制备软骨细胞悬液的方法及其用途与流程

文档序号:15734894发布日期:2018-10-23 21:18阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种制备软骨细胞悬液的方法,包括:

(a)从受试者的膝的非负重区收获40mg至100mg重量的软骨组织;

(b)将来自(a)的组织切碎,接着用一种或多种酶消化以分离软骨细胞;

(c)将软骨细胞与营养培养基、血清和任选的生长因子混合;

(d)任选地接种以实现细胞增殖直至P2阶段以在四周内获得不少于4800万个细胞;

(e)离心、弃去上清液;

(f)与营养培养基混合;

(g)分析和表征软骨细胞悬液;

(h)将经表征的软骨细胞悬液灌装到透明V形1ml小瓶中;并且任选地运送到与(a)中相同的受试者。

2.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述受试者是成人受试者。

3.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述酶选自胰蛋白酶-EDTA、胶原酶等。

4.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述营养培养基选自IMDM、EMEM、DMEM等。

5.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述生长因子选自IGF、TGF、FGF等。

6.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述接种在T-25和/或T-75和/或T-150烧瓶等中进行。

7.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述运送在2℃至8℃下进行。

8.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中进行的分析是外观、无菌性、支原体、内毒素、细胞计数、细胞活力、细胞纯度测试、细胞表征和核型分析。

9.根据权利要求9所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中细胞表征通过分析软骨细胞CD44+和CD151+标记物表达而进行。

10.根据权利要求1所述的制备软骨细胞悬液的方法,还包括任选地与凝胶混合,同时通过使用关节镜检查或微创关节切开术将所述软骨细胞悬液植入所述受试者膝的缺损部位。

11.根据权利要求11所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中缺损大小为1cm2至20cm2

12.根据权利要求11所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述凝胶选自纤维蛋白、凝血酶、热可逆凝胶等。

13.根据权利要求11所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中当使用凝胶时,使用包括钝针的Y形套管进行植入。

14.一种植入用于自体软骨细胞移植的软骨细胞悬液的方法,包括:

(i)从小瓶1中取出1ml营养培养基,与小瓶2中的纤维蛋白(浓度范围为72mg至110mg)混合,混合并将内容物混合抽吸到注射器A中;

(ii)从小瓶1中取出1ml营养培养基,添加到小瓶3中的凝血酶(浓度为500IU/ml)中并混合;

(iii)从小瓶3中取出0.2ml并注入空小瓶4中;

(iv)随后从软骨细胞悬液的一个或多个小瓶中取0.4ml+0.4ml,注入小瓶4中,并将内容物抽吸到注射器B中;

(v)将注射器A和B置于施用装置/支架上;

(vi)将包括钝针的Y形双注射器施用装置固定到两个注射器;以及

(vii)使用关节镜检查或微创关节切开术植入受试者的缺损部位。

15.根据权利要求14所述的植入软骨细胞悬液的方法,其中营养培养基选自IMDM、EMEM、DMEM等。

16.根据权利要求14所述的植入软骨细胞悬液的方法,其中使用包括钝针的Y形双注射器施用装置进行植入。

17.根据权利要求14所述的植入软骨细胞悬液的方法,其中软骨细胞悬液通过权利要求1至9中所述的方法制备。

18.根据权利要求14所述的制备软骨细胞悬液的方法,其中所述受试者是成人受试者。

19.根据权利要求14所述的植入软骨细胞悬液的方法,其中所述缺损部位处于受试者的膝或踝或肩或腕或肘或髋中。

20.根据权利要求14所述的植入软骨细胞悬液的方法,其中所述软骨细胞悬液通过包括以下步骤的方法制备:

(a)从成人受试者的膝的非负重区收获40mg至100mg重量的软骨组织;

(b)将来自(a)的组织切碎,随后用一种或多种酶消化以分离软骨细胞,其中所述一种或多种酶选自胰蛋白酶-EDTA、胶原酶等;

(c)将软骨细胞与营养培养基、血清和任选的生长因子混合,其中所述营养培养基选自IMDM、EMEM、DMEM等;

(d)任选地接种以实现细胞增殖直至P2阶段以在四周内获得不少于4800万个细胞,其中接种在T-25烧瓶和/或T-75和/或T-150烧瓶等中进行;

(e)离心、弃去上清液;

(f)与营养培养基混合;

(g)分析和表征软骨细胞悬液;其中进行的分析是外观、无菌性、支原体、内毒素、细胞计数、细胞活力、细胞纯度测试、细胞表征和核型分析;进一步地,其中通过CD44+和CD151+标记物表达分析软骨细胞的细胞表征;

(h)将经表征的软骨细胞悬液灌装到透明V形1ml小瓶中;并且任选地在2℃至8℃下运送到与(a)中相同的受试者。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1