的改变的核酸序列。例如，突变可包括点突变、移码突变、错义突变、倒位、缺失、插入、截短、染色体易位。在实施例中，突变可导致编码非功能性蛋白质、具有减少活性的蛋白质(或部分功能性蛋白质)或具有改变的活性的蛋白质的基因或其片段。例如，“功能丧失”突变指导致编码非功能性蛋白质的基因或其片段的突变，与其野生型配对物相比，所述非功能性蛋白质具有基本上减少的活性(例如与其野生型配对物相比，非功能性蛋白质具有少于60％、50％、40％、30％、20％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少的活性)。例如，“功能的部分丧失”突变指导致编码部分功能性蛋白质的基因或其片段的突变，与其野生型配对物相比，所述部分功能性蛋白质具有减少的活性(例如部分功能性蛋白质具有其野生型配对物的小于50％且大于10％的活性)。
如本文使用的，“单位剂量”指适合作为用于待治疗受试者的单位剂量的物理离散单位。每个单位含有计算为与所需药物载体结合产生所需治疗效应的预定数量的活性化合物。
如本文使用的，“剂量”指治疗剂的数量或量。在一些实施例中，剂量是在单次施用中，例如在一个或多个单位剂量的单次注射、单次输注或单次施用中，施用于受试者的量。在实施例中，剂量是在多次施用中，例如一个或多个单位剂量的多次注射、多次输注或多次施用，施用于受试者的量。在其他实施例中，剂量可指在某个时间段(例如每天)对受试者施用的总量。在这样的例子中，剂量通常称为“日剂量”或根据数量/天的剂量。
如本文使用的，“饥饿”或“饥饿水平”指受试者的食欲、消耗食物的愿望或察觉到的对食物的需求。在实施例中，受试者的饥饿或饥饿水平可通过使用量表来量化，以获得饥饿得分。在实施例中，饥饿量表对更频繁(例如经常或总是)感觉到难以忍受的饥饿的受试者指定较高得分，并且对更不频繁(例如有时或从未)感觉到难以忍受的饥饿的受试者指定较低得分。参见例如，sibilia.psychologicoltopics19(2010)，2，341-354。例如，可使用指定从0到10点(0＝没有饥饿；10＝严重饥饿)的得分的likert饥饿量表。在其他例子中，可使用指定从1到4点的得分的likert饥饿量表，其中从未感觉到难以忍受的饥饿的受试者被指定1分，其中有时感觉到难以忍受的饥饿的受试者被指定2分，其中经常感觉到难以忍受的饥饿的受试者被指定3分，并且其中总是感觉到难以忍受的饥饿的受试者被指定4分。参见上文。
病症
根据本文所述的方法和组合物，在一些实施例中，mc4r激动剂(例如本文所述的mc4r激动剂)用于治疗病症，例如代谢病症，例如肥胖、摄食过量或代谢综合征。
普拉德威利综合症(pws)
普拉德威利综合征(pws)是一种罕见的遗传疾病，其患病率在美国的范围为大约8,000之一到25,000之一的患者。pws的标志是严重的摄食过量-驱动进食的最主要生理需求-导致严重肥胖和其他并发症。肥胖是pws患者最大的健康威胁之一，并且摄食过量损害pws患者独立生活的能力，需要昂贵而持续的监督来防止进食过量。如果没有监督，这些患者可能因噎塞、胃部破裂而过早死亡或死于由病态肥胖引起的并发症。目前，不存在经批准的与pws相关的肥胖和摄食过量的治疗。
pws的症状包括婴儿肌张力过低症，伴随在儿童期过程中的发育停滞、快速重量增加和进食过量，以及智力残疾、发育迟缓、身材矮小、性腺机能减退。pws的诊断标准在例如holm等人pediatrics91(1993)：398-402中描述。
结果
在实施例中，本文所述的方法导致一种或多种结果，包括受试者的重量(例如体重)减轻、饥饿水平的降低、能量消耗(例如静息能量消耗)没有可检测的减少、能量消耗(例如静息能量消耗)的增加、每日/每周/每月食物摄入的减少、腰围减小、血压没有可检测的升高或血压降低(例如相对于对照)。
在实施例中，对照是在施用mc4r激动剂(用mc4r激动剂治疗)之前受试者中参数的测量。在实施例中，对照是预定值，例如与受试者具有同样年龄和性别的平均肥胖人群中的参数的值；或在先前时间点(例如在例如对医生、医疗机构或实验室的先前就诊时)在受试者中测量的参数的值。
在实施例中，在用mc4r激动剂治疗开始后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间，在受试者中测量结果(例如给定参数的减少、增加、没有可检测的减少或没有可检测的增加)。在其他实施例中，在治疗过程中，经过一段时间(例如经过1-2周、2-4周、4-6周、6-8周、8-12周或12-16周或更长时间的时期)，在受试者中测量结果(例如给定参数的减少、增加、没有可检测的减少或没有可检测的增加)。
在实施例中，本文所述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的重量或预定的值，例如具有与未经受治疗干预的受试者同样年龄和性别的肥胖人群的平均重量，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的重量)相比，受试者的重量(例如体重)减轻。在实施例中，减少是治疗1周后约0.5至1kg至0.5至3kg、治疗2周后约1kg至6kg、治疗4周后约2kg至12kg、治疗8周后约4kg至24kg、或治疗16周后约8kg至48kg。在实施例中，例如经过1-2周或更长的治疗时期、2-4周或更长的治疗时期、4-8周或更长的治疗时期、8-16周的治疗时期、或者16-32周或更长的治疗时期，减少以约.5至2kg/周，例如约2kg/周的损失速率。
重量例如体重的测量可使用本领域的标准方法执行。
在实施例中，本文所述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的饥饿水平或预定的饥饿水平，例如具有与受试者同样年龄和性别的肥胖人群的平均饥饿水平，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的饥饿水平)相比，受试者中的饥饿水平的减少。在实施例中，本文描述的方法导致受试者中的饥饿的消除。
