本发明涉及一种菠萝蛋白酶的除杂纯化处理方法，还涉及菠萝蛋白酶产品的制备方法。
背景技术：
菠萝蛋白酶简称菠萝酶，亦称凤梨酶或凤梨酵素，主要是从菠萝果、茎、叶、皮提取出来的，并经过纯化等步骤而得到的一种天然植物蛋白酶。菠萝蛋白酶是一种蛋白质消化酶的复杂混合体，由多种不同分子量和分子结构的酶组成的酶系，主要由半胱氨酸蛋白酶组成，此外还含有磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其他糖苷酶等。
现代研究表明，菠萝蛋白酶具有重要的药用价值，其具有免疫刺激作用；能够在各种组织中有效治疗炎症和水肿；治疗腹泻；还可用于烧伤脱痂，选择性地去除死皮；抑制肿瘤细胞生长，降低毒素结合活性。除了药用领域，菠萝蛋白酶还应用于食品、化妆品等领域。
现有的菠萝蛋白酶生产工艺主要有硫酸铵沉淀法、超滤法、单宁沉淀法等。其中，硫酸铵沉淀法是在高浓度的硫酸铵溶液中，盐离子竞争性地结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。硫酸铵沉淀法由于需要使用大量的硫酸铵，环境污染严重，同时生产的蛋白酶中可能带入硫酸铵，蛋白得率低，工艺不稳定且耗时。超滤法是在一定压力和流量下，利用不对称微孔结构和半透膜介质，依靠膜两侧的压力差作为推动力，以错流方式进行过滤，使溶剂及小分子物质通过，大分子蛋白质被滤膜阻留，从而达到分离纯化的目的。超滤法所需设备投资大，菠萝汁在超滤浓缩过程中黏度逐渐加大，超滤膜极易堵塞，因此生产周期长，成本高，提取收率低。单宁沉淀法是利用鞣酸能与蛋白中氨基酸的氨基端结合从而使蛋白质沉淀。
实际生产中发现，不同来源、不同批次的原料用相同的生产方法制得的菠萝蛋白酶质量差别较大，菠萝蛋白酶质量不稳定问题比较突出，产品合格率偏低。
技术实现要素：
为解决上述问题，发明人进行了大量研究，意外地发现菠萝原料中的金属离子、特别是铁离子的含量对菠萝蛋白酶的酶活具有较大影响。当用于提取菠萝蛋白酶的菠萝原料中铁离子的含量较高时，容易出现生产的菠萝蛋白酶质量不合格的情况，这是导致现有方法生产菠萝蛋白酶质量不稳定的重要原因。
本发明的目的在于提供一种菠萝蛋白酶的纯化方法，该方法能够有效降低菠萝蛋白酶产品中的金属离子含量，特别是铁盐的含量，从而提高菠萝蛋白酶产品的合格率，使其质量稳定可控。本发明的进一步的目的在于提供一种菠萝蛋白酶的纯化方法，该方法获得的菠萝蛋白酶的酶活明显提高。
本发明的另一目的在于提供一种菠萝蛋白酶产品的制备方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种菠萝蛋白酶的纯化方法，包括如下步骤：
(1)将菠萝汁调节至ph2.5-3.5，得到菠萝汁上样液；
(2)将所述菠萝汁上样液过活化的阳离子交换树脂柱，流速为2.5-4.5bv/h，收集流出液，并将所述流出液调节至ph6.5-7.5，得到第一流出液；
(3)将所述第一流出液过活化的阴离子交换树脂柱，流速为2.5-4.5bv/h，收集流出液；将所述流出液调节至ph3.0-4.0，得到纯化的菠萝汁处理液。
本发明中，优选地，步骤(1)所述的菠萝汁为经过前处理后的菠萝汁；所述前处理包括将菠萝原汁与防腐剂、抗氧剂混合，搅拌，进行固液分离操作，经过电渗析，从而得到经过前处理后的菠萝汁。
本发明中，优选地，步骤(1)中，所述菠萝原汁的ph为3.5-5.5，所述防腐剂为苯甲酸钠，所述抗氧剂为偏重亚硫酸钠，且所述菠萝汁、苯甲酸钠和偏重亚硫酸钠的重量比为1000:0.05-0.2:0.05-0.2；所述固液分离操作包括于0-6℃的离心温度下进行离心，然后用微孔滤膜过滤。
本发明中，优选地，步骤(2)中，所述活化的阳离子交换树脂柱的制备方法为：
(a)将阳离子交换树脂用纯化水润胀，装柱，得到阳离子交换树脂柱；
(b)采用0.5-4mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为0.5-3bv/h，盐酸溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性；
