一种非选择性鉴定大豆抗大豆食心虫的室内生物测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种大豆抗虫能力室内鉴定方法，特别涉及一种非选择性鉴定大豆抗 大豆食心虫的室内生物测定方法。
【背景技术】
[0002] 目前大豆抗食心虫室内生物测定主要由东北农业大学韩岚岚等于2011年设计的 圆盘分割法（李婷婷，韩岚岚，赵奎军等."圆盘分割法在转基因大豆抗虫鉴定上的应用" 《作物杂志》2011，4:20-22)。该方法是在昆虫生长适宜的温湿度条件下，通过放置在圆形滤 纸中心的初孵幼虫对圆盘外周等距随机放置豆荚的趋向和蛀食、死亡情况来判定抗虫性差 异。圆盘分割法鉴定大豆对大豆食心虫抗性能力是一种选择性实验，但是大豆食心虫对寄 主的选择是发生在成虫产卵阶段，即成虫对寄主的豆荚进行选择产卵，初孵幼虫直接蛀入 所在豆荚，而不是幼虫对豆荚进行选择。该方法让初孵幼虫自主随机选择豆荚，不能满足每 个豆荚上都有初孵幼虫。所以豆荚与初孵幼虫接触的几率不一致，这样就增大的鉴定结果 的误差。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的缺点与不足，提供一种非选择性鉴 定大豆抗大豆食心虫的室内生物测定方法。本方法为了减小大豆抗食心虫室内生测鉴定结 果的误差，采用每个豆荚逐一接种初孵幼虫的非选择性实验，保证每个豆荚上都有初孵幼 虫，让豆荚与初孵幼虫的接触几率保持一致，从而提高鉴定结果的准确性。
[0004] 本发明的目的通过下述技术方案实现：一种非选择性鉴定大豆抗大豆食心虫的室 内生物测定方法，包括以下步骤：
[0005] (1)供试昆虫准备：将田间采集的大豆食心虫成虫配对后放入接有豆荚的成虫产 卵笼中，每个产卵笼放入40~50对配对大豆食心虫成虫，每天更换新鲜豆荚供成虫产卵， 将带卵的豆荚放入恒温培养箱中恒温保湿孵育，待卵孵化每天检查卵的发育进度，等到卵 粒出现黑头后，获得带黑头的大豆食心虫卵粒豆荚；
[0006] (2)大豆材料的准备：在田间采集生长一致的豆荚，放入自封袋带回，每个培养皿 放入10个豆荚，将豆荚紧密的排列在一起，豆荚的基部用保湿棉球包住，保湿待用，制备获 得带有大豆豆荚的培养皿；
[0007] (3)将步骤（1)获得的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮小心剪下，计数后用 刀片将带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的卵粒，用 镊子将小片转移到步骤（2)中带有大豆豆荚的培养皿内，对培养皿中每个豆荚接入一片有 2粒带黑头的卵粒的荚皮，共计20粒，放入养虫室中培养，待其孵化后自行蛀荚；
[0008] (4)养虫室培养6~8天后拨开豆荚调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数，实现非 选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定。
[0009] 步骤（1)中所述的恒温保湿孵育的温度为25°C，相对湿度为80%。
[0010] 步骤（3)中所述的计数优选为在体视镜下计数。
[0011] 步骤（3)中所述的培养室中培养的条件为温度为25°C，相对湿度为80%。
[0012] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0013] 本发明的方法减小大豆抗食心虫室内生测鉴定结果的误差，采用每个豆荚逐一接 种初孵幼虫的非选择性实验，保证每个豆荚上都有初孵幼虫，让豆荚与初孵幼虫的接触几 率保持一致，从而提高鉴定结果的准确性。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
[0015] 实施例1
[0016] 本发明提供了一种非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，包括以下步 骤：
[0017] (1)供试昆虫准备：将田间采集的大豆食心虫成虫配对后放入事先接入豆荚的成 虫产卵笼中，每个产卵笼放入40对配对大豆食心虫成虫，每天更换新鲜豆荚供成虫产卵， 将带卵的豆荚放入恒温培养箱中恒温保湿孵育待卵孵化（温度25°C，相对湿度80 % )，每天 检查卵的发育进度，等到卵粒出现黑头后取出备用；
[0018] (2)大豆材料的准备：在田间采集大豆材料生长一致的豆荚，编号后放入自封袋 带回实验室，1个垄区的豆荚放入1个玻璃培养皿中，每个培养皿放入10个豆荚，将豆荚紧 密的排列在一起，豆荚的基部用保湿棉球包住，保湿待用；
[0019] (3)试验处理：将步骤⑴获得的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮小心剪下， 计数后用刀片将带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的 卵粒，用镊子将小片转移到步骤（2)中带有大豆豆荚的培养皿内，对培养皿中每个豆荚接 入一片有2粒带黑头的卵粒的荚皮，共计20粒，放入养虫室中培养，待其孵化后自行蛀荚， 养虫室的培养条件为温度为25°C，相对湿度为80% ;
[0020] (4)调查：养虫室培养6天后拨开豆荚调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数，实现 非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定。
[0021] 实施例2
[0022] 本发明提供了一种非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，包括以下步 骤：
[0023] (1)供试昆虫准备：将田间采集的大豆食心虫成虫配对后放入事先接入豆荚的成 虫产卵笼中，每个产卵笼放入45对配对大豆食心虫成虫，每天更换新鲜豆荚供成虫产卵， 将带卵的豆荚放入恒温培养箱中恒温保湿孵育待卵孵化（温度25°C，相对湿度80 % )，每天 检查卵的发育进度，等到卵粒出现黑头后取出备用；
[0024] (2)大豆材料的准备：在田间采集大豆材料生长一致的豆荚，编号后放入自封袋 带回实验室，1个垄区的豆荚放入1个玻璃培养皿中，每个培养皿放入10个豆荚，将豆荚紧 密的排列在一起，豆荚的基部用保湿棉球包住，保湿待用；
