干细胞衍生的含有大量生长因子的外来体的制作方法

本发明涉及从含有上皮生长因子(EGF)和/或成纤维细胞生长因子(FGF)的培养基中培养的干细胞获得的具有增加量的生长因子的外来体、其方法及其用途。
背景技术：
：随着老龄化人口的增加以及现代人生活水平的提高，对与防止衰老、改善皱纹、美白和紫外线有关的功能性化妆品的兴趣和需求正在增加。然而，由于基本或功能性化妆品主要由化学材料制成，由此对人体相关安全问题的关注不断提高。因此，对含有天然和有机成分的化妆品越来越感兴趣，并且相关产品的市场规模也在增加。例如，开发了用于改善皮肤状况的包含人胚胎干细胞培养物的化妆品组合物(韩国专利申请公开号10-2015-0039343)、用于改善皮肤皱纹或抑制皮肤老化的化妆品组合物，其包含来源于哺乳动物的干细胞培养液作为活性成分(韩国专利申请公开号10-1063299)，等等。然而，使用人胚胎干细胞存在道德问题，以及人胚胎干细胞的作用不明显的问题，等等。已知充质干细胞分泌细胞因子和各种生长因子，例如上皮生长因子和成纤维细胞生长因子，并且具有通过促进成纤维细胞的胶原蛋白生成而使皮肤再生的重要作用。使用具有这些性质的干细胞开发化妆品越来越受到关注，特别是研究已经致力于开发增强干细胞有效因子的皮肤渗透的技术。公开内容[技术问题]本发明的目的是提供一种制备具有增加量的生长因子的外来体的方法，其包括在含有上皮生长因子、成纤维细胞生长因子及其组合的培养基中培养干细胞。本发明的另一个目的是提供通过上述方法制备的具有增加量的生长因子的外来体。本发明的又一个目的是提供一种用于增加包含在干细胞的外来体中的生长因子的量的组合物，其含有上皮生长因子、成纤维细胞生长因子或其组合。本发明的又一个目的是提供一种用于改善皮肤状况的化妆品组合物，其含有外来体作为活性成分。本发明的又一个目的是提供一种用于改善皮肤状况的准标准药物组合物，其含有外来体作为活性成分。本发明的又一个目的是提供一种用于愈合伤口的药物组合物，其含有外来体作为活性成分。[本发明的有益效果]根据本发明从脐带血来源的充质干细胞(下文称为UCB-MSC)获得的外来体与不同来源的外来体比较含有更高水平的EGF，EGF在皮肤再生、毛囊形成、伤口愈合等方面有效。由于特殊的脂质双层结构，外来体可以将EGF传送到皮肤的真皮层，并且因此，外来体可以有效地用于改善皮肤状况(例如，皮肤再生、抗衰老作用、增加胶原蛋白合成、毛发生长、皱缩的毛囊恢复等)，以及伤口愈合。附图说明图1显示图像，其显示从各种细胞培养基中分离的外来体的人生长因子抗体阵列的结果，其中CTL(对照组)代表在分离外来体之前的UCB-MSC的培养物；“UCB-MSC外来体”代表从UCB-MSC培养物中分离的外来体；“AD-MSC外来体”代表从人脂肪来源的充质干细胞(AD-MSC)的培养物中分离的外来体；和“BM-MSC外来体”表示从人骨髓来源的充质干细胞(BM-MSC)的培养物中分离的外来体。图2a显示确认从各种细胞培养物中分离的外来体的主要生长因子的图，其中比较了从CTL(对照组)、UCB-MSC、AD-MSC和BM-MSC培养物中分离的外来体中包含的各种生长因子的量。图2b显示确认从各种细胞培养物中分离的主要生长因子的图，其中比较了从除CTL培养物之外的UCB-MSC、AD-MSC和BM-MSC培养物分离的外来体中包含的主要生长因子的量。图3显示根据UCB-MSC的培养条件比较外来体中主要生长因子的量的图。在存在或不存在EGF和FGF的条件下培养UCB-MSC。具体而言，图3A显示图解外来体的人生长因子抗体阵列的结果的图像，以及图3B显示图解上述外来体中含有的生长因子的量的图。图4显示图解相对于从UCB-MSC培养物分离的外来体的人真皮成纤维细胞(HDF)增加胞外基质(ECM)的表达水平的效果的图。对于ECM，使用I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、弹性蛋白和纤连蛋白。具体实施方式为了实现上述目的，本发明的第一方面提供了制备具有增加量的生长因子的外来体的方法，其包括在含有上皮生长因子、成纤维细胞生长因子及其组合的培养基中培养干细胞。本发明的第二方面提供了具有增加量的生长因子的外来体，其通过第一方面的制备方法制备。