Ppar受体和egf受体特异性化合物及其盐以及它们在医药领域中的用途的制作方法

专利名称：Ppar受体和egf受体特异性化合物及其盐以及它们在医药领域中的用途的制作方法
PPAR受体和EGF受体特异性 化合物及其盐以及它们在医药领域中的用途发明领域本发明涉及PPAR受体和EGF受体特异性化合物及其盐以及它 们在医药领域中的用途。发明目的特别地，根据本发明的化合物及其盐可有利地用于预防和治疗表 达PPARy受体(过氧化物酶体增生物激活受体)和EGF受体(表皮生长 因子受体)的肿瘤，如食道肿瘤、胃肿瘤、胰腺肿瘤、结肠胂瘤、前列 腺肿瘤、乳腺肿瘤、子宫及附件肿瘤、肾肿瘤和肺肿瘤。此外，根据 本发明的化合物及其盐可用于治疗慢性炎性疾病，尤其是慢性肠疾病， 如克罗恩病和溃疡性直肠结肠炎。发明背景PPARy受体是核受体(约50个转录因子的组)，其控制多种基因 的表达，这些基因对于调节脂类代谢、胰岛素合成以及致癌作用和炎 症过考呈是重要的。(Bull AW， Arch Pathol Lab Med 2003; 127: 1121-1123) (Koeffler HP, Clin Cancer Res 2003; 9: 1-9) (Youssef J等 人，J Biomed Biotec 2004; 3: 156-166)。有各种与PPARy受体结合并改变其构象，产生激活作用的天然 和合成激动剂。天然和合成的配体描述于The Lancet 2002; 360:1410-1418。最近的研究已显示肺瘤细胞用PPARy受体的配体处理诱发细胞增生、细胞分化和编程性细胞死亡的降低，表明这类化合物作为预防致癌作用的潜在应用(Osawa E等人，Gastroenterology 2003; 124:361-367)。其它研究已显示在IBD动物模型中PPARy受体的配体(例如曲格 列酮)具有抗炎作用并抑制粘膜炎性反应(Tanaka T等人，Cancer Res 2001; 61: 2424-2428)。此外，最近已公开的证据表明，5-ASA(即IBD治疗中的金标准) 的肠内抗炎活性依赖于PPARy受体的结合及随后激活(Rousseaux C 等人，J Exp Med 2005; 201: 1205-1215)。在各种类型的肿瘤中具有酪氨酸激酶EGF活性的跨膜受体以被 活化的形式极高程度地表达(Mendelsohn J， Endocr Relat Cancer 2001; 8: 3-9) (Harari PM， Endocr Rdat Cancer 2004; 11: 689-708)。受体的过表达还与癌细胞潜在的转移能力相关。关于这一点，已 证明了 EGF在与细胞外基质相互作用的水平上促进与病变相关的各 种细胞类型的迁移和侵袭力(Brunton等，Oncogene 1997; 14: 283-293)。在实验室动物和人类中进行的许多研究已确立了 EGF受体的抑 制剂在控制增殖和肿瘤扩散中的功效(Mendelsohn J, Endocr Relat Cancer 2OOI5 8: 3-9) (Harari PM, Endocr Relat Cancer 2004; 11: 689-708)。毫无疑问，通过EGF受体激活激发的细胞内信号促进肿瘤细胞 的生长和存活，有助于病理状况的发展，并且这类信号在确定肿瘤细 胞扩散和移生至远端器官的能力中是必要的。(Mendelsohn J， Endocr Relat Cancer 200" 8: 3-9) (Kari C等人，Cancer Res 2003^ 63.. 1-5)。根据前述内容并且此外考虑到根据生物学观点，慢性炎性过程参 与致癌作用，很清楚存在对新化学实体的创新研究的实际需要，所述 新化学实体通过其对PPARy受体和EGF受体的互补作用能发挥化学预防、抗增殖和抗转移类型的抗炎和抗肿瘤作用。本发明提供了通过调节特异性受体如PPARy受体和EGF受体而 适合于预防和治疗癌症和慢性炎症的新的一类化合物。发明概述本发明涉及一 系列化合物的新颖的和创造性的医药和治疗用途。 就这些化合物中的任何一个都是未知的来说，本发明还涉及这些化合 物。本发明涉及包含通式(I)的化合物Ri和R2，可以相同或不同，选自-H、或者含有l-6个碳原子的直 链或支链烷基基团，或者一起形成含有5或6个原子的芳香族或脂肪 族环；Y和Z,可以相同或不同，选自-H、 -OH、 -COOH、 -OR3、 -CH(OR3)COOH,其中R3选自H、苯基、苄基、-CF3或画CF;jCF3、乙 烯基、烯丙基和含有l-6个碳原子的直链或支链烷基基团。本发明还涉及通式(Ia)的化合物亚群Ri和R;j，可以相同或不同，选自-H或者含有1-6个碳原子的直 链或支链烷基基团；Y和Z，可以相同或不同，选自-H、 -OH、 -COOH、 -OR3、 -CH(OR3)COOH，其中R3选自-H和含有1-6个碳原子的直链或支链 烷基基团。在本发明的一些实施方案中，Z和Y是不同的。在本发明的一些 实施方案中，Y或Z中至少一个以-COOH结尾。因此，在本发明的 一些实施方案中，Y或Z(以及在一些实施方案中Y或Z中至少一个， 和在一些实施方案中，Y或Z中仅有一个)是-COOH。在本发明的一其中其中些实施方案中，Y或Z (以及在一些实施方案中Y或Z中至少一个， 和在一些实施方案中，Y或Z中仅有一个)是-CH(OR3)COOH。本发明还涉及根据式(I)和(Ia)的化合物，除其中Y和Z,可以相 同或不同，选自誦H、 -COOH、 -OR3、 -CH(OR3)COOH以外。因此， 在本发明的一些实施方案中，Z或Y可以不是-OH。在本发明的这类 实施方案中，排除化合物10和11。在本发明的一些实施方案中，当Y是-H且Z是-CH(OH)COOH 时，基团NRiR2连接于3'位。因此，在本发明的一些实施方案中，排 除化合物21。本发明的其它实施方案中，当Z是-OCH3且Y是-COOH时，基 团NI^R2连接于4'位。因此，在本发明的一些实施方案中，排除化合 物22。在本发明的一些实施方案中，当Y是-H且Z是-CH(OCH3)COOH 时，基团NI^R2连接于4'位。因此，在本发明的一些实施方案中，排 除化合物35。特别地，上述含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团可选自 -CH3、 -CH2CH3、 CH(CH3)2、 -CH2CH2CH3、 -CnH2nl。 式(I)和式(Ia)化合物可选自 3-(3'-氨基苯基)2-羟基丙酸(化合物20) 2-(4-氨基苯基)2-曱氧基乙酸(化合物23) 2-(3-氨基苯基)2-乙氧基乙酸(化合物32)2- (4-氨基苯基)2-乙氧基乙酸(化合物33)3- (4'-氨基苯基)2-甲氧基丙酸(化合物34) 3-(4'-氨基苯基)2-乙氧基丙酸(化合物39) 3-(3'-氨基苯基)2-乙氧基丙酸(化合物40)。上述化合物名称也可写成如下的标准化学名称(该名称将在整篇 文章中使用)(±)-2-羟基-3-(3'-氨基苯基)丙酸(化合物20) (±)-2-甲氧基-2_(4'-氨基苯基)乙酸(化合物23)(±)-2-乙氧基-2-(3'-氨基苯基)乙酸(化合物32)(±)-2-乙氧基-2_(4'-氨基苯基)乙酸(化合物(±)-2-甲氧基-3-(4，-氨基苯基)丙酸(化合物34)(±)-2-乙氧基-3-(4，-氨基苯基)丙酸(化合物3"(±)_2_乙氧基-3-(3，-氨基苯基)丙酸(化合物40)。根据本发明的化合物可以有利地用于医药领域。因此，本发明涉 及包含一种或多种如上文所定义的作为有效成分的化合物与一种或多 种可药用赋形剂或助剂组合的药物组合物。此外，本发明涉及如上文所定义的化合物用于制备用于预防和治 疗表达PPARy受体和egf受体的肿瘤的药物产品的用途，所述肺瘤 例如食道胂瘤、胃肿瘤、胰腺肿瘤、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、乳腺肿 瘤、子宫及其附件肺瘤、肾肿瘤和肺肿瘤。