本发明涉及il-17抗体，属于生物医药领域。
背景技术：
：迄今为止，细胞因子的白细胞介素17(il-17)家族已有六个家族成员被发现：il-17a(il-17)、il-17b、il-17c、il-17d、il-17e(亦命名为il-25)和il-17f。il-17是il-17家族的原型，il-17家族成员以同源二聚体或异源二聚体的形式行使功能，所有il-17家族成员具有4个高度保守的半胱氨酸残基，其参与链内二硫键的形成并具有两个或更多半胱氨酸残基，所述残基参与链间二硫键的形成。已经报道了il-17家族成员的许多功能，其主要参与免疫应答的调节。白细胞介素17(il-17，也被称作il-17a)是20-30kd的同源二聚体糖蛋白，其是活化的cd4+t细胞亚群th17细胞分泌的特征性细胞因子，作为促炎细胞因子起作用。il-17具有多种生物学特性，包括上调黏着分子并从多种细胞类型包括滑膜细胞、软骨细胞、成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、角质形成细胞和巨噬细胞中诱导大量炎性细胞因子和趋化因子的产生。同样，il-17通过诱导趋化因子的释放诱导嗜中性粒细胞募集到炎性位点上，刺激前列腺素和金属蛋白酶的产生，并抑制蛋白聚糖的合成。此外，il-17在造血祖细胞的成熟中起重要作用。已表明il-17在不同的器官和组织包括肺、关节软骨、骨、脑、造血细胞、肾、皮肤和肠中具有信号转导功能。il-17在体内的产生增加与多种疾病相关，如呼吸道炎症、类风湿性关节炎、骨关节炎、骨质疏松、系统性硬化、系统性红斑狼疮、腹膜内脓肿与粘连、炎性肠病、同种异体移植排斥、牛皮癣、某些类型的癌、血管发生、动脉粥样硬化和多发性硬化。il-17逐渐被认为是某些炎性或自身免疫疾病的治疗靶点，已有研究提出采用与il-17结合的抗体治疗il-17介导的疾病和病症。但已有的抗il-17在体内的药代动力学性质、疗效并不是很理想，并且在运输和储藏时需要条件苛刻均需冷藏，导致目前il-17抗体的治疗应用受到局限。急需一种热稳定性高有利于运输和储藏，且亲和力及其药效动力学方面有进一步改善的抗il-17抗体，以便易于储藏运输的同时，能实现低剂量低频率给药。技术实现要素：本发明的目的是提供一种热稳定性高，且同时具有高亲和力、高抑制活性和高体内活性的il-17抗体。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种il-17抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，重链可变区序列顺次包含高变区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述hcdr1为序列表seqidno:1中第25-35位氨基酸或其直接等同序列，所述hcdr2为序列表seqidno:1中第50-68位氨基酸或其直接等同序列；所述hcdr3为序列表seqidno:1中第99-124位氨基酸或其直接等同序列；轻链可变区序列顺次包含高变区lcdr1、lcdr2和lcdr3，所述lcdr1为序列表seqidno:2中第24-35位氨基酸或其直接等同序列，所述lcdr2为序列表seqidno:2中第51-57位氨基酸或其直接等同序列；所述lcdr3为序列表seqidno:2中第90-98位氨基酸或其直接等同序列,其中高变区cdr序列根据kabat定义。所述重链可变区序列为序列表seqidno:1的氨基酸序列或其同源序列，轻链可变区序列为序列表seqidno:2的氨基酸序列或其同源序列。evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsnywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvgsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyydiltrdyydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:1)所述重链可变区序列提及的高变区hcdr1、hcdr2和hcdr3的直接等同序列或所述重链可变区序列的同源序列为序列表seqidno:1的第30位、第31位、第62位、第102位、第107位和第114位中的一个或多个氨基酸被替换的氨基酸序列。所述序列表seqidno:1的第30位s替换为y或f。所述序列表seqidno:1的第31位n替换为l或a。所述序列表seqidno:1的第62位g替换为n或q。所述序列表seqidno:1的第102位d替换为e。所述序列表seqidno:1的第107位d替换为r或k。所述序列表seqidno:1的第114位d替换为t或s。