在实施例中，饥饿通过量表例如likert饥饿量表来测量，所述likert饥饿量表范围为0到10并且在本文中描述。在实施例中，本文描述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的饥饿水平或预定的饥饿水平，例如具有与受试者同样年龄和性别的肥胖人群的平均饥饿水平，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的饥饿水平)相比，受试者的饥饿得分的减少。在实施例中，本文所述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的饥饿水平或预定的饥饿水平，例如具有与受试者同样年龄和性别的肥胖人群的平均饥饿水平，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的饥饿水平)相比，likert饥饿量表上较低的得分，例如低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10点的较低得分。在实施例中，本文所述的方法导致在治疗后在likert饥饿量表上的0分。
在实施例中，在1-2周治疗或更长时间、2-4周治疗或更长时间、4-8周治疗或更长时间、或8-16周治疗或更长时间后，测量/观察到饥饿水平的减少。
ree是受试者的基础代谢率的量度，并且可使用方法例如chen等人j.clin.endocrinol.metab.100.4(2015)：1639-45中描述的那些进行测定。在实施例中，ree可通过在治疗后的某一时间(例如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4周或更长时间后)将受试者置于全室间接量热计(也称为代谢室)中来测定。在实施例中，ree在30分钟的测量时期内测量，并且在一些情况下，来自几个30分钟时期的ree值求平均值，以生成平均ree。在实施例中，ree可在10-12小时禁食期后、在热中性(例如约25℃)下测定，其中受试者是清醒的且没有心理或生理应激。在实施例中，ree以能量单位/单位时间(例如kcal/h或kcal/天)进行测量。在实施例中，ree相对于受试者的kg瘦体重(例如ree/kg瘦体重)进行测量，例如，如实例中所述。
在实施例中，经过每小时、每日(例如在24小时内)、每周(例如在7天内)、或每月(例如在30天内)时期，例如，如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后测量的，本文描述的方法导致与对照静息能量消耗(ree)(例如治疗前受试者中的ree或预定的ree，例如具有与受试者同样年龄和性别且就重量标准化的肥胖人群的平均ree，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的ree)相比，受试者中的能量消耗例如ree没有变化或没有减少。
在实施例中，经过每小时、每日(例如在24小时内)、每周(例如在7天内)、或每月(例如在30天内)时期，例如，如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后测量的，本文描述的方法导致与对照静息能量消耗(ree)(例如治疗前受试者中的ree或预定的ree，例如具有与受试者同样年龄和性别的肥胖人群的平均ree，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的ree)相比，受试者中的能量消耗例如ree/kg瘦体重没有可检测的变化或没有可检测的减少。
在实施例中，经过每小时、每日(例如在24小时内)、每周(例如在7天内)、或每月(例如在30天内)时期，例如，如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后测量的，本文描述的方法导致与对照静息能量消耗(ree)(例如治疗前受试者中的ree或预定的ree，例如具有与受试者同样年龄和性别且就重量标准化的肥胖人群的平均ree，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的ree)相比，受试者中的能量消耗例如ree的增加。
在实施例中，例如，如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后测量的，受试者中的ree增加为至少20kcal/天(例如至少20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150kcal/天或更多)。
在实施例中，例如，如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后测量的，与治疗前受试者中的ree相比，受试者中的ree增加为至少2％(例如至少2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％或更多)。
在实施例中，例如对于成年受试者，在用mc4r激动剂治疗后(例如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后)，受试者(例如成年受试者)中的ree为至少1800kcal/天(例如至少1800、1825、1850、1875、1900、1925、1950、1975、2000、2025、2050、2100、2150、2200、2250、2300、2400kcal/天或更多)。在实施例中，例如对于儿科患者，在用mc4r激动剂治疗后(例如在3、4、5、6、7天或1、2、3、4或更多周治疗后)，受试者(例如儿科受试者)中的ree为至少200kcal/天(例如至少200、225、250、275、300、325、350、375、400、450、500kcal/天或更多)。