此外，本发明涉及根据本发明的化合物用于制备用于治疗慢性炎 性疾病的药物产品的用途，所述炎性疾病例如克罗恩病和溃疡性直肠 结肠炎。特别地，可用于上述应用中的根据本发明的化合物，除已经描述 的以外，可以是如下化合物(R，s)-:2-羟基-;2-P-氨基苯基)乙酸(化合物10)(R，s)-2-羟基-2-(4-氨基苯基)乙酸(化合物11)(R，s)-2-羟基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物21)(R，s)-2-甲氧基-3-(3，-氨基苯基)丙酸(化合物35)(R,s)-2-曱氧基-3-(3-氨基苯基)丙酸(化合物34)。上述化合物名称也可写成如下的标准化学名称(该名称将在整篇 文章中使用)(±)-2-羟基-2-(3'-氨基苯基)乙酸(化合物10)(±)-2_羟基-2-(4'-氨基苯基)乙酸(化合物11)(±)-2-羟基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物21)(±)-2-甲氧基-3_(3，-氨基苯基)丙酸(化合物35)(±)-2-曱氧基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物34)。根据一个实施方案，根据下式(II),式(I)化合物的R3可以是H<formula>formula see original document page 13</formula>而Rp R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(III)，式(I)化合物的R3可以是<formula>formula see original document page 13</formula>而Rp R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(IV)，式(I)化合物的R3可以是 CH2CHh<formula>formula see original document page 13</formula>而Rn R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(V)，式(I)化合物的R3可以是 CH2CKh<formula>formula see original document page 13</formula>而R!、 R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(VI)，式(I)化合物的R3可以是<formula>formula see original document page 14</formula>(VI)而Rp R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(VI),式(I)化合物的R3可以是<formula>formula see original document page 14</formula> (VI)而Rp R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(VII)，式(I)化合物的R3可以是 CH2CH3<formula>formula see original document page 14</formula> (VII)而R,、 R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(VIII)，式(I)化合物的113可以是 CH2CH3NH2 (VIII)而Ri、 R2、 X和Y如上文所定义。根据另一个实施方案，根据下式(IX)，式(I)化合物的R3可以是-CH3而Ri、 R2、 X和Y如上文所定义。优选地，式(I)化合物可以选自(±)-2-羟基-3-(3，-氨基苯基)丙酸(化合物20)(±)-2-甲氧基-2-(4'-氨基苯基)乙酸(化合物23)(士)-2-乙氧基-2-(3'-氨基苯基)乙酸(化合物32)(±)-2-乙氧基-2-(4'-氨基苯基)乙酸(化合物33)(±)-2-甲氧基-3_(4，-氨基苯基)丙酸(化合物34)(±)-2-乙氧基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物3"(±)-2-乙氧基-3-(3'-氨基苯基)丙酸(化合物40)。根据本发明的化合物可有利地用于医药领域。因此，本发明涉及 包含一种或多种如上文所定义的作为有效成分的化合物与一种或多种 可药用赋形剂或助剂组合的药物组合物。此外，本发明涉及如上文所定义的化合物用于制备用于预防和治 疗表达PPARy受体和EGF受体的肺瘤的药物产品的用途，所述肿瘤 例如食道肿瘤、胃肿瘤、胰腺肺瘤、结肠肺瘤、前列腺肺瘤、乳腺肿 瘤、子宫及其附件肺瘤、肾肿瘤和肺肿瘤。此外，本发明涉及根据本发明的化合物用于制备用于治疗慢性炎性疾病的药物产品的用途，所述炎性疾病例如克罗恩病和溃疡性直肠 结肠炎。本发明还涉及治疗人类和/或哺乳动物(包括啮齿类动物、家 畜、家养宠物、小鼠、大鼠、仓鼠、兔、犬、猫、猪、羊、奶牛、马) 的方法。特别地，可用于上述应用中的根据本发明的化合物，除已经描述的以外，可以是如下化合物(±)-2-羟基-2-(3-氨基苯基)乙酸(化合物10)(士)-2-羟基-2-(4-氨基苯基)乙酸(化合物11)(±)-2-羟基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物21)(±)-2-甲氧基-3-(3'-氨基苯基)丙酸(化合物")(±)-2-甲氧基-3-(4，-氨基苯基)丙酸(化合物34)。所述化合物的使用不限于其以外消旋形式的使用。本发明延及任 何所述化合物以对映体纯的R或S形式的使用，或以其中一种对映体 超过另一种，以任何比例的任何混合物使用。实际上，完成的对接研究表明S对映体较R对映体更有活性，尽 管纯R对映体确实显示出活性。本发明的分子得自使用美沙拉秦作为基础的分子建模工作，并且 评价了所有化学上可行的变化，以便在计算机对接实验中得到最好的 分数(受体的亲和力和激活)。结果，认为显示与美沙拉秦功能和/或活 性相当的本发明化合物通过相似的生物学途径发挥作用。有人认为本 发明的分子中固有的与美沙拉秦相似的特性赋予了该分子与EGF途 径相关的相似活性。本文所提供的实施例是用于预测所述化合物在各种已经讨论的医 药领域中的用途的有用模型。因此，不管其作用机理，该模型提供了 有价值和有意义的结果。除上文提及的化合物以外，本发明还提供了以下化合物的用途2—10 2—11(R，S) 2-羟基-2-(3-氨基苯基) (R，S) 2-羟基-2-(4-氨基苯基)<formula>formula see original document page 17</formula>2—21 2_22(R，S) 2-羟基-3-(4'-氨基苯基) (R，S) 2-甲氧基-2-(3-氨基苯 丙酸 基)乙酸根据其优选的实施方案，特别参照附图中的图表，为了举例说明 的目的，现在将描述本发明，但不限于此。附图和表格简述表1:由指定化合物的分级剂量(0.5-10mM)抑制DLD-1细胞的百 分数。细胞在化合物存在或缺乏下培养，然后在48小时培养后通过比 色(BrdU)测定法评价细胞生长。