[0025] (3)试验处理：将步骤⑴获得的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮小心剪下， 计数后用刀片将带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的 卵粒，用镊子将小片转移到步骤（2)中带有大豆豆荚的培养皿内，对培养皿中每个豆荚接 入一片有2粒带黑头的卵粒的荚皮，共计20粒，放入养虫室中培养，待其孵化后自行蛀荚， 养虫室的培养条件为温度为25°C，相对湿度为80% ;
[0026] (4)调查：养虫室培养7天后拨开豆荚调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数，实现 非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定。
[0027] 实施例3
[0028] 本发明提供了一种非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，包括以下步 骤：
[0029] (1)供试昆虫准备：将田间采集的大豆食心虫成虫配对后放入事先接入豆荚的成 虫产卵笼中，每个产卵笼放入50对配对大豆食心虫成虫，每天更换新鲜豆荚供成虫产卵， 将带卵的豆荚放入恒温培养箱中恒温保湿孵育待卵孵化（温度25°C，相对湿度80 % )，每天 检查卵的发育进度，等到卵粒出现黑头后取出备用；
[0030] (2)大豆材料的准备：在田间采集大豆材料生长一致的豆荚，编号后放入自封袋 带回实验室，1个垄区的豆荚放入1个玻璃培养皿中，每个培养皿放入10个豆荚，将豆荚紧 密的排列在一起，豆荚的基部用保湿棉球包住，保湿待用；
[0031] (3)试验处理：将步骤⑴获得的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮小心剪下， 计数后用刀片将带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的 卵粒，用镊子将小片转移到步骤（2)中带有大豆豆荚的培养皿内，对培养皿中每个豆荚接 入一片有2粒带黑头的卵粒的荚皮，共计20粒，放入养虫室中培养，待其孵化后自行蛀荚， 养虫室的培养条件为温度为25°C，相对湿度为80% ;
[0032] (4)调查：养虫室培养8天后拨开豆荚调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数，实现 非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定。
[0033] 数据统计与分析：利用DPS软件的单因素统计分析功能进行Duncan多重比较。
[0034] 以AG系列大豆材料为例，通过本方法进行室内抗大豆食心虫鉴定，结果表明，有 8份材料的抗虫性与受体对照Willams82相比表现出显著差异，结果如表1所示。
[0035] 表1 AG系列材料的抗虫性鉴定
[0036] CN 105123298 A 说明书 4/4 页
[0038] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种非选择性鉴定大豆抗大豆食心虫的室内生物测定方法，其特征在于：包括以下 步骤： (1) 供试昆虫准备：将田间采集的大豆食心虫成虫配对后放入接有豆荚的成虫产卵笼 中，每个产卵笼放入40~50对配对大豆食心虫成虫，每天更换新鲜豆荚供成虫产卵，将带 卵的豆荚放入恒温培养箱中恒温保湿孵育，待卵孵化每天检查卵的发育进度，等到卵粒出 现黑头后，获得带黑头的大豆食心虫卵粒豆荚； (2) 大豆材料的准备：在田间采集生长一致的豆荚，放入自封袋带回，每个培养皿放入 10个豆荚，将豆荚紧密的排列在一起，豆荚的基部用保湿棉球包住，保湿待用，制备获得带 有大豆豆荚的培养皿； (3) 将步骤（1)获得的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮小心剪下，计数后用刀片将 带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的卵粒，用镊子将 小片转移到步骤（2)中带有大豆豆荚的培养皿内，对培养皿中每个豆荚接入一片有2粒带 黑头的卵粒的荚皮，共计20粒，放入养虫室中培养，待其孵化后自行蛀荚； (4) 养虫室培养6~8天后拨开豆荚调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数，实现非选择 性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定。2. 根据权利要求1所述的非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，其特征在 于：步骤（1)中所述的恒温保湿孵育的温度为25°C，相对湿度为80%。3. 根据权利要求1所述的非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，其特征在 于：步骤（3)中所述的计数为在体视镜下计数。4. 根据权利要求1所述的非选择性鉴定大豆抗虫性的室内生物测定方法，其特征在 于：步骤（3)中所述的培养室中培养的条件为温度为25°C，相对湿度为80%。
【专利摘要】本发明公开了一种非选择性鉴定大豆抗大豆食心虫的室内生物测定方法，属于大豆抗虫能力室内鉴定方法技术领域。所述的测定方法包括以下步骤：将配对大豆食心虫成虫接入豆荚，放入恒温振荡培养箱中恒温保湿孵育获得带黑头的大豆食心虫卵粒；将培养的带黑头的大豆食心虫卵粒的豆荚荚皮切成小片，每个小片有2粒带黑头的卵粒，采用每个豆荚逐一接种初孵幼虫的非选择性实验，养虫室培养第6～8天调查豆荚中存活的大豆食心虫活虫数。本发明的方法减小大豆抗食心虫室内生测鉴定结果的误差，采用每个豆荚逐一接种初孵幼虫的非选择性实验，保证每个豆荚上都有初孵幼虫，让豆荚与初孵幼虫的接触几率保持一致，从而提高鉴定结果的准确性。
【IPC分类】A01G7/00, A01K67/033
【公开号】CN105123298
【申请号】CN201510396945
【发明人】汪洋洲, 郭东全, 杜茜, 李启云, 钱雪艳, 张云月
【申请人】吉林省农业科学院
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年7月8日