一种诱导糙皮侧耳菌加速产漆酶的方法与流程

本发明涉及一种木质素降解酶漆酶的诱导生产方法，特别涉及一种利用糙皮侧耳pleurotusostreatus(jacq.)p.kumm.菌株诱导加速生产漆酶的方法，属于食用和药用真菌应用领域。

背景技术

糙皮侧耳pleurotusostreatus(jacq.)p.kumm.属菌物界fungi，担子菌门basidiomycota，伞菌纲agaricomycetes，伞菌目agaricales，侧耳科pleurotaceae，侧耳属pleurotus(fr.)p.kumm.真菌，是最重要的食用和药用真菌之一(戴玉成等2010)，具有治疗腰腿疼痛、手足麻木、筋络不疏、抑肿瘤等作用(戴玉成和杨祝良2008)。其属于白腐真菌，能够分泌相关的水解酶(纤维素酶和半纤维素酶)和降解木素的氧化酶，因此能降解各种农业和工业的木质纤维素废弃物等。

木质素降解酶类包括木素过氧化物酶(ligninperoxidase)、锰过氧化物酶(manganeseperoxidase)和漆酶(laccase)等，其中，漆酶(lac，ec1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶(p-diphenploxidase)，与植物中的抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆中的铜蓝蛋白均属于蓝色多铜氧化酶家族，在结构和功能上也有许多的相似之处。漆酶在自然界中有着极为广泛的存在，在植物、动物、细菌和真菌中等发现了漆酶或者是漆酶的类似物，但是其中主要的生产者还是真菌，尤其是白腐真菌。白腐菌漆酶为胞外蛋白，这些蛋白的表观分子量有较大差异，从58～390kda不等，比较典型的分子量为60～80kda。

漆酶由于其底物的广泛和人们对漆酶介质的不断研究，其在工农业生产及环境保护中具有极为广泛的应用前景和应用价值。第一，造纸工业领域。漆酶在制浆造纸领域中的应用主要体现在生物制浆、纸浆增湿、纸浆生物漂白、纸浆脱墨等诸多方面。在漂白过程中是通过去除木质素来提高纸张的质量及色泽，传统的纸浆漂白过程是采用氯化物对木质素进行选择性的降解，但产生的一系列副产物如二噁英等则对环境形成一定的负面影响。漆酶及漆酶介体系统(lms)可以替代传统纸浆漂白所使用的试剂来对纸浆处理，达到较好的漂白效果且不会产生对环境有副作用的副产物。第二，食品工业领域。漆酶能有效地降解黄曲霉毒素(afb1)，因此，这对于控制食品中的生物毒素水平具有极为重要的价值。而且，漆酶由于具有催化酚类化合物并同时消耗氧的特点，其在净化水质及防止食品变质等方面也有应用。第三，医药工业领域。漆酶能够转化某些酚类底物来生产抗菌素，比如将4-甲基-3-羟基邻氨基苯甲酸转化成放线菌素(actinocin)，该产物可以通过阻断肿瘤细胞dna的转录来起到对抗癌症的功效。第四，生物合成领域。漆酶可催化生漆中的漆酚氧化，使得生漆干燥成膜。第五，能源开发领域。利用漆酶对稻草、灌木等农林废弃物进行生物预处理，降解其中的木质素和半纤维素，提高酶水解的效率和还原糖的得率，为农林废弃物处理和乙醇生产的无污染化工艺奠定生物学基础。第六，生物修复领域及环境保护领域。漆酶能够有效地处理工业废水，将有毒的芳香类化合物降解成无毒或毒性很低的小分子化合物，可降低废水中的总有机氯、色度等，其具有无污染且能耗低等优点。

目前普遍认为，限制漆酶广泛应用的因素在于漆酶的生产规模、成本与性质。高成本的投入一直都是限制木质素酶被广泛利用的关键因素之一，而在生物领域中往往需要大量低成本、且性质稳定的酶蛋白供其迅速发展。因此，如果能使得产酶时间提前则能够大量节约人力物力。而且，真菌漆酶的生产模式包括固态发酵和液体发酵，工业生产基本以液体发酵为主。