本公开所述重链可变区序列的同源序列，优选以下多点替换序列：h1-1：为序列表seqidno:1的第31位n替换为l，第62位g替换为n，第102位d替换为e，即序列表seqidno:5的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfslywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrdyydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:5)h1-1-m：为序列表seqidno:1的第31位n替换为l，第102位d替换为e，即序列表seqidno:6的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfslywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvgsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrdyydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:6)h1-2：为序列表seqidno:1的第31位n替换为l，第62位g替换为n，第102位d替换为e，第107位d替换为r，即序列表seqidno:7的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfslywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrryydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:7)h1-3：为序列表seqidno:1的第31位n替换为l，第62位g替换为n，第102位d替换为e，第114位d替换为t，即序列表seqidno:8的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfslywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrdyydilttyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:8)h3-1：为序列表seqidno:1的第30位s替换为y，第62位g替换为n，第102位d替换为e，即序列表seqidno:9的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfynywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrdyydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:9)h3-1-m：为序列表seqidno:1的第30位s替换为y，第62位g替换为n，即序列表seqidno:10的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfynywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyydiltrdyydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:10)h3-2：为序列表seqidno:1的第30位s替换为y，第62位g替换为n，第102位d替换为e，第107位d替换为r，即序列表seqidno:11的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfynywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrryydiltdyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:11)h3-3：为序列表seqidno:1的第30位s替换为y，第62位g替换为n，第102位d替换为e，第114位d替换为t，即序列表seqidno:12的氨基酸序列；evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfynywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrdyydilttyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:12)h5：为序列表seqidno:1的第30位s替换为y，第62位g替换为n，第102位d替换为e，第107位d替换为r，第114位d替换为t，即序列表seqidno:13的氨基酸序列。evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfynywmnwvrqtpgkglewvaainqdgsekyyvnsvkvrftisrdnaknslylqmnslrvedtavyycardyyeiltrryydilttyyihywyfdlwgrgtlvtvssas(seqidno:13)本公开所述轻链可变区序列提及的高变区lcdr1、lcdr2和lcdr3的直接等同序列或所述轻链可变区序列的同源序列为序列表seqidno:2的第30位、第32位、第54位、第57位和第93位中的一个或多个氨基酸被替换的氨基酸序列。eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvsssylawyqqkpgqaprlliygassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsspltfgggtkveikrt(seqidno:2)所述序列表seqidno:2的第30位s替换为y或f。所述序列表seqidno:2的第32位s替换为n或q。所述序列表seqidno:2的第54位s替换为h。所述序列表seqidno:2的第57位t替换为f或y。所述序列表seqidno:2的第93位g替换为n或q。所述轻链可变区序列的同源序列，优选以下多点替换序列：l0：为序列表seqidno:2的氨基酸序列；l3：为序列表seqidno:2的第30位s替换为y，第54位s替换为h，即序列表seqidno:14的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvyssylawyqqkpgqaprlliygashratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsspltfgggtkveikrt(seqidno:14)l5：为序列表seqidno:2的第32位s替换为n，第54位s替换为h，即序列表seqidno:15的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvssnylawyqqkpgqaprlliygashratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsspltfgggtkveikrt(seqidno:15)l7：为序列表seqidno:2的第30位s替换为y，第57位t替换为f，即序列表seqidno:16的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvyssylawyqqkpgqaprlliygassrafgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsspltfgggtkveikrt(seqidno:16)l8：为序列表seqidno:2的第30位s替换为y，第93位g替换为n，即序列表seqidno:17的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvyssylawyqqkpgqaprlliygassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqynsspltfgggtkveikrt(seqidno:17)l9：为序列表seqidno:2的第32位s替换为n，第57位t替换为f，即序列表seqidno:18的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvssnylawyqqkpgqaprlliygassrafgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygsspltfgggtkveikrt(seqidno:18)l10：为序列表seqidno:2的第32位s替换为n，第93位g替换为n，即序列表seqidno:19的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvssnylawyqqkpgqaprlliygassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqynsspltfgggtkveikrt(seqidno:19)l11：为序列表seqidno:2的第30位s替换为y，第54位s替换为h，第93位g替换为n，即序列表seqidno:20的氨基酸序列；eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvyssylawyqqkpgqaprlliygashratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqynsspltfgggtkveikrt(seqidno:20)l30-32：为序列表seqidno:2的第30位s替换为y，第32位s替换为n，第54位s替换为h，第93位g替换为n，即序列表seqidno:21的氨基酸序列。