本发明涉及制药领域，具体涉及一种靶向肿瘤低氧的芳香氮芥-氯乙基亚硝基脲偶联分子的合成方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
氮芥类药物和亚硝基脲类药物是临床上常用的两类抗癌烷化剂。氮芥类药物中的双β-氯乙氨基是发挥抗肿瘤作用的功能基团，该基团与不同的载体结构连接，可以形成脂肪氮芥、芳香氮芥、氨基酸氮芥、甾体氮芥以及杂环氮芥等。芳香氮芥分子中载体部分为芳香基，其抗癌作用机制是先失去氯离子生成碳正离子中间体，再与dna上的亲核中心发生反应，形成以鸟嘌呤n7位烷化产物为主的dna损伤，进一步阻碍肿瘤细胞dna的复制和转录过程，最终诱导肿瘤细胞凋亡。然而，与脂肪氮芥相比，芳香氮芥中氮原子上的孤对电子与苯环产生共轭作用，导致烷基化能力降低，因此抗肿瘤活性较脂肪氮芥弱。
氯乙基亚硝基脲(cenus)在临床上常应用于脑瘤、骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤和白血病的治疗。cenus能够在生理条件下分解产生氯乙基碳正离子，首先与dna鸟嘌呤o6位发生烷化反应，再进一步与互补的胞嘧啶发生反应，最终在鸟嘌呤n1位和胞嘧啶的n3位之间形成dna股间交联。这种dna股间交联阻碍了肿瘤细胞中dna的复制和转录过程，最终诱导肿瘤细胞凋亡。然而，o6-烷基鸟嘌呤-dna烷基转移酶(agt)介导的cenus耐药性严重阻碍了该类药物的进一步开发。agt是一种普遍存在于细胞中的dna修复蛋白，它可将dna鸟嘌呤o6位上的甲基、氯乙基、苄基和苄基等烷基基团移除，从而修复dna的烷化损伤。研究表明，agt通过修复cenus导致的o6-氯乙基鸟嘌呤和n1,o6-桥亚乙基鸟嘌呤，从而阻断这两种烷化产物进一步与胞嘧啶反应形成dna股间交联，最终导致cenus不能有效抑制肿瘤细胞而产生耐药性。
为了阻断agt介导的耐药性、提高cenus的化疗效果，设计开发具有高活性的agt抑制剂引起了广泛关注。o6-苄基鸟嘌呤(o6-bg)和lomeguatrib(patrin-2)均能够有效抑制agt活性，二者均可作为agt的假底物与肿瘤细胞中的agt发生作用，阻断agt对cenus导致的o6-烷基鸟嘌呤的修复作用，从而提高肿瘤细胞对cenus的敏感性，最终消除或降低cenus的耐药性。然而，现有的agt抑制剂不具有肿瘤靶向性，这使其在抑制肿瘤细胞agt活性的同时也抑制了正常细胞中agt的活性，引起cenus的毒副作用显著增强。因此，设计具有肿瘤靶向性的新型cenus或agt抑制剂是解决上述问题的关键所在。
低氧微环境是多数实体瘤区别于正常组织的重要特征，利用肿瘤低氧探索治疗新策略已成为肿瘤靶向治疗的热点之一。低氧激活前药(haps)正是基于肿瘤低氧而设计合成的一类新型化合物，它们对正常组织无毒或毒性较低，而在肿瘤低氧区域可释放具有细胞毒性的药效团，从而实现肿瘤的靶向治疗。低氧激活前药主要包括硝基-芳香族杂环化合物、n-氧化物、醌类、过渡金属络合物和含有偶氮基团的化合物。本发明利用肿瘤组织存在低氧微环境的特性，设计合成了一种同时含有agt抑制剂药效团、芳香氮芥药效团和低氧激活基团的新型联合cenus前药。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种偶氮芳香氮芥-氯乙基亚硝基脲偶联的化合物或药学上可授受的盐。本发明的这种化合物以偶氮基团作为低氧激活药效团，在肿瘤低氧条件下，偶氮基团的氮氮双键断裂释放出芳香氮芥和o6-bg类似物，靶向性地在低氧区域发挥烷化剂和agt抑制剂的作用，使肿瘤细胞对烷化剂更敏感；并且，该化合物中的cenus药效团能够分解生成氯乙基碳正离子，导致dna股间交联，发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。
本发明所述的化合物或药学上可接受的盐，其结构式如(i)所示：
r为h，nh2，(ch2)nnh2，ch3，ch2ch3，ch2ch2ch3，ch2oh，ch2ch2oh，nhcoch3，(ch2)nnhcoch3，n(ch3)2，(ch2)nn(ch3)2中的一种；
n为2-6的整数。
优选的，r为h，nh2，n(ch3)2，nhcoch3时，该化合物或其盐的抗肿瘤活性和选择性较高。
最优的，当r为h，且n分别为2或3的时候，即分别具有如下结构式时，化合物或其盐的抗肿瘤活性和选择性最佳。
可采用本领域常规的技术手段，将上述任一化合物与有机酸或无机酸成盐，其中，本发明优选所述盐为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐、葡萄糖酸盐，成盐后的化合物同样具有与未成盐化合物相同的药理活性。
本发明的第二个目的是提供一种药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量的式(i)结构化合物或药学上可接受的盐，和至少一种药用载体。
所述药用载体为本领域常用物质，如崩解剂、分散剂、润滑剂、乳化剂、稳定剂等。所述药物组合物可以采用本领域常规手段制备成药学上常用的剂型，如片剂、注射剂、胶囊剂等。
本发明的第三个目的是提供本发明所述化合物或药学上可接受的盐的制备方法，所述方法的反应历程至少包括：
(1)化合物a与二卤代烷烃反应得到化合物b；
(2)化合物b与邻苯二甲酰亚胺反应得化合物c；
(3)化合物c先后加入nano2、氨基磺酸、n,n-二羟乙基苯胺反应得化合物d；
(4)化合物d与氯化亚砜反应得化合物e；
(5)化合物e与水合肼反应得化合物f；
(6)化合物f与2-氯乙基异氰酸酯反应得化合物g；
(7)化合物g与四氟硼酸亚硝鎓反应得化合物h。
优选的，其步骤具体为：
(1)化合物a与二卤代烷烃按照1：(1-7)的摩尔比，在碱的催化作用下，于40-60℃反应，得化合物b；
(2)化合物b与邻苯二甲酰亚胺按照1：(1-4)的摩尔比，于35-70℃反应，得化合物c；
(3)按照化合物c、nano2、氨基磺酸、n,n-二羟乙基苯胺的摩尔比为1：(1-4)：(1-5)：(3-10)，先向化合物c中添加nano2，在n2保护下，0-10℃条件下反应0-1h，再加氨基磺酸，在0-10℃条件下反应0-1h，最后添加n,n-二羟乙基苯胺，在0-10℃条件下反应1-4h，得化合物d；
(4)化合物d与socl2按照1：(1-7)的摩尔比，在20-40℃的条件下回流反应，得化合物e；
(5)化合物e与水合肼在25-60℃条件下反应，得化合物f；
(6)化合物f与2-氯乙基异氰酸酯按照1：(1-8)的摩尔比，在0-10℃反应，得化合物g；
(7)化合物g与亚硝鎓四氟硼酸盐按照1：(1-5)的摩尔比，在0-10℃条件下反应，得化合物h。
优选的，步骤(1)中，所述二卤代烷烃为二溴代烷烃或二氯代烷烃；优选二溴代烷烃。二溴代烷烃具有较高的反应活性，能够保证反应顺利进行，获得较高的收率和较纯的产品。
进一步优选的:
步骤(1)的具体操作：将化合物a溶解，向其中加入催化剂无机碱并滴加1,2-二溴代烷烃，然后在40-60℃条件下反应，即得化合物b；
其中，化合物a、无机碱、1,2-二溴代烷烃的摩尔比优选为1：(1-6)：(1-7)；所述无机碱优选为无水碳酸钾；溶解化合物a的溶剂优选为丙酮或n，n-二甲基甲酰胺；步骤(1)还包括对化合物b进行提纯的步骤，具体为浓缩反应液，采用柱层析法对浓缩液进行分离提纯，优选柱层析的固定相为硅胶，流动相为石油醚和乙酸乙酯，进一步优选按照石油醚/乙酸乙酯(v/v)1:2逐渐变为1:4的比例进行梯度洗脱对化合物b进行提纯。
步骤(2)的具体操作为：化合物b与邻苯二甲酰亚胺按照1：(1-4)的摩尔比，于40-70℃反应，得化合物c。其中，步骤(2)所使用的反应溶剂优选为乙腈或n，n-二甲基甲酰胺；步骤(2)还包括对化合物c进行提纯的步骤，具体为向反应液中加入乙酸乙酯和水(v：v＝1:1)进行萃取，收集有机相，使用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥，蒸馏除去溶剂即得。