本实验利用两株栽培糙皮侧耳菌株在简单的液体发酵条件下，以简单的木质素或者含葡萄糖的木质素培养基进行诱导产漆酶，能够在发酵初期就得到高漆酶活性，能够极大的提高工作效率、节省大量的成本，为今后迅速获取低成本酶并广泛应用于生物领域提供一种新方法。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是针对现有的漆酶生产方法中所普遍存在的技术不成熟，产量低，生产成本高，产酶时间长等缺陷，提供一种新的诱导糙皮侧耳菌加速产漆酶的方法，本发明方法采用含有碱性木质素的诱导培养基诱导培养糙皮侧耳菌，摸索出了适合于糙皮侧耳菌产漆酶的培养基、发酵时间、温度等环境因子，具有漆酶活性高，产漆酶时间提前，产漆酶时间早，漆酶产量高，缩短了漆酶生产周期，漆酶生产效率高，生产成本低等优点。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种诱导糙皮侧耳菌加速产漆酶的方法，包括将真菌菌株糙皮侧耳菌于含有碱性木质素的诱导培养基中进行发酵培养。

其中，所述真菌菌株糙皮侧耳菌(pleurotusostreatus)，其在中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00322；所述真菌菌株糙皮侧耳菌(pleurotusostreatus)，其在中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00406。

特别是，所述菌株编号为ccmssc00322、ccmssc00406真菌菌株糙皮侧耳菌(pleurotusostreatus)保存于中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库(chinacenterformushroomspawnstandardsandcontrol，ccmssc)；保藏地址：北京市海淀区中关村南大街12号。

尤其是，中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00322的糙皮侧耳菌株(pleurotusostreatus)在中国农业微生物菌种保藏管理中心的菌株保藏编号为accc50156；保藏于中国农业微生物菌种保藏管理中心(agriculturalculturecollectionofchina英文缩写accc)；保藏地址：北京市海淀区中关村南大街12号。

尤其是，中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00406的糙皮侧耳菌株(pleurotusostreatus)在中国农业微生物菌种保藏管理中心的菌株保藏编号为accc50838；保藏于中国农业微生物菌种保藏管理中心(agriculturalculturecollectionofchina英文缩写accc)；保藏地址：北京市海淀区中关村南大街12号。

其中，所述诱导培养基的组成为：碱性木质素3g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b10.03g、无菌水1000ml，ph自然。

特别是，所述诱导培养基的组成为：葡萄糖10g、碱性木质素3g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b10.03g、无菌水1000ml，ph自然。

其中，所述发酵培养的培养条件为在26±1℃下恒温、避光培养。

特别是，所述发酵培养在摇床上恒温培养，其中摇床速度为150-200r/min。

为了解决本发明的技术问题，采用以下技术方案：

一种诱导糙皮侧耳菌加速产漆酶的方法，按照如下顺序进行步骤进行：

1)将糙皮侧耳菌接种于固体mea平板培养基上，进行菌种活化培养；

2)将活化培养后的菌种接种于液体完全培养基中，进行扩大培养，制得扩大培养混合物；

3)在无菌操作条件下采用匀浆机对扩大培养混合物进行均质搅拌处理，制得糙皮侧耳菌均质体；

4)将糙皮侧耳菌均质体接种于诱导培养基中，进行诱导发酵培养。

其中，步骤1)中所述菌种活化培养是在26±1℃恒温的条件下进行培养。

特别是，所述菌种活化培养时间为5-9天，优选为7天。

其中，步骤2)中所述扩大培养是在26±1℃恒温、避光的条件下进行培养。

特别是，所述扩大培养在摇床上恒温培养，其中摇床速度为150-200r/min。

尤其是，所述扩大培养的时间为6-9天，优选为7天。

其中，步骤3)中搅拌时间为20-60秒，优选为30秒(s)。

特别是，所述糙皮侧耳菌均质体经匀浆机搅拌后菌丝球会变成质地均匀的菌丝，无大菌丝球的存在。

其中，步骤4)中所述诱导培养基的组成为：碱性木质素3g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b10.03g、无菌水1000ml，ph自然。

特别是，步骤4)中所述诱导培养基的组成为：葡萄糖10g、碱性木质素3g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b10.03g、无菌水1000ml，ph自然。