在实施例中，例如当食物摄入作为每日食物摄入或者经过24小时或一周时期的食物摄入进行测量时，本文所述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的食物摄入或预定的食物摄入水平，例如平均肥胖人群的食物摄入，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的食物摄入)相比，受试者的食物摄入的减少。在实施例中，例如对于成年受试者，例如对于每日食物摄入或者经过24小时、或一周、或30天的时期或更长时间段的食物摄入，减少为至少100千卡路里，例如至少100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、1000千卡路里或更多。在实施例中，例如在约1岁的儿科受试者中，在用mc4r激动剂治疗后，平均食物摄入可从处于约100kcal/kg/天或以上的基线降低到约90、80、70、60、50、40、30、20或10kcal/kg/天或更低。在实施例中，例如在处于青春晚期的儿科受试者中，在用mc4r激动剂治疗后，平均食物摄入可从处于约40kcal/kg/天或以上的基线降低到约35、30、20或10kcal/kg/或更低。
食物摄入可通过例如，如rutishauser.pub.healthnutr.8.7a(2005)：1100-07中所述的标准方法来测定。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，本文所述的方法导致与对照(例如治疗前受试者的腰围或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的腰围)相比，受试者的腰围减小。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与对照(例如治疗前受试者的腰围或预定的腰围，例如具有同样年龄和性别的平均肥胖人群的腰围，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的腰围)相比，腰围减少在受试者(例如成年受试者)中为至少2cm(例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10cm或更多)。
在实施例中，使用标准方法测量腰围。在实施例中，腰围是围绕受试者的中间部分(例如围绕受试者的腹部)的最大周长。在其他实施例中，围绕天然腰部(例如在最低肋骨和髋骨顶部之间)、肚脐或在中间部分的最窄点处测量腰围。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，本文所述的方法导致与对照血压(例如治疗前受试者的血压或预定的血压，例如具有同样年龄和性别的平均肥胖人群的血压，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的血压)相比，受试者的血压(例如舒张压和/或收缩压)没有可检测的增加。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，本文所述的方法导致与对照血压(例如治疗前受试者的血压或预定的血压，例如具有同样年龄和性别的平均肥胖人群的血压，或在先前测量时例如在先前就诊时受试者的血压)相比，受试者的血压(例如舒张压和/或收缩压)的降低。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，血压例如收缩压的降低为至少1、2或3mmhg(例如至少3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7mmhg或更多)。
在实施例中，如在治疗开始后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或更长时间测量的，与治疗前受试者的血压相比，血压例如舒张压的降低为至少4mmhg(例如至少4、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10mmhg或更多)。
在实施例中，本文所述的方法不导致对心率或血压的不利效应。
受试者
根据本文所述的任何方法，在某些实施例中，例如在施用本文所述的激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在激动剂的第一次施用时，受试者是肥胖的。在实施例中，例如在施用本文所述的激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在激动剂的第一次施用时，受试者是严重肥胖的儿科或成年患者。在实施例中，例如在施用本文所述的激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在激动剂的第一次施用时，受试者是摄食过量的。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者(例如成年受试者)具有大于25kg/m2或30kg/m2(例如≥25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50kg/m2或更大)的体重指数(bmi)。
在实施例中，在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者(例如儿科受试者)具有高于85-95百分位数的体重指数(bmi)。
在实施例中，例如在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有至少约5kg，例如至少约5kg、10kg、20kg、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、200、205、210、215、220kg或更大的体重。在实施例中，例如在施用激动剂之前，例如在开出激动剂时，或在第一次施用时，受试者具有至少20kg、至少60kg或至少100kg的体重。
在实施例中，受试者是成年人，例如18岁或更大，例如18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、6l、62、63、64、65、66、67、68、69、70岁或更大。
在实施例中，受试者是儿科受试者，例如小于18岁或更年幼(例如18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1岁或更年幼。
在又一个方面，本发明提供了在有此需要的受试者中引发来自黑皮质素受体的激动剂效应的方法。该方法包括给受试者施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐。
