本发明属于食品加工领域，特别是涉及一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法。
背景技术：
花色苷是一种安全、无毒的天然食用色素，其来源丰富，且具有很高的营养和药理价值，在食品、化妆品和医药领域有着巨大应用潜力。但是受限于天然植物的花色苷的不稳定性，极易受到酸碱、温度、光照、金属离子、酶等因素的影响，因而在食品加工过程中的提取、浓缩等环节极易发生水解或开环反应，形成无色的查尔酮或其同分异构体，降低了生物活性。分子辅色技术是源于花色苷在自然生理条件下的稳定呈色机制。花色苷与多酚、黄酮、有机酸、类黄酮等辅色素之间能够发生分子间辅色效应，从而可以稳定花色苷。花色苷的分子辅色技术一直是食品加工领域研究的热点。
黑莓被称为“生命之果”。黑莓花色苷包括矢车菊-3-o-葡萄糖苷，矢车菊-3-o-阿拉伯糖苷、矢车菊-3-o-木糖苷，矢车菊-3-o-丙二酸酸葡萄糖苷等，其中矢车菊-3-o-葡萄糖苷的含量高达80％以上。国内外相关文献中报道的黑莓花色苷提取方法较多，如卢锋波等(2010，江苏农业科学，5，366-369；2010，食品科学，31，11-15)、陈钢等(2012，食品科学，33，117-121)、张丽霞(2012，南京农业大学)、赵慧(2010，东北农业大学)等。但这些方法仅限于常规的溶剂萃取法、生物酶解法、超声波和微波辅助法单用或联用。普通溶剂浸提法提取率较低，且提取过程花色苷易降解，而单一的微波或超声波辅助法，在不添加辅色素的情况下，花色苷护色效果不显著，反而增加了生产成本。
目前，关于黑莓花色苷提取辅剂及辅色提取方法的相关专利并不多见。中国发明专利(申请号：cn201310041495.8)公开了一种花色苷提取剂及提取花色苷的方法，其利用由水，纤维素酶，果胶酶，金属螯合剂，葡萄糖，乙醇，有机酸组成花色苷提取剂，并将其应用于蓝莓、黑加仑、越橘、紫玉米或紫甘薯花色苷的提取，提高了花色苷的提取率。但由于不同植物源的花色苷种类和结构有较大差异，花色苷的提取方法也不尽相同。本发明中的黑莓花色苷是以矢车菊-3-o-葡萄糖苷为主要成分，据此，通过选择不同的溶剂，并采用黄酮、酚酸类辅色素对提取过程加以分子辅色，会有效提高黑莓花色苷的提取得率和稳定性。本发明专利方法操作简单、高效可行，是分子辅色原理在花色苷提取技术中的拓展应用。
技术实现要素：
本发明提供了一种黑莓花色苷提取辅剂，本提取辅剂制备简单，安全无毒。
本发明还提供了一种黑莓花色苷的辅色提取方法，操作简单，花色苷提取得率和稳定性较好。
本发明所述的一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由水、果胶酶和果浆酶组成提取辅剂i；
(2)由乙醇和辅色素组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例混合，在一定条件下反应，得到溶液a；
(4)将步骤(2)得到的提取辅剂ii加入到溶液a中，超声提取，得到花色苷溶液离心，上清旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
步骤(1)中，水为纯净水，质量分数为10％-50％。
步骤(1)中，果胶酶为商业购买，质量分数为0.10％-0.50％(以10000u计)。果浆酶为商业购买，质量分数为0.10％-0.50％(以10000u计)。不同品牌的酶活力单位不同时，通过换算得出所需用量。
步骤(2)中，乙醇为75％-95％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)。
步骤(2)中，辅色素是原儿茶酸、对羟基肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、黄芩素、大豆异黄酮、芦丁中的一种或多种。
步骤(2)中，辅色素的质量分数为0.50％-10％。
优选的，辅色素的质量分数为1.0％-5.0％。
本发明提供一种黑莓花色苷的辅色提取方法，应用步骤(1)和(2)提供的提取辅剂。
步骤(3)中，提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶3-1∶10混合，在温度45-60℃，摇床转速50-300rpm条件下反应0.5-4.0h，得到溶液a；
步骤(4)中，按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶10-1∶30的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为30-55℃，时间0.5-2.0h，超声功率为50-500w。得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度0.10mpa，转速120rpm，温度50℃条件下，旋蒸去溶剂，得到花色苷浓缩液。
本发明专利提供了一种黑莓花色苷提取辅剂，所用原料均为食品级原料，安全无毒，制备方法简单、易操作。同时还提供了一种采用本发明的黑莓花色苷提取辅剂提取黑莓花色苷的方法，大大提高了黑莓花色苷的提取得率和储藏稳定性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做出详细说明。
黑莓花色苷的提取得率计算方法
按照计算公式：
黑莓花色苷提取得率(mg/g)＝黑莓花色苷的浓度×体积/黑莓原料质量
其中，黑莓花色苷的浓度采用ph示差法测定。具体操作：精确量取2.0ml样品溶液，分别用缓冲液ph1.0[0.2mol/lkcl∶0.2mol/lhcl＝25∶67，v/v]和ph4.5[0.2mol/lnaac·3h2o∶0.2mol/lhac＝1∶1，v/v]稀释至20ml，混匀。两组溶液分别在520nm和700nm波长下测定吸光值a。
按公式c(mg/ml)＝(a×m×v)/(ε×l)计算。式中，a＝(a520nm-a700nm)ph1.0-(a520nm-a700nm)ph4.5，c为花色苷总含量；ε为矢车菊-3-o-葡萄糖苷的消光系数，29600；l为光程，1cm；m为矢车菊-3-葡萄糖苷的相对分子量，449.2；df为稀释倍数。
黑莓花色苷储藏稳定性的评价方法：
(1)黑莓花色苷的热稳定性评价
将黑莓花色苷溶于蒸馏水(ph3.0)，溶液分别置于50℃、60℃和70℃恒温水浴6h，每隔2h测定a520值，计算热降解率(p)：p＝(1-a/a0)×100％。式中：a为花色苷加热后的吸光值，a0为花色苷的初始吸光值。
(2)黑莓花色苷光稳定性的评价
将黑莓花色苷溶于蒸馏水(ph3.0)，分别置于日光灯光照(5000±500lx)和黑暗条件下，25℃处理120h。按照公式ln(c/c0)＝-kt和t1/2＝ln2/k计算花色苷降解半衰期t1/2。其中，c0和c分别是初始和处理t小时后的吸光值。
对照例：
黑莓花色苷的提取根据文献(陈钢等，食品科学，2012，33，117-121)报道的方法实施。并评价此方法提取得到的黑莓花色苷的储藏稳定性。
实施例1
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水10％、果胶酶0.10％和果浆酶0.10％组成提取辅剂i；
(2)由75％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)和1.0％芦丁组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶3混合，在温度45℃，摇床转速150rpm条件下反应1.5h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶10的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间0.5h，超声功率为150w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度0.10mpa，转速120rpm，温度50℃条件下，旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.409mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(8.96％)、60℃(18.69％)、70℃(20.16％)；光降解半衰期为0.50h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。