本发明的第三方面提供了用于增加含有上皮生长因子、成纤维细胞生长因子及其组合的干细胞的外来体中生长因子的量的组合物。本发明的第四方面提供了一种用于改善皮肤状况的化妆品组合物，其含有外来体作为活性成分。本发明的第五方面提供一种用于改善皮肤状况的准标准药物组合物，其含有外来体作为活性成分。本发明的第六方面提供用于愈合伤口的药物组合物，其含有外来体作为活性成分。在下文中，将详细描述本发明。外来体是由脂质双层组成的细胞来源的囊泡，并且它们在细胞外以含有细胞特异性蛋白质、RNA等的状态被分泌，从而将这些蛋白质、RNA等转移到其他细胞。外来体中包含的蛋白质被细胞膜形式的磷脂保护，并且由此它们的活性不易被蛋白酶等损失，因此与可溶性蛋白质相比，这些蛋白质可以稳定地发挥其功能。另外，脂质双层的结构易于与细胞膜融合，因此外来体中包含的材料可以有效地递送至细胞(Lai,R.C.etal.,Biotechnol.Adv.,5,543-551,2013)。可以在培养细胞后从细胞培养物中获得外来体。分离和检测外来体的过程是复杂的。另外，外来体含有RNA、蛋白质、脂质和代谢物，它们反映了相应的外来体来源的细胞类型。外来体可以含有各种分子构成元素(例如，蛋白质和RNA)，相应的外来体衍生自其。存在各种外来体蛋白质组合物，这取决于衍生相应外来体的细胞和组织，但是大多数外来体含有一组进化上保守的常见蛋白质分子。同时，外来体的产生和量可能受到外来体产生细胞接收的分子信号的影响。因此，本发明人使用含有上皮生长因子(EGF)和/或成纤维细胞生长因子(FGF)的培养基培养源自骨髓、脂肪和脐带血的充质干细胞，并分析从其培养物中分离的外来体，结果他们发现产生了大量含有参与细胞生长的各种生长因子(如上皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)和血小板衍生生长因子(PDGF))的外来体，并且还发现作为各种生长因子中的代表性生长因子，主要调节细胞生长的EGF含量最大。此外，他们发现源自UCB-MSC的充质干细胞与源自骨髓和脂肪的那些相比含有更多样的生长因子。本发明基于这些发现。由于从干细胞培养物中分离的外来体是纳米尺寸的，因此预期它们会渗透到皮肤的真皮层中，从而增加皮肤再生效果。另外，由于这些外来体含有大量的各种生长因子，它们可以通过作为皮肤构成细胞的成纤维细胞的增殖和活化提供诸如皮肤再生、抗衰老、增加胶原蛋白合成、毛发生长、皱缩的毛囊恢复和伤口愈合的效果。因此，本发明提供了制备具有增加量的生长因子的外来体的方法，其包括两步法：在含有EGF、FGF或其组合的培养基中培养干细胞；从干细胞培养物中分离外来体。本发明还提供了具有增加量的生长因子的外来体。特别地，培养基中包含的EGF和FGF的浓度可以在10pg/mL-10μg/mL范围内，但浓度不限于此。另外，本发明提供用于增加生长因子的量的组合物，其含有EGF、FGF或其组合。与从不含EGF和/或FGF的培养基中培养的干细胞获得的外来体相比，根据本发明的外来体具有更高量的生长因子。另外，外来体可以以含有外来体的培养物的形式产生或使用，或者可以以细胞被除去的培养物的形式产生或使用。在根据本发明制备外来体的方法的具体实施方案中，方法包括在含有EGF和/或FGF的培养基中培养干细胞并在细胞外分泌含EGF的外来体；并从干细胞培养基(培养物)中分离外来体。本发明的特征是含有EGF和/或FGF的培养基用于产生外来体，其中干细胞大量含有EGF或各种生长因子。培养基可以是无血清培养基。例如，培养基可以是含有EGF和/或FGF的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)。根据本发明使用培养基获得的外来体可以含有两种或更多种生长因子，并且其中具有最高量的生长因子可以是EGF。可选地，根据本发明使用培养基获得的外来体可含有上皮生长因子(EGF)；以及选自下述的至少一种：血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、胰岛素样生长因子(IGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)。此外，本发明的外来体还可以含有反映产生和分泌外来体的干细胞来源的分子。