图1 显示了化合物20、 23、 32、 33、 34、 35、 39和40的结构。图2:经用化合物处理的PPARy的活性。图3-4:指定物质对人结肠癌细胞系(即HT29、 HT115和DLD1) 增殖的作用。细胞用增加性浓度的物质(0.5-10mM)处理48小时，使用 用于测量BrdU结合的比色测定法确定增殖。使用ELISA读出器在 450nm处测定光密度(OD)。数据表明3次单独实验的平均值士 SD。图5: (R)化合物34和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标 记和氢键合)。图6: (s)化合物34和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标记 和氢键合)。图7: (R)化合物35和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标 记和氢键合)。图8: (s)化合物35和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标记 和氢键合)。图9: (R)化合物39和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标 记和氢键合)。图10: (s)化合物39和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标 记和氢键合)。图11:美沙拉秦和PPARy受体的对接(显示了氨基酸残基标记和 氢键合)。图12:化合物39的合成图示和随后的拆分。 实施例1制备(±)-2-羟基-3-(3，氨基苯基)-丙酸(化合物20)的方法步骤1将3-硝基苯曱醛(45.3g, 0.3mol)、 n-乙酰甘氨酸(42.1g， (U6mo1) 和乙酸钠(32g, 0.39mol)与乙酸酐(142ml， 1.5mol)混合，并将得到的混合物在搅拌下加热至120。C保持6小时，得到深色溶液。然后，将混合物冷却至室温过夜，致形成沉淀的固体。将反应混合物倾入到冰水(130g)中，经过滤收集得到的悬浮固体。粗制固体产物(72g)用丙酮(80ml)洗涤，然后从热丙酮(320ml)重结晶，得到晶状固体，该晶状固体用50%乙醇水溶液洗涤，然后于40°C/40mmHg干燥，得到淡黄色针状的2-曱基-4-(3-硝基亚爷基)噁唑-5(411)-酮(49.(^, 78%)。 1H ,R (5, 250MHz, GDCI3) = 2,47 (3H, s), 7,15 (1H, s), 7乃3 (1H' dd, 8.2 & 7.6Hz〉, 8.27 (1H, d, 8.2Hz), 8.34 "H, d, 7.6Hz), 9.02 (1H, s》，步骤2将2-甲基-4-(3-硝基亚节基)噁唑-5(4H)-酮(52.0g， 0.224mol)与3M 盐酸(1.3L)混合，并将混悬液于100。C搅拌6小时。得到的混悬液于室 温搅拌过夜，然后经过滤收集悬浮固体，用水(2x40ml)洗涤，然后在 真空中干燥，得到2-羟基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(29.3g)。合并的滤液 和洗涤物用乙酸乙酯(4x0.5L)萃取，然后将合并的有机提取物经硫酸 钠干燥，并浓缩至干燥，得到另一批量的2-羟基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(12.0g)。 2-羟基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸的总收率为41.3g(88%)。，H NMR (5, 250MHz, DMSO陽似- 6.56 (1H, 3), 7力4 (1H， t, 8Hz), 8.0~8.1 (2H, m)' 8,78 (1H, s), 9邻(1H, brs), 12.80 (1H, brs). 步骤3将乙醇钠(l，8g， 26.4mmol)于0。C分批加入到搅拌的2-羟基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(5.25g， 25.0mmol)在甲醇(131 ml)中的溶液中，形成澄 清的淡黄色溶液。然后，将硼氢化钠(lg， 26.4mmol)分成两份小心加入， 该混合物于5-10。C搅拌30分钟。然后加入少量水以袢灭反应并破坏 任何过量的NaBH4。真空中除去曱醇，得到固体残余物，其和乙酸乙 酯和庚烷的5:2混合物(21ml)磨细，然后用3%甲醇水溶液进一步磨细。 经过滤收集得到的固体，并在真空中干燥，得到2-羟基-3-(3-硝基苯基) 丙酸(3.0g， 57%)。1H刚R (6, 2羅Hz, DMSOda) = 2,97 (1H, dd, 14 & 8.2Hz), 3.15 (1H, dd, 14 &4 2Hz), 4.23 (1H, dd, 8.2 & 4,2Hz》，7.58 (1H' t,阔，7.70 (1H, d, 8Hz), 8.0-8.15 (2H,nri).步骤4将2-羟基-3-(3-硝基苯基)丙酸(3.0g， 14.2mmol)、甲醇(129ml)和 5。/。活性炭上钯(600mg， 2 mol。/。)的混合物在10psi H2气氛中氢化1小 时。然后将该混合物经硅藻土过滤，滤饼用甲醇洗涤，于40'C在高真 空下浓缩滤液，得到泡沫状固体产物。将其溶解于水中，冷冻干燥该溶液，得到白色固体(士)-2-羟基-3-(3'-氨基苯基)-丙酸(2.6g， 100%)。NMR (5, 250MHz, DMSCKy = 2.6， (1H, dd, 13,6 & 8,3Hz), 2,81 (1h^ dd, 13.6 & 4.,, 4.09 (1H' dd, 8.25 & 4,6HJ, 6.35-6,43 (2H' m), 6.45 (1H, d, 1Hz), 6,90 (1H, t, 7.6Hz),实施例2制备(±)-2-甲氧基-2-(4'-氨基苯基)-乙酸(化合物23)的方法步骤l以保持温度低于-5。C的速率将氢氧化钾(6.72g， 0.12mol)在甲醇 (25ml)中的溶液加入到冷却的(-7。C) 4-乙酰氨基苯甲醛(24.5g， 0.15mol) 和氯仿(40.1g， 0.33moL)在DMF (100ml)中的溶液中。将混合物温热至 2°C ，历经5.5小时，然后将其加入1M HC1水溶液(200ml)和甲苯(200ml) 的混合物中，并搅拌过夜。经过滤收集得到的2-(4-乙酰氨基苯基)-三 氯曱醇(29g),并抽吸干燥。 步骤2将2-(4-乙酰氨基苯基)-三氯甲醇(14.0g， 49.5mmol)在甲醇(330ml) 中的溶液和氢氧化钾(13.8g， 250mmol)在曱醇(150ml)中的溶液合并， 并将该混合物加热至70-80。C保持3小时。冷却后，经过滤除去KC1 副产物，然后在真空中浓缩滤液，得到白色固体2-(4-乙酰氨基苯基)-2-曱氧基乙酸(14g)。步骤3将2-(4-乙酰氨基苯基)-2-曱氧基乙酸(7.1g， 31.8mmol)和肼一水合物(40ml)加热16小时，冷却并在真空中浓缩。得到的残余油状物经硅 胶柱色语法(洗脱剂，在CH2C12中的20-40%曱醇)纯化，得到2.6g (45%) 的(±)-2-甲氧基-2-(4'-氨基苯基)-乙酸。1H NMR (5, 250隨i CD3OD): 3.27 (3H, s)' 4.43 (1H' s), 6.66 (2H, d, 8,5Hz), 7.18 (2H, 实施例3制备(±)-2-乙氧基-2-(3'-氨基苯基)-乙酸(化合物32)的方法步骤l将3-硝基苯甲醛(25g， 165mmol)和氯仿(30ml， 375mmol)溶解于 DMF(100ml)中，并将溶液冷却至-5。C到-10。C之间。緩慢加入氩氧化 钾(7.5g， 134mmol)在甲醇(22.5ml)中的新鲜溶液以便维持内部温度 <-5°C。将反应在《5。C维持2小时，然后用冷却的盐酸水溶液(225ml) 在曱苯(225ml)中的混合物幹灭。将溶液在水浴中緩慢温热至室温过 夜。此后分离甲苯层，并将水层用甲苯进一步提取。合并的有机层用 水(2 x 225ml)、 5。/。碳酸氩钠溶液(225ml)和水(225ml)洗涂。将溶液干 燥(MgS04)，过滤并在真空中浓缩，得到橙色固体2-(3-硝基苯基)-三 氯甲醇(42g， 155mmo1， 94 %)。