尤其是，步骤4)中所述诱导发酵培养的培养条件为在26±1℃下恒温、避光培养。

特别是，步骤4)中所述诱导发酵培养在摇床上恒温培养，其中摇床速度为150-200r/min。

特别是，步骤4)中所述糙皮侧耳菌均质体接种的体积与诱导处理培养基体积之比为2-6：100，优选为3:100。

本发明人通过大量的实验发现，糙皮侧耳菌的培养基组成对糙皮侧耳菌产漆酶的时间和漆酶活性的影响较大，因此，发明人考察了培养基中含有碱性木质素和碱性木质素含量的高低、碱性木质素与葡萄糖、碱性木质素与蛋白胨对产漆酶时间、漆酶活性的影响，最终发现诱导培养基中含有碱性木质素、葡萄糖和碱性木质素的培养基对应糙皮侧耳菌产漆酶时间提前和漆酶活性有利。

本发明与现有技术相比，具有如下优点和好处：

1、本发明方法可以大幅度缩短糙皮侧耳菌产漆酶的时间，缩短漆酶生产周期，提高漆酶生产效率，降低漆酶生产成本；

2、本发明方法摸索出了适合于糙皮侧耳菌产漆酶的培养基、发酵时间、温度等环境因子，采用含有碱性木质素的诱导培养基诱导培养糙皮侧耳菌，漆酶活性提高，漆酶产量高；

3、本发明方法摸索出2株栽培糙皮侧耳pleurotusostreatus利用简单的木质素或者含葡萄糖的木质素培养基进行诱导产漆酶，能够在发酵初期就得到高漆酶活性；其中在仅以木质素培养基做诱导时两个菌株均在第1天就检测到最大漆酶酶活性，在含葡萄糖的木质素培养基做诱导时菌株ccmssc00322能够在第1天检测到最大漆酶酶活性而菌株ccmssc00406也能在第2天检测到最大漆酶酶活性；

4、本发明方法摸索出2株栽培糙皮侧耳pleurotusostreatus利用简单的木质素或者含葡萄糖的木质素培养基进行诱导产漆酶，能够发现只用木质素或者额外添加碳源(葡萄糖)来诱导，效果明显要优于额外添加氮源(蛋白胨)的培养基，也表明对于产漆酶而言碳源要比氮源更为重要；

5、本发明方法将2株栽培糙皮侧耳pleurotusostreatus的整个产酶时间完全提前，使得其在发酵初期得到最大漆酶活性后便下降，方便前期便可纯化利用，便于投入到工业中使用；

6、本发明方法是建立在极为简单的液体培养基的基础上，操作简便，省时省力，易于重复，利于广泛推广使用。

附图说明

图1为糙皮侧耳栽培菌株ccmssc00322在诱导处理培养基1(c1)、处理培养基2(c2)、对比培养基1(d1)和对比培养基2(d2)条件下液体发酵的漆酶活性检测图；

图2为糙皮侧耳栽培菌株ccmssc00406在诱导处理培养基1(c1)、处理培养基2(c2)、对比培养基1(d1)和对比培养基2(d2)条件下液体发酵的漆酶活性检测图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。碱性木质素购自西格玛(sigma)公司。

实施例1

1、实验菌株

在中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00322和ccmssc00406的2株真菌菌株糙皮侧耳栽培菌株pleurotusostreatus，由中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库(chinacenterformushroomspawnstandardsandcontrol，ccmssc)提供。

中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00322的糙皮侧耳菌株(pleurotusostreatus)在中国农业微生物菌种保藏管理中心的菌株保藏编号为accc50156；中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库的菌株编号为ccmssc00406的糙皮侧耳菌株(pleurotusostreatus)在中国农业微生物菌种保藏管理中心的菌株保藏编号为accc50838；保藏于中国农业微生物菌种保藏管理中心(agriculturalculturecollectionofchina英文缩写accc)；保藏地址：北京市海淀区中关村南大街12号。

2、培养基

2a、麦芽浸粉琼脂培养基(maltextractagar，mea)：葡萄糖10g/l、麦芽浸粉20g/l、磷酸二氢钾3g/l、琼脂20g/l，无菌水，ph自然，在温度121℃下恒温灭菌30min。