eivltqspgtlslspgeratlscrasqsvysnylawyqqkpgqaprlliygashratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqynsspltfgggtkveikrt(seqidno:21)本公开中的il-17的重链可变区和轻链可变区优选以下组合：重链可变区为h1-2，轻链可变区为l7(h1-2/l7)：氨基酸序列分别为序列表seqidno:7和序列表seqidno:16；重链可变区为h5，轻链可变区为l3(h5/l3)：氨基酸序列分别为seqidno:13和序列表seqidno:14；重链可变区为h5，轻链可变区为l11(h5/l11)：氨基酸序列分别为seqidno:13和序列表seqidno:20；重链可变区为h3-3，轻链可变区为l7(h3-3/l7)：氨基酸序列分别为seqidno:12和序列表seqidno:16；重链可变区为h1-3，轻链可变区为l11(h1-3/l11)：氨基酸序列分别为seqidno:8和序列表seqidno:20；重链可变区为h1-3，轻链可变区为l3(h1-3/l3)：氨基酸序列分别为seqidno:8和序列表seqidno:14；重链可变区为h1-3，轻链可变区为l5(h1-3/l5)：氨基酸序列分别为seqidno:8和序列表seqidno:15；重链可变区为h1-3，轻链可变区为l7(h1-3/l7)：氨基酸序列分别为seqidno:8和序列表seqidno:16；重链可变区为h3-1，轻链可变区为l11(h3-1/l11)：氨基酸序列分别为seqidno:9和序列表seqidno:20；重链可变区为h3-1，轻链可变区为l3(h3-1/l3)：氨基酸序列分别为seqidno:9和序列表seqidno:14；重链可变区为h3-1，轻链可变区为l5(h3-1/l5)：氨基酸序列分别seqidno:9和序列表seqidno:15；重链可变区为h3-1，轻链可变区为l7(h3-1/l7)：氨基酸序列分别为seqidno:9和序列表seqidno:16；重链可变区为h5，轻链可变区为l7(h5/l7)：氨基酸序列分别为seqidno:13和序列表seqidno:16；重链可变区为h1-2，轻链可变区为l7(h1-2/l7)：氨基酸序列分别为seqidno:7和序列表seqidno:16；重链可变区为h1-2，轻链可变区为l5(h1-2/l5)：氨基酸序列分别为seqidno:7和序列表seqidno:15；重链可变区为h1-2，轻链可变区为l3(h1-2/l3)：氨基酸序列分别为seqidno:7和序列表seqidno:14；重链可变区为h1-2，轻链可变区为l11(h1-2/l11)：氨基酸序列分别为序列表seqidno:7和序列表seqidno:20。所述抗体为单链抗体、fab、嵌合抗体或全抗体免疫球蛋白。所述抗体还包含选自igg1、igg2、igg3、igg4、iga、ige、igm或igd型的重链恒定区和包含选自kappa或lambda亚型的轻链恒定区。优选地，所述重链恒定区序列为igg1亚型；所述轻链恒定区序列为kappa亚型。所述重链恒定区序列为序列表seqidno:3的氨基酸序列，轻链恒定区序列为序列表seqidno:4的氨基酸序列。tkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(序列表seqidno:3)vaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(序列表seqidno:4)dna序列，其编码上述il-17抗体。本领域技术人员在已知抗体的氨基酸序列的基础上，为了表达该抗体，能够获得其编码核苷酸序列，并根据所选用的表达系统和使用的酶，进一步优化采用表达系统偏好密码子或增加相应的酶切位点序列。能够在原核或真核细胞系中复制的表达载体，其包含上述dna序列。含有上述表达载体的宿主菌、宿主细胞或表达盒。转染上述表达载体的宿主细胞，优选为cho细胞或hek293细胞。药物组合物，其包含上述il-17抗体与药物学上可接受的载体。所述药物组合物还可包括至少一种另外的治疗药物，所述治疗药物用于治疗其中il-17活性是有害的疾病。所述药物组合物可以为溶液、乳剂或混悬剂的液体剂型。发明的药物制剂的施用可以经胃肠外施用进行。胃肠外施用在医学文献中通常理解为通过无菌注射器或其它机械装置如输液泵将剂型注射到身体内。胃肠外途径可以包括静脉内、肌内、皮下和腹膜内给药途径。优选皮下给药。产生il-17抗体的方法，培养用上述表达载体转化的生物体，并从培养物中回收il-17抗体。本发明的il-17抗体可以利用本领域熟知的技术制备，所述技术例如重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或这些技术与本领域其它公知技术的组合。制备和纯化抗体和抗原结合片段的方法是本领域熟知的。上述il-17抗体在制备用于治疗骨关节炎、类风湿性关节炎、骨质疏松症、银屑病、强直性脊柱炎、多发性骨髓瘤、局限性回肠炎、慢性阻塞性肺病(copd)、移植排斥中或哮喘的药物中的用途。本公开的il-17抗体特别适用于治疗、预防或改善自身免疫疾病和炎性疾病，特别是病因学包括自身免疫成分的炎性疾病，比如关节炎(例如类风湿性关节炎、慢性进行性关节炎和变形性关节炎)和风湿性疾病，其中风湿性疾病包括涉及骨丢失、炎性疼痛、脊椎关节病(包括強直性脊椎炎、赖特尔综合征、反应性关节炎、银屑病关节炎和肠病性关节炎)、超敏反应(包括呼吸道超敏反应和皮肤超敏反应)和变态反应。