在另一个方面，本发明提供了在有此需要的受试者中引发来自黑皮质素受体的激动剂效应的方法。该方法包括给受试者施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，其中所述化合物是选择性黑皮质素4受体激动剂。
在一个进一步的方面，本发明提供了在有此需要的受试者中引发来自黑皮质素受体的激动剂或拮抗剂效应的方法。该方法包括给受试者施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，其中所述化合物是选择性黑皮质素4受体激动剂。
在又一个方面，本发明提供了在有此需要的受试者中引发来自黑皮质素受体的激动剂效应的方法。该方法包括给受试者施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，其中所述化合物是选择性黑皮质素4受体激动剂。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗急性或慢性炎性疾病或医学状况如一般炎症、炎性肠病、脑炎症、败血症和脓毒性休克的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗具有自身免疫组分的疾病或医学状况如类风湿性关节炎、痛风性关节炎和多发性硬化的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗伴有重量增加的代谢疾病或医学状况如肥胖、进食障碍和普拉德-威利综合征的方法。在前述方法的一个进一步方面，所治疗的疾病或状况是肥胖。在前述方法的又一个进一步方面，所治疗的疾病或状况是特征在于摄食过量和/或肥胖的进食障碍。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。在一个实施例中，本发明提供了通过经由施用有效量的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。
在另一个实施例中，本发明提供了通过经由施用有效量的式(i)或(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。
在另一个实施例中，本发明提供了通过经由施用有效量的式(i)或(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。在另一个实施例中，本发明提供了通过经由施用有效量的式(i)或式ii的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来降低食物摄入、降低体重或其组合的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来降低食欲而不损害体重的方法。在另一个方面，本发明提供了通过施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐，来降低食物消耗同时降低体重的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗生殖或性医学状况如子宫内膜异位、子宫出血、性功能障碍、勃起功能障碍和女性中的性反应降低的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗起因于对生物的治疗或损害的疾病或医学状况的方法，所述疾病或医学状况例如器官移植排斥、局部缺血和再灌注损伤、受伤和脊髓损伤、以及由于医疗程序的重量减轻，所述医疗程序选自化学疗法、放射疗法、暂时或永久固定和透析。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗心血管疾病或医学状况如出血性休克、心源性休克、低血容量性休克、心血管病症和心源性恶病质的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗肺部疾病或医学状况如急性呼吸窘迫综合征、肺纤维化、慢性阻塞性肺病和哮喘的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来增强免疫耐受或治疗变态反应的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗皮肤病或医学状况如牛皮癣、红细胞生成性原卟啉病、皮肤色素沉着枯竭、痤疮和瘢痕疙瘩形成的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗行为或中枢神经系统或神经元疾病或医学状况如焦虑症、抑郁症、记忆功能障碍和神经性疼痛的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来治疗肾病或医学状况如肾病性恶病质和尿钠排泄的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来调节正常化或稳态活性如卵巢重量、胎盘发育、催乳素分泌、fsh分泌、宫内胎儿生长、分娩、精子发生、甲状腺素释放、醛固酮合成和释放、性腺发育、体温、血压、心率、血管紧张度、脑血流量、血糖水平、皮脂分泌、信息素分泌、动机、学习和行为、疼痛感知、神经保护和神经生长的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来调节正常化或稳态活性例如骨代谢、骨形成和骨发育的方法。
在另一个方面，本发明提供了通过经由施用有效量的如上文定义的式(i)或式(ii)的化合物或者其药学可接受的盐引发来自黑皮质素受体的激动剂效应，来抑制酒精消耗、用于减少酒精消耗、用于治疗酒精中毒或用于治疗酒精滥用的方法。在前述方法的一个进一步方面，该化合物是选择性黑皮质素4受体激动剂。