2b、完全培养基(completemedium，cym)：葡萄糖20g/l、蛋白胨2g/l、酵母膏2g/l、七水硫酸镁0.5g/l、三水磷酸氢二钾1g/l、磷酸二氢钾0.46g/l，无菌水，ph自然，在温度121℃下恒温灭菌30min。

2c、诱导处理培养基1(c1)：碱性木质素(lignin，alkali)3g/l、磷酸二氢钾3.0g/l、维生素b1(vb1)0.03g/l，无菌水1000l，ph自然，在温度121℃下恒温灭菌30min。

2d、诱导处理培养基2(c2)：葡萄糖10g/l、碱性木质素3g/l、磷酸二氢钾3.0g/l、维生素b1(vb1)0.03g/l，无菌水1000l，ph自然，在温度121℃下恒温灭菌30min。

2e、对比培养基1(d1)：蛋白胨2g、碱性木质素3g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b1(vb1)0.03g，无菌水定容至1l。

2f、对比培养基2(d2)：葡萄糖10g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾3.0g、维生素b1(vb1)0.03g，无菌水定容至1l。

实施例2

2-1)将中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库提供的菌株编号为：ccmssc00322的真菌菌株糙皮侧耳菌pleurotusostreatus接种于固体mea平板培养基上，于26℃下恒温培养，进行菌种活化；

2-2)活化培养7d(通常为5-9天)后，用无菌打孔器打取直径为5mm的菌种活化培养物，获得扩大培养接种物；并将扩大培养接种物接种于液体完全培养基(cym)中，在摇床上于150r/min、26℃下恒温摇床避光培养，制得糙皮侧耳菌扩大培养混合物(含有扩大培养得到糙皮侧耳菌丝球)，其中，每100ml完全培养基中接种5个扩大培养接种物；

2-3)摇床避光培养7d(通常为6-9天)后的含有糙皮侧耳菌丝球的糙皮侧耳扩大培养混合物在无菌操作条件下采用匀浆机进行搅拌处理，匀浆机将糙皮侧耳扩大培养混合物中的菌丝球打碎，搅拌30s(通常为20-60s)，制成糙皮侧耳菌均质体；糙皮侧耳菌均质体经匀浆机搅拌后菌丝球会变成质地均匀的菌丝，无大菌丝球的存在。

2-4)将糙皮侧耳菌均质体3ml(通常为2-6ml)接种于含有100ml诱导处理培养基1(c1)的250ml的三角瓶中，在摇床上于150r/min、26℃下恒温摇床避光培养，进行发酵处理，诱导糙皮侧耳菌产漆酶，其中接种的均质体的体积与诱导处理培养基体积之比为3:100(通常为2-6：100)；每个实验设置3个重复。

2-5)在诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程中，于接种后每24h吸取发酵液测定漆酶活性，漆酶活性的测定方法如下：

a)将三角瓶内的发酵混合物(包括发酵液体和菌丝球)经过双层滤纸用循环水真空泵进行抽滤，抽滤去除菌丝球等，得到滤液(即纯液体发酵液)，接着吸取滤液，于4℃12000r/min离心20min，获得上清液即粗酶液，然后吸取粗酶液测定吸光值；

b)首先按照3ml反应体系将abts、醋酸-醋酸钠缓冲液和酶液混合均匀，3ml反应体系中含有1ml1mmol/l2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonicacid)，abts)底物、1.9ml50mmol/l醋酸-醋酸钠缓冲液(ph4.2)和100μl的粗酶液，混合后置于双光束紫外可见分光光度计uv-4802机器(上海尤尼柯公司)中，于420nm处初步测定，使得吸光值在0.2-0.8之间，若数值>0.8则需稀释粗酶液(使用去离子水或蒸馏水稀释)，若数值<0.2则增加适量粗酶液，使得其吸光值在0.2-0.8之间。

c)通过预测之后，将abts、醋酸-醋酸钠缓冲液和酶液混合均匀后置于双光束紫外可见分光光度计uv-4802仪器中，于420nm处测定5min内的吸光值变化，其中，3ml反应体系中含有1ml1mmol/l2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonicacid)，abts)底物、1.9ml50mmol/l醋酸-醋酸钠缓冲液(ph4.2)和100μl的酶液。

