本发明属于医药生物领域，具体涉及一种阿福特罗有关物质、制备方法和用途。
背景技术：
阿福特罗，化学名为n-[2-羟基-5-[(1r)-1-羟基-2-[[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]甲酰胺，(2r,3r)-2,3-二羟基，化学结构如式i所示，是一种选择性长效β2-肾上腺素受体激动剂，用于治疗copd患者的支气管痉挛，
为了保证用药安全，活性药物成分(api)中的每一个杂质都必须进行安全性评估，即建立保证安全性的杂质限度。根据人用药品注册技术标准国际协调会(ich)要求，原料药中的单个杂质量如果超过0.05％，应需要报告；单个杂质量如超过0.1％，就需要进行确证；单个杂质量如超过0.15％，则需要有安全性数据支持。因此，对阿福特罗有关物质进行结构确认、含量控制，以满足药品制备的要求，十分必要。
技术实现要素：
本发明一个目的是提供式ii所示的阿福特罗有关物质，命名为二聚体杂质，化学名为n-[2-羟基-5-[(1r)-1-[[2-羟基-5-[(1r)-1-羟基-2-[[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]-氨基]-2-[[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]-乙基]苯基]甲酰胺，
本课题组在阿福特罗有关物质分析中发现式ii所示的杂质未见任何文献报道，鉴于对塞阿福特罗原料药中的式ii所示杂质的结构还缺乏明确的表征，且含量亦缺乏控制，本课题组对式ii所示杂质进行了研究，分离制备出式ii所示杂质的标准品，鉴定了其结构，并对其含量进行控制。
本发明的第二个目的在于提供一种制备式ii所示化合物的方法，所述方法操作简单，反应条件温和，收率高。
本发明的第三个目的在于提供式ii所示化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用。
为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
第一方面，本发明提供式ii所示的阿福特罗有关物质，命名为二聚体杂质，化学名为n-[2-羟基-5-[(1r)-1-[[2-羟基-5-[(1r)-1-羟基-2-[[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]苯基]-氨基]-2-[[(1r)-2-(4-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基]-乙基]苯基]甲酰胺，
第二方面，本发明提供一种制备式ii所示化合物的方法，所述方法包括将式d所示的化合物与式b所示的化合物进行取代反应制得，其中，式b所示化合物是通过式a所示化合物与甲磺酰氯反应在室温下反应得到；式d所示化合物是通过将式a所示化合物与溴苄反应，将羟基保护制得式c所示化合物后，再将式c所示化合物在碱性溶剂中水解得到，反应路线如下：
根据本发明，式ii所示化合物是式d所示的化合物与式b所示的化合物于碱性有机溶剂中，100-140℃下反应得到，所述式d所示的化合物与式b所示的化合物的摩尔比为1:0.9-1.1；优选地，式ii所示化合物是式d所示的化合物与式b所示的化合物dmf溶剂中，加入碳酸钾，120℃下反应得到，所述式d所示的化合物与式b所示的化合物的摩尔比为1:1。本发明人发现，在加入了碳酸钾的dmf溶剂中，不仅可以同时完成式b化合物与式d化合物的亲核取代反应和苄基保护基的脱去，且得到的式ii化合物纯度较高，为进一步纯化提供了便利。
根据本发明，式b所示化合物是将式a化合物与甲磺酰氯在选自二氯甲烷、氯仿的溶剂中常温反应得到，式a化合物与甲磺酰氯的摩尔比为1：1-1.2；优选地，式b所示化合物是将式a化合物与甲磺酰氯在二氯甲烷中常温反应得到，式a化合物与甲磺酰氯的摩尔比为1：1-1.1。
根据本发明，式c所示化合物是式a所示化合物在dmf和碳酸钾中，与溴苄反应得到，式a所示化合物与溴苄的摩尔比为1:1-1.2；优选地，式c所示化合物是式a所示化合物在dmf和碳酸钾中，与溴苄常温反应得到，式a所示化合物与溴苄的摩尔比为1:1-1.1。
根据本发明，式d所示化合物是式c所示化合物在质量分数为20-50％的naoh水溶液反应得到；优选地，式d所示化合物是式c所示化合物在质量分数为30-40％的naoh水溶液反应得到；进一步优选地，式d所示化合物是式c所示化合物在质量分数为40％的naoh水溶液中常温反应得到。
根据本发明，本发明提供的制备式ii所示化合物的方法，还包括将式ii所示化合物纯化；优选地，本发明提供的制备式ii所示化合物的方法，还包括将式ii所示化合物重结晶纯化；进一步优选地，本发明提供的制备式ii所示化合物的方法，还包括将式ii所示化合物重结晶纯化，所述重结晶纯化方法是将式ii所示化合物在体积比为2:1的甲醇-四氢呋喃混合溶液中重结晶。
在一个具体的实施方案中，本发明提供的制备式ii所示化合物的方法，还包括将式ii所示化合物重结晶纯化，所述重结晶纯化方法是向式ii所示化合物中加入其质量8-10倍的甲醇-四氢呋喃混合溶液(体积比为2:1)中，升温至40℃，搅拌至式ii所示化合物全部溶解，冷却至0-4℃析晶得到。
第三方面，本发明提供式ii化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用，包括：
(1)提供阿福特罗的供试品、自身对照品和式ii化合物标准品；
(2)用色谱法测定供试品、对照品和标准品，确定阿福特罗供试品中式ii化合物的存在和/或量。
在一个实施方案中，式ii所示化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用包括如下步骤：a)提供阿福特罗的供试品；b)提供式ii化合物的标准品；c)通过hplc法分析式ii化合物标准品，确定式ii化合物的保留时间；d)通过hplc法分析阿福特罗的供试品，确定供试品中是否含有保留时间与步骤c)保留时间基本一致的物质，从而确定阿福特罗供试品中式ii化合物的存在。
