本发明涉及用于治疗癌症的方法，例如，治疗患有癌症(如肾细胞癌瘤)的患者的方法。
相关申请的交叉引用
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背景技术：
在美国，肾细胞癌瘤是男性中第七种最常见的癌症，并且是女性中第九种最常见的癌症，预计2015年将有65,000例新病例和13,500例死亡。尽管对i期、ii期和iii期经常通过部分或根治性肾切除术进行治疗，多达30％的局部肿瘤患者会复发。对于具有可手术切除的原发性肿瘤的iv期肾细胞癌瘤患者，通常推荐细胞减灭性肾切除术，然后进行全身治疗。然后建议对患有残留转移性疾病的患者进行全身治疗。chittoria和rini(2013)《肾细胞癌瘤(renalcellcarcinoma)》；www.clevelandclinicmeded.com/medicalpubs/diseasemanagement/nephrology/renal-cell-carcinoma/。
使用免疫调节药物(如抗pd-1抗体纳武单抗(nivolumab)(
已经在若干种可手术癌症中证明了新辅助化学和免疫疗法的益处。与辅助疗法相比，在局部和区域晚期癌症患者中新辅助疗法有以下若干潜在的益处：
·减小原发性和转移性肿瘤的大小增加了实现阴性边缘切除的可能性；
·在血液和淋巴管保持完整的同时，暴露于潜在有效的全身治疗的肿瘤增加；以及
·在新辅助疗法后收集肿瘤组织的术前和术中样本，可以对肿瘤细胞、肿瘤微环境(tme)和免疫系统的治疗效果进行实时的体内评估。
具体实施方式
cxcr4(c-x-c趋化因子受体4型)是在广泛的细胞类型(包括正常干细胞、造血干细胞(hsc)、成熟淋巴细胞和成纤维细胞)上表达的趋化因子受体。cxcl12(以前称为sdf-1α)是cxcr4的唯一配体。cxcl12/cxcr4轴的主要生理功能包括响应于损伤和炎症，在胚胎发育(cxcr4-/-敲除胚胎在子宫内死亡)期间和其后干细胞的迁移。越来越多的证据表明cxcr4/cxcl12在恶性肿瘤中具有多种潜在作用。已经在若干种肿瘤类型中观察到一种或两种因子的直接表达。cxcl12由与癌症相关的成纤维细胞(caf)表达，并且通常在tme中以高水平存在。在广泛的肿瘤类型(包括乳腺瘤、卵巢瘤、肾瘤、肺瘤和黑素瘤)的临床研究中，cxcr4/cxcl12的表达与预后不良有关，并且与转移到作为cxcl12表达位点的淋巴结、肺、肝和大脑的风险增加有关。cxcr4经常在黑素瘤细胞上，特别是在被认为代表黑素瘤干细胞的cd133+群体上表达，并且体外实验和小鼠动物模型已经证明cxcl12对那些细胞是趋化性的。
纳武单抗(nivolumab)(
目前，fda批准纳武单抗(nivolumab)用于治疗先前接受抗血管生成疗法的晚期肾细胞癌瘤(rcc)患者。纳武单抗的推荐剂量为3mg/kg，作为静脉输注剂每2周施用超过60分钟，直至疾病进展或毒性不可接受。在临床试验中，与正在使用癌症化学疗法依维莫司治疗的患者相比，之前使用纳武单抗治疗的患者的总生存期提高。
多个观察结果暗示cxcl12/cxcr4轴有助于肿瘤对血管生成抑制剂的响应性的缺乏(或丧失)(也称为“血管生成逃逸”)。在动物癌症模型中，已经证明干扰cxcr4功能会破坏肿瘤微环境(tme)并揭示肿瘤通过多种机制免疫攻击，包括消除肿瘤再血管化和增加cd8+t细胞与treg细胞的比率。这些效应导致异种移植物、同基因以及转基因癌症模型中肿瘤负荷显著降低，并且总生存期增加。参见vanharanta等人(2013)《自然医学(natmed)》19:50-56；gale和mccoll(1999)《生物学论文集(bioessays)》21:17-28；highfill等人(2014)《科学转化医学(scitranslmed)》6:ra67；facciabene等人(2011)《自然(nature)》475:226-230。