(c)再采用0.5-4mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠溶液的流速为0.5-3bv/h，氢氧化钠溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性，得到活化的阳离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，步骤(a)中，所述阳离子交换树脂柱为带有磺酸基的阳离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，步骤(3)中，所述活化的阴离子交换树脂柱的制备方法为：
(a’)将阴离子交换树脂用纯化水润胀，装柱，得到阴离子交换树脂柱；
(b’)采用0.5-4mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠溶液的流速为0.5-3bv/h，氢氧化钠溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性；
(c’)再采用0.5-4mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为0.5-3bv/h，盐酸溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性，得到活化的阴离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，步骤(a’)中，所述阴离子交换树脂柱为带有季铵基的阴离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，所述纯化方法还包括如下步骤：
(4)将所述纯化的菠萝汁处理液加入氯化钙并使氯化钙的浓度为2-5mmol/l，得到含氯化钙的菠萝汁处理液。
本发明中，优选地，所述除杂纯化处理方法还包括如下步骤：
(5)将步骤(3)得到的纯化的菠萝汁处理液或者步骤(4)得到的含氯化钙的菠萝汁处理液进行微孔滤膜过滤，得到除菌处理后的菠萝汁处理液。
本发明还提供一种菠萝蛋白酶产品的制备方法，其包括将上述纯化的菠萝汁处理液、含氯化钙的菠萝汁处理液或除杂纯化处理后的菠萝汁处理液进行析酶处理，析出菠萝蛋白酶；再将所述菠萝蛋白酶进行干燥处理，得到菠萝蛋白酶产品。
本发明的除杂纯化处理方法，能够有效除去铁离子，同时除杂过程很好地保护了菠萝蛋白酶的酶活，能够获得质量稳定的菠萝蛋白酶产品。本发明优选的实施方式，酶活进一步提高。此外，本发明工艺流程简单，设备投入少，资源消耗低，各流程参数确定，便于控制，适合工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中，“bv”表示柱体积。
本发明的菠萝蛋白酶的纯化方法利用树脂除杂方式除去其中的金属离子，特别是能够有效除去铁离子。所述的除杂纯化处理方法还可以包括菠萝汁前处理的步骤。本发明的纯化方法还可以包括阳离子交换树脂和阴离子交换树脂的活化步骤。
本发明的菠萝蛋白酶产品的制备方法包括将经过纯化处理的菠萝蛋白酶处理液进行析酶处理和干燥处理的步骤。
＜菠萝汁的前处理＞
本发明中，菠萝汁的前处理步骤中，所述菠萝汁是指从菠萝的果、茎、叶或皮中压榨取得的菠萝原汁。从废物利用和节约能源的角度，优选地，所述菠萝汁是指从菠萝茎、叶或皮中压榨取得的菠萝原汁，更优选为从菠萝皮中压榨取得的菠萝原汁。所述压榨方法不限，例如可以为常温压榨法或冷榨法。
