耐除草剂大豆SHZD32‑1及其衍生品种的定性PCR检测方法与流程

文档序号:12056653阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的特异性PCR检测引物对,其特征在于,选自以下3对引物中的任意一对:

引物对1:由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示核苷酸序列组成;

引物对2:由SEQ ID No.3和SEQ ID No.2所示核苷酸序列组成;

引物对3:由SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示核苷酸序列组成。

2.权利要求1所述的特异性PCR检测引物对在检测耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种中的应用。

3.一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)提取待检测大豆样品的DNA;(2)以提取的DNA为模板,以权利要求1所述的特异性PCR检测引物对为扩增上下游引物,建立PCR扩增体系并进行PCR扩增;(3)如果从待检测样品中扩增出目的条带,则待检测的大豆样品是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种;如果从待检测样品中未能扩增出目的条带,则待检测的大豆样品不是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种。

4.一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)提取待检测大豆样品的DNA;(2)以提取的DNA为模板,以权利要求1所述的引物对1为扩增上下游引物,建立PCR扩增体系并进行PCR扩增;(3)如果从待检测样品中扩增出234bp的条带,则待检测的大豆样品是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种;如果从待检测样品中未能扩增出234bp的条带,则待检测的大豆样品不是耐除草剂大豆SHZD32-1或其衍生品种。

5.按照权利要求3或4所述的定性PCR检测方法,其特征在于:所述PCR扩增体系包括:反应体系总体积为25.0μL,其中,10×PCR缓冲液2.5μL,25mmol/L氯化镁溶液1.5μL,dNTPs混合溶液2.0μL,10μmol/L上游引物0.5μL,10μmol/L下游引物0.5μL,终浓度为0.025U/μL的Taq DNA聚合酶,25mg/L DNA模板2μL,余量为双蒸水。

6.按照权利要求3或4所述的定性PCR检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的程序包括:95℃变性5min;95℃变性30s,54-62℃退火45s,72℃延伸45s,共进行35次循环;72℃延伸7min。

7.按照权利要求6所述的定性PCR检测方法,其特征在于,所述PCR扩增的程序包括:95℃变性5min;95℃变性30s,58℃退火45s,72℃延伸45s,共进行35次循环;72℃延伸7min。

8.一种耐除草剂大豆SHZD32-1及其衍生品种的定性PCR检测试剂盒,包括:10×PCR缓冲液,氯化镁溶液,dNTPs混合溶液,检测上下游引物对,Taq DNA聚合酶和双蒸水;其特征在于:所述检测上下游引物对为权利要求1所述特异性PCR检测引物对。

9.按照权利要求8所述的定性PCR检测试剂盒,其特征在于:所述检测上下游引物对为权利要求1所述的引物对1。

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