x4p-001(以前称为amd11070)是一种有效的口服生物可利用的cxcr4拮抗剂(参见montane等人(2011)《临床研究期刊(jclininvest)》121:3024-8)，其在固体和液体肿瘤模型中已经证明具有活性(参见acharyya等人(2012)《细胞(cell)》150:165-78，以及未发表的数据)以及之前(名称为amd070和amd11070)已进入1期和2a期试验，涉及总共71名健康志愿者(参见montane等人(2011)《临床研究期刊(jclininvest)》121:3024-8；zhao等人(2012)《临床研究期刊(jclininvest)》122:4094-4104；silva等人(2008)《科学(science)》319:617-20)和感染hiv的受试者(参见schlabach等人(2008)《科学(science)》319:620-24；shen等人(2013)《肿瘤生物学(tumorbiol)》34:1839-45)。这些研究表明口服施用高达400mgbid持续3.5天(健康志愿者)和200mgbid持续8至10天(健康志愿者和hiv患者)耐受良好，没有不良事件模式或临床显著的实验室变化。这些研究还证明了药效学活性，循环白细胞(wbc)中的剂量和浓度相关变化；以及大量的分布(vl)，表明高组织渗透。
普乐沙福(plerixafor)(以前称为amd3100，现在以mozobil销售)是目前fda批准的唯一cxcr4拮抗剂。普乐沙福通过皮下注射施用，半衰期很短；唯一获得fda批准的适应症是用于3至5天的疗程，以将hsc从骨髓释放到外周血中用于收获。已经在黑素瘤、肾细胞癌瘤和卵巢癌的小鼠动物模型中研究了x4p-001和普乐沙福两者，并且已经证明了显著的抗肿瘤活性，包括转移减少和总生存期增加。治疗效果与tme中髓源性抑制细胞(mdsc)的存在减少以及肿瘤特异性cd-8+效应细胞的存在增加有关。参见d'alterio等人(2012)《癌症免疫学免疫疗法(cancerimmunolimmunother)》61:1713-1720；feig等人(2013)《美国科学院院报(pnas)》110:20212-20217；zhang等人(2006)《癌症生物学与治疗(cancerbiolther)》5:1034-1312。
不希望受任何特定理论的束缚，据信施用x4p-001将增加肿瘤细胞中cd8+t细胞的密度，并且当x4p-001与纳武单抗组合给予时，所述效果将持续或增加。由于x4p-001在体内具有良好的耐受性，并且可能增加身体产生强大的抗肿瘤免疫反应的能力，因此将x4p-001与检查点调节剂组合施用可以大幅度提高在多种肿瘤类型中的客观反应率、持久的长期反应的频率和总生存期。
进一步认为，这种结果将以相对较小的毒性实现，因为预期cxcr4靶向药物不会在骨髓和其它正常增殖细胞群中诱导细胞周期停滞。因此，本发明利用cxcr4抑制剂amd11070(x4p-001)对rcc中mdsc运输、分化和肿瘤细胞基因表达的低毒性和作用，在治疗结果方面提供了显著的优势。
现已发现x4p-001对cxcr4的拮抗作用提供了显著的效果，这进而又可通过多种机制为患有晚期肾细胞癌瘤和其它癌症的患者提供显著的治疗益处。在某些实施例中，施用x4p-001增加了cd8+t细胞的密度，从而使抗肿瘤免疫攻击增加。在某些实施例中，施用x4p-001另外减少了新血管生成和肿瘤血管供应。在其它实施例中，施用x4p-001干扰了xcr4及其唯一配体cxcl12两者的肿瘤表达增加的自分泌作用，从而减少癌细胞转移。
在本发明的一个方面，对患有晚期癌症形式(包括肾癌，如肾细胞癌瘤)的患者用x4p-001作为单一药剂(单一疗法)或与免疫检查点抑制剂(如纳武单抗)组合治疗。纳武单抗是pd-1的抗体，它与程序性细胞死亡1受体(pd-1)结合以阻止受体与抑制性配体pdl-1结合，从而超越肿瘤抑制宿主抗肿瘤免疫反应的能力，被称为免疫检查点抑制剂。
不希望受任何特定理论的束缚，据信通过组合两种药物x4p-001或其药学上可接受的盐，和免疫检查点抑制剂，可以通过增加患者身体产生强大的抗肿瘤免疫反应的能力来进一步改善患者的治疗结果。
在一些实施例中，将x4p-001或其药学上可接受的盐施用给禁食状态的患者。
在一些实施例中，本发明提供了治疗患有癌症的患者的方法，所述癌症呈现为实体瘤，特别是肾细胞癌瘤。在一些实施例中，患者具有可切除的rcc，这意味着患者的肿瘤被认为易于通过手术移除。在其它实施例中，患者具有不可切除的癌，这意味着患者的肿瘤被认为不易通过手术移除。