在一个进一步方面，本发明提供了治疗有效量的如上文定义的根据式(i)或式(ii)的黑皮质素4受体激动剂化合物或者其药学可接受的盐，用于制造可用于治疗选自下述的疾病和/或医学状况的药剂的用途：急性和慢性炎性疾病，例如一般炎症、炎性肠病、脑炎、败血症和脓毒性休克；具有自身免疫组分的疾病，例如类风湿性关节炎、痛风性关节炎和多发性硬化；伴有重量增加的代谢性疾病和医学状况，例如肥胖、进食障碍和普拉德-威利综合征；伴有重量减轻的代谢性疾病和医学状况，例如厌食症、贪食症、aids消瘦、恶病质、癌症性恶病质和虚弱老人中的消瘦；糖尿病、糖尿病相关状况和糖尿病并发症，例如视网膜病变；瘤性增生，例如皮肤癌和前列腺癌；生殖或性医学状况，例如妇女中的子宫内膜异位和子宫出血、性功能障碍、勃起功能障碍和女性中的性反应降低；起因于对生物的治疗或损害的疾病或医学状况，例如器官移植排斥、局部缺血和再灌注损伤、脊髓损伤和受伤、以及由化学疗法、放射疗法、暂时或永久固定或透析引起的重量减轻；心血管疾病或状况，例如出血性休克、心源性休克、低血容量性休克、心血管病症和心源性恶病质；肺疾病或状况，例如急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、哮喘和肺纤维化；增强免疫耐受和抵抗对免疫系统的攻击，例如与某些变态反应或器官移植排斥相关的那些；皮肤病和状况例如牛皮癣、皮肤色素沉着枯竭、痤疮、瘢痕疙瘩形成和皮肤癌的治疗；行为、中枢神经系统和神经元病症，例如焦虑症、抑郁症、记忆功能障碍和神经性疼痛；和肾状况或疾病，例如肾病性恶病质和尿钠排泄的治疗。
在一个进一步方面，本发明提供了治疗有效量的如上文定义的根据式(i)或式(ii)的黑皮质素4受体激动剂化合物或者其药学可接受的盐用于制造药剂的用途，所述药剂可用于调节正常化或稳态活性如卵巢重量、胎盘发育、催乳素分泌、fsh分泌、宫内胎儿生长、分娩、精子发生、性腺发育、甲状腺素释放、醛固酮合成和释放、体温、血压、心率、血管紧张度、脑血流量、血糖水平、皮脂分泌、信息素分泌、动机、学习和行为、疼痛感知、神经保护、神经生长、骨代谢、骨形成和骨发育。
应了解还考虑了解决利用黑皮质素受体的正常生理和病理生理过程两者的治疗干预。
式(i)或(ii)的化合物是关于黑皮质素受体(mc1-r、mc2-r、mc3-r、mc4-r和mc5-r)中的至少一种的配体，并且其选择测试了其在下文描述的体外测定中充当配体的能力。
在一些方面，本文还提供了评估受试者例如对本文所述的mc4r激动剂的可能响应性的方法。在一些实施例中，该方法包括获取关于受试者的基因型的信息。
在实施例中，具有缺陷例如遗传缺陷，例如突变的受试者的鉴定指示受试者可能响应(例如具有一种或多种症状中的改善)mc4r激动剂，例如此处描述的mc4r激动剂。在实施例中，症状中的改善可包括本文描述的结果。例如，症状中的改善可包括例如相对于对照的重量(例如体重)减轻、饥饿水平的减少、能量消耗(例如静息能量消耗)没有可检测的减少、能量消耗(例如静息能量消耗)的增加、每日/每周/每月食物摄入的减少或腰围的减少。
在实施例中，本文描述的方法还包括提供识别遗传缺陷的存在或不存在以及在一些情况下受试者的标识符的报道。在实施例中，报道提供关于可能的治疗选项的推荐、治疗选项的可能有效性和/或关于施用治疗选项(例如本文描述的mc4r激动剂)的推荐/说明。
mc4r激动剂
本发明提供了根据式i的mc4r激动剂：
一般结构：
aaa、bbb＝选自cys、hcys、pen；能够建立二硫桥
或
能够建立内酰胺桥的glu、asp、lys、orn、dpr、dbu
xxx＝asn、gln、ser、thr
yyy＝lys、arg、d-lys、d-arg
a1＝h、ac
a2＝oh、nh2
ac是酰基，例如乙酰基。
在实施例中，mc4r激动剂具有根据式ii的结构：
其中xxx是asn、gln、ser或thr，
其中a1是h或ac，
其中a2是oh或nh2，和
其中yyy是lys、arg、d-lys或d-arg。
在实施例中，mc4r激动剂选自下述化合物(或其药学可接受的盐)中的一种或多种：
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h-d-lys-(hcys-thr-d-phe-arg-trp-pen)-nh2(seqidno：65)。
本发明的示例性化合物的ec-50和选择性比率在下文提供：
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可用于实践本文所述方法的化合物或其药学可接受的盐或者包含本发明化合物或化合物的药学盐的组合物的施用可为连续的、每小时地、每天四次、每天三次、每天两次、每天一次、每隔天一次、每周两次、每周一次、每两周一次、每月一次或每两个月一次或更长时间或某个其他间歇给药方案。
化合物或者包含本发明化合物或化合物的药学盐的组合物的施用例子包括外周施用。外周施用的例子包括经口、皮下、腹膜内、肌内、静脉内、直肠、经皮或鼻内形式的施用。
如本文使用的，外周施用可包括化合物或包含本发明化合物的组合物的所有形式的施用，所述施用排除颅内施用。外周施用的例子包括但不限于经口、肠胃外(例如肌内、腹膜内、静脉内或皮下注射、延长释放、缓释植入物、贮库等)、鼻腔、阴道、直肠、舌下或局部施用途径，包括经皮贴剂应用等等。
用于定义肽的命名法是本领域中通常使用的命名法，其中在n末端处的氨基在左侧出现，而在c末端处的羧基在右侧出现。当氨基酸具有d和l异构体形式时，除非另有明确说明，否则其为所表示的氨基酸的l形式。
可用于实践本文所述方法的本发明化合物可具有一个或多个手性中心，并且因此以多种立体异构体形式存在。所有的立体异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。外消旋化合物可使用制备型hplc和具有手性固定相的柱分离，或者利用本领域技术人员已知的方法分辨，以产生各个对映异构体。另外，手性中间化合物可被分辨且用于制备本发明的手性化合物。
本文所述的化合物可以一种或多种互变异构体形式存在。所有互变异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。例如，对2-羟基吡啶基的请求保护也将覆盖其互变异构体形式α-吡啶酮基(α-pyridonyl)。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。另外，本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献以引用的方式全文并入。