1H NMR (3, 250MHz, CDCI3): 3.7 (for, s, 1H), 5.4 (s' 1H), 7.6 (t' 1H, 8,0Hz)' 8,0 (d, 1H' 8.0Hz), 8,3 (d、 1H, 8,0Hz)> 8,5 (s' ，H). 步骤2将2-(3-硝基苯基)-三氯甲醇(20g， 74mmol)溶解于无水乙醇(74ml) 中，并緩慢加入氢氧化钾(20.7g， 369mmol)在无水乙醇(150ml)中的溶 液。将溶液回流加热4小时，冷却，然后在真空中浓缩。残余物用稀 盐酸酸化，并将产物在乙酸乙酯中萃取(x 3)。将合并的有机层干燥 (MgS04)，过滤并在真空中浓缩，得到棕色固体2-乙氧基-2-(3-硝基苯基)乙酸(6,4g， 28.4mmol， 38%)。1H NMR (5, 250MHz, C03OD〉 1.03H, 7,0Hz》，3.6 (m' 1H), 3.7 (m, 1H), 5.1 (s. 1H>， 7.7《t, 1K 7.8H2), 7.9 <d, 1H, 7.8Hz), 8.3 (A 1H, 7力Hz)' 8.4 (s. 1H), 步骤3将2-乙氧基-2-(3-硝基苯基)乙酸(6.化，28.411111101)溶解于无水乙醇 (500ml)中，加入5。/。钯碳(湿的)(1.5g)，将混合物于60psi氢化过夜。 混悬液经硅藻土过滤，浓缩滤液，得到棕色固体(±)-2-乙氧基-2-(3'-氨 基苯基)-乙酸(3.0g， 15,3mmo1， 54%)。1H NMR (6t 250MHz, CD3OD〉 1.2 (t, 3 Hi, J ^ 6,9 Hz>, 3.5 (m, 1 H), 3,6 <m， 1 H), 4.6 (s, 1 M), 6,7 (cf' 1 H' J = 7,S Hz), 6,9 (m, 2 H》,7.0 (t, 1 HJ - 7.6 Hz).实施例4制备(±)-2-乙氧基-2-(4，-氨基苯基)-乙酸(化合物33)的方法<formula>formula see original document page 22</formula>见"化合物23步骤l" 步骤2将2-(4-乙酰氨基苯基)-三氯甲醇(14.0g， 49.5mmol)在乙醇(400ml) 中的溶液和氢氧化軒(13.8g， 250mmol)在乙醇(150ml)中的溶液合并， 并将混合物于70-8(TC加热2.5小时。将混合物冷却，过滤，以除去 KC1副产物，并在真空中浓缩，得到黄色固体2-(4-乙酰氨基苯基)-2-乙氧基乙酸(l4g)。步骤3将2-(4-乙酰氨基苯基)-2-乙氧基乙酸(7.54g, 31.8mmol)和肼一水合物(40ml)加热16小时，冷却混合物，然后在真空中浓缩。然后将残余油状物经硅石柱色语法(在CH2Ch中的20-40%甲醇洗脱剂)纯化，得到白色泡沫状的(士)-2-乙氧基-2-(4'-氨基苯基)-乙酸(2.3g， 37%)。1H NMR (5, 250MH之,CD3OD): 1,18 (3H, t' 7,0Hz), 4-42 (1H, qd, 7.3, 2.4Hz), 4.56 (2H,s), 5,50 (1H, qd, 7,0' 2,1Hz)' 6.66 (2H, d' 8,7Hz〉， 7,20 (2H, d' 8.5Hz)实施例5制备(±)-2-甲氧基-3-(4'-氨基苯基)-丙酸(化合物34)的方法步骤l将4-硝基苯甲醛(53.7g， 0.356mol)、 N-乙酰甘氨酸(49.9g， 0.427mol) 和乙酸钠(37.9g, 0.463mol)与乙酸酐(168g， 1.78mol)混合，并将得到的 混合物在搅拌下加热至120。C保持6小时，得到深色混悬液。然后将 混合物冷却至室温过夜，使得形成沉淀固体。将反应混合物倾入到冰 水(150g)中，经过滤收集得到的悬浮固体。粗制固体产物用丙酮(100ml) 洗涤，然后从热丙酮(650ml)重结晶，得到晶状固体，该晶状固体用50% 乙醇水溶液洗涤，然后在真空中干燥，得到淡黄色针状的2-甲基-4-(4-硝基亚千基)嚙唑-5(4H)-酮(55.0g， 66%)。将结晶母液和洗涤物合并， 蒸发，得到固体残余物，其从丙酮重结晶，得到第二批量的2-甲基-4-(4-硝基亚节基)噁唑-5(4H)-酮(8g， 10%)。 2-甲基-4-(4-硝基亚千基)嚙唑 -5(4H)-酮的合并收率为63g (76%)。'H ,R (。， 250MHz, COCiy = 2.47 (3H' S>, 7,14 (1H, s), 8,28 (4H' m), 步骤2将2-甲基-4-(4-硝基亚千基)嚙唑-5(4H)-酮(63.0g, 0.272mol)和3M 盐酸(1.2L)混合，并将混悬液于100。C搅拌6小时。得到的混悬液在室 温下搅拌过夜，然后经过滤收集悬浮固体，用水(2x50ml)洗涤，然后 在真空中干燥，得到2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(46.6^81%)。将合 并的滤液和洗涤物用乙酸乙酯(4x0.5L)萃取，然后经硫酸钠干燥合并 的有机提取物，浓缩至干燥，得到另一批量的2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(0.化，1 %)。 2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸的总收率为47.4g (82%)。1H NMR〖5, 250MHz> 0MS0-d6> = 6.52《1H, s), 8,0, (2H' d， 8,5Hn)， 8.22 (2H, d, 8.5Hz).步骤3将2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(15g， 71.7mmo1)、碳酸铯(56g， 172.1 mmol)和硫酸二曱酯(14.2ml， 150.6mmol)在DMF (270ml)中的混 合物于室温下搅拌18小时。加入水(220ml)和乙酸乙酯(150ml)，并分 离各层。水层进一步用乙酸乙酯(4 x 100ml)萃取，然后将合并的有机 相用水(6 x 100ml)、盐水(2 x 120ml)洗涤，并浓缩至一半体积。加入 庚烷(70ml),混合物浓缩至200ml体积。经过滤收集得到的沉淀固体， 用庚烷(2 x 100ml)洗涤，在滤器上抽吸干燥，得到含有痕量庚烷的黄 褐色固体2-甲氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸甲酯(9.2g，收率54%)。 !H NMR (3， 250MHz, DMSO-d6): 3.82 (s， 3-H, OMe)， 3.84 (s， 3國H, OMe)， 7.02 (s， 1國H, CH=)， 8.04 (d， 2-H, CH芳香族)，8.26 (d， 2-H， CH 芳香族)。步骤4将2-曱氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸甲酯(7.8g， 32.8mmol)溶解于 IMS (156ml)中。加入NaOH (1.44g, 36.1mmol)在水(78ml)中的溶液， 并将该混合物在室温(18。C)下搅拌18小时。反应混合物用1M HC1 (120ml)酸化，并将得到的沉淀固体经过滤收集，用水(2xl00ml)洗涤， 在滤器上部分抽吸干燥30分钟，随后经真空干燥箱于18t:干燥18小 时。由此得到2-甲氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸为含有一些结晶水的黄 褐色固体(6.7g, 91%)。NMR (6， 250MHz， DMSO-d6): 3.83 (s， 3-H, OMe), 6.97 (s， 1國H， CH=), 8.02 (d， 2-H， CH芳香族)，8.25 (d， 2-H， CH芳香族)。