专利名称：一种胍基硫酸化合物及其提取分离方法
技术领域：
本发明涉及从海绵中分离出的化合物，具体地说一种硫酸胍基化合物及其提取分离方法。
背景技术：
海绵是低等多细胞动物，是最大的天然产物来源。目前已从海绵中分离出多种天然产物，主要有萜类、生物碱、含溴化合物、甾类等，其中有许多具有独特的化学结构，而且在抗菌、抗炎、抗肿瘤等方面具有明显的活性，而且有一些已经进入临床实验阶段。
硫是海水中第四大元素，因此海洋生物中含有大量的含硫化合物，相对来说从海绵中分离得到的含硫化合物并不是很多，有近100个含硫酸集团的化合物从海绵中分离得到，(文献1Jean-Michel Kornprobst，ClaireSallenave and Gilles Barnathan，Sulfated compounds from marine organisms，Comp.Biochem.Physiol，1998，119B1-15)，化合物主要为萜类、芳香族和甾类化合物，活性表现在抗HIV-1等活性。含有胍基的化合物也是海绵中经常发现的天然产物，其活性主要体现在抗菌、抗病毒、抗疟疾等方面(文献2Boberto G.S.Berlinck，Natural guanidine derivatives，Natural ProductsReports，2002，19617-649)。但是到目前为止还没有发现一种化合物同时含有硫和胍基。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的胍基硫酸化合物及其提取分离方法。
本发明技术方案如下一种胍基硫酸化合物，中文名称为2-(N-甲基-胍基)-乙烷硫酸，英文名称为2-(N-methyl-guanidino)-ethanesulfonic acid，其结构式如下 其提取分离方法如下采用柱分离技术，用溶剂淋洗，正相层析柱与反相层析柱相结合，可按如下步骤分离提取操作以多皱软海绵(Halichondria rugosa Ridley&Dendy)为原料，取2～3公斤冷冻干燥切碎，用1000～2000毫升的甲醇搅拌提取，将提取物浓缩至浆状物并均匀分散到100～200ml水中，得水溶提取物，再依有机溶剂极性从大到小分别用与水溶提取物等量的环己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；将极性最大的正丁醇萃取液所得的萃取液浓缩经硅胶层析柱及反相柱层析分离，得到白色针状晶体产品。
所述提取为用1000～2000毫升的甲醇常温搅拌提取3～5次，每次3-5小时，合并提取物并减压蒸馏浓缩至100～200毫升后分散于等体积的水中，再依有机溶剂极性从小到大依次萃取；柱分离技术为浓缩物经硅胶柱层析时，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，二氯甲烷60％的馏分减压蒸馏，浓缩液再经一次ODS反相柱柱层析，用水-甲醇梯度洗脱，得到的馏分减压蒸馏除去溶剂，得到白色粉末产品。
本发明与现有技术相比，具有如下有益效果1.化合物结构新颖。采用本发明提取分离工艺，首次从多皱软海绵中获得并确定了活性化合物的结构；具有新颖的结构特征。
2.方法简便可行。本发明在分离过程中仅通过正相和反相层析柱分离，即可得到纯的新化合物。
3.具有良好的应用前景。本发明化合物是一种具有极强的抗HIV-1病毒的活性及抗肿瘤活性，可以作为抗HIV-1病毒及抗肿瘤的先导化合物。同时该化合物分子量小，具有水溶性，这类性质作为先导化合物研究具有明显的优势。
具体实施例方式
实施例1一种胍基硫酸化合物结构式如下 其提取分离方法以中国南海多皱软海绵(Halichondria rugosaRidley&Dendy)为原料，采用正相柱与反相柱相结合的方法，可按如下步骤操作采集中国南海多皱软海绵(Halichondria rugosa Ridley&Dendy)，采集后立即于-20℃冰箱冷冻保存，使用时冷冻干燥(100g)，粉碎，于甲醇中机械搅拌提取，重复4次，合并提取物并减压蒸馏浓缩至浆状物，将浆状物均匀分散于100ml水中，分别用等量的环己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取3次，正丁醇萃取物经减压浓缩，浓缩物经硅胶(青岛海洋化工分厂，300-400目)柱层析，依次以500ml不同比例的二氯甲烷-甲醇(100％，80％，60％，40％，20％，0)洗脱，二氯甲烷60％的馏分减压蒸馏，浓缩液再经一次ODS反相柱(5g，进口分装，北京金欧亚公司，40-60微米)柱层析，用50ml水-甲醇(100％，50％，0)洗脱，得到的馏分减压蒸馏除去溶剂，得到白色粉末10mg，纯度达90％。
结构鉴定
物理常数熔点＞300℃；溶解性易溶于水；光谱数据紫外光谱＞200nm波长下没有紫外吸收；红外光谱υmax(KBr，cm-1)3363，3220，3177，2926，2853，1661，1638，1543，1462，1376，1264，1205，1108，1053，1040，1024，1002，825，782，727，629，562，526，468；核磁共振谱δ1H(D2O，TMS)ppm3.83(2H，t)，3.29(2H，t)，3.12(3H，s)；δ13C(D2O/CD3OD，TMS)ppm158.00，48.23，47.21，36.68；电喷雾质谱正离子模式204[M+Na]+，385[2M+Na]+；负离子模式180[M-H]-，361[2M-H]-；高分辨率质谱(HRMS)得到分子量为182.05946，分子式为C4H12O3S生理活性化合物对HIV-1诱导的C8166细胞病变具有明显的抑制作用，活性(EE50)为29ug/ml，而对宿主细胞的毒性则较小(CC50)＞200ug/ml。
实施例2将采集到的新鲜海绵2公斤切碎，直接用2000毫升甲醇搅拌萃取，萃取液浓缩至1000毫升，再与实施例1相同的方法依次萃取及分离，得到无色针状晶体。
权利要求
1.一种胍基硫酸化合物，其特征在于结构式如下，
2.一种权利要求1所述胍基硫酸化合物的提取分离方法，其特征在于采用柱分离技术，用溶剂淋洗，可按如下步骤分离提取操作，以多皱软海绵2～3公斤为原料，冷冻干燥切碎，用1000～2000毫升的甲醇搅拌提取，将提取物浓缩至浆状物，将浆状物均匀分散于100～200ml水中，得水溶提取物，分别用与水溶提取物等量的环己烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，正丁醇萃取物浓缩经硅胶层析柱和反相层析柱分离，得到白色针状晶体产品。
3.按照权利要求2所述提取分离方法，其特征在于用1000～2000毫升的甲醇常温搅拌提取3～5次，每次3-5小时，合并提取物并减压蒸馏浓缩至100～200毫升后分散于等体积的水中，再依有机溶剂极性从小到大依次萃取。
4.按照权利要求2所述提取分离方法，其特征在于浓缩物经硅胶柱层析时，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，二氯甲烷60％的馏分减压蒸馏，浓缩液再经一次ODS反相柱柱层析，用水-甲醇梯度洗脱，得到的馏分减压蒸馏除去溶剂，得到白色粉末产品。
全文摘要
本发明涉及一种胍基硫酸化合物及其提取分离方法，其结构式如图采用柱分离技术，本发明化合物结构新颖，方法简便可行，具有良好的应用前景。
文档编号C07C303/00GK1765881SQ20041005075
公开日2006年5月3日 申请日期2004年10月29日 优先权日2004年10月29日
发明者靳艳, 张卫, 虞星炬, 金美芳 申请人:中国科学院大连化学物理研究所