本发明中，所述的菠萝汁的前处理包括将所述菠萝原汁与防腐剂、抗氧剂混合的步骤。所述防腐剂选自苯甲酸钠、山梨酸钾、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯中的一种或多种；所述抗氧剂选自偏重亚硫酸钠、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠中的一种或多种。根据本发明的一个实施方式，所述防腐剂为苯甲酸钠，所述抗氧剂为偏重亚硫酸钠，且所述菠萝原汁、苯甲酸钠和偏重亚硫酸钠的重量比为1000:0.05-0.2:0.05-0.2，优选为1000:0.08-0.15:0.08-0.15，再优选为1000:0.08-0.12:0.08-0.12。根据本发明一个优选的实施方式，所述菠萝原汁、苯甲酸钠和偏重亚硫酸钠的重量比为1000:0.1:0.1。采用本发明的配比，能够有效防止酸败，并保持菠萝蛋白酶的活性。优选地，当菠萝原汁与防腐剂、抗氧剂混合之前，将菠萝原汁调节ph至3.5-5.5，优选为4.0-5.5。在这样的ph值下，能够保证菠萝原汁与防腐剂和抗氧剂混合时，菠萝蛋白酶具有较好的活性。需要说明的是，若菠萝原汁本身的ph即在上述范围内，则无需再调节ph。
本发明中，所述菠萝汁的前处理还包括在所述菠萝原汁与防腐剂、抗氧剂混合后，进行固液分离的步骤。所述固液分离的方法选自过滤、离心，从而得到前处理后的菠萝汁。优选地，所述固液分离的操作在低温下进行，优选在0-10℃，更优选为0-6℃，再优选为4℃下进行。在所述温度下进行固液分离操作，有利于菠萝蛋白酶保持较好的活性。优选地，所述固液分离操作为离心，离心温度为0-6℃。优选地，离心速率为12000-20000rpm，优选为14000-18000rmp，更优选为15000-17000rmp，再优选为16000rmp，得到离心液。本发明中，所述前处理还可以包括将离心操作所得的离心液用微孔滤膜进行过滤的步骤，从而得到经过过滤的菠萝汁。优选地，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。然后采用电渗析法进行处理，电渗析的电压为恒电压50v。根据本发明的一个实施方式，所述电渗析的方法为：向极室中加入自来水，向淡室中加入与自来水相同体积的经过滤的菠萝汁，向浓室中加入相同体积的纯化水；电渗析操作在室温下进行流速控制为经过滤的菠萝汁体积的3-4倍/h，运行时间为60-80min。经电渗析仪处理过的菠萝汁再继续下一步的处理。
＜离子交换树脂的前处理＞
本发明中，所述离子交换树脂的前处理包括阳离子交换树脂的活化处理和阴离子交换树脂的活化处理。
所述阳离子交换树脂的活化处理中，所述阳离子交换树脂为带有磺酸基的阳离子交换树脂。优选地，所述阳离子交换树脂选自732型阳离子交换树脂、734型阳离子交换树脂、d001型阳离子交换树脂，更优选为732型阳离子交换树脂。在本发明中，732型阳离子交换树脂的效果明显优于其他型号的阳离子交换树脂。具体地，所述阳离子交换树脂的活化处理包括如下步骤：(a)将阳离子交换树脂用纯化水洗净，润胀，装柱，得到阳离子交换树脂柱；(b)采用0.5-4mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为0.5-3bv/h，盐酸溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性；(c)再采用0.5-4mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠溶液的流速为0.5-3bv/h，氢氧化钠溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性，得到活化的阳离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，步骤(a)所述阳离子交换树脂柱的高径比1-8:1，更优选为2-6:1，再优选为3-5:1，又优选为3-4:1。根据本发明一个优选的实施方式，所述阳离子交换树脂柱的高径比4:1。
本发明中，优选地，步骤(b)所述盐酸溶液的浓度为1-3mol/l，更优选为1-2mol/l；盐酸溶液的流速为1-2.5bv/h，更优选为1-2bv/h；盐酸溶液的用量为2-5bv，更优选为2-4bv。根据本发明一个优选的实施方式，步骤(b)所述盐酸溶液浓度为1-2mol/l，盐酸溶液的流速为1-2bv/h，盐酸溶液的用量为2-4bv。