可采用本发明抗体的特定自身免疫疾病包括自身免疫血液病(包括例如溶血性贫血、再生障碍性贫血、纯红细胞贫血和自发性血小板减少症)、系统性红斑狼疮、炎性肌肉病(inflammatorymuscledisorders)、多软骨炎、硬皮病、韦格纳肉芽肿病、皮肤肌炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、牛皮癣、史蒂芬强森综合征、自发性口炎性腹泻、自身免疫炎性肠病(包括例如溃疡性结肠炎、克隆氏疾病和应激性肠综合征)、内分泌眼病、格雷夫斯疾病、肉样瘤病、多发性硬化、原发性胆汁性肝硬变、青少年糖尿病(i型糖尿病)、眼色素层炎(前眼色素层炎和后眼色素层炎)、干性角膜結膜炎和春季角膜結膜炎、肺间质纤维化、银屑病关节炎和肾小球性肾炎(具有和不具肾病综合征，包括例如自发性肾病综合征或微小病变性肾病)、肿瘤、多发性硬化、皮肤和角膜的炎性疾病、肌炎、骨植入物松动、代谢性疾病例如动脉硬化、糖尿病和血脂异常。本公开的il-17抗体也适用于对哮喘、支气管炎、肺尘症、肺气肿和呼吸道的其他阻塞性或炎性疾病的治疗、预防或改善。本公开的il-17抗体适用于治疗由il-17介导的或涉及il-17产生或由il-17促进的tnf释放介导的不希望的急性和超急性炎性反应，如急性感染,例如败血症性休克、脑膜炎、肺炎；以及严重烧伤；并适用于治疗与病理性tnf释放有关的、继发于感染、癌症或器官机能障碍的恶病质或消瘦综合征，尤其是例如与hiv感染有关或继发于hiv感染的aids相关的疾病。本公开的il-17抗体尤其适用于治疗包括骨关节炎、骨质疏松症和其他炎性关节炎的骨代谢疾病，以及全身骨丢失(包括与年龄有关的骨丢失)和特别是牙周疾病。本发明的优点在于：本发明的il-17抗体热稳定性高，且具有高亲和力、高抑制活性和高的体内活性。下面结合具体实施方式对本公开做详细的说明，并非对本发明的限制，凡依照本公开内容进行的本领域等同替换，均属于本公开的保护范围。具体实施方式实施例1：抗体制备一、载体构建先合成抗体的重链h3-1和轻链序列l3的编码基因，pcr扩增后，用ecori(takara，1040a)和bamhi酶(takara，1010a)分别将dna序列和pcdna3.1载体(invitrogen，v79020)进行双酶切，分别回收酶切后的载体和目的dna片段后，使用dna连接酶试剂盒(takara/6022)16℃连接1h，分别连接重链和载体酶切产物、轻链和载体酶切产物，从而将抗体的重链和轻链分别构建到pcdna3.1载体上形成重链pcdna3.1(h3-1)和轻链质粒pcdna3.1(l3)。上述重链h3-1编码基因包括信号肽序列(atgggatggtcatgtatcatcctttttctagtagcaactgccaccggtgtacactca,seqidno:35)、重链可变区序列和重链恒定区序列，其是在序列表seqidno:22基础上添加信号肽序列和重链恒定区序列得到；轻链l3编码基因包括信号肽序列、轻链可变区序列和轻链恒定区序列，其是在序列表seqidno:27基础上添加信号肽序列和轻链恒定区序列得到。同样方法，我们合成并构建了所有突变体重链和轻链的质粒。也可通过常规点突变的方法获得所有突变体相关的质粒。本公开中重链或轻链可变区部分除酶切位点和信号肽序列外的编码基因可以是如下序列：h3-1的编码序列：序列表seqidno:22h1-3的编码序列：序列表seqidno:23h1-2的编码序列：序列表seqidno:24h5的编码序列：序列表seqidno:25h3-3的编码序列：序列表seqidno:26h的编码序列：序列表seqidno:31h1的编码序列：序列表seqidno:33l3的编码序列：序列表seqidno:27l5的编码序列：序列表seqidno:28l7的编码序列：序列表seqidno:29l11的编码序列：序列表seqidno:30k的编码序列：序列表seqidno:32l2的编码序列：序列表seqidno:34二、抗体的表达和纯化于3.5cm组织培养皿中接种3×105293f细胞(invitrogen，k1677，细胞培养至90％-95％融合时进行转染：取36ml细胞培养基到125ml培养瓶；加360ug质粒(重链质粒：轻链质粒＝1:3)，混匀；再加1080ugpei，混匀。室温静置15分钟；与细胞混匀，约12.3ml/瓶；37℃，8％co2，120rpm培养。转染后第六日收集细胞上清，10000g离心20分钟。收集上清，0.45um过滤，得到蛋白上清液。用proteina亲和柱(ge)分离纯化抗体，使用0.1m甘氨酸溶液(ph3.2)洗脱得到目的抗体，离心浓缩至浓度约为1mg/ml。使用20mmpbs，150mmnacl，ph7.2的缓冲溶液储存。得到纯化后的抗体h1-2/l7、h5/l3、h5/l11、h3-3/l7、h1-3/l11、h1-3/l3、h1-3/l5、h1-3/l7、h3-1/l11、h3-1/l3、h3-1/l5、h3-1/l7、h5/l7、h1-2/l7、h1-2/l5、h1-2/l3、h1-2/l11等。实施例2il-17抗体与抗原间的结合亲和力kd检测一、仪器和原理本实验通过生物膜层干涉技术(bli)检测评价il-17抗体与抗原间的亲和力强弱，从而确定所选抗体在动力学和亲和力上的优越性。实验使用octet仪器(fortebio公司，型号为qke)进行测定。