在一些实施例中，本发明提供了用于对有需要的患者治疗晚期癌症(如肾癌或肾细胞癌瘤)的方法，包括施用x4p-001或其药学上可接受的盐或药物组合物。在某些实施例中，先前给患者施用了免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，给患者先前施用了选自由以下项组成的组中的免疫检查点抑制剂：纳武单抗(nivolumab)
在某些实施例中，本发明提供用于治疗患者癌症的方法，包括向所述患者组合施用x4p-001或其药学上可接受的盐以及免疫治疗药物(如免疫检查点抑制剂)。在某些实施例中，x4p-001和检查点抑制剂同时或相继施用。在某些实施例中，在最初给药免疫检查点抑制剂之前施用x4p-001或其药学上可接受的盐。在某些实施例中，在最初给药x4p-001或其药学上可接受的盐之前施用免疫检查点抑制剂。
在某些实施例中，免疫检查点抑制剂选自pd-1拮抗剂、pd-l1拮抗剂和ctla-4拮抗剂。在一些实施例中，x4p-001或其药学上可接受的盐与选自由以下项组成的群组的免疫治疗药物组合施用：纳武单抗(nivolumab)(
开发中的其它免疫检查点抑制剂适合与x4p-001或其药学上可接受的盐组合使用。这些包括：阿特朱单抗(atezolizumab)(genentech/roche)，也称为mpdl3280a，一种针对pd-l1的igg1同种型的完全人源化的、经工程改造的抗体，用于非小细胞肺癌和晚期膀胱癌(如晚期尿路上皮癌)的临床试验，并作为辅助疗法以防止癌症在手术后复发；度伐单抗(durvalumab)(astra-zeneca)，也称为medi4736，用于转移性乳腺癌、多发性骨髓瘤、食道癌、骨髓增生异常综合征、小细胞肺癌、头颈癌、肾癌、胶质母细胞瘤、淋巴瘤和实体恶性肿瘤的临床试验；皮地利珠单抗(pidilizumab)(curetech)，也称为ct-011，一种与pd-1结合的抗体，用于弥漫性大b细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的临床试验；阿维单抗(avelumab)(pfizer/merckkgaa)，也称为msb0010718c，一种完全人类igg1抗pd-l1抗体，用于非小细胞肺癌、merkel细胞癌、间皮瘤、实体瘤、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈癌和胃癌的临床试验；以及pdr001(诺华公司(novartis))，一种与pd-1结合的抑制性抗体，用于非小细胞肺癌、黑素瘤、三阴性乳腺癌和晚期或转移性实体瘤的临床试验。
纳武单抗(nivolumab)
在超过800名患有晚期透明细胞肾细胞癌的患者(他们已经接受了先前使用一种或两种抗血管生成治疗方案的治疗)的3期试验中，随机分配接受3mg/kg体重的纳武单抗，每两周静脉注射一次，或每天口服10mg依维莫司片。与依维莫司(5％)(p<0.001)相比，使用纳武单抗治疗的患者中位总生存期更长，死亡风险比降低，客观反应率更高(25％)，而3级或4级与治疗相关的不良事件的发生率较低(motzer等人(2015)，《新英格兰医学期刊(newenglandjournalofmedicine)》，373:1803-1813)。
在其目前对不可切除或转移性肾细胞癌瘤的处方标记中，纳武单抗的推荐施用方案是3mg/kg，作为静脉输注剂每2周施用超过60分钟，直至疾病进展或毒性不可接受。根据临床医生的判断，取决于个体耐受性，可以增加纳武单抗的处方剂量，例如，增加剂量和/或频率。根据临床医生的判断，连同处方信息提供的警告，可以停止施用纳武单抗，或者在显著不良反应的情况下减少剂量。
在一些实施例中，本发明提供了用于通过将x4p-001或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂组合施用来治疗患者的肾细胞癌瘤的方法。在一些实施例中，所述癌是可切除的并且是转移性的。在其它实施例中，所述癌是不可切除的并且是转移性的。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是纳武单抗。