步骤5将2-甲氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(6.7g， 30mmol)置于曱醇(700ml) 中，并加入THF (300ml)和10。/。钯碳(湿基)(0.67g)。将混合物于45psi 氢化43分钟，随后每隔1小时重复再填充至45-48psi，持续3小时，最后在48ps持续18小时。将得到的混悬液经GF/F滤纸过滤，滤渣 用MeOH (200ml)洗涤。将滤液浓缩至灰白色固体。于20'C将固体在 IMS(75ml)中浆化1.5小时，过滤，并用IMS/庚烷(1:2) (20ml)洗涤， 在滤器上干燥1小时，得到灰白色固体(±)-2-甲氧基-3-(4，-氨基苯基)-丙酸(5.1g，收率88%)。画R (3， 250MHz， DMSO-d6): 2.74 (m， 2-H)， 3.23 (s， 3-H， CH3)， 3.80 (dd， 1画H， CH)， 6.47 (d， 2-H，芳香族)，6.87 (d， 2画H,芳香族)。 实施例6制备(±)-2-甲氧基-3-(3'-氨基苯基)-丙酸(化合物35)的方法步骤1和2 按照化合物20 步骤3将疏酸二曱酯(13.23g， 105mmol)加入到搅拌的2-幾基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(10.5g， 50.0mmol)和碳酸铯(39.1g， 120mmol)在DMF(105ml)中混合物中，形成澄清的淡黄色混合物，将其在室温下搅拌过夜。将得到的深红色混悬液在真空中浓缩，并将残余物分配于水(100ml)和二氯甲烷(150ml)之间。分离有机层，进一步用水(2 x 100ml)洗涤，经硫酸钠干燥并经硅胶过滤。将得到的黄色溶液在真空中蒸发至干燥，得到黄色固体2-甲氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸曱酯(8.1g, 67%)。1H NMR (5, 250MHz, DMSOde) 3,81 (3H, s》，3.83 (3H, S》，7.08 (1H, s)T 7'71 (1H, dd，7<9 & 8,2Hz;), 8.10-8,22 (2H, m), 8.66 (1H, s), 步骤4将氢氧化钾(2.0g， 35.9mol)在水(25ml)中的溶液加入到搅拌的2-甲氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸曱酯(8.lg， 3丄:Zmmol)在甲醇(150ml)中 的溶液中，得到的混合物于室温下搅拌过夜。加入更多量的在水(10ml) 中的KOH (0.5g， 8.9mmol)，并将该混合物加热至SO。C保持1小时。 然后将甲醇在真空中蒸发，残余物用水(200ml)稀释。溶液用二氯曱烷 (2 x 100ml)洗涤，经珪藻土垫过滤，然后通过加入3MHCl酸化至pH 3。将混合物冷藏18小时，然后经过滤收集沉淀的固体，用水洗涤(3x 30ml)，并在真空中于4(TC干燥，得到黄色固体2-甲氧基-3-(3-硝基苯 基)丙烯酸(6.4g， 84%)。1H MMR (。， 2S0MHz, DMSO-de〉 ^ 3,82 (3Ht s>, 7,02 (1H, 3》，7.70 (1H, t, 7,93Hz>, 8,10-8.22飘m), 8.65 (1H, s). 步骤5将2-甲氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(3.4g, 15.25mmo1)、甲醇(340ml) 和5。/。活性炭上钯(1.36g， 4 mol。/。)的混合物于12-36psi 112气氛下氢化 1.5小时。然后，经硅藻土过滤混合物，滤饼用甲醇洗涤，滤液于40。C 在真空下浓缩，得到泡沫状固体产物。将其溶解于水(100ml)中，并将 溶液冷冻干燥，得到灰白色固体(±)-2-曱氧基-3-(3'-氨基苯基)-丙酸 (2.6g， 100%)。,R (5, 230,2, DMSO-de) = 2.68 (1H, dd, 13.9 & 8H2)r 2.80 (1H, dd, 13.9 & 4.6他》，3,21 (3H, s), 3,84 (1H, dd, 8,25 & 4,6Hz), 6.36~6.44 (3H,时，g.91 (1H, dd, 7-6H4'实施例7制备(±)-2-乙氧基-3-(4'-氨基苯基)-丙酸(化合物39)的方法。对映 体的拆分(图12)。N02 NH2按照化合物34步骤1和2。 步骤3将2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(20g， 95.6mmol)悬浮于DMF (200ml)中。加入Cs2C03 (74.9g， 229.9mmol)和硫酸二乙酯(26.3ml， 201mmo1)，并观察到溶解。于18。C搅拌18小时后，加入水(350ml) 和乙酸乙酯(250ml)，并分离各层。水层进一步用乙酸乙酯(5 x 200ml) 萃取，然后将合并的有机相用水(2 x 200ml)、盐水(2 x 200ml)洗涤， 经硫酸镁干燥。将有机层浓缩至千燥，得到含有3.6%质量的DMF的 橙色固体2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-丙烯酸乙酯(27.6g潮湿的，收率 >100%)。^匪R (S， 250MHz， DMSO-d6): 1.32 (t, 6國H, 2 x CH2CH3)， 4.13 (q， 2-H， CH2CH3)， 4.30 (q， 2-H, CH2CH3)， 6.99 (s, l-H， CH-)， 8.06 (d， 2画H， CH芳香族)，8,26 (d， 2-H， CH芳香族)。 步骤4含有3.6wt% DMF的2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸乙酯(校正 26.07g， 98.3mmol)溶解于IMS (500ml)中，并加入NaOH (1.44g， 36.1 mmol)在水(260ml)中的溶液。得到的混合物在室温下搅拌18小时，然 后用lMHCl(120ml)酸化，经过滤收集得到的固体，用水(2xl00ml) 洗涤，并在滤器上抽吸干燥30分钟，随后经真空干燥箱于18。C干燥 18小时。由此得到2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸为含有结晶水的橙 色固体(18.4g， 79%)。^醒R (8， 250MHz， DMSO-d6): 1.31 (t， 3-H， Me), 4.11 (q， 2-H， CH2)， 6.98 (s， l-H， CH=)， 8.05 (d， 2-H， CH芳香族)，8.25 (d， 2誦H， CH芳香族)。步骤5将2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(18.4g潮湿的，约77.5mmol) 溶解于MeOH (I.IL)中，并加入10%钯碳(湿基)(1.84g)。将混合物于 12psi氢化10分钟，随后每隔10-20分钟重复再填充至20-28psi，持续5小时，然后至46psi持续18小时。将混合物通过GF/F纸过滤， 并将残余物在IMS (100ml)中浆化，过滤，用庚烷(100ml)洗涤，并在 滤器上抽吸干燥。由此得到灰白色固体(±)-2-乙氧基-3-(4，-氨基苯基)-丙酸(11.2g， 69%)。1H MMR (6, 250MHg, DMSOds》1.03 (t, 3-K CH3>, 2.73 (m, 2-H,)' 3,29 (m, 1H》，3>4S (m, 1H), 3.80 (ck), 、H》，6,50 (d, 2-H), 6—87 (d' 2-H〉. 