在一个实施方案中，式ii化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用包括如下步骤：a)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm*250mm,5um)，以乙腈-四氢呋喃-磷酸盐缓冲液(ph6.8)(37:8:55)为流动相，称取阿福特罗，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；b)称取式ii所示化合物，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为标准品溶液；c)精密量取标准品溶液和供试品溶液各20μl，注入色谱仪中，记录色谱图，确定供试品溶液中式ii所示化合物是否存在。
在一个实施方案中，式ii所示化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用包括如下步骤：a)提供阿福特罗的供试品；b)提供阿福特罗的自身对照品；c)通过hplc法测定供试品中式ii所示化合物的峰面积和自身对照品中阿福特罗的峰面积；d)根据公式(供试品式ii所示化合物的峰面积/对照品中塞来昔布的峰面积)×校正因子，计算供试品中式ii所示化合物的含量。
在一个实施方案中，校正因子可以根据以下方法得到：a)提供含有式ii所示化合物和阿福特罗的系列混标溶液；b)按最小二乘法以峰面积对进样浓度进行线性回归，得到式ii所示化合物和阿福特罗的标准曲线；c)将阿福特罗标准曲线的斜率和式ii所示化合物标准曲线的斜率相除，可得到式ii所示化合物的校正因子。
在一个实施方案中，式ii所示化合物在阿福特罗分析测定中作为质量控制参照标准品的应用包括如下步骤：a)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm*250mm,5um)，以乙腈-四氢呋喃-磷酸盐缓冲液(ph6.8)(37:8:55)为流动相，称取阿福特罗，加流动相溶解并制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；b)精密量取所述供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，再精密量取1ml置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液；c)精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入色谱仪中，记录色谱图，确定式ii化合物的峰面积和阿福特罗的峰面积；d)根据公式(供试品式ii化合物的峰面积/对照品阿福特罗的峰面积)×校正因子，计算供试品溶液中式ii化合物的含量。
具体实施方式
以下实施例用于进一步理解和说明本发明，而非限制本发明的范围。实施例中所用的原料可以商购得到，阿福特罗和式a所示化合物参照专利wo0021487方法制备。
实施例1式ii所示化合物的制备
步骤1：式b化合物的制备
称取式a所示化合物2.0g，加入15ml二氯甲烷溶解，加入0.44g甲磺酰氯，室温反应2h，反应结束，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得式b化合物。
lc-msm/z:[m+h]+＝604。
步骤2：式c化合物的制备
称取式a所示化合物3.0g，加入10mldmf溶解，加入0.5g碳酸钾，0.98g溴苄，室温反应2h，反应结束，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得式c化合物。
lc-msm/z:[m+h]+＝616。
步骤3：式d化合物的制备
称取式c所示化合物1.5g，加入30ml质量分数为40％的naoh水溶液，室温搅拌1h，加入乙酸乙酯30ml，分液，水层继续用乙酸乙酯萃取(15ml*3)，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，柱层析纯化得式d化合物。
lc-msm/z:[m+h]+＝588。
步骤4：式ii化合物的制备
称取式b所示化合物1.0g，加入10mldmf溶解，加入碳酸钾1.0g和式d所示化合物0.97g，室温反应1h，过滤，减压蒸除溶剂，柱层析纯化得式ii化合物。
lc-msm/z:[m+h]+＝643。
1hnmr(400mhz,cdcl3,δppm):9.05(s,1h),7.65(t,1h),7.20-7.18(m,4h),6.94-6.92(m,4h),6.90-6.88(m,2h),6.67-6.66(m,1h),6.50-6.48(m,2h),4.88(m,1h),4.37(bs,2h),4.17-4.156(m,1h),3.84(s,6h),3.18-3.14(m,4h),2.94-2.90(m,2h),2.81-2.78(m,2h),2.56-2.54(m,4h),1.12(t,6h)。
lc-msm/z:[m+h]+＝473。
实施例2阿福特罗的hplc分析
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm*250mm,5um)，以乙腈-四氢呋喃-磷酸盐缓冲液(ph6.8)(37:8:55)为流动相，柱温为40℃，流速为每分钟1.0ml，检测波长为237nm。称取阿福特罗适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液；称取式ii所示化合物，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为标准品溶液；c)精密量取标准品溶液和供试品溶液各20μl，注入色谱仪中，记录色谱图。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而应归属于权利要求书。