步骤(3)的具体操作为：按照化合物c、nano2、氨基磺酸、n,n-二羟乙基苯胺的摩尔比为1：(1-4)：(1-5)：(3-10)，先在化合物c中添加nano2，n2保护下，0-10℃条件下反应10～30min，再加氨基磺酸0-10℃条件下反应10～20min，再与n,n-二羟乙基苯胺0-10℃条件下反应1.5～2.5h，得化合物d
步骤(3)的具体操作优选为：将化合物c溶解，在惰性气体保护下于0℃滴加溶解nano2的溶液，反应10～30min，再滴加溶解氨基磺酸的溶液，反应10～20min，然后向反应液中滴加含n-n二羟乙基苯胺的溶液，于0℃冰浴3h，得化合物d。
其中，溶解化合物c的溶剂优选为乙腈、二氯甲烷、三氟乙酸和水的混合液；步骤(3)还包括对化合物d进行提纯的步骤，具体为浓缩反应液，采用柱层析法对浓缩液进行分离提纯，优选柱层析的固定相为硅胶，流动相为丙酮和二氯甲烷，进一步优选按照丙酮/二氯甲烷(v/v)1:19逐渐变为1:2的比例进行梯度洗脱对化合物e进行提纯。
步骤(4)的具体操作为：按照化合物d、socl2的摩尔比为1：(1-7)，20-40℃回流1.5～2.5h，得化合物e。其中，溶解化合物d的溶剂优选为二氯甲烷。步骤(4)还包括对化合物e进行提纯的步骤，具体为浓缩反应液，采用柱层析法对浓缩液进行分离提纯，优选柱层析的固定相为硅胶，流动相为甲醇和二氯甲烷，进一步优选按照甲醇/二氯甲烷(v/v)1:2逐渐变为1:4的比例进行梯度洗脱对化合物e进行提纯。
步骤(5)的具体操作为：化合物e与水合肼在25-60℃条件下反应，得化合物f，优选化合物e与70％水合肼的摩尔体积比为(1-5)：1(mmol：ml)。其中，首先将化合物e溶解后再与水合肼反应，优选溶解化合物e的溶剂为dmf或甲醇；步骤(4)还包括对化合物f进行提纯的步骤，具体为向反应液中加入二氯甲烷和水(v：v＝1:1)进行萃取，收集有机相，使用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥，蒸馏除去溶剂即得。
步骤(6)的具体操作为：化合物f与2-氯乙基异氰酸酯按照1：(1-8)的摩尔比，在0-10℃反应，得化合物g。其中，反应溶解优选为二氯甲烷，反应完全后蒸馏除去溶剂，得化合物g。
步骤(7)的具体操作为：化合物g、冰醋酸、亚硝鎓四氟硼酸盐按照1：(1-5)：(1-5)的摩尔比，冰浴条件下反应，得化合物h。
本发明中化合物h即为式(i)结构所述的化合物。
其中，步骤(7)的反应溶剂优选为乙腈或丙酮。步骤(6)还包括对化合物h进行提纯的步骤，具体为反应结束后，向反应液中加入乙酸乙酯和水(v：v＝1:1)进行萃取，洗涤有机相，干燥浓缩，采用柱层析对浓缩液进行分离，所述柱层析优选为固定相为硅胶，流动相为石油醚和乙酸乙酯，进一步优选按照石油醚/乙酸乙酯(v/v)为1:1逐渐变为1:5的梯度进行洗脱，即得化合物h。
本发明的第四个目的是保护本申请所述的化合物、药学上可接受的盐或组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的，所述肿瘤为脑瘤、骨髓瘤、恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺肿瘤、白血病、淋巴癌中的一种或多种；
更优选为脑瘤、白血病、肺癌、结肠癌、淋巴癌细胞中的一种或多种。
本发明通式中的化合物或药学上可接受的盐，为新型的具有抗耐药性和肿瘤细胞靶向性的芳香氮芥联合氯乙基亚硝基脲，本发明对通式(i)中的化合物进行了体外抗肿瘤筛选试验。结果表明，在低氧条件下通式(i)中的化合物对l1210小鼠白血病细胞，ht29人结肠癌细胞，a549人肺细胞，hut102人t淋巴瘤细胞，人神经胶质瘤细胞sf763，sf126等多种肿瘤细胞系均有明显的抑制作用，而在有氧条件下通式(i)中的化合物对上述肿瘤细胞的抑制作用并不明显。因此，通式(i)中的化合物具有良好的靶向性和杀死肿瘤细胞的能力，可以用于靶向性肿瘤化疗药物。该化合物在肿瘤低氧条件下，偶氮基团的氮氮双键断裂会释放芳香氮芥、o6-bg类似物，靶向性地在低氧区域发挥烷化剂和agt抑制剂的作用，使肿瘤细胞对烷化剂更敏感；并且该化合物也为氯乙基亚硝基脲的衍生物，分解生成氯乙基碳正离子，导致dna股间交联的产生，发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。
本发明的化合物具有三方面的优点：第一，偶氮苯结构使得该化合物具有低氧选择性；第二，低氧区域释放o6-bg类似物使得该化合物具有靶向肿瘤低氧的抗耐药性；第三，cenus和芳香氮芥双烷化剂官能团的共同作用使得该化合物的抗肿瘤活性更高。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。以下实施例中涉及到的药品无特殊说明，均可市购获得；涉及到的操作，无特殊说明，均为本领域常规的操作。
以下实施例中涉及的化合物1、化合物2的结构式如下：
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物1)的合成1)n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤的合成
称取o6-苄基鸟嘌呤(2.05g,8.5mmol)，无水碳酸钾(3.35g,24.3mmol)加入到100ml圆底烧瓶中，加入50ml丙酮，缓慢升温至52℃，滴加1,2-二溴乙烷(2.89ml,33mmol)，滴毕后继续反应72h，过滤反应液，收集滤液，40℃减压蒸馏旋干溶剂后，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:4，40℃真空干燥得到白色固体n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤(2.05g,5.9mmol)，产率69％。
uvλ:48,283nm；
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esi-ms:m/z348(m+h)+。
2)n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤
将所得固体n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤(2.05g,5.9mmol)，加入15ml无水n,n-二甲基甲酰胺溶解，再加入邻苯二甲酰亚胺钾固体(3.42g,18.5mmol)，加热至65℃，搅拌反应6h，用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，35℃真空干燥得到白色固体n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤(2.07g,5mmol)，产率85％。
uvλ:228,284nm；
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3)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
先配25ml混合液(5ml乙腈、20ml二氯甲烷、50ul三氟乙酸、25ul水)。在0℃，n2保护下向搅拌着的n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤(2.07g,5mmol)的21ml混合液中加入nano2(0.69g，10mmol)，反应20min。再注射含氨基磺酸(0.92g，9.5mmol)的4ml混合液，反应15min。再注射含n-苯基二乙醇胺(6.08g，36mmol)的10ml乙腈，在0℃下反应2h。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为丙酮和二氯甲烷，采用梯度洗脱，丙酮/二氯甲烷的体积比从1:19逐渐变为到1:2，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.94g,3.2mmol)，产率64％。
uvλ:224,275nm；