实施例8制备(±)-2-乙氧基-3-(3，-氨基苯基)-丙酸(化合物40)的方法步骤1和2按照化合物20步骤1和2。 步骤3将硫酸二乙酯(12g, 78.2mmol)加入到搅拌的2-羟基-3-(3-硝基苯基) 丙烯酸(6.1g, 30.0mmol)和碳酸铯(29.3g，卯mmol)在DMF (61ml)中的 混合物中，形成澄清的淡黄色混合物，将其于室温下搅拌过夜。将得 到的深红色混悬液加热至50。C保持4小时，然后在真空中浓缩，并将 残余物分配于水(100ml)和二氯曱烷(150ml)之间。分离有机层，再用水 (2 x 100ml)洗涤，经硫酸钠干燥，并通过硅胶垫过滤。在真空中将得 到的黄色溶液蒸发至干燥，得到黄色固体2-乙氧基-3-(3-硝基苯基)丙 烯酸乙酯(5.6g， 72%)。 步骤4将氢氧化钾(1.3g， 22.2mol)在水(20ml)中的溶液加入搅拌的2-乙 氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸乙酯(5.6g， 21，1 mmol)在甲醇(100ml)中的 溶液中，并将得到的混合物加热至回流过夜。然后，在真空中蒸发甲醇，残余物用水(150ml)稀释。溶液用二氯甲烷(2 x 80ml)洗涤，经硅 藻土垫过滤，然后通过加入3M HC1酸化至pH 3。将混合物冷藏18 小时，然后经过滤收集沉淀的固体，用水(3x30ml)洗涤，并于40。C在 真空中千燥。得到的固体从乙酸乙酯和庚烷重结晶，得到黄色固体的2-乙氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(3.0&， 61 %)。，H薩R 〔5, 2,Hz, DMSO"de) - 1.34 (3HI, t, 7Hz), 4,10 (2H, q, 7Hz), 7.CW (1H. s),7,69 (1H, t, 7;3Hz》，8,07-8.22 (2H, m), 8,80 (，H, m)t 13.25 (1H, brs>, 步骤5将2-乙氧基-3-(3-硝基苯基)丙烯酸(3.06g, 12.9mmo1)、甲醇(150ml) 和5。/。活性炭上把(0.60g， 2mol。/。)的混合物于12-30psi H2气氛下氩化2 小时。然后，经硅藻土过滤混合物，滤饼用甲醇洗涂，并于40。C在真 空下浓缩滤液，得到泡沫状固体产物。将其溶解于水(100ml)中，并将 该溶液冷冻干燥，得到灰白色固体(±)-2-乙氧基-3-(3'-氨基苯基)-丙酸 (2.7g， 100%)。1H NMR (5, 250MHz, DMSO"d6) - 1,07《3H, t, 7Hz), 2.6-2.85 (2H, m〉， 3,20-3,38 (1H, m)， 3.40 3,60 (1H' m), 3.92 (1H, dd, 5 & 7,7Hz),沃3>6*45 (3H國m), 7,01 (1H, t, 7^Hz),实施例9分子建模使用SYBYL软件6.9.1版(Tripos Associates Inc， St Louis， MO) 在Silicon Graphics工作站上运行，进行分子建模研究。由标准碎片 库建立了 5-ASA的两性离子形式的三维^f莫型，随后使用Tripos力场(3) 优化其几何形状。由于化合物的pKa仍是未知的，所以SPARC在线 计算器用于测定在生理 pH (7.4)时发生的种类 (http:〃ibmlc2.chem.uga.edu/spare/index.cfm)。离子4匕4匕合物的三维才莫 型由标准碎片库建立，随后使用Tripos力场(3)，包括由Gasteiger和 Hiickel原子电荷计算的静电项，优化其几何形状。Maximin2程序中 可用的Powell方法用于使能量最小化，直至梯度值小于0.001 kcal/mol丄人PPARy配体结合域的结构得自其与在RCSB蛋白数据库(1171) 中可用的泰沙格列赛(tesaglitazar (AZ 242))络合的X-射线晶体结构(4,5)。化合物进入受体活性位点的柔性对接使用GOLD软件进行(6)。 最稳定的对接模型根据由GoldScore (6)和X-Score评分机能(7)所预测 的评分最高的构象选择。使用Maximin2程序中可用的Powell法和 Tripos力场以及4.0的介电常数，使络合物能量降至最低，直至梯度 值达到0.01 kcal/mol.A。围绕配体定义热域(10A)和兴趣区域(15A), 使用退火机能。 结果分子建模受体对接研究表明， 一般而言，S对映体较R对映体更 有活性，即使R对映体也确实显示活性。 一个对映体更有生物活性这 一现象是众所周知的。结果，本发明提供了一种将化合物拆分为对映体的方法。化合物 32的拆分方法以图解方式显示于图11。尽管不希望被理论所束绰，但是认为化合物的S-对映体将提供较 高的活性。对接研究的结果显示于图5-10。实施例7制备(±)-2-乙氧基-3-(4'-氨基苯基)-丙酸(化合物39)的方法。对映 体的拆分(图12)。<formula>formula see original document page 30</formula>
步骤1和2按照化合物34步骤1和2。 步骤3将2-羟基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸(20g， 95.6mmol)悬浮于DMF(200ml)中。加入Cs2C03 (74.9g， 229.9mmol)和硫酸二乙酯(26.3ml， 201mmol)，并观察到溶解。于18。C搅拌18小时后，加入水(350ml) 和乙酸乙酯(250ml)，并分离各层。水层进一步用乙酸乙酯(5 x200ml) 萃取，然后将合并的有机相用水(2 x 200ml)、盐水(2 x 200ml)洗涤， 经硫酸镁干燥。将有机层浓缩至干燥，得到含有3.6。/。质量的DMF的 橙色固体2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)-丙烯酸乙酯(27.6g潮湿的，收率 >100%)。
'H匪R (S， 250MHz， DMSO-d6): 1.32 (t， 6-H， 2 x CH2CH3)， 4.13 (q， 2國H， CH2CH3)， 4.30 (q, 2画H， CH2CH3), 6.99 (s， l-H， CH=)， 8.06 (d， 2-H， CH芳香族)，8.26 (d， 2-H, CH芳香族)。 步骤4
含有3.6wt% DMF的2-乙氧基-3-(4-硝基苯基)丙烯酸乙酯(校正 26.07g， 98.3mmol)溶解于IMS (500ml)中，并加入NaOH (1.44g， 36.1 mmol)在水(260ml)中的溶液。得到的混合物在室温下搅拌18小时，然 后用lMHCl(120ml)酸化，经过滤收集得到的固体，用水(2xl00ml) 洗涤，并在滤器上抽吸干燥30分钟，随后
结果
激活PPARy导致一连串使与特异性DNA序列元件(称为过氧化 物酶体增殖物反应元件(ppRE))结合的反应(7-9)。
我们通过用海鳃萤光素酶和PPRE质粒瞬时转染上皮细胞，研究 了 PPARy转录活性。为了评价所述新分子是否具有比5-ASA更高的 刺激PPARy激活的功效，我们以lmM的浓度检测了这些分子。将 lmM浓度的新分子的作用与5-ASA和罗格列酮比较，后二者分别以 30mM和1(T5M的最佳浓度用作阳性对照。在24小时期间用不同的分 子刺激细胞。
在转染的HT-29细胞中PPARy活性的分析显示，lmM的新分子 34、 39、 35和40分别增加了报道基因活性4.8±0.71、 2.73±0.31、 2.64±0.46、 3.4±0.97倍，由此显示出相似于或优于30mM的5-ASA (2.8±0.7 )和1(T5M的罗格列酮(3.17士0.29)的活性。图2表示在一式三份进行的2或3个实验中所有得到的每一个分 子的所有结果。不同实验之间的重现性良好，并与文献中所述的数据 相似。
