一种刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物及其制备方法和应用与流程

文档序号:12712481阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种核酸纳米结构载体,其特征在于,所述核酸纳米结构载体为通过DNA折纸技术构建的两个三角形DNA折纸结构,通过控制链将两个三角形DNA折纸结构相连形成菱形折纸结构,具体是通过脚手架链与辅助折叠的订书钉链进行杂交,再通过控制链分别与两个三角形DNA折纸结构的脚手架链杂交而自组装形成的核酸纳米结构。

2.根据权利要求1所述的核酸纳米结构载体,其特征在于,所述脚手架链与所述订书钉链、所述控制链与脚手架链都是通过碱基互补配对原则进行杂交;

优选地,所述脚手架链为M13噬菌体基因组DNA;

优选地,所述订书钉链为人工合成的寡核苷酸序列;

优选地,所述订书钉链选取5-20个位点延伸出了捕获序列;

优选地,所述控制链包含二硫键和/或限制性内切酶的特异性识别位点。

3.根据权利要求1或2所述的核酸纳米结构载体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)将所述脚手架链溶液、所述订书钉链混合溶液和所述控制链混合溶液混匀中,所述脚手架链、所述订书钉链与所述控制链的摩尔比为1:(2-30):(2-30),混匀;

(2)以85-98℃为起始温度进行降温退火至20-30℃,采用超滤柱纯化;

(3)将纯化后的两种三角形DNA折纸结构以40-50℃为起始温度进行降温退火至20-30℃,进行梯度PCR循环,制得所述核酸纳米结构载体。

4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述脚手架链、所述订书钉链与所述控制链的摩尔比为1:(5-20):(5-20),更优选1:(8-15):(8-15),特别优选1:10:10;

优选地,步骤(2)所述降温退火的起始温度为88-93℃,更优选90℃;

优选地,步骤(2)所述降温退火的终点温度为22-28℃,更优选25℃;

优选地,步骤(2)所述降温退火过程的持续时间为8-20h,优选为10-15h,更优选为12h;

优选地,步骤(3)所述降温退火的起始温度为43-48℃,更优选45℃;

优选地,步骤(3)所述降温退火的终点温度为22-28℃,更优选25℃;

优选地,步骤(3)所述循环的数量为3-10个,优选为4-8个,更优选为6个。

5.一种刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物,其特征在于,所述刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物包括贵金属纳米颗粒和根据权利要求1或2所述的核酸纳米结构载体;所述贵金属纳米颗粒为表面进行寡核苷酸序列修饰的金纳米棒、金纳米壳、表面包银的金纳米棒、金纳米笼中的一种或至少两种的混合物;所述核酸纳米结构载体与所述贵金属纳米颗粒通过寡核苷酸序列相偶联。

6.根据权利要求5所述的刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物,其特征在于,所述贵金属纳米颗粒为表面进行巯基化DNA修饰的金纳米棒,所述表面进行巯基化DNA修饰的DNA与所述捕获序列互补。

7.根据权利要求5或6所述的刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1’)制备核酸纳米结构载体;

(2’)制备贵金属纳米颗粒;

(3’)将步骤(1’)得到的核酸纳米结构载体与步骤(2’)得到的贵金属纳米颗粒按照摩尔比为1:(1-5)混合于溶液中,进行降温退火;

(4’)将步骤(3’)得到的溶液进行电泳除去过量的贵金属纳米颗粒,纯化得到刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物。

8.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,步骤(1’)中,核酸纳米结构载体的制备方法为根据权利要求3-5中任一项所述的制备方法;

优选地,步骤(2’)中所述贵金属纳米颗粒通过以下方法制备:利用晶种诱导生长法制备金纳米棒;使用十六烷基三甲基溴化铵CTAB作为表面活性剂活化;使用合成的巯基化寡核苷酸序列替代CTAB,由此完成金纳米棒的DNA表面修饰;

优选地,步骤(3’)中,所述核酸纳米结构载体与所述贵金属纳米颗粒的摩尔比为1:(1-3),优选为1:2;

优选地,步骤(3’)中,所述降温退火为从温度40-50℃,逐渐降温退火至温度20-30℃;

优选地,步骤(4’)中,所述电泳的条件为:0.5-1%琼脂糖胶、电泳环境温度4-10℃、电泳缓冲液为0.5-1×TBE缓冲液并含5-11mM Mg2+、电泳电压为10-15V/cm、且电泳时间30-50min。

9.根据权利要求1或2所述的核酸纳米结构载体用于检测生物活性物质。

10.根据权利要求5或6所述的刺激响应型核酸纳米结构载体手性贵金属纳米复合物用于检测生物活性物质。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1