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4)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
向含1.94g(3.2mmol)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的20ml二氯甲烷溶液中加入1.4ml(20mmol)socl2，在回流条件下30℃反应1.5小时。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:2逐渐变为到1:4，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.35g,2.1mmol)，产率66％。
uvλ:221,272nm；
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5)(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺的合成
将所得固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.35g,2.1mmol)溶于10mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)，并加入2.4ml水合肼，32℃搅拌反应4h，使其发生肼解，用二氯甲烷和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，30℃真空干燥得(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.82g,1.6mmol)，产率76％。
uvλ:226,276nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3457.3(n-(ch2)2-)；3327.9(n-h)；3174.9(c-h)；1789.5(c＝o)；1747.4(n＝n)；1692.6(c＝c)；1426.4(n-o)；1288.7(c-o-c)；1097.4(c-n)；772.3(c-cl)；
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esi-ms:m/z513(m+h)+。
6)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将所得固体(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.82g,1.6mmol)溶于10ml二氯甲烷，滴加含2-氯乙基异氰酸酯(0.68ml,8mmol)的5ml二氯甲烷，0℃冰浴反应6h，反应完毕后30℃减压蒸馏得(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.56g,0.9mmol)，产率57％。
uvλ:224,270nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3345.7(n-h)；3096.2(c-h)；1772.1(c＝o)；1759.4(n＝n)；1657.9(c＝c)；1365.4(n-o)；1234.5(c-o-c)；1120.2(c-n)；769.7(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.45(t,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；3.64(t,2h,ch2)；4.56(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.2(t,1h,nh)；6.76-7.74(m,4h,c6h4)；7.38-7.47(m,5h,c6h5)；8.06(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z618(m+h)+。
7)(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-氯乙基亚硝基脲(化合物1)的合成
将所得固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.56g,0.9mmol)溶于8ml乙腈，加入含冰乙酸(11.2μl,0.2mmol)的3ml乙腈，在冰浴条件下，加入亚硝鎓四氟硼酸盐(0.48g,4mmol)，冰浴条件下反应4h，反应完毕后用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:1逐渐增加到1:4，30℃真空干燥得(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-氯乙基亚硝基脲(0.37g,0.58mmol)，产率63％。
uvλ:225,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3365.6(n-h)；3024.5(c-h)；1765.1(c＝o)；1755.4(n＝n)；1685.8(c＝c)；1574.5(n＝o)；1372.6(n-o)；1293.4(c-o-c)；1132.1(c-n)；1065.7(n-n)；772.8(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.45(t,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；3.63(t,2h,ch2)；4.56(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.3(t,1h,nh)；6.72-7.77(m,4h,c6h4)；7.35-7.49(m,5h,c6h5)；8.05(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z647(m+h)+。
实施例2：(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物1)的合成1)n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤的合成
称取o6-苄基鸟嘌呤(2.12g,8.8mmol)，无水碳酸钾(3.36g,24.32mmol)加入到100ml圆底烧瓶中，加入50ml丙酮，缓慢升温至52℃，滴加1,2-二溴乙烷(3.02ml,34.5mmol)，滴毕后继续反应75h，过滤反应液，收集滤液，40℃减压蒸馏旋干溶剂后，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:4，40℃真空干燥得到白色固体n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤(2.16g,6.22mmol)，产率71％。
uvλ:248,283nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3468.2(-(ch2)2-n-h)；3325.1(n-h)；2963.1(-ch2-)；1638.2(c＝c)；1255.2(c-o-c)；1064.9(c-n)；682.1(c-br)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.71(t,2h,ch2)；4.22(t,2h,ch2)；5.25(s,2h,ch2)；6.91(s,2h,nh2)；7.35-7.45(m,5h,c6h5)；8.19(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z348(m+h)+。
2)n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤
将所得固体n9-溴乙基-o6-苄基鸟嘌呤(2.16g,6.22mmol)，加入15ml无水n,n-二甲基甲酰胺溶解，再加入邻苯二甲酰亚胺钾固体(3.46g,18.7mmol)，加热至68℃，搅拌反应6.5h，用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，35℃真空干燥得到白色固体n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤(2.24g,5.42mmol)，产率87％。
uvλ:228,284nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3498.3(-(ch2)2-n-h)；2957.2(-ch2-)；1725.2(c＝o)；1622.3(c＝c)；1258.4(c-o-c)；1069.1(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:4.15(t,2h,ch2)；4.66(t,2h,ch2)；5.17(s,2h,ch2)；6.97(s,2h,nh2)；7.37-7.42(m,5h,c6h5)；7.81-7.85(m,4h,c6h4)；8.12(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z415(m+h)+。
3)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
先配25ml混合液(5ml乙腈、20ml二氯甲烷、50ul三氟乙酸、25ul水)。在0℃，n2保护下向搅拌着的n9-(2-(n-邻苯二甲酰亚胺基)乙基)-o6-苄基鸟嘌呤(2.24g,5.42mmol)的21ml混合液中加入nano2(0.76g，11mmol)，反应20min。再注射含氨基磺酸(1.07g，11mmol)的4ml混合液，反应15min。再注射含n-苯基二乙醇胺(6.39g，38mmol)的10ml乙腈，在0℃下反应3h。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为丙酮和二氯甲烷，采用梯度洗脱，丙酮/二氯甲烷的体积比从1:19逐渐变为到1:2，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.12g,3.5mmol)，产率65％。
uvλ:224,275nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3639.1(-oh)；3489.4(n-(ch2)2-)；3332.4(n-h)；3171.5(c-h)；1791.6(c＝o)；1756.2(n＝n)；1648.2(c＝c)；1265.2(c-o-c)；1089.2(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.55(s,1h,oh)；3.64(s,1h,oh)；3.72(t,2h,ch2)；3.76(t,2h,ch2)；4.16(t,2h,ch2)；4.23(t,2h,ch2)；4.29(t,2h,ch2)；4.61(t,2h,ch2)；5.20(s,2h,ch2)；6.74-7.78(m,4h,c6h4)；7.32-7.45(m,5h,c6h5)；7.84-7.89(m,4h,c6h4)；8.12(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z607(m+h)+。
4)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
向含2.12g(3.5mmol)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的22ml二氯甲烷溶液中加入1.54ml(22mmol)socl2，在回流条件下33℃反应2小时。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:2逐渐变为到1:4，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.54g,2.4mmol)，产率69％。
uvλ:221,272nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3495.8(n-(ch2)2-)；3336.4(n-h)；3175.4(c-h)；1789.8(c＝o)；1752.3(n＝n)；1649.2(c＝c)；1385.1(n-o)；1268.1(c-o-c)；1089.1(c-n)；772.4(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.55(t,2h,ch2)；3.64(t,2h,ch2)；3.66(t,2h,ch2)；3.69(t,2h,ch2)；4.11(t,2h,ch2)；4.62(t,2h,ch2)；5.18(s,2h,ch2)；6.75-7.74(m,4h,c6h4)；7.38-7.41(m,5h,c6h5)；7.81-7.86(m,4h,c6h4)；8.12(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z643(m+h)+。
5)(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n,n-双(2-氯乙基)苯胺的合成
将所得固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.52g,2.4mmol)溶于12mldmf(n,n-二甲基甲酰胺)，并加入2.6ml水合肼，35℃搅拌反应4.5h，使其发生肼解，用二氯甲烷和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，30℃真空干燥得(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n,n-双(2-氯乙基)苯胺(0.95g,1.85mmol)，产率78％。
uvλ:226,276nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3462.2(n-(ch2)2-)；3331.2(n-h)；3176.2(c-h)；1792.4(c＝o)；1749.4(n＝n)；1693.6(c＝c)；1428.1(n-o)；1293.1(c-o-c)；1098.1(c-n)；772.5(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.15(t,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；3.68(t,2h,ch2)；4.59(t,2h,ch2)；5.15(s,2h,nh2)；6.72-7.75(m,4h,c6h4)；7.36-7.42(m,5h,c6h5)；8.08(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z513(m+h)+。
6)(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
将所得固体(e)-4-((9-(2-氨基乙基)-6-(苄氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n,n-双(2-氯乙基)苯胺(0.95g,1.85mmol)溶于12ml二氯甲烷，滴加含2-氯乙基异氰酸酯(0.85ml,10mmol)的5ml二氯甲烷，0℃冰浴反应6.5h，反应完毕后30℃减压蒸馏得(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.68g,1.1mmol)，产率59％。