本发明中，优选地，步骤(c)所述氢氧化钠溶液的浓度为1-3mol/l，更优选为1-2mol/l；氢氧化钠溶液的流速为1-2.5bv/h，更优选为1-2bv/h；氢氧化钠溶液的用量为2-5bv，更优选为2-4bv。根据本发明一个优选的实施方式，步骤(c)所述氢氧化钠溶液浓度为1-2mol/l，氢氧化钠溶液的流速为1-2bv/h，氢氧化钠溶液的用量为2-4bv。
所述阴离子交换树脂的活化处理中，所述阴离子交换树脂为带有季铵基的阴离子交换树脂。优选地，所述阴离子交换树脂选自717型阴离子交换树脂、711型阴离子交换树脂、d201型阴离子交换树脂，更优选为717型阴离子交换树脂。在本发明中，717型阴离子交换树脂的效果明显优于其他型号的阴离子交换树脂。具体地，所述阴离子交换树脂的活化处理包括如下步骤：(a’)将阴离子交换树脂用纯化水洗净、润胀，装柱，得到阴离子交换树脂柱；(b’)采用0.5-4mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠的流速为0.5-3bv/h，氢氧化钠溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性；(c’)再采用0.5-4mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为0.5-3bv/h，盐酸溶液的用量为1-6bv，再用纯化水洗至流出液近中性，得到活化的阴离子交换树脂柱。
本发明中，优选地，步骤(a’)所述阴离子交换树脂柱的高径比1-8:1，更优选为2-6:1，再优选为3-5:1。
本发明中，优选地，步骤(b’)所述氢氧化钠溶液的浓度为1-3mol/l，更优选为1-2mol/l；氢氧化钠溶液的流速为1-2.5bv/h，更优选为1-2bv/h；氢氧化钠溶液的用量为2-5bv，更优选为2-4bv。根据本发明一个优选的实施方式，步骤(b’)所述氢氧化钠溶液浓度为1-2mol/l，氢氧化钠溶液的流速为1-2bv/h，氢氧化钠溶液的用量为2-4bv。
本发明中，优选地，步骤(c’)所述盐酸溶液的浓度为1-3mol/l，更优选为1-2mol/l；盐酸溶液的流速为1-2.5bv/h，更优选为1-2bv/h；盐酸溶液的用量为2-5bv，更优选为2-4bv。根据本发明一个优选的实施方式，步骤(c’)所述盐酸溶液浓度为1-2mol/l，盐酸溶液的流速为1-2bv/h，盐酸溶液的用量为2-4bv。
＜纯化处理＞
本发明中，所述除杂纯化处理包括如下步骤：
(1)将菠萝汁调节至ph2.5-3.5，得到菠萝汁上样液；
(2)将所述菠萝汁上样液过活化的阳离子交换树脂柱，流速为2.5-4.5bv/h，收集流出液，并将所述流出液调节至ph6.5-7.5，得到第一流出液；
(3)将所述第一流出液过活化的阴离子交换树脂柱，流速为2.5-4.5bv/h，收集流出液；将所述流出液调节至ph3.0-4.0，得到纯化的菠萝汁处理液。
本发明中，步骤(1)中，所述菠萝汁可以为直接从菠萝果、茎、叶或皮中压榨取得的汁液，但优选为经过上述前处理后的菠萝汁。优选地，采用盐酸溶液对菠萝汁进行调节ph。优选地，所述盐酸溶液的浓度为25-36wt％，更优选为30-36wt％，再优选为36wt％，采用这样的盐酸溶液浓度，既能够快速调节ph，又不至于影响菠萝蛋白酶的活性。优选地，采用盐酸溶液将所述菠萝汁混合液调节至ph2.8-3.2，再优选为ph3.0。
本发明中，步骤(2)所述阳离子交换树脂的选择如上所述，这里不再赘述。优选地，所述活化的阳离子交换树脂柱为活化的732型阳离子交换树脂。优选地，所述流速为3-4bv/h。优选地，采用氢氧化钠溶液对菠萝汁进行调节ph。所述氢氧化钠溶液的浓度为30-50wt％，更优选为35-45wt％，再优选为40wt％，采用这样的氢氧化钠溶液浓度，既能够快速调节ph，又不至于影响菠萝蛋白酶的活性。优选地，采用氢氧化钠溶液将所述菠萝汁混合液调节至ph6.8-7.2，再优选为ph7.0，得到第一流出液。步骤(2)中，所述菠萝汁上样液的上样量以不超过所述活化的阳离子交换树脂柱的载样量为准；例如可以通过定期检测所述流出液的ph及电导率，作为确定是否超载的参考指标。优选地，所述菠萝汁上样液的上样量为所述活化的阳离子交换树脂柱体积的9-14倍，更优选为10-12倍。