在一些实施例中，本发明提供了用于治疗患者难治性癌症的方法，其中所述方法包括向所述患者组合施用x4p-001或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂。在一些实施例中，难治性癌症是转移性肾细胞癌瘤，其肿瘤表达pd-l1，并且在用抗血管生成疗法或含铂化学疗法治疗后具有疾病进展。在一些实施例中，难治性癌症是转移性肾细胞癌瘤，免疫检查点抑制剂是纳武单抗。
在所公开的方法的一些实施例中，向有需要的、禁食状态的患者施用x4p-001或其药学上可接受的盐，并且向禁食或进食状态的患者施用免疫检查点抑制剂。
在某些实施例中，本发明提供了用于治疗患者癌症的方法，其中所述方法包括向所述患者组合施用x4p-001或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂，还包括从患者获得生物样本并测量与疾病相关的生物标志物的量的步骤。在一些实施例中，生物样本是血液样本。在某些实施例中，与疾病相关的生物标志物是循环cd8+细胞、pd-1的血浆水平和/或pdl-1的血浆水平。
在某些实施例中，本发明提供了用于治疗有需要的患者的晚期癌症(如转移性肾细胞癌瘤)的方法，其中所述方法包括向所述患者组合施用x4p-001或其药学上可接受的盐与纳武单抗，还包括从患者获得生物样本并测量与疾病相关的生物标志物的量的步骤。在一些实施例中，生物样本是血液样本。在某些实施例中，与疾病相关的生物标志物是循环cd8+细胞、pd-1的血浆水平和/或pdl-1的血浆水平。
在本发明的其它实施例中，x4p-001或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂组合施用。免疫检查点抑制剂可以是针对pd-1、pdl-1或ctla-4的抗体。在某些实施例中，免疫检查点抑制剂选自由纳武单抗、派姆单抗和伊匹单抗组成的组。
在一些实施例中，本发明提供了用于治疗患者癌症的方法，其中所述方法包括向所述患者施用x4p-001或其药学上可接受的盐与免疫检查点抑制剂的组合，其中x4p-001和免疫检查点抑制剂协同作用。本领域普通技术人员将理解，当活性剂的组合产生的效果大于单独服用的每种药剂的累加效应时，活性剂(如x4p-001和免疫检查点抑制剂)协同作用。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂是纳武单抗。
剂量和配方
x4p-001是cxcr4拮抗剂，分子式为c21h27n5；分子量349.48amu；外观为白色至淡黄色固体。溶解度：x4p-001在3.0至8.0的ph范围内易溶(>100mg/ml)，在ph9.0时略溶(10.7mg/ml)，在ph10.0时微溶(2.0mg/ml)。x4p-001仅微溶于水。熔点：108.9℃。
x4p-001的化学结构如下所示。
在某些实施例中，含有x4p-001或其药学上可接受的盐的药物组合物以每日约200mg至约1200mg的量口服施用。在某些实施例中，剂量组合物可以每天两次以分开的剂量提供，间隔约12小时。在其它实施例中，剂量组合物可以每天提供一次。x4p-001的终末半衰期通常确定为约12至约24小时之间，或约14.5小时。口服施用的剂量可以是约100mg至约1200mg，每天一次或两次。在某些实施例中，可用于本发明的x4p-001或其药学上可接受的盐的剂量为每天约200mg至约600mg。在其它实施例中，可用于本发明的x4p-001或其药学上可接受的盐的剂量可以为每天约400mg至约800mg、约600mg至约1000mg或约800mg至约1200mg。在某些实施例中，本发明包括施用x4p-001或其药学上可接受的盐的量约10mg、约20mg、约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg、或约1600mg。