在本发明中，产生外来体的干细胞可以是成体干细胞。成体干细胞是未分化的细胞，必要时其注定要分化成特定组织的细胞。与从人胚胎中提取的胚胎干细胞不同，成体干细胞是从生长的身体组织中提取的，因此，成体干细胞的优点在于可以避免伦理问题。在本发明中，成体干细胞可以源自脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜或胎盘，更具体地源自脐带血，但成体干细胞的来源不限于此。另外，成体干细胞可以是充质干细胞、间充质基质细胞或多能干细胞，但成体干细胞不限于此。已知EGF通过促进成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成在皮肤再生中起重要作用(StanleyCohen,DevelopmentalBiology12,394-407,1965；A.Coligeetal.,JournalofCellularPhysiology145:450-457,1990)。已经表明EGF可以能够作为诱导新毛囊形成的因子(MooYeolHyunetal.,InternationalWoundJournal,2014,doi:10.1111/iwj.12354.)并且对于伤口愈合具有优异的效果(HardwickeJetal.,Surgeon,2008Jun；6(3):172-177.)。另外，外来体被认为是用于药物传递的理想囊泡，因为它们可以穿过细胞膜转移材料。由于这种脂质双层囊泡系统可以克服皮肤渗透的问题，因此被认为是将药物输送到皮肤真皮层的最有效策略之一(SaahilAroraetal.,AsianJournalofPharmaceutics,6,4,237-244,2012)。因此，根据本发明的外来体可以用作用于改善皮肤状况的化妆品组合物中、用于改善皮肤状况的准标准药物组合物中、用于皮肤施用的组合物中或用于伤口愈合的药物组合物中的活性成分。如本文所用，术语“改善皮肤状况”可以指皮肤再生、改善皮肤弹性、预防或改善皮肤皱纹、预防或改善皮肤老化、毛囊生长和/或恢复皱缩的毛囊。尤其，术语“改善”是指至少减少与缓解或治疗病症相关的参数例如症状程度的所有活动。在本发明的具体实施方案中，证实了与从源自脂肪组织的充质干细胞或源自骨髓的充质干细胞的培养物中分离的外来体相比，从UCB-MSC培养物中分离的外来体含有更高水平的各种生长因子(例如，EGF、VEGF、TGF、HGF、FGF、IGF、PDGF等)，特别是大量含有EGF(图2)。另外，确认了外来体处理的人皮肤成纤维细胞显示出参与皮肤弹性的ECM蛋白的高水平表达(图4)。由于生长因子(如EGF等)促进成纤维细胞(即皮肤构成细胞)的增殖、细胞迁移和胶原蛋白合成等，因此表明从UCB-MSC分离的外来体将能够表现出例如皮肤再生、改善皮肤弹性、预防或改善皮肤皱纹、预防或改善皮肤老化、毛囊生长或皱缩毛囊恢复的效果。同时，根据本发明的化妆品组合物可以制备成选自如下的制剂：溶液、外用软膏、乳膏、泡沫、营养润肤剂、柔软润肤剂、香料、套装、软水、乳液、化妆底霜、精华素、肥皂、液体清洁剂、沐浴露、防晒霜、防晒油、悬浮液、糊剂、凝胶、洗液、粉末、含表面活性剂的清洁剂、油、粉底、乳液粉底、蜡粉底、贴剂和喷雾剂，但制剂不限于此。根据本发明的化妆品组合物可以进一步含有至少一种化妆品可接受的载体，其混合在一般的皮肤化妆品中，并且作为常规组分，例如脂肪组分、水、表面活性剂、保湿剂、低级醇、增稠剂、螯合剂、颜料、防腐剂、香料等可以被适当混合，但化妆品可接受的载体不限于此。包含在本发明的化妆品组合物中的化妆品可接受的载体可根据化妆品组合物的制剂而变化。当本发明的制剂是软膏、糊剂、乳膏或凝胶时，可以使用动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、西黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌等作为载体组分，但载体组分不限于此。载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。