本发明中，步骤(3)所述阴离子交换树脂的选择如上所述，这里不再赘述。优选地，所述活化的阴离子交换树脂柱为活化的717型阴离子交换树脂。优选地，所述流速为3-4bv/h。优选地，将所述流出液调节至ph3.3-3.7，更优选为ph3.5，得到纯化的菠萝汁处理液。步骤(3)中，所述第一流出液的上样量以不超过所述活化的阴离子交换树脂柱的载样量为准；例如可以通过定期检测所述流出液的ph及电导率，作为确定是否超载的参考指标。优选地，所述第一流出液的上样量为所述活化的阴离子交换树脂柱体积的9-14倍，更优选为10-12倍。
本发明中，优选地，所述纯化处理方法还包括如下步骤：
(4)将所述纯化的菠萝汁处理液加入氯化钙并使氯化钙的浓度为2-5mmol/l，得到含氯化钙的菠萝汁处理液。
本发明中，步骤(4)所述氯化钙可以以固体形式加入，也可以以氯化钙溶液形式加入，并优选以氯化钙溶液的形式加入。本发明中，优选地，将所述纯化的菠萝汁处理液加入氯化钙溶液并使氯化钙的浓度为2-4mmol/l，更优选为2.5-3.5mmol/l，再优选为3mmol/l。
本发明中，优选地，所述除杂纯化处理方法还包括如下步骤：
(5)将步骤(3)得到的纯化的菠萝汁处理液或者步骤(4)得到的含氯化钙的菠萝汁处理液进行微孔滤膜过滤，得到除杂纯化处理后的菠萝汁处理液。采用这样的步骤能够有效除去微生物。优选地，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。
采用本发明的纯化处理方法，能够有效除去铁离子，同时除杂过程很好地保护了菠萝蛋白酶的酶活，且工艺流程简单。此外，在纯化的菠萝汁处理液中加入氯化钙，并将氯化钙的浓度控制在本发明范围内，菠萝蛋白酶的酶活得到有效提高。采用本发明的方法进行除杂后，最终得到的菠萝蛋白酶产品质量合格率高达98％以上，且不同来源的菠萝原料均可获得质量稳定的菠萝蛋白酶产品。
＜析酶与干燥处理＞
本发明中，可以采用多种方法对除杂处理后的菠萝汁处理液进行析酶处理，例如硫酸铵沉淀法、超滤法、单宁沉淀法等，优选为单宁沉淀法，从而析出菠萝蛋白酶。
根据本发明的一个优选的实施方式，所述析酶处理方法为：将微孔滤膜过滤后的菠萝汁处理液与鞣酸按照重量比为1000:1-3进行混合，搅拌，于4～15℃下静置，析出菠萝蛋白酶。
本发明中，优选地，所述除杂处理后的菠萝汁处理液与鞣酸的重量比为1000:2；所述静置时间为2-3h。根据本发明的一个实施方式，将除杂处理后的菠萝汁处理液与鞣酸按照重量比为1000:2进行混合，搅拌，于4～15℃下静置2-3h，酶糊沉降，除去上清液，得到菠萝蛋白酶酶糊；将所述酶糊于0-10℃的离心温度下进行离心处理，从而得到菠萝蛋白酶酶膏，然后将所述菠萝蛋白酶酶膏进行干燥，得到菠萝蛋白酶产品。优选地，所述离心温度为0-6℃，更优选为4℃；所述离心处理的离心速率为12000-20000rpm，优选为14000-18000rmp，更优选为15000-17000rmp，再优选为16000rmp。所述干燥的方式例如为真空干燥或真空冷冻干燥，并优选为冷冻干燥法。
以下通过具体实施例对本发明进行详细说明，但这些实施例并不用于限制本发明。
制备例1-732型阳离子交换树脂的活化
(1)将732型阳离子交换树脂用纯化水充分洗净，润胀，装柱，得到732型阳离子交换树脂柱，其高径比为4:1；
(2)采用2mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为1.5bv/h，盐酸溶液的用量为3bv，再用纯化水洗至流出液近中性；