uvλ:224,270nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3348.7(n-h)；3094.2(c-h)；1775.2(c＝o)；1759.4(n＝n)；1658.4(c＝c)；1368.3(n-o)；1235.6(c-o-c)；1120.2(c-n)；770.2(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.46(t,2h,ch2)；3.65(t,2h,ch2)；3.69(t,2h,ch2)；4.56(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.23(t,1h,nh)；6.72-7.72(m,4h,c6h4)；7.35-7.45(m,5h,c6h5)；8.07(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z618(m+h)+。
7)(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2–((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-氯乙基亚硝基脲(化合物1)的合成
将所得固体(e)-2-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.68g,1.1mmol)溶于10ml乙腈，加入含冰乙酸(22.4μl,0.4mmol)的3ml乙腈，在冰浴条件下，加入亚硝鎓四氟硼酸盐(0.53g,4.5mmol)，冰浴条件下反应5h，反应完毕后用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:1逐渐增加到1:4，30℃真空干燥得(e)-3-(2-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-氯乙基亚硝基脲(0.48g,0.75mmol)，产率67％。
uvλ:225,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3368.2(n-h)；3027.2(c-h)；1768.3(c＝o)；1758.1(n＝n)；1686.1(c＝c)；1574.2(n＝o)；1375.1(n-o)；1294.2(c-o-c)；1138.1(c-n)；1072.2(n-n)；776.2(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:3.44(t,2h,ch2)；3.60(t,2h,ch2)；3.65(t,2h,ch2)；4.58(t,2h,ch2)；5.14(s,2h,ch2)；6.34(t,1h,nh)；6.72-7.72(m,4h,c6h4)；7.36-7.50(m,5h,c6h5)；8.12(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z647(m+h)+。
实施例3：(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物2)的合成
1)n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤的合成
称取o6-苄基鸟嘌呤(1.45g,6mmol)，无水碳酸钾(2.76g,20mmol)加入到50ml圆底烧瓶中，加入50ml丙酮，缓慢升温至55℃，滴加1,3二溴丙烷(3.03ml,30mmol)，滴毕后继续反应65h，过滤反应液，收集滤液，45℃减压蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:4，40℃真空干燥得到白色固体n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤(1.41g,3.9mmol)，产率65％。
uvλ:250,284nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3452.4(n-(ch2)3-)；3312.6(n-h)；2947.9(c-h)；1634.7(c＝c)；1258.9(c-o-c)；1052.7(c-n)；733.9(c-br)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.25(m,2h,ch2)；3.55(t,2h,ch2)；4.08(t,2h,ch2)；5.15(s,2h,ch2)；6.92(s,2h,nh2)；7.38-7.45(m,5h,c6h5)；8.11(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z362(m+h)+。
2)n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤的合成
将所得固体n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤(1.41g,3.9mmol)，加入15ml无水n,n-二甲基甲酰胺溶解，再加入邻苯二甲酰亚胺钾固体(1.48g,8mmol)，加热至65℃，搅拌反应6h，用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，40℃真空干燥得到白色固体n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤(1.24g,2.9mmol)，产率74％。
uvλ:225,286nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3482.7(n-(ch2)3-)；3341.1(n-h)；2975.4(c-h)；1783.9(c＝o)；1631.7(c＝c)；1272.6(c-o-c)；1087.7(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.67(m,2h,ch2)；4.05(t,2h,ch2)；4.56(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.99(s,2h,nh2)；7.38-7.47(m,5h,c6h5)；7.85-7.84(m,4h,c6h4)；8.09(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z429(m+h)+。
3)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
先配25ml混合液(5ml乙腈、20ml二氯甲烷、50ul三氟乙酸、25ul水)。在0℃，n2保护下向搅拌着的n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤(1.24g,2.9mmol)的20ml混合液中加入nano2(0.76g，11mmol)，反应25min。再注射含氨基磺酸(582mg，6mmol)的5ml混合液，反应20min。再注射含n-苯基二乙醇胺(2g，12mmol)的10ml乙腈，在0℃下反应2.5h。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为丙酮和二氯甲烷，采用梯度洗脱，丙酮/二氯甲烷的体积比从1:20逐渐变为到1:2，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.12g,1.8mmol)，产率62％。