当本发明的制剂是粉末或喷雾剂时，可以使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙、聚酰胺粉末等作为载体组分，以及尤其是当制剂是喷雾剂时，可以使用诸如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚的推进剂，但载体组分不限于此。这些载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。当本发明的制剂是溶液或乳液时，可以使用溶剂、增溶剂和乳化剂等作为载体组分，例如可以使用水、甘油、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油等，并且特别地，可以使用棉籽油、花生油、玉米籽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，但载体组分不限于此。这些载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。当本发明的制剂是悬浮液时，可以使用液体稀释剂(例如水、甘油、乙醇或丙二醇)、悬浮剂(例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯)、微晶纤维素、偏氢氧化铝(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂、西黄蓍胶等作为载体组分，但载体组分不限于此。这些载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。当本发明的制剂是肥皂时，可以使用脂肪酸的碱金属盐、脂肪酸的半酯盐、脂肪酸蛋白质水解物、羟乙基磺酸盐、羊毛脂衍生物、脂肪醇、植物油、甘油、糖类等作为载体组分，但载体组分不限于此。这些载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。在本发明的化妆品组合物中，相对于化妆品组合物的总重量，外来体可以以0.0001-50wt％，更具体地0.0005-10wt％的量被包含。当外来体的含量在上述范围内时，化妆品组合物的优势在于其具有改善皮肤状况和稳定组合物的制剂的优异效果。如本文所用，术语“准标准药物”是指用于诊断、治愈、改善、缓解、治疗或预防人或动物疾病的目的的产品，不包括那些比药物产品或用于制药目的的那些活性低的产品。包括用于治疗或预防人或动物疾病的那些产品、对人体表现出轻微作用的产品、或不直接作用于人体的产品。本发明的准标准药物组合物可以以选自以下的制剂形式制备：沐浴露、泡沫、肥皂、面膜、软膏、乳膏、洗液、精华素和喷雾剂，但制剂不限于此。“用于皮肤施用的组合物”和“用于伤口愈合的组合物”可以是药物组合物。因此，当这些组合物是药物组合物时，除含有作为活性成分的外来体外，它们还可含有药学上可接受的载体。如本文所用，术语“药学上可接受的”是指当给予化合物时，其可以常规用于药学领域而不刺激和抑制化合物的生物活性和特征。剂量可以是用于改善皮肤状况的药学有效量。如本文所用，术语“药学有效量”是指足以以适用于医学治疗的合理利益/风险比治疗疾病的量，并且有效剂量的水平可基于包括对象的类型和疾病的严重程度、年龄、性别、疾病类型、药物活性、药物敏感性、给药时间、给药途径、排泄率、治疗持续时间的因素，包括同时结合使用的药物的因素，以及医学领域众所周知的其他因素决定。另外，如本领域技术人员所公知的，有效量可以根据给药途径、赋形剂的使用和与其他药剂组合使用的可能性而变化。在本发明中，载体的种类没有特别限制，并且可以使用本领域常规使用的任何载体。载体的具体实例可包括盐水、无菌水、林格液、缓冲盐水、白蛋白注射液、乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖糊精、甘油、乙醇等，但载体不限于此。这些载体组分可以单独使用或以两种或多种的组合使用。此外，如果需要，可以通过向组合物中加入其它药学上可接受的添加剂(例如赋形剂、稀释剂、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂等)来使用组合物，并且可以另外地使用填充剂、增量剂、保湿剂、崩解剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂、润滑剂等。