定义每分钟转化1μmolabts所需的酶量为一个活力单位。abts在420nm处摩尔吸光系数为3.6×10⁴l/(mol·cm)。

连续测定10天，即诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程连续10天测定发酵液酶活性，测定结果如表1、图1所示。

实施例3

除了步骤2-3)中使用的培养基为诱导处理培养基2(c2)之外，其余与实施例2相同。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表1、图1所示。

表1糙皮侧耳栽培菌株ccmssc00322液体发酵的漆酶活性

从表1、图1的实验结果可知：

1、菌株ccmssc00322在仅含碱性木质素作为诱导的处理培养基1，即c1处理，在第1天就能检测到漆酶活性，而且是10天内的最大酶活性，高达49.11±3.19u/l；从第2天，漆酶活性开始快速衰减，至第10天降到仅4.64±0.048u/l(图1，表1)。

2、菌株ccmssc00322在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2，即c2处理，第1天的漆酶活性同处理培养基1(c1)时的趋势相同，也是达到了最大值，高达63.61±5.09u/l(图1，表1)，高于处理培养基1条件下的漆酶活性；从第2天漆酶活性也开始快速下降。

菌株ccmssc00322在仅含碱性木质素作为诱导的处理培养基1，即c1处理，最大漆酶酶活性为49.11±3.19u/l，于第1天产生；在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2，即c2处理，最大漆酶酶活性为63.61±5.09u/l，于第1天产生。

3、菌株ccmssc00322在含简单氮源(蛋白胨)和碱性木质素一起来做诱导的对比培养基1，即d1，在第1天虽然也能检测到漆酶活性，但却很小，仅有11.13±0.45u/l(图1，表1)；即便在第3天能检测到最大漆酶活性也仅为15.37±0.49u/l(图1，表1)。

4、菌株ccmssc00322在不含碱性木质素但含简单碳源(葡萄糖)和简单氮源(蛋白胨)的对比培养基2，即d2，直到第4天才开始检测到漆酶活性且很小，为5.74±0.42u/l(图1，表1)；第8天达到最大漆酶活性，为12.54±0.55u/l(图1，表1)。

5、从图1、表1的结果可知：菌株ccmssc00322在本发明方法含碱性木质素作为诱导的处理培养基(c1、c2)中进行诱导培养，产漆酶时间明显提前，显著缩短了糙皮侧耳菌产漆酶生产周期，并且采用本发明方法糙皮侧耳菌产漆酶的活性也显著增加。

6、菌株ccmssc00322在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2(c2处理)条件下的漆酶酶活性均高于处理培养基1(c1处理)，换言之，诱导处理培养基2更适合菌株ccmssc00322产漆酶。

7、从图1、表1的结果可知：菌株ccmssc00322在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2(c2处理)条件下的漆酶活性高于含简单氮源(蛋白胨)和碱性木质素一起来做诱导的对照培养基1(d1处理)条件下的漆酶活性，表明对于诱导产漆酶方面葡萄糖作用比蛋白胨更重要。

8、从图1、表1的结果可知：菌株ccmssc00322在含木质素的培养基中均在第1天能检测到漆酶活性，但不含木质素的对照培养基2(d2处理)出现漆酶活性的时间却没有提早。

实施例4

除了步骤2-1)、2-2)、2-3)中接种的菌种为中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库提供的菌株编号为：ccmssc00406的真菌菌株糙皮侧耳菌pleurotusostreatus之外，其余与实施例2相同。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表2、图2所示。

实施例5

除了步骤2-4)中使用的培养基为诱导处理培养基2(c2)之外，其余与实施例4相同。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表2、图2所示。

表2糙皮侧耳栽培菌株ccmssc00406液体发酵的漆酶活性

从表2、图2的实验结果可知：

1、菌株ccmssc00406在仅含碱性木质素作为诱导的处理培养基1，即c1处理，在第1天就能检测到漆酶活性，而且是10天内的最大酶活性，高达51.28±0.42u/l；从第2天，漆酶活性开始快速衰减，至第9天开始就检测不到漆酶活性(图2，表2)。