uvλ:226,271nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3642.1(-oh)；3492.5(n-(ch2)3-)；3362.7(n-h)；3214.2(c-h)；1841.5(c＝o)；1752.6(n＝n)；1652.7(c＝c)；1391.5(n-o)；1245.4(c-o-c)；1061.6(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.67(m,2h,ch2)；3.61(s,1h,oh)；3.62(s,1h,oh)；3.73(t,2h,ch2)；4.04(t,2h,ch2)；4.20(t,2h,ch2)；4.56(t,2h,ch2)；5.18(s,2h,ch2)；6.71-7.75(m,4h,c6h4)；7.35-7.49(m,5h,c6h5)；7.85-7.89(m,4h,c6h4)；8.08(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z621(m+h)+。
4)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
向含1.12g(1.8mmol)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的20ml二氯甲烷溶液中加入420μl(6.00mmol)socl2，在回流条件下30℃反应1.5小时。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:1逐渐变为到1:4，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.79g,1.2mmol)，产率67％。
uvλ:223,272nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3492.5(n-(ch2)3-)；3362.7(n-h)；3214.2(c-h)；1841.5(c＝o)；1746.4(n＝n)；1652.7(c＝c)；1391.5(n-o)；1245.4(c-o-c)；1061.6(c-n)；775.4(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.65(m,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；3.67(t,2h,ch2)；4.04(t,2h,ch2)；4.57(t,2h,ch2)；5.12(s,2h,ch2)；6.76-7.74(m,4h,c6h4)；7.32-7.47(m,5h,c6h5)；7.85-7.89(m,4h,c6h4)；8.05(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z657(m+h)+。
5)(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺的合成
将所得固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.79g,1.2mmol)溶于15mldmf，并加入2.1ml水合肼，35℃搅拌反应5h，使其发生肼解，用二氯甲烷和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，35℃真空干燥得(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.47g,0.9mmol)，产率74％。
uvλ:227,278nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3467.9(n-(ch2)3-)；3347.9(n-h)；3014.3(c-h)；1802.9(c＝o)；1757.4(n＝n)；1682.1(c＝c)；1417.8(n-o)；1259.5(c-o-c)；1072.7(c-n)；752.4(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.54(m,2h,ch2)；2.68(t,2h,ch2)；3.61(t,2h,ch2)；3.63(t,2h,ch2)；4.05(t,2h,ch2)；5.17(s,2h,nh2)；5.18(s,2h,ch2)；6.75-7.74(m,4h,c6h4)；7.32-7.49(m,5h,c6h5)；8.12(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z527(m+h)+。
6)(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲的合成
将所得固体(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.47g,0.9mmol)溶于15ml二氯甲烷，滴加含2-氯乙基异氰酸酯(0.4ml,5mmol)的5ml二氯甲烷，0℃冰浴反应5h，反应完毕后28℃减压蒸馏得(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲(0.38g,0.6mmol)，产率67％。
uvλ:226,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3357.4(n-h)；2997.1(c-h)；1789.3(c＝o)；1765.4(n＝n)；1676.5(c＝c)；1357.6(n-o)；1268.4(c-o-c)；1146.7(c-n)；779.8(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.62(m,2h,ch2)；3.42(t,2h,ch2)；3.65(t,2h,ch2)；3.66(t,2h,ch2)；3.44(t,2h,ch2)；3.64(t,2h,ch2)；4.04(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.5(s,1h,nh)；6.76-7.75(m,4h,c6h4)；7.38-7.47(m,5h,c6h5)；8.11(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z632(m+h)+。
7)(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲的合成
将所得固体(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲(0.38g,0.6mmol)溶于6ml乙腈，加入含冰乙酸(5.6μl,0.1mmol)的6ml乙腈，在冰浴条件下，加入亚硝鎓四氟硼酸盐(0.27g,2.3mmol)，冰浴条件下搅拌反应5h，反应完毕后用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:5，28℃真空干燥得(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(0.23g,0.35mmol)，产率58％。
uvλ:225,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3389.6(n-h)；3042.5(c-h)；1797.3(c＝o)；1753.4(n＝n)；1674.5(c＝c)；1589.3(n＝o)；1391.4(n-o)；1281.8(c-o-c)；1145.9(c-n)；1078.6(n-n)；772.2(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.58(m,2h,ch2)；3.38(t,2h,ch2)；3.44(t,2h,ch2)；3.61(t,2h,ch2)；3.63(t,2h,ch2)；3.64(t,2h,ch2)；4.04(t,2h,ch2)；5.26(s,2h,ch2)；6.1(s,1h,nh)；6.76-7.74(m,4h,c6h4)；7.38-7.47(m,5h,c6h5)；8.05(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z661(m+h)+。