除非另有说明，否则除了n末端氨基酸之外，本公开内容中氨基酸的所有缩写(例如ala)代表-nh-c(r)(r′)-co-的结构，其中r和r′各自独立地为氢或氨基酸的侧链(例如对于ala，r＝ch3和r′＝h)，或者r和r′可连接以形成环系统。
药物组合物/施用
根据本文所述的任何方法或组合物，在实施例中，本文提供的是本文所述的mc4r激动剂的单位剂量。在实施例中，单位剂量含有0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2mg的激动剂。在实施例中，单位剂量适合于注射，例如皮下注射。在实施例中，单位剂量设置在适合于注射，例如皮下注射的递送装置中。在实施例中，单位剂量设置在适合于注射例如皮下注射的注射器或笔型注射器中。示例性笔型注射器例如在以引用的方式并入本文的us8512297b2、us5688251a、us5820602a、us2014/0163526a1和us5226895a中描述。
在实施例中，本文还提供了包含本文所述的mc4r激动剂的药物组合物。在实施例中，药物组合物包括治疗有效量的本文所述的mc4r激动剂。激动剂的治疗有效量可根据因素而变，所述因素例如个体的疾病状态、年龄、性别和重量，以及激动剂在个体中引起所需应答的能力，例如改善至少一种病症参数，例如肥胖或摄食过量的参数，或改善病症例如肥胖、摄食过量或普拉德威利综合征(pws)的至少一种症状。在实施例中，治疗有效量也是其中组合物的任何毒性或有害效应被治疗有益效应超过的量。
在某些实施例中，激动剂可用保护其不会快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备这种制剂的许多方法是有专利权或一般已知的。参见例如sustainedandcontrolledreleasedrugdeliverysystems，j.r.robinson，编辑，marceldekker，inc.，newyork，1978。
在其他实施例中，可使用以引用的方式并入本文的wo2014/144842中描述的方法制备激动剂。在实施例中，激动剂在包含阴离子赋形剂(例如peg-羧酸、具有10个或更多个碳原子的脂肪酸和/或阴离子磷脂)的制剂中制备。在实施例中，阴离子磷脂在wo2014/144842中(例如在第7-9页处)描述。在一些实施例中，阴离子磷脂是任选与聚乙二醇(peg)缀合的1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dspe)，其结构是：
其中“n”的值随分子量而变。在实施例中，脂肪酸在wo2014/144842中(例如在第9页处)描述。在实施例中，peg-羧酸在wo2014/144842中(例如在第9-11页处)描述。在实施例中，激动剂与阴离子赋形剂的摩尔比范围为约1∶1至约1∶10。
在实施例中，激动剂与制剂的其他组分形成离子复合物，并且例如对激动剂提供期望的药代动力学概况(例如延长药物作用的持续时间和/或最小化不利效应)。在实施例中，制剂是缓释制剂。在实施例中，制剂提供了在施用后激动剂浓度中减少的波动。
本文所述的mc4r激动剂可通过各种方法施用于受试者，例如人受试者。在实施例中，施用途径是以下之一：静脉注射或输注、皮下注射或肌内注射。在实施例中，施用途径是皮下注射。
在实施例中，药物组合物(例如包含本文所述的mc4r激动剂)可与医疗装置一起施用。例如，包含激动剂的组合物可与无针皮下注射装置一起施用，所述无针皮下注射装置例如美国专利号5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4,596,556中公开的装置。植入物和模块的例子包括：美国专利号4,487,603，其公开了用于以受控速率分配药物的可植入式微输液泵；美国专利号4,486,194，其公开了用于通过皮肤施用药剂的治疗装置；美国专利号4,447,233，其公开了用于以精确输注速率递送药剂的药剂输液泵；美国专利号4,447,224，其公开了用于连续药物递送的可变流量可植入输注仪器；美国专利号4,439,196，其公开了具有多室区室的渗透药物递送系统；以及美国专利号4,475,196，其公开了渗透药物递送系统。其他这样的植入物、递送系统和模块也可使用。
在实施例中，连续施用可例如经由皮下泵指示。在实施例中，激动剂经由注射器(例如预填充注射器)、可植入装置、无针皮下注射装置、输液泵(例如可植入输液泵)或渗透递送系统施用。
在实施例中，激动剂以单位剂量例如皮下施用，所述单位剂量例如包含0.1-10mg，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10mg的激动剂。
在实施例中，激动剂以0.1-10mg，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10mg的激动剂的剂量在推注中例如皮下施用。
在实施例中，激动剂例如经由泵例如皮下泵连续施用。
在实施例中，激动剂例如单位剂量的激动剂设置于递送装置内，所述递送装置例如注射器(例如预填充注射器)、可植入装置、无针皮下注射装置、输液泵(例如可植入输液泵)或渗透递送系统。
在实施例中，激动剂的日剂量例如皮下施用于受试者。在实施例中，激动剂的日剂量为例如皮下施用的约0.1mg至约10mg，例如0.1-0.2、0.2-0.4、0.4-0.6、0.6-0.8、0.8-1、1-1.2、1.2-1.5、1.5-2、2-2.5、2.5-3、3-3.5、3.5-4、4-4.5、4.5-5、5-5.5、5.5-6、6-6.5、6.5-7、7-7.5、7.5-8、8-8.5、8.5-9、9-9.5、9.5-10mg。
在实施例中，经过至少3周，例如至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40周或更长时间，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月或更长时间，或至少1、2、3、4年或更长时间的时期，例如经由一次或多次施用来施用激动剂。在其中提供激动剂的多次施用的实施例中，任何两次施用之间的时间间隔为至少6小时，例如6小时、12小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、1周、2周、3周、4周或更长时间。在实施例中，任何两次施用之间的间隔为1天。