另外，本发明的又一方面提供了一种改善皮肤状况的方法，包括给对象施用具有增加量的生长因子的外来体，所述外来体从在含有EGF和/或FGF的培养基中培养的干细胞中获得。如本文所用，术语“对象”是指所有动物，包括哺乳动物，例如小鼠、牛、人等。在本发明的改善皮肤状况的方法中，组合物可以通过静脉内施用、腹膜内施用、肌内施用、透皮施用、皮下施用等施用，此外，组合物可以通过对皮肤施用或喷雾该组合物进行施用，但施用方法不限于此。实施例在下文中，将参考以下实施例更详细地描述本发明。然而这些实施例仅用于说明目的，本发明的范围不受这些实施例的限制。实施例1.充质干细胞的培养和培养物的收集在以下条件下培养人脐带血来源的充质干细胞(UCB-MSC)、人脂肪来源的充质干细胞(AD-MSC)和人骨髓来源的充质干细胞(BM-MSC)。作为无血清培养基，UCB-MSC、AD-MSC和BM-MSC以2×105个细胞的浓度分配到每个T25烧瓶中，其中含有Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)而没有pH指示剂(例如，酚红等)，并在含有5％CO2的37℃培养箱中培养2天。然后，除去存在的培养物，用PBS洗涤细胞，并且以存在的培养物的2.5倍体积，用含有EGF和FGF的DMEM或不含EGF和FGF的DMEM替换培养基。将细胞在置换培养基中培养4天，从而获得UCB-MSC、AD-MSC和BM-MSC培养物。实施例2.从培养物中分离外来体将实施例1中获得的每种培养物转移到50mL管中并以2,000rpm离心5分钟。弃去每种细胞培养物的所产生的粒状沉淀，仅收集每种细胞培养物的上清液并转移到50mL管中，并以2,000×g离心30分钟。将通过离心分离的每种上清液再次转移到干净的50mL管中。然后将外来体分离试剂(Invitrogen,目录号4478359)以500μL：1mL的比例加入到每个分离的上清液中，并在4℃温育。24小时后，将每种混合物以10,000×g离心60分钟，并将形成的每个粒状沉淀重新悬浮于1×PBS中以制备分离的外来体。实验实施例1.分离的外来体中的活性成分的分析实验实施例1-1.活性成分存在的确认为了证实从每种干细胞培养物中分离的外来体成分的存在，使外来体经受人生长因子抗体阵列(RayBiotech,目录号AAH-GF-1-8)。存在于外来体中的组分通过下表1的阵列图(ARRAYMAP)确认，并且通过经由ImageJ.对比分析成分与阳性对照斑点确认每种生长因子的相对量。[表1]阵列图POS＝阳性对照斑点NEG＝阴性对照斑点BLANK＝空白斑点具体而言，比较了UCB-MSCCM(CTL)中含有的成分，其是UCB-MSC自身的培养物；从UCB-MSC培养物中分离的外来体(下文称“UCB-MSC外来体”)；从AD-MSC培养物中分离的外来体(下文称为“AD-MSC外来体”)；和从BM-MSC培养物中分离的外来体(下文称为“BM-MSC外来体”)。结果证实，如图2A所示，外来体中存在各种生长因子。具体地，证实了调节细胞生长的上皮生长因子(EGF)在外来体中最占优势。另外，证实了“UCB-MSC外来体”含有比“AD-MSC外来体”或“BM-MSC外来体”更高水平的各种生长因子。此外，在生长因子中，考察了与细胞生长有关的上皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子(HGF)等。结果证实，如图2B所示，与从脐带血以外的来源衍生的干细胞培养物获得的外来体相比，“UCB-MSC外来体”含有更大量的生长因子，尤其EGF以显著高的量包含。实验实施例2.根据培养条件比较外来体中的活性成分为了开发进一步增加外来体中活性成分含量的方法，在添加或不添加生长因子EGF和FGF的条件下培养UCB-MSC，并将从培养的UCB-MSC中分离的外来体中的活性成分的量通过人生长因子抗体阵列进行比较。结果证实，在添加EGF和FGF的培养基条件下，“UCB-MSC外来体”显示所有生长因子(例如，转化生长因子β2(TGFβ2)、HGF、转化生长因子-β3(TGFβ3)、bFGF、VEGF、EGF、血小板衍生生长因子-AA(PDGFAA)等)的量增加1.5-2倍，如图3所示。