实施例2
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水50％、果胶酶0.50％和果浆酶0.50％组成提取辅剂i；
(2)由75％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)和1.0％阿魏酸组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶10混合，在温度50℃，摇床转速150rpm条件下反应2.5h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶30的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间1.0h，超声功率为180w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度为0.10mpa，转速为120rpm，温度为50℃条件下旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.523mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(8.14％)、60℃(18.34％)、70℃(19.21％)；光降解半衰期为0.42h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。
实施例3
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水10％、果胶酶0.20％和果浆酶0.20％组成提取辅剂i；
(2)由80％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)、1.0％槲皮素、1.0％对羟基肉桂酸和1.0％阿魏酸组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶5混合，在温度50℃，摇床转速180rpm条件下反应2.0h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶10的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间1.0h，超声功率为150w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度为0.10mpa，转速为120rpm，温度为50℃条件下旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.531mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(8.87％)、60℃(18.01％)、70℃(19.58％)；光降解半衰期为0.37h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。
实施例4
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水30％、果胶酶0.20％和果浆酶0.20％组成提取辅剂i；
(2)由95％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)、1.0％槲皮素和1.0％黄芩素组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶5混合，在温度50℃，摇床转速180rpm条件下反应2.0h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶15的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间0.6h，超声功率为150w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度为0.10mpa，转速为120rpm，温度为50℃条件下旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.568mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(7.02％)、60℃(17.61％)、70℃(18.34％)；光降解半衰期为0.59h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。
实施例5
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水10％、果胶酶0.20％和果浆酶0.20％组成提取辅剂i；
(2)由95％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)、1.0％芦丁和1.0％咖啡酸组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶5混合，在温度50℃，摇床转速180rpm条件下反应2.0h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶10的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间0.5h，超声功率为180w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度为0.10mpa，转速为120rpm，温度为50℃条件下旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.575mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(6.92％)、60℃(17.05％)、70℃(18.31％)；光降解半衰期为0.66h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。
实施例6
一种黑莓花色苷提取辅剂及黑莓花色苷的辅色提取方法，包括以下步骤：
(1)由纯净水30％、果胶酶0.30％和果浆酶0.40％组成提取辅剂i；
(2)由75％柠檬酸酸化乙醇(ph3.0)、1.0％对羟基肉桂酸和1.0％阿魏酸组成提取辅剂ii；
(3)将步骤(1)得到的提取辅剂i与黑莓原料按照比例1∶5混合，在温度50℃，摇床转速180rpm条件下反应2.0h，得到溶液a；
(4)按照提取辅剂i∶提取辅剂ii＝1∶10的比例，将提取辅剂ii与溶液a混合，超声提取温度为45℃，时间1.0h，超声功率为150w。提取结束后，得到的花色苷溶液在4000rpm，离心20min。上清液在真空度为0.1mpa，转速为120rpm，温度为50℃条件下旋转蒸发去溶剂，得到花色苷浓缩液。
根据黑莓花色苷的提取得率计算方法和储藏稳定性的评价方法，本实施例条件下得到的黑莓花色苷提取得率为0.594mg/g。黑莓花色苷的热降解率为50℃(7.22％)、60℃(16.61％)、70℃(19.24％)；光降解半衰期为0.64h。对照例中黑莓花色苷提取得率为0.321mg/g；热降解率为50℃(10.21％)、60℃(20.14％)、70℃(22.20％)。光降解半衰期为0.12h。以上可以看出，本发明提供的黑莓花色苷辅色提取方法得到的花色苷提取得率较高，储藏稳定性较好。