本研究使我们鉴别了 4个对激活PPARy具有较5-ASA大30-50 倍功效的新分子。 实施例11 结肠癌细胞生长
检测了以下物质(即20、 34、 35、 39和40)它们调节结肠癌细胞生 长的能力。为此，使用三个人结肠癌细胞系(即HT-29、 HT-115和 DLD-1)。在环氧合酶-2(COX-2)表达的基础上选择这些细胞类型。事 实上，HT-115细胞表达生物学活性的COX-2, HT-29细胞表达无功 能的COX-2同工型，DLD-1是COX-2-缺陷细胞。现认为这些分子 对不表达COX-的细胞也是有活性的，因此本发明的分子可用于不表 达COX-2的细胞以便治疗肿瘤和本文所述的其它应用。
HT-29和DLD-1细胞分别在McCoy和RPMI1640培养基中培养， 所述培养基中补充了 10y。胎牛血清(FBS)、 1。/。青霉素/链霉素(P/S)和 50mg/ml庆大霉素。HT-115在补充了 15% FBS和1% P/S的DMEM 培养基中培养。将细胞于37。C在5%(:02存在下维持在增湿的培养箱 中。
为了细胞生长测定，将单个细胞悬浮液以2 x 103细胞/孔(HT115 为4 x 103细胞/孔)接种于含有0.5% FBS的培养基的96-孔培养皿中， 并使其粘附。然后除去非粘附细胞，将含有0.5% FBS的新鲜培养基 加入到每一个孔中。细胞在指定物质存在或缺乏下培养。将各物质溶 解于含有0.5% FBS的培养介质中，作为25mM储备溶液，需要时用 NaOH将各储备溶液的pH调节至7.4。以0.5至10mM范围内的终浓 度使用物质。
4吏用市售的细胞增殖试剂盒(Roche Diagnostics, Monza，意大 利)，通过测定掺入到DNA中的5-溴-2，-脱氧尿苷(BrdU)测定细胞增 殖。在温育的最后6小时期间将BrdU加入到细胞培养物中，在培养48小时后通过联免疫吸附测定法(ELISA)来评价BrdU-阳性细胞的水 平。使用ELISA读出器在450nm处测定光密度(OD)。 一式三份进行 实验，并以平均值士标准偏差(SD)报告结果。 结果所述化合物在其抑制结肠癌细胞生长的能力方面存在差异。结果概 括于表l中，其中显示了指定化合物抑制DLD-1细胞生长的百分数。 物质20，以剂量依赖性方式在受试的三个细胞系中的每一个中都显示 出明显的抗增殖作用(图3和4)。当化合物以终浓度lOmM使用时， 可见细胞生长抑制超过90%。当以终浓度5或10mM使用时，可见化 合物20明显抑制细胞生长的能力。当以高剂量(10mM)使用时，化合物34和39轻微降低细胞生长(图 4)，但是组间差异无统计学意义。类似地，在加入了物质35和40的 培养基中未见细胞生长的抑制(见表1)。 结论本发明的第一组实施例(实施例10)表明了四个优化的分子34、39、 35和40以lmM浓度增加转染的HT-29细胞中PPARy活性的能力， 显示出相似于或优于30mM的5-ASA和1(T5M的罗格列酮的活性。本发明的第二组实施例(实施例1 l)显示化合物不同程度地影响结 肠癌细胞系，HT-29、 HT-115和DLD1的生长抑制作用。所述化合物 在其抑制结肠癌细胞系生长的能力方面存在差异。物质20对受试细胞 系显示了明显的抗增殖效应。本发明的这些分子对于不表达COX-2的细胞也是有活性的，因 此本发明的分子可用于不表达COX-2的细胞以便治疗肿瘤和本文所 述的其它应用。总的结论由建模研究表明的合成的最高等级化合物，均显示了相似/优于美 沙拉秦的活性。参考文献1. Dubuq呵，L, EA Ja眼orr, S, Deeb, S. Rakot咖，M:. Karou"丄F. Co，ombel, 丄Auwerx, S. Petter卿n, and P, Desreumaux, 2003. Impaired: expression of peroxisome proltferato「~adivated receptor g柳ma in ulcerative colitis. GssfroeWera/ogy 124:1265-1276,2. Rous滅aux C, Lefebvre B, Dubuq:呵L, Lefebvre P, Romano O, Au條rx J， Metz:ger D, WaWi W, Desvergne B, Naccari GC, Chavatte P, Fsrc暨A, Bulois P, Cortot A, Cofomb'el JF, Desreumaux P.. ftit曰:stinai arrti-irrflammatory effect of 5-amino sslicyfic acid fs d邻加derH on PPARy. J fp W^c 20O5; 207: 1205>15.3. Clark, M,C.R.D丄V.O,, N, 1989, Validation of tfie General Purpose Tripos 5,2 Fteld. J- C帥p"fC^em. 10:982-1012,4. Gampe, RT., Jr., V.G. Montana, M,H. Lambert, A,B. IVWIer, RK. Kedsoe, M.V, Miiburn, S.A,. Klie鹏r, T.SVI. Wilteon， and H,E.. Xu, 2O00, Asymmetry inthe PPAR^RXRalpha crystal staictur reveals the motecutar basis of heterodi怖riz幼'o:n among nuotear rec邻tws, Mo/ Ce,/ 5:545-555,5.. Jones, G., P,誦ett, R,C- Gten, A,R. Lsach, and R, Taytor. 1断，Oevdopment snd validation of a genetic algorithm for flexfcte dodking, "' SZoZ 267:727-748.6. Wang, R., L Lai, and S* Wang.. 2:002. Further dev由pment曰nd validation of empirical scoring functions for strudure-based binding a活ntty preciiction. J Compuf細Des 16:11-26.7, Ws幼n, S.' R. Kurokawa, RT. Node, G,B. Wisely, E,M Mclnerney, D,W, Rose' M-V. Miilbufn, M,G, Rose咖d, and C..K. Glass. 1998. l:nteracUons e赠ol卄ng the assembly of mscfear-receptor heterodimers and co-artivators, Wafwre 395:199-202,8. Mangefsdort, DJ。 C. Thummel, M, Beato, P, Herrlich, G, SchutzT K, Uin的ono, B, Blu她,，P, Kastrw, M,胸rt(, P< Chambon, and et al- 1卿，The nuc!的r receptor superfamily: the second decade, Ce//83:836^839.9, 睛s『a, P,, E,D, Owuor， W. U & Yu, C. Qit K. Meyer, Y,丄2hu, MS' Rao,线 Kong, and丄K. Reddy, 2002, Ptiosphorylatbn of transoipticmal coactivator peroxisome proliferator-activated reeepto'r (PPAR)-bind:ing prc^ein《PBP》. Sti麵'Iation of transcriptJona[ regulation by mitogen-activated protein kinase. J 8/0/ Cfrsm 277:4874548754. Epub 42002 Sep 48727,