实施例4：(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物2)的合成1)n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤的合成
称取o6-苄基鸟嘌呤(1.49g,6.2mmol)，无水碳酸钾(3.17g,23mmol)加入到50ml圆底烧瓶中，加入50ml丙酮，缓慢升温至55℃，滴加1,3二溴丙烷(3.33ml,30mmol)，滴毕后继续反应72h，过滤反应液，收集滤液，45℃减压蒸馏除去溶剂后，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:4，40℃真空干燥得到白色固体n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤(1.48g,4.1mmol)，产率66％。
uvλ:250,284nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3456.4(n-(ch2)3-)；3318.2(n-h)；2950.2(c-h)；1642.2(c＝c)；1251.2(c-o-c)；1055.9(c-n)；742.2(c-br)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.22(m,2h,ch2)；3.54(t,2h,ch2)；4.09(t,2h,ch2)；5.16(s,2h,ch2)；6.97(s,2h,nh2)；7.35-7.41(m,5h,c6h5)；8.14(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z362(m+h)+。
2)n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤的合成
将所得固体n9-溴丙基-o6-苄基鸟嘌呤(1.48g,4.1mmol)，加入15ml无水n,n-二甲基甲酰胺溶解，再加入邻苯二甲酰亚胺钾固体(1.66g,9mmol)，加热至65℃，搅拌反应6h，用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，40℃真空干燥得到白色固体n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤(1.34g,3.12mmol)，产率76％。
uvλ:225,286nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3478.2(n-(ch2)3-)；3339.2(n-h)；2971.4(c-h)；1785.4(c＝o)；1634.2(c＝c)；1283.2(c-o-c)；1092.2(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.65(m,2h,ch2)；4.08(t,2h,ch2)；4.59(t,2h,ch2)；5.17(s,2h,ch2)；6.72(s,2h,nh2)；7.36-7.45(m,5h,c6h5)；7.81-7.86(m,4h,c6h4)；8.11(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z429(m+h)+。
3)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
先配25ml混合液(5ml乙腈、20ml二氯甲烷、50ul三氟乙酸、25ul水)。在0℃，n2保护下向搅拌着的n9-(3-(n-邻苯二甲酰亚胺基)丙基)-o6-苄基鸟嘌呤(1.34g,3.12mmol)的20ml混合液中加入nano2(0.75g，10.92mmol)，反应25min。再注射含氨基磺酸(601mg，6.2mmol)的5ml混合液，反应20min。再注射含n-苯基二乙醇胺(2.15g，12.8mmol)的10ml乙腈，在0℃下反应2.5h。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为丙酮和二氯甲烷，采用梯度洗脱，丙酮/二氯甲烷的体积比从1:20逐渐变为到1:2，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.24g,2mmol)，产率64％。
uvλ:226,271nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3649.1(-oh)；3496.1(n-(ch2)3-)；3358.3(n-h)；3217.3(c-h)；1847.1(c＝o)；1755.1(n＝n)；1659.1(c＝c)；1390.2(n-o)；1246.2(c-o-c)；1065.2(c-n)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.68(m,2h,ch2)；3.60(s,1h,oh)；3.65(s,1h,oh)；3.75(t,2h,ch2)；4.07(t,2h,ch2)；4.23(t,2h,ch2)；4.58(t,2h,ch2)；5.17(s,2h,ch2)；6.68-7.74(m,4h,c6h4)；7.35-7.45(m,5h,c6h5)；7.81-7.89(m,4h,c6h4)；8.14(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z621(m+h)+。
4)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的合成
向含1.24g(2mmol)(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-羟乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮的20ml二氯甲烷溶液中加入socl2(560μl,8.00mmol)，在回流条件下30℃反应1.5小时。用二氯甲烷和水萃取，合并有机层，用无水na2so4过夜干燥，30℃减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷的体积比从1:1逐渐变为到1:4，30℃真空干燥得到白色固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.92g,1.4mmol)，产率70％。
uvλ:223,272nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3495.2(n-(ch2)3-)；3365.2(n-h)；3218.1(c-h)；1845.2(c＝o)；1756.3(n＝n)；1662.3(c＝c)；1385.5(n-o)；1253.9(c-o-c)；1065.2(c-n)；781.6(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.66(m,2h,ch2)；3.64(t,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；4.09(t,2h,ch2)；4.55(t,2h,ch2)；5.13(s,2h,ch2)；6.75-7.74(m,4h,c6h4)；7.32-7.45(m,5h,c6h5)；7.85-7.89(m,4h,c6h4)；；8.13(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z657(m+h)+。
5)(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，
n-双(2-氯乙基)苯胺的合成