2、菌株ccmssc00406在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2，即c2处理，漆酶活性趋势与处理培养基1(c1)情况下略有不同，其在第2天时达到最大漆酶活性，高达54.69±4.57u/l，高于处理培养基1条件下的漆酶活性；从第3天漆酶活性也开始快速下降，到第10天漆酶活性仅为1.85±0.16u/l(图2，表2)。

菌株ccmssc00406在仅含碱性木质素作为诱导的处理培养基1，即c1处理，最大漆酶酶活性为51.28±0.42u/l，于第1天产生；在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2，即c2处理，最大漆酶酶活性为54.69±4.57u/l，于第2天产生。因此，能够看出菌株ccmssc00406在仅含碱性木质素作为诱导的处理培养基1(c1处理)条件下的漆酶活性高于菌株ccmssc00322的，而菌株ccmssc00322在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2(c2处理)条件下的漆酶酶活性高于菌株ccmssc00406的。

3、菌株ccmssc00406在含简单氮源(蛋白胨)和碱性木质素一起来做诱导的对比培养基1(d1)、在不含碱性木质素但含简单碳源(葡萄糖)和简单氮源(蛋白胨)的对比培养基2(d2)中均未能检测到漆酶活性(图2，表2)。

4、从图2、表2的检测结果可知：菌株ccmssc00406在本发明含碱性木质素作为诱导的处理培养基中进行诱导培养，不仅可以促使糙皮侧耳菌生产漆酶，而且采用本发明方法促使糙皮侧耳菌产漆酶的活性高，促使其尽早产漆酶，显著缩短了糙皮侧耳菌产漆酶生产周期。

5、菌株ccmssc00406在含简单碳源(葡萄糖)和碱性木质素一起来做诱导的处理培养基2(c2处理)条件下的漆酶酶活性均高于处理培养基1(c1处理)，换言之，诱导处理培养基2更适合菌株ccmssc00406产漆酶。

此外，这两种处理培养基1和2均优于对照培养基1和2，即处理培养基c1和c2效果明显好于对比培养基d1和d2。

对照例1

除了步骤2-4)中使用的培养基为对比培养基1(d1)之外，其余与实施例2相同。每个实验设置3个重复。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表1、图1所示。

对照例2

除了步骤2-4)中使用的培养基为对比培养基2(d2)之外，其余与实施例2相同。每个实验设置3个重复。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表1、图1所示。

对照例3

除了步骤2-4)中使用的培养基为对比培养基1(d1)之外，其余与实施例4相同。每个实验设置3个重复。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表2、图2所示。

对照例4

除了步骤2-4)中使用的培养基为对比培养基2(d2)之外，其余与实施例4相同。每个实验设置3个重复。

连续10天测定诱导糙皮侧耳菌产漆酶的发酵处理过程的发酵液中漆酶活性，测定结果如表2、图2所示。

利用两株中国农业科学院农业资源与农业区划研究所国家食用菌标准菌株库提供的、菌株编号为：ccmssc00322、ccmssc00406的栽培糙皮侧耳菌株pleurotusostreatus在简单的液体发酵条件下，以简单的木质素或者含葡萄糖的木质素培养基进行诱导产漆酶，能够在发酵初期就得到高漆酶活性。在仅以木质素培养基做诱导时两个菌株编号为ccmssc00322和ccmssc00406的菌株均是在第1天就检测到最大漆酶酶活性，在含葡萄糖的木质素培养基做诱导时菌株编号为ccmssc00322的糙皮侧耳菌株能够在第1天检测到最大漆酶酶活性而菌株编号为ccmssc00406的糙皮侧耳菌株也能在第2天检测到最大漆酶酶活性。通过这两种诱导方法，能够极大的提高工作效率、节省大量的成本，为今后迅速获取低成本酶并广泛应用于生物领域提供新诱导方法。

发明实施方案中所涉及的参数条件数值范围都可以实现，篇幅所限，在此不进行更多各端点和中间值的列举。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案有效可行，而非对其限制；本领域技术人员在前述各实施案例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术方案范围内进行的通常变化和替换应包含在本发明的保护范围内。