从这些结果，确认，当使用EGF和FGF培养UCB-MSC时，可以进一步增加来源于上述细胞的外来体的量。实验实施例3.分离的外来体对改善皮肤状况的作用的确认如实验实施例1证实，本发明的“UCB-MSC外来体”含有显著量的外来体，本发明人试图检测“UCB-MSC外来体”对改善皮肤状况的作用。具体地，用根据实施例2分离的“UCB-MSC外来体”处理人真皮成纤维细胞(HDF)，并通过qPCR确认这些细胞的细胞外基质(ECM)的表达水平。将HDF以2×105个细胞的密度接种到6孔板的每个孔中并培养24小时。然后，以8×106个细胞的密度向其中加入按照实施例2分离的外来体，培养48小时，从每个培养的HDF中获得总RNA，并由此合成cDNA。通过使用每种合成的cDNA作为模板以及表2中描述的引物进行实时qPCR来比较I型胶原蛋白、III型胶原蛋白、弹性蛋白和纤连蛋白的mRNA水平。特别地，GAPDH用作内部对照组。[表2]名称引物类别I型胶原蛋白F:5′-cacagaggtttcagtggtttgg-3′SEQIDNO:1R:5′-gcaccagtagcaccatcatttc-3′SEQIDNO:2III型胶原蛋白F:5′-ctgaaattctgccatcctgaac-3′SEQIDNO:3R:5′-ggattgccgtagctaaactgaa-3′SEQIDNO:4弹性蛋白F:5′-atcaacgttggtgctactgctt-3′SEQIDNO:5R:5′-atctttagaggagccccaggta-3′SEQIDNO:6纤连蛋白F:5′-aagattggagagaagtgggacc-3′SEQIDNO:7R:5′-gagcaaatggcaccgagata-3′SEQIDNO:8GAPDHF:5′-gagtcaacggatttggtcgt-3′SEQIDNO:9R:5′-gacaagcttcccgttctcag-3′SEQIDNO:10结果证实，如图4所示，当“UCB-MSC外来体”被处理为与皮肤弹性相关的ECM蛋白(例如，胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白等)时，与“未经处理”的测试组相比较，这些ECM蛋白的表达水平显著增加。证实了I型胶原蛋白显示表达水平增加约7倍，III型胶原增加约1.5倍，弹性蛋白增加约5倍，纤连蛋白增加约1.3倍。这些结果证实了根据本发明的“UCB-MSC外来体”可以表现出改善皮肤弹性的效果。因此，与从来源于脂肪组织或骨髓的干细胞的培养物中分离的外来体相比，从脐带血来源的干细胞培养物中分离的外来体含有显著更高量的生长因子，并且这些以含有大量各种生长因子的状态的外来体可以渗透到皮肤的真皮层，因此它们可以通过成纤维细胞(其为皮肤构成细胞)的增殖和活化表现出例如皮肤再生、抗衰老、胶原蛋白合成增加、毛发生长、皱缩的毛囊恢复和伤口愈合的效果。根据前述内容，本发明所属领域的技术人员将能够理解，在不修改本发明的技术概念或必要特征的情况下，本发明可以以其他特定形式实施。在这方面，本文公开的示例性实施方案仅用于说明目的，不应解释为限制本发明的范围。相反，本发明旨在不仅涵盖示例性实施方案，而且涵盖可以包括在由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内的各种替换、修改、等同物和其他实施方案。<110>康干细胞生物技术有限公司<120>干细胞衍生的含有大量生长因子的外来体<130>OPA17005<150>KR10-2016-0003819<151>2016-01-12<160>10<170>KoPatentIn3.0<210>1<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>I型胶原蛋白F-引物<400>1cacagaggtttcagtggtttgg22<210>2<211>22<212>DNA<213>人工序列<220><223>I型胶原蛋白R-引物<400>2gcaccagtagcaccatcatttc22<210>3<211>22<212>DNA<213>人工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