试剂盒
本文所述的mc4r激动剂可在试剂盒中提供。该试剂盒包括本文所述的mc4r激动剂以及任选的容器、药学可接受的载体和/或信息材料。信息材料可为涉及本文所述方法和/或激动剂用于本文所述方法的用途的描述性、指导性、上市或其他材料。
试剂盒的信息材料在其形式中不受限制。在一个实施例中，信息材料可包括关于激动剂生产、激动剂的物理性质、浓度、有效期、批次或生产场所信息等等的信息。在一个实施例中，信息材料涉及用于施用激动剂的方法，例如通过本文所述的施用途径和/或以本文所述的剂量和/或给药时间表。
在一个实施例中，信息材料可包括以执行本文所述方法的合适方式施用本文所述的激动剂的说明书，例如以合适的剂量、剂型或施用模式(例如本文所述的剂量、剂型或施用模式)。在另一个实施例中，信息材料可包括将激动剂施用于合适受试者(例如人，例如肥胖的人，例如严重肥胖的人)的说明书。
试剂盒的信息材料在其形式中不受限制。在许多情况下，信息材料例如说明书，以印刷品，例如印刷文字、图画和/或照片，例如标签或印刷单提供。然而，信息材料也可以其他格式提供，例如盲文、计算机可读材料、视频记录或音频记录。在另一个实施例中，试剂盒的信息材料是联系信息，例如实际地址、电子邮件地址、网站或电话号码，其中试剂盒的用户可获得关于本文描述的激动剂和/或其在本文描述的方法中的用途的实质性信息。信息材料也可以任何格式的组合提供。
除激动剂之外，试剂盒的组成还可包括其他成分，例如表面活性剂、冻干保护剂或稳定剂、抗氧化剂、抗菌剂、填充剂、螯合剂、惰性气体、张度剂和/或粘度剂、溶剂或缓冲剂、稳定剂、防腐剂、药学可接受的载体和/或用于治疗本文所述的状况或病症的第二试剂。可替代地，其他成分可包括在试剂盒中，但在与本文所述的激动剂不同的组合物或容器中。
在一些实施例中，试剂盒的组分贮存在例如具有橡胶或硅酮封闭物(例如聚丁二烯或聚异戊二烯封闭物)的密封小瓶中。在一些实施例中，试剂盒的组分贮存于惰性条件下(例如在氮或另一种惰性气体如氩下)。在一些实施例中，试剂盒的组分贮存于无水条件下(例如使用干燥剂)。在一些实施例中，试剂盒的组分贮存在遮光容器例如琥珀色小瓶中。
本文所述的激动剂可以任何形式，例如液体、冷冻、干燥或冻干形式提供。优选包括本文所述激动剂的组合物是基本上纯的和/或无菌的。当本文所述的激动剂在液体溶液中提供时，液体溶液优选为水溶液，其中无菌水溶液是优选的。在一个实施例中，激动剂与稀释剂或稀释指导一起供应。稀释剂可包括例如盐或盐水溶液，例如ph为6至9的氯化钠溶液、乳酸林格氏注射液、d5w或plasma-lyteainjectionph
该试剂盒可包括用于含有本文所述激动剂的组合物的一个或多个容器。在一些实施例中，试剂盒含有用于组合物和信息材料的分开的容器、分隔器或区室。例如，组合物可包含在瓶、小瓶、iv混合袋、iv输液装置、背负式装置或注射器(例如预填充注射器)中，并且信息材料可包含在塑料套筒或小包中。在其他实施例中，试剂盒的分开元件包含在单个未分开的容器内。例如，组合物包含在以标签形式的信息材料已与之附着的瓶、小瓶或注射器中。在实施例中，组合物包含在注射器装置例如笔型注射器中。试剂盒的容器可为气密、防水(例如对水分中的变化或蒸发不可渗透的)和/或不透光的。
实例
通过参考下述实验实例进一步详细描述本发明。这些实例提供仅用于说明的目的，且不预期是限制性的，除非另有说明。因此，本发明决不应解释为限制于下述实例，而是应解释为涵盖由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变化。
如果没有进一步的描述，则认为使用前文描述和下述说明性实例，本领域的普通技术人员可制备且利用本发明的化合物并且实践请求保护的方法。下述工作实例具体指出了本发明的各个方面，并且不解释为以任何方式限制本公开内容的剩余部分。
实例1：式(i和ii)的多肽的合成
式(i和ii)的多肽通过常规固相肽合成来制备。肽链从其c末端氨基酸衍生物偶联到已知适合于肽合成的适当选择的固体载体树脂上开始以逐步方式延伸。为了合成具有c末端酰胺官能团的肽，rink酰胺mbha树脂用作固体载体。为了合成具有c末端自由羧基官能团的肽，可利用树脂例如2-氯三苯甲基氯树脂、wang或merrifield树脂，其与fmoc-氨基酸形成酯键。这些酯连接fmoc-氨基酸-树脂类型中的大部分从各种来源商购可得，并且一般在可行时使用。
二硫化物环化肽的合成
使用fmoc化学在固相肽合成仪上装配二硫化物环肽酰胺的线性衍生物。将fmoc-rink酰胺树脂置于反应容器中并且用nmp溶胀。它然后用nmp中的20％哌啶处理15分钟，随后为nmp的3次洗涤。树脂就阳性kaiser测试(kaiser，e.，colescot，r.l.，bossinge，c.d.&cook，p.i.anal.biochem.，1990，34：595-598)进行测试。将它重悬浮于nmp并且与所需的第一c末端fmoc-氨基酸衍生物和hobt混合。通过添加hbtu试剂和dipea开始偶联反应。在混合2-3小时之后，偶联的完成通过对从反应混合物中取出的小等分试样的树脂的阴性kaiser测试加以证实。然后用nmp洗涤树脂三次。其后，如较早所述去除fmoc基团，并且如所述用第二个c末端fmoc-氨基酸衍生物重复整个循环。用每个进入的氨基酸序贯重复相同的反应循环。在具有n末端乙酰基的肽的情况下，将fmoc脱保护的肽树脂用乙酸酐和吡啶处理10分钟。对于kapton测试为测试阴性后的树脂用nmp、二氯甲烷洗涤并且在真空中干燥。fmoc-氨基酸衍生物用于合成这些肽。所使用的三官能氨基酸衍生物如下：fmoc-cys(trt)-oh、fmoc-trp(boc)-oh、fmoc-arg(pbf)-oh、fmoc-asn(trt)-oh、fmoc-gln(trt)-oh、fmoc-hcys(trt)-oh、fmoc-pen(trt)-oh、fmoc-glu(obut)-oh和fmoc-d-phe-oh。