(3)再采用2mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠溶液的流速为1.5bv/h，氢氧化钠溶液的用量为3bv，再用纯化水洗至流出液近中性，得到活化的732型阳离子交换树脂柱。
制备例2-717型阴离子交换树脂的活化
(1)将717型阴离子交换树脂用纯化水充分洗净，润胀，装柱，得到717型阴离子交换树脂柱，其高径比为4:1；
(2)采用2mol/l氢氧化钠溶液过柱，氢氧化钠溶液的流速为1.5bv/h，氢氧化钠溶液的用量为3bv，再用纯化水洗至流出液近中性；
(3)再采用2mol/l盐酸溶液过柱，盐酸溶液的流速为1.5bv/h，盐酸溶液的用量为3bv，再用纯化水洗至流出液近中性；得到活化的717型阴离子交换树脂柱。
制备例3-菠萝汁的前处理
菠萝汁的前处理方法：取从菠萝皮压榨取得的菠萝汁，其ph为4.1；将所述菠萝汁与苯甲酸钠、偏重亚硫酸钠按照重量比为1000:0.1:0.1混合，搅拌，静置，然后用管式离心机在转速16000rpm、4℃下离心，滤液过1μm微孔滤膜，采用电渗析仪50v恒电压，流速为4倍菠萝汁体积/h，运行70min，得到前处理后的菠萝汁。
实施例1-菠萝汁的纯化处理
(1)将制备例3的前处理后的菠萝汁采用36wt％的盐酸调节至ph3.0，得到菠萝汁上样液；
(2)将所述菠萝汁上样液过制备例1的活化的732型阳离子交换树脂柱，流速为3.5bv/h，收集流出液，通过定期检测所述流出液的ph及电导率，确保活化的732型阳离子交换树脂柱未超载；再将所述流出液调节至ph7.0，得到第一流出液；
(3)将所述第一流出液过制备例2的活化的717型阴离子交换树脂柱，流速为3.5bv/h，收集流出液，通过定期检测所述流出液的ph及电导率，确保活化的717型阴离子交换树脂柱未超载；将所述流出液调节至ph3.5，得到纯化的菠萝汁处理液；
(4)将所述纯化的菠萝汁处理液加入氯化钙溶液并使氯化钙的浓度为3mmol/l，得到含氯化钙的菠萝汁处理液；
将所述含氯化钙的菠萝汁处理液过孔径为0.22μm微孔滤膜，得到除杂纯化处理后的菠萝汁处理液。
实施例2-菠萝汁的纯化处理
(1)将制备例3的前处理后的菠萝汁采用36wt％的盐酸调节至ph3.0，得到菠萝汁上样液；
(2)将所述菠萝汁上样液过制备例1的活化的732型阳离子交换树脂柱，流速为3.5bv/h，收集流出液，通过定期检测所述流出液的ph及电导率，确保活化的732型阳离子交换树脂柱未超载；再将所述流出液调节至ph7.0，得到第一流出液；
(3)将所述第一流出液过制备例2的活化的717型阴离子交换树脂柱，流速为3.5bv/h，收集流出液，通过定期检测所述流出液的ph及电导率，确保活化的717型阴离子交换树脂柱未超载；将所述流出液调节至ph3.5，得到纯化的菠萝汁处理液；
将所述纯化的菠萝汁处理液过孔径为0.22μm微孔滤膜，得到除杂处理后的菠萝汁处理液。
实施例3-菠萝蛋白酶产品的制备
将实施例1方法处理得到的菠萝汁处理液与鞣酸按照重量比为1000:2进行混合，搅拌，于4～15℃下静置2.5h，酶糊沉降，除去上清液，得到菠萝蛋白酶酶糊；将所述酶糊于4℃的离心温度下进行离心处理，从而得到菠萝蛋白酶酶膏；将所述菠萝蛋白酶酶膏进行真空冷冻干燥，得到菠萝蛋白酶产品。
实施例4-菠萝蛋白酶产品的制备
将实施例2方法处理得到的菠萝汁处理液与鞣酸按照重量比为1000:2进行混合，搅拌，于4～15℃下静置2.5h，酶糊沉降，除去上清液，得到菠萝蛋白酶酶糊；将所述酶糊于4℃的离心温度下进行离心处理，从而得到菠萝蛋白酶酶膏；将所述菠萝蛋白酶酶膏进行真空冷冻干燥，得到菠萝蛋白酶产品。
对实施例3和实施例4的菠萝蛋白酶产品的金属离子含量、菠萝蛋白酶酶活进行测定，结果见表1。
表1菠萝蛋白酶产品相关参数
此外，通过对不同来源、不同批次的菠萝原料采用本发明的方法制备菠萝蛋白酶产品，所得菠萝蛋白酶质量十分稳定，未出现不合格现象。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。