使用thermofisher公司的生物素化试剂盒(ez-linktmsulfo-nhs-biotincat:21326)进行生物素标记。二、实验方法实验主要包括以下步骤(未做特殊说明的情况下实验在室温下进行)：打开机器octet的电源，预热机器1小时以上。将未使用的sasensor放置于取用架上，取用架下方对应孔中加入300uldpbs缓冲液(0.05％bsa，0.1％tween)，使sensor在缓冲液中孵育10min以上，以溶解sensor前端包裹的蔗糖。使用pbs缓冲液(0.05％bsa，0.1％tween)稀释生物素化人源il-17a抗原(hil-17a，金斯瑞，z03228-50)至0.33ug/ml，加入至黑色不透光96孔板中，300ul/孔。使用pbs缓冲液(0.05％bsa，0.1％tween)稀释上述实施例2制备的各抗体样品至5ug/ml，加入96孔板的相应孔中，300ul/孔，共3复孔。使用pbs缓冲液(0.05％bsa，0.1％tween)设置一组空白对照。使用dataacquisition8.2设置运行程序，使sasensor结合生物素化抗原(180sec)后，与一组候选抗体反应(300sec)测定结合反应中kon数据，然后置于pbs缓冲液(0.05％bsa，0.1％tween)中(1800sec)测定解离反应中koff数据。使用10mm甘氨酸清洗sasensor后同样的方法测定下一组候选抗体。运行结束后使用dataanalysis8.2分析软件分析所得数据文件，根据所得kd数据对候选抗体进行排序。三、实验结果1.重链(h链)单点替换的测定平均结果如表1所示：表1sampleidconc.(nm)kd(m)kon(1/ms)kdis(1/s)fullr^2s30y33.39.49e-115.28e+055.01e-050.9555n31l33.31.12e-104.99e+055.57e-050.938g62n33.35.75e-116.34e+053.64e-050.9117d102e33.3<1.0e-124.29e+051.75e-070.9484d107r33.31.27e-104.83e+056.12e-050.9768d114t33.31.32e-105.10e+056.71e-050.95822.轻链(l链)单点替换的测定平均结果如表2所示：表2sampleidconc.(nm)kd(m)kon(1/ms)kdis(1/s)fullr^2s30y33.34.65e-115.97e+052.78e-050.9335s32n33.3<1.0e-123.22e+05<1.0e-070.9824s54h33.31.10e-113.65e+054.00e-060.9846t57f33.33.33e-114.68e+051.56e-050.9247g93n33.32.14e-104.49e+059.58e-050.98053.重链(h链)多点替换的测定平均结果如表3所示：表3sampleidconc.(nm)kd(m)kon(1/ms)kdis(1/s)fullr^2h1-133.32.76e-114.76e+051.32e-050.9677h3-133.35.96e-116.33e+053.77e-050.9197h1-1-m33.37.28e-115.23e+053.81e-050.9508h1-333.38.47e-123.92e+053.32e-060.9642h3-1-m33.32.58e-115.16e+051.33e-050.945h3-233.33.68e-116.86e+052.53e-050.9091h1-233.39.64e-123.42e+053.30e-060.9935h3-333.31.21e-105.83e+057.05e-050.9659h533.31.81e-105.11e+059.24e-050.97894.轻链(l链)多点替换的测定结果如表4所示：表4sampleidconc.(nm)kd(m)kon(1/ms)kdis(1/s)fullr^2l333.37.72e-114.78e+053.69e-050.9682l833.33.06e-104.59e+051.40e-040.9711l933.31.52e-104.92e+057.47e-050.9765l733.32.95e-114.64e+051.37e-050.9677l533.35.90e-115.18e+053.05e-050.9635l1033.31.55e-106.48e+051.00e-040.951l1133.31.10e-105.00e+055.48e-050.9672l30-3233.31.44e-106.31e+059.07e-050.9395.重链(h链)与轻链(l链)同时多点替换的测定平均结果如表5所示，其中h/k(参见专利cn101001645b)、h1/l2(参见专利cn103154026b)为对照组：表5由上述表中重链(h链)与轻链(l链)同时多点替换的测定平均结果可知，与已有抗体相比，本发明的抗体亲和力都较高，部分抗体亲和力kd<1.0e-12。