将所得固体(e)-2-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.92g,1.4mmol)溶于15mldmf，并加入2.5ml水合肼，35℃搅拌反应6h，使其发生肼解，用二氯甲烷和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，35℃真空干燥得(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.58g,1.1mmol)，产率79％。
uvλ:227,278nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3473.4(n-(ch2)3-)；3352.6(n-h)；3011.2(c-h)；1803.4(c＝o)；1751.1(n＝n)；1678.6(c＝c)；1419.2(n-o)；1242.5(c-o-c)；1075.72(c-n)；753.4(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.56(m,2h,ch2)；2.72(t,2h,ch2)；3.63(t,2h,ch2)；3.68(t,2h,ch2)；4.06(t,2h,ch2)；5.12(s,2h,nh2)；5.16(s,2h,ch2)；6.75-7.76(m,4h,c6h4)；7.32-7.45(m,5h,c6h5)；8.15(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z527(m+h)+。
6)(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲的合成
将所得固体(e)-4-((9-(3-氨基丙基)-6-(苄基氧基)-9h-嘌呤-2-基)二氮烯基)-n，n-双(2-氯乙基)苯胺(0.58g,1.1mmol)溶于15ml二氯甲烷，滴加含2-氯乙基异氰酸酯(0.48ml,6mmol)的6ml二氯甲烷，0℃冰浴反应6h，反应完毕后28℃减压蒸馏得(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲(0.47g,0.75mmol)，产率68％。
uvλ:226,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3362.2(n-h)；2985.3(c-h)；1792.3(c＝o)；1773.4(n＝n)；1761.5(c＝c)；1363.2(n-o)；1262.4(c-o-c)；1145.2(c-n)；779.8(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.61(m,2h,ch2)；3.45(t,2h,ch2)；3.62(t,2h,ch2)；3.69(t,2h,ch2)；4.04(t,2h,ch2)；5.17(s,2h,ch2)；6.5(s,1h,nh)；6.76-7.79(m,4h,c6h4)；7.38-7.45(m,5h,c6h5)；8.14(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z632(m+h)+。
7)(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲的合成
将所得固体(e)-1-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-3-(2-氯乙基)脲(0.47g,0.75mmol)溶于5ml乙腈，加入含冰乙酸(11.2μl,0.2mmol)的5ml乙腈，在冰浴条件下，加入亚硝鎓四氟硼酸盐(0.33g,2.8mmol)，冰浴条件下搅拌反应5h，反应完毕后用乙酸乙酯和去离子水进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂，用硅胶柱层析法分离纯化，洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，采用梯度洗脱，石油醚/乙酸乙酯的体积比从1:2逐渐增加到1:5，28℃真空干燥得(e)-3-(3-(6-(苄氧基)-2-((4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基)二氮烯基)-9h-嘌呤-9-基)丙基)-1-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(0.3g,0.45mmol)，产率61％。
uvλ:225,274nm；
ir(kbr压片)υ/cm-1:3383.6(n-h)；3041.2(c-h)；1788.2(c＝o)；1756.5(n＝n)；1680.2(c＝c)；1593.1(n＝o)；1392.4(n-o)；1289.2(c-o-c)；1146.9(c-n)；1075.6(n-n)；771.9(c-cl)；
1hnmr(400mhz,cdcl3)δ:2.57(m,2h,ch2)；3.36(t,2h,ch2)；3.43(t,2h,ch2)；3.60(t,2h,ch2)；3.63(t,2h,ch2)；3.69(t,2h,ch2)；4.02(t,2h,ch2)；5.25(s,2h,ch2)；6.13(s,1h,nh)；6.72-7.77(m,4h,c6h4)；7.33-7.41(m,5h,c6h5)；8.13(s,1h,ch)；
esi-ms:m/z661(m+h)+。
本发明制得的新型氯乙基亚硝基脲化合物的抗肿瘤活性评价如下：实验例1：抗肿瘤活性的评价
1、实验材料与仪器
供试化合物：上述制备实施例中制得的化合物1和化合物2；
细胞系：l1210小鼠白血病细胞，ht29人结肠癌细胞，a549人肺癌细胞，hut102人t淋巴瘤细胞，人神经胶质瘤细胞sf763，sf126
2、实验方法
六种肿瘤细胞分别以1000/孔接种96孔板，在37℃，5％co2培养24小时后，换以系列浓度(1μm、5μm、10μm、50μm、100μm、200μm、400μm和1000μm)的卡莫司汀(阳性对照组)、化合物1和化合物2，每组5个复孔，并设置对照组。将上述各组分别在有氧和低氧条件下作用48小时。然后，向每孔中加10μlcck-8溶液，作用4小时。最后，测定在450nm处的吸光度值，按以下公式计算细胞活性，并通过回归分析计算得到半数抑制率ic50。
细胞存活率(％)＝(a加药组–a空白组)/(a对照组–a空白组)×100
a加药组为具有细胞、cck8溶液和药物溶液的孔的吸光度；
a空白组为具有培养基和cck8溶液而没有细胞的孔的吸光度；
a对照组为具有细胞、cck8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度。
3、实验结果：见表1
表1肿瘤细胞的半数抑制率(ic50,μm)
表1结果显示：
在常氧环境下，化合物1和2对6种肿瘤细胞的ic50值与阳性对照组(卡莫司汀组)相近，表明在常氧条件下，化合物1和2的肿瘤细胞抑制活性与卡莫司汀组差别不大。
在低氧环境下，化合物1和2对6种肿瘤细胞的ic50值比阳性对照组(卡莫司汀组)显著降低。这表明化合物1和2在低氧环境下偶氮键的断裂，一方面能够释放出o6-苄基鸟嘌呤类似物作为agt抑制剂，从而阻断了agt介导的肿瘤细胞耐药性，使癌细胞对亚硝基脲的烷化作用更敏感；另一方面化合物1和2在低氧环境下偶氮键的断裂，释放出芳香氮芥，作为另一种烷化剂进攻鸟嘌呤的n7位，使癌细胞的dna产生链内或链间交联。从而使得化合物1和2的抗肿瘤活性明显提高。
对比常氧和低氧环境下化合物1和2的ic50值，可以看出低氧环境比常氧环境下化合物1和2的肿瘤细胞抑制活性显著提高，表明化合物1和2具有低氧环境选择性。因此，化合物1和2能够选择性地作用于处于低氧状态下的肿瘤细胞，而避免对处于常氧状态下的正常细胞造成损伤，从而达到靶向作用于肿瘤细胞的目的。
实验结果表明，本发明提供的化合物在低氧条件下比现有的氯乙基亚硝基脲具有更高的肿瘤抑制活性；同时，该类化合物能够特异性的作用于肿瘤细胞，可用于肿瘤靶向治疗。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。