权利要求
1.通式(I)的化合物其中R1和R2，可以相同或不同，选自-H、或者含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团，或者一起形成含有5或6个原子的芳香族或脂肪族环；Y和Z，可以相同或不同，选自-H、-OH、-COOH、-OR3、-CH(OR3)COOH，其中R3选自H、苯基、苄基、-CF3或-CF2CF3、乙烯基、烯丙基和含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团。
2.通式(Ia)的化合物Rj和R2，可以相同或不同，选自-H或者含有1-6个碳原子的直 链或支链烷基基团；Y和Z,可以相同或不同，选自-H、 -OH、 -COOH、 -OR3、 -CH(OR3)COOH，其中R3选自-H和含有1-6个碳原子的直链或支链 烷基基团。
3.权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中所述含有1-6个 碳原子的直链或支链烷基基团选自-CH3、 -CH2CH3、 -CH(CH3)2、<formula>formula see original document page 2</formula>
4. 任意一项前述权利要求所述的化合物，其中Y是H。
5. 权利要求1-4中任意一项所述的化合物，其中Z是 CH3(OR3)COOH。
6. 任意一项前述权利要求所述的化合物，其中R3是-CH3。
7. 任意一项前述权利要求所述的根据下式(VI)的化合物<formula>formula see original document page 0</formula>(化合物34)。
8.权利要求1-6中任意一项所述的根据下式(VI)的化合物<formula>formula see original document page 0</formula>(化合物35)。
9. 任意一项前述权利要求所述的化合物，其中R3是-H。
10. 权利要求1-5中任意一项所述的根据下式(II)的化合物<formula>formula see original document page 0</formula>(化合物20)。
11.权利要求1-5中任意一项所述的化合物，其中R3是-CH2CH3,
12.权利要求1-5和权利要求11中任意一项所述的根据下式(VII) 的化合物(化合物39),
13.权利要求l-5和权利要求11中任意一项所述的根据下式(VIH) 的化合物<formula>formula see original document page 4</formula>(化合物40),
14. 权利要求1-3中任意一项所述的化合物，其中Y是-COOH。
15. 权利要求1-3和权利要求14中任意一项所述的化合物，其中 R3是-CH3。
16.权利要求1-3和权利要求14或15中任意一项所述的根据下 式(III)的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>，(化合物23),
17.权利要求1-3和权利要求14中任意一项所述的化合物，其中 R3是-CH2CH3。
18.权利要求1-3和权利要求14和17中任意一项所述的根据下 式(IV)的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>(化合物32),
19.权利要求1-3和权利要求14和17中任意一项所述的根据下 式(V)的化合物<formula>formula see original document page 5</formula>(化合物33)。
20.根据任意一项前述权利要求的化合物，其中所述化合物选自 (±)-2-羟基-3_(3'-氨基苯基)丙酸(化合物20) (±)-2-甲氧基-2-(4，-氨基苯基)乙酸(化合物23) (±)-2-乙氧基-2-(3'-氨基苯基)乙酸(化合物32)(±)-2-乙氧基-2-(4'-氨基苯基)乙酸(化合物33) (±)-2-甲氧基-3_(4'-氨基苯基)丙酸(化合物34) (±)-2-乙氧基-3-(4'-氨基苯基)丙酸(化合物39) (±)-2-乙氧基-3-(3'-氨基苯基)丙酸(化合物40)。
21. 根据任意一项前述权利要求的化合物，其为对映体纯的R或 s形式。
22. 药物组合物，它包含与一种或多种可药用赋形剂或助剂组合 的一种或多种如权利要求1-22任意一项中所定义的作为活性成分的 化合物。
23. 根据权利要求1-21任意一项的化合物或根据权利要求22的 药物组合物用于医药领域的用途。
24. 根据权利要求1-21任意一项的化合物或根据权利要求22的 药物组合物用于制备药物产品的用途，所述药物产品用于预防和治疗 表达PPARy受体和egf受体的肿瘤。
25. 根据权利要求24的用途，其特征在于所述肿瘤选自食道肿 瘤、胃肿瘤、胰腺肿瘤、结肠肿瘤、前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、子宫及 附件肿瘤、肾肿瘤和肺肿瘤。
26. 根据权利要求1-21任意一项的化合物或根据权利要求22的 药物组合物在制备用于治疗慢性炎性疾病的药物产品中的用途。
27. 根据权利要求24的用途，其特征在于所述慢性炎性疾病选 自克罗恩病和溃疡性直肠结肠炎。
28. 根据权利要求1-21任意一项的化合物或根据权利要求22的 药物组合物在制备用于治疗慢性炎性疾病的药物产品中的用途。
29. 根据权利要求1-21任意一项的化合物或根据权利要求22的 药物組合物的用途，其特征在于所述化合物选自(±)-2-羟基-2-(3，-氨基苯基)乙酸 (±)-2-羟基-2-(4'-氨基苯基)乙酸 (±)-2-羟基-3-(4'-氨基苯基)丙酸 (±)-2-甲氧基-3_(3'-氨基苯基)丙酸 (±)-2-甲氧基-3-(4，-氨基苯基)丙酸。
30. 根据权利要求23-29任意一项的用途，其特征在于所述化合 物选自化合物IO、化合物ll、化合物20、化合物21、化合物22、化 合物23、化合物32、化合物33、化合物34、化合物35、化合物39 和4匕合物40。
31. 根据权利要求23-30任意一项的用途，其中所述化合物的应 用是以混合物使用，该混合物中一种对映体以任何比例过量于另一种 对映体。
32. 治疗人或动物的方法，其包括用 一种或多种根据权利要求1-21 任意一项的化合物、权利要求22中所述的药物组合物或根据权利要求 23-31任意一项的用途治疗所述的人或动物。
33. 参照附图和附表基本上如本文所述的化合物。
34. 参照附图和附表基本上如本文所述的用途。
35. 参照附图和附表基本上如本文所述的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及包含通式(I)的化合物，其中，R₁和R₂，可以相同或不同，选自-H、或者含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团，或者一起形成含有5或6个原子的芳香族或脂肪族环；Y和Z，可以相同或不同，选自-H、-OH、-COOH、-OR₃、-CH(OR₃)COOH，其中R₃选自H、苯基、苄基、-CF₃或-CF₂CF₃、乙烯基、烯丙基和含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团。
文档编号C07C229/42GK101243039SQ200680030077
公开日2008年8月13日 申请日期2006年7月24日 优先权日2005年7月22日
发明者G·纳卡里, S·巴罗尼 申请人:朱利亚尼国际有限公司