实施例3hil-17抗体抑制活性测定一、原理和材料将hil-17抗体作用于hil-17a刺激的人胚胎皮肤成纤维细胞(简称ccc-esf-1细胞，协和细胞资源中心)，通过定量hil-17a刺激的ccc-esf-1细胞释放的il-6水平，说明hil-17抗体的抑制活性,其中il-6用humanil-6elisa检测试剂盒(r&dsystem，d6050)进行定量。二、实验方法ccc-esf-1细胞以1×104个/孔的密度接种在96孔细胞培养板中，37℃，5％co2过夜培养。然后分为空白对照、对照组、实验组对细胞进行处理。(1)空白对照组加入dmem细胞培养基(gibco，11995-065)进行稀释；(2)对照组加入30ng/ml(1.67pmol/ml)的hil-17a(genscript，z03228-50)；(3)实验组：在加入的hil-17抗原剂量一定(终浓度为1.67pmol/ml)时，按照摩尔比为0.25:1，0.5:1，1:1，2:1，4:1，8:1，16:1，32:1分别进行抗原与抗体等体积混合后处理细胞。37℃孵育1h后加入到96孔板细胞中(每组分别设置3个复孔)，37℃，5％co2细胞培养箱孵育24h后，各孔均取100μl上清液然后按照elisa试剂盒的操作说明对il-6进行检测。通过使用graphpadprism5软件对抑制曲线进行拟合确定各抗体的ic50各抗体ic50结果如下表6所示：表6抗体编号ic50(pm)h/k431h1/l2654h1-2/l7210h5/l3242h3-3/l7192h5/l0155h3-1/l0188h3-2/l0172h3-1/l3275h3-1/l5288h3-1/l11323h1-3/l5375h3-1/l7274h1-3/l3382h1-3/l7199h1-2/l5183实施例4、动物体内测活方法一、原理和材料本发明的hil-17抗体能够在cd-1小鼠体内阻断hil-17的活性。hil-17能够结合并刺激小鼠il-17受体，导致趋化因子cxcl1(kc)的大量释放。筛选了hil-17体内诱导小鼠kc产生的最佳剂量和时间，通过给予hil-17抗体抑制kc产生的程度来评价hil-17抗体的效果。订购spf级别cd-1小鼠，小鼠规格为雄性，体重30-35g。随机分为三组：正常对照组、hil-17模型组及各实验组(各待测hil-17抗体组)，每组5只。二、实验方法正常对照组和hil-17模型组给药dpbs缓冲液(thermofisher，14190-144)。实验组：根据预实验的结果选定hil-17和hil-17结合剂的最佳剂量，每只小鼠尾静脉注射各待测hil-17抗体，剂量为12μg/只，体积为0.3ml，浓度为40μg/ml。给药0.5h后，除正常对照组外所有小鼠均背部皮下注射hil-17(金斯瑞，z03228-50)，剂量为3μg/只，体积为0.2ml，浓度为15μg/ml，其中正常对照组给药dpbs缓冲液。在hil-17作用2h后，眼眶取血收集血清，将小鼠安乐死。使用elisa法测定血清中的kc含量，进行药效评估。三、实验结果测定结果如下表7所示。表7由上表可知，与已有抗体相比，本发明的抗体在体内抑制kc产生的能力更强，疗效更好。实施例5il-17抗体的热稳定性检测一、检测原理因芳香族氨基酸在紫外照射下产生荧光，而蛋白在加热过程中由于本身结构的去折叠，内部的芳香族氨基酸暴露在水环境中，会引起荧光的淬灭。故使用荧光光谱观察蛋白荧光淬灭过程可得到能够反应蛋白去折叠(变性)的数据—tm值。同时，利用sls(静态光散射)对溶液中溶质粒子粒径变化的监测，得到该蛋白开始聚集的温度—tagg值。高的tm值和tagg值可说明蛋白样品能够在更高的温度下保持结构稳定。本实验采用仪器unit(unchainedlabs)测定。二、实验方法启动机器unit(unchainedlabs)，稀释抗体样品至统一浓度250ug/ml，10000rpm1分钟离心。取8.5ul加入到检测管中在unit.client中设置运行程序：设置检测起点20℃，终点95℃，每分钟上升0.3℃，孵育0分钟。运行程序，然后在unit.analysis中分析所存结果、保存分析结果。samplename变性起始温度(℃)聚集起始温度(℃)h/k61.566.7h1/l262.766.3h1-2/l568.574.3h1-2/l767.975.7h1-2/l1168.874.2h3-3/l768.275.4上述热稳定性实验结果说明，与已有抗体相比，本发明的抗体热稳定性更好，更有利于储存和运输。序列表<110>舒泰神（北京）生物制药股份有限公司<120>il-17抗体<130><160>35<170>patentinversion3.5<210>1<211>137<212>prt<213>人工序列<400>1gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheserasntyr202530trpmetasntrpvalargglnthrproglylysglyleuglutrpval354045alaalaileasnglnaspglyserglulystyrtyrvalglyserval5055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