本发明涉及菲律宾蛤仔基因组DNA的提取方法。
背景技术：
菲律宾蛤仔通常又称杂色蛤，是贝壳类海产品，隶属海洋无脊椎动物中的软体动物门，双壳纲，帘蛤目，帘蛤科，中文名名菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum），南方俗称花蛤(huage)，辽宁称蚬子(xianzi)，山东称蛤蜊(gala)，英文名：short necked clam。花蛤广泛分布在我国南北海区，它生长迅速，养殖周期短，适应性强（广温、广盐、广分布），离水存活时间长，是一种适合于人工高密度养殖的优良贝类，是我国四大养殖贝类之一。
分子生物学是生物学研究的一项重要分支，而DNA的提取则是分子生物学研究的重要基础，DNA纯度的纯度及质量对后续的研究工作具有极为重要的影响。每一物种由于其自身各成分的含量不同（比如有的物种蛋白含量高、有的物种糖分含量高），会对DNA的纯度和质量产生较大影响。因此，需要针对不同的物种开发出适宜的有针对性的提取方法。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明旨在提供一种适于菲律宾蛤仔的高质量、高纯度的DNA提取方法。
菲律宾蛤仔基因组DNA的提取方法，步骤如下：
（1）取菲律宾蛤仔肌肉组织3-8克，用液氮研磨后，将粉末平均加入到10-15管装有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中，随即每管加入5μL 浓度为20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇（24:1），轻柔晃动5-15min，室温10000-12000 rpm离心8-15min；
（3）离心后有机相位于下层，中间层为蛋白层，上层为溶有DNA的水相，吸取上清液至新离心管中，重复步骤（2），至水相和有机相之间无蛋白层残留；
（4）吸取上清液至新离心管中，加入500μL氯仿/异戊醇，轻柔晃动5-15min，室温10000-12000 rpm离心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，缓慢轻柔摇匀，添加1mL在-20℃预冷的无水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 离心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用预冷的 70%乙醇洗涤沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根据沉淀量多少加入不同量的无菌超纯水及终浓度为0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度计测定DNA的浓度，同时进行琼脂糖电泳检测。
本发明的方法针对性强，特别适于菲律宾蛤仔DNA的提取，提取的DNA浓度、纯度非常高，非常适于文库构建、PCR等后续研究。
附图说明
图1 本发明方法提取的菲律宾蛤仔DNA的电泳图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
从市场购买的菲律宾蛤仔在实验室用无菌海水暂养3-5天后，开始DNA的提取工作，步骤如下：
（1）取菲律宾蛤仔肌肉组织3-8克，用液氮研磨后，将粉末平均加入到10-15管装有500μL STE（100mM NaCl；10mM Tris-Cl，pH8.0；1mM EDTA，pH8.0）及50μL 10% SDS裂解缓冲液的1.5mL离心管中，随即每管加入5μL 浓度为20mg/mL的蛋白酶K，55-57℃水浴10-60 min，至溶液澄清；
（2）每管加入250μL饱和酚、250μL氯仿/异戊醇（24:1），轻柔晃动5-15min，室温10000-12000 rpm离心8-15min；
（3）离心后有机相位于下层，中间层为蛋白层，上层为溶有DNA的水相，吸取上清液至新离心管中，重复步骤（2），至水相和有机相之间无蛋白层残留；
（4）吸取上清液至新离心管中，加入500μL氯仿/异戊醇，轻柔晃动5-15min，室温10000-12000 rpm离心8-15min；
（5）吸取上清液，加入50μL 3M NaAc，缓慢轻柔摇匀，添加1mL在-20℃预冷的无水乙醇，放置于-20℃冰箱 20-50min，10000-15000rpm 离心8-15min，得到DNA沉淀；
（6）用预冷的 70%乙醇洗涤沉淀1-3次；
（7）沉淀干燥，根据沉淀量多少加入不同量的无菌超纯水及终浓度为0.05mg/mL的RNase A，37℃水浴15-40min，直至RNA全部溶解；
（8）用分光光度计测定DNA的浓度，同时进行琼脂糖电泳检测。
经检测，DNA的浓度为955 ng/uL，A260/A280=1.8。电泳结果如图1所示，可见DNA的浓度及纯度都非常高。