为了从树脂切下肽以及使侧链官能团脱保护，将肽树脂放入2％tis/5％水/5％(w/v)dtt/88％tfa中。允许溶液混合3.5小时，然后过滤。将滤液与冷的无水乙醚混合。通过离心收集沉淀物。倾析溶剂并且将肽团块重悬浮于新鲜乙醚中。乙醚处理再重复两次。将肽在真空中干燥。将粗制的线性肽产物在5％乙酸中稀释至2mg/ml的浓度，并且伴随剧烈搅拌逐滴加入0.5m碘/甲醇，直至获得持久的浅黄色溶液。将该溶液再搅拌10分钟。通过在混合下加入1m硫代硫酸钠淬灭过量的碘，直至混合物致使无色。将环化的肽溶液冻干，并且通过使用反相c-18柱的制备型hplc纯化粗粉末。将纯化的产物级分合并且冻干。使用电喷雾电离技术通过质谱法分析肽并且鉴定以校正质量。
内酰胺环化肽的合成
环状内酰胺肽也通过标准固相肽合成方法合成。对于具有c末端dpr的肽，将fmoc-dpr(mtt)-bha树脂转移至固相肽合成仪反应器，并且对于具有c末端abu的肽，将fmoc-abu(mtt)-bha树脂转移至固相肽合成仪反应器。如上所述去除fmoc基团，并且通过标准偶联程序，将下一个受fmoc保护的氨基酸，例如fmoc-trp(boc)-oh偶联到树脂。通过重复偶联和脱保护程序，去除fmoc保护基团，并且按正确顺序各个加入剩余的氨基酸，直到氨基酸序列完成。对于谷氨酸或天冬氨酸偶联，采用fmoc-glu(opip)或fmoc-asp(opip)。然后根据较早对于肽的二硫化物系列所述的方法，将完全装配的肽在n末端处乙酰化。然后去除正交保护的侧链。例如，通过用二氯甲烷中的1％tfa的处理切割具有作为2-苯基异丙基(opip)酯的glu或作为4-甲基三苯甲基(mtt)的dpr的正交保护侧链的肽树脂。将脱保护的肽树脂悬浮于nmp中，并且用hbtu/dipea处理。在环化后(阴性kaiser测试)，将肽-树脂用dcm洗涤且干燥。在水和1，2-乙二硫醇(edt)的存在下，使用三氟乙酸(tfa)将环肽连同任何剩余的保护基团一起从树脂切割。在加入冷无水乙醚后通过沉淀收集产物并且通过离心收集。使用反相c-18柱通过反相hplc进行最终纯化。通过冻干收集纯化的肽并且使用电喷雾方法通过质谱法分析其质量。
本领域技术人员可修饰本文所述的式(i和ii)的合成多肽。
放射性配体结合测定：
用于确定从式(i或ii)的环肽的受体置换放射性标记的配体的结合常数(kd)或抑制浓度(ic50)的受体结合测定可通过本领域已知的任何手段进行。
作为例子，用于结合测定的细胞膜制备物由经转染以稳定表达hmc受体亚型1、3、4或5的cho-k1细胞制备。[125i](tyr2)-(nle4-d-phe7)-α-msh([125i]-ndp-α-msh结合的竞争性抑制在聚丙烯96孔板中进行。简言之，将如上所述制备的细胞膜(1-10μg蛋白质/孔)在以ph7.4的50mmtris-hcl中与渐增浓度的测试化合物和0.1-0.3nm[125i]-ndp-α-msh一起在37℃下温育大约120分钟，所述tris-hcl含有0.2％bsa、5mmmgcl2、1mmcacl2和0.1mg/ml杆菌肽。经由通过用0.1％(w/v)聚乙烯亚胺(pei)预浸渍的gf/c玻璃纤维滤板(
环状amp刺激测定
使用本领域已知的方法执行测定式(i和ii)多肽的环肽的激动剂或拮抗剂状态的功能测定。
电化学发光(ecl)测定
通过电化学发光(ecl)测定(mesoscalediscovery，gaithersburg，md，usa；下文称为“msd”)以剂量依赖性方式测定通过肽的细胞内环状amp(camp)水平的刺激。简言之，将稳定表达hmc受体亚型的cho-k1细胞悬浮于rmpi
camp测量测定
使人mc4-r转染的细胞在96孔板(铺大约250,000个细胞/孔)中生长至汇合。将细胞用0.2mm异丁基甲基黄嘌呤(ibmx)和分级浓度的肽或可替代地在20nmndp-msh的存在下的肽以一式三份集合进行处理。同样处理但仅使用20nmndp-msh的细胞充当在200μl体积中的阳性对照。还包括充当阴性对照的缓冲液空白。在37℃下温育1小时后，通过加入50μl细胞裂解缓冲液来裂解细胞。根据由试剂盒供应商规定的程序，使用商购可得的低phcamp测定试剂盒(amershambiosciences)定量在250μl该温育培养基中累积的总camp。显示在与作为阳性对照的α-msh相同或更高的范围内的camp累积的肽视为激动剂。绘制激动剂的数据并且进行曲线拟合以确定ec50值。显示与阴性对照(在不存在α-msh的情况下的缓冲液空白)在相同范围内的累积的肽在测试浓度下无效。当α-msh也存在于测定中时，如果存在camp中的抑制，则显示减弱累积的肽视为拮抗剂。可用hmc-1r、hmc-3r和hmc-5r细胞执行类似的测定。
经由β-半乳糖苷酶(β-gal)报道系统的camp累积测量
使用化学发光读出系统，其使用具有β-半乳糖苷酶(β-gal)的酶片段互补(efc)系统作为功能性报道系统。用于各种黑皮质素受体系统的这种测定系统是商购可得的(camphuntergpcr测定系统，discoverxcorp，fremont，ca)。该测定利用分成两个互补部分的β-gal酶；用于酶受体的ea和用于酶供体的ed。在该测定中，使与camp融合的ed部分与由细胞生成的camp竞争结合camp特异性抗体。然后添加ea以与任何未结合的ed-camp形成活性β-gal。然后这种活性酶转换化学发光底物，以生成在标准微板阅读器上记录的输出信号。
简言之，将10000个细胞/孔铺平板过夜，然后将每个孔(与10μl测定缓冲液一起温育的细胞)与在细胞测定缓冲液(5μl)中的4x系列浓度的测试化合物和camp抗体试剂(5μl)一起在37℃下温育30分钟。然后加入含有ed-camp偶联的酶片段和报道底物(emeraldii-galactonstar，5∶1)的细胞裂解缓冲液(20μl)，并且在室温下温育60分钟。接下来，加入20μleaβ-gal片段试剂。在室温下进一步温育120分钟后，通过板阅读器(envision)测量化学发光。
结构式i和ii的示例性多肽的ec-50数据显示于下文。
例子：ec50值和选择性。
等价方案
本文引用的每个和每一个专利、专利申请和出版物的公开内容在此以引用的方式全文并入本文。虽然本发明已参考具体方面得到公开，但显而易见，本领域的其他技术人员可设计出本发明的其他方面和变化，而不背离本发明的真实精神和范围。所附权利要求预期解释为包括所有这些方面和等价变化。