在一些实施例中，提供的方法包括向患者施用包含x4p-001或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物，其中所述组合物被配制用于口服施用。在某些实施例中，将组合物配制成以片剂或胶囊形式口服施用。在一些实施例中，将包含x4p-001或其药学上可接受的盐的组合物配制成以胶囊形式口服施用。
在某些实施例中，提供的方法包括向患者施用包含100至1200mgx4p-001或其药学上可接受的盐作为活性成分的一种或多种胶囊；和一种或多种药学上可接受的赋形剂。在一些实施例中，施用的每个胶囊或多个胶囊可独立地包含约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约400mg或约800mgx4p-001或其药学上可接受的盐作为活性成分；和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在某些实施例中，本发明提供了药物组合物，其包含x4p-001或其药学上可接受的盐、一种或多种稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和润湿剂。在一些实施例中，本发明提供了包含10至1200mgx4p-001或其药学上可接受的盐、微晶纤维素、二碱式磷酸氢钙二水合物、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酰富马酸钠、胶体二氧化硅和十二烷基硫酸钠的组合物。在一些实施例中，本发明提供了单位剂型，其中所述单位剂型包含含有10至200mgx4p-001或其药学上可接受的盐、微晶纤维素、二碱式磷酸氢钙二水合物、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酰富马酸钠、胶体二氧化硅和十二烷基硫酸钠的组合物。在某些实施例中，本发明提供了单位剂型，包含含有x4p-001或其药学上可接受的盐的组合物，其存在量为约10mg、约20mg、约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1100mg、约1200mg、约1300mg、约1400mg、约1500mg、或约1600mg。在一些实施例中，向患者施用所提供的组合物(或单位剂型)每天一次、每天两次、每天三次、或每天四次。在一些实施例中，向患者施用所提供的组合物(或单位剂型)每天一次或每天两次。在一些实施例中，单位剂型包含含有约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约150mg、约200mg、约400mg、或约800mg的x4p-001或其药学上可接受的盐的胶囊。
在一些实施例中，本发明提供了包含药物组合物的单位剂型，所述药物组合物包含：
(a)x4p-001或其药学上可接受的盐，占组合物重量的约30至40％；
(b)微晶纤维素，占组合物重量的约20至25％；
(c)二碱式磷酸钙脱水物，占组合物重量的约30至35％；
(d)交联羧甲基纤维素钠，占组合物重量的约5至10％；
(e)硬脂酰富马酸钠，占组合物重量的约0.5至2％；
(f)胶体二氧化硅，占组合物重量的约0.1至1.0％；以及
(g)十二烷基硫酸钠，占组合物重量的约0.1至1.0％。
在一些实施例中，本发明提供包含组合物的单位剂型，所述组合物包含：
(a)x4p-001或其药学上可接受的盐，占组合物重量的约37％；
(b)微晶纤维素，占组合物重量的约23％；
(c)二碱式磷酸钙脱水物，占组合物重量的约32％；
(d)交联羧甲基纤维素钠，占组合物重量的约6％；
(e)硬脂酰富马酸钠，占组合物重量的约1％；
(f)胶体二氧化硅，占组合物重量的约0.3％；以及
(g)十二烷基硫酸钠，占组合物重量的约0.5％。
在一些实施例中，本发明提供包含组合物的单位剂型，所述组合物包含：
(a)x4p-001或其药学上可接受的盐，占组合物重量的约55至65％；
(b)微晶纤维素，占组合物重量的约10至15％；
(c)二碱式磷酸钙脱水物，占组合物重量的约15至20％；
(d)交联羧甲基纤维素钠，占组合物重量的约5至10％；
(e)硬脂酰富马酸钠，约占组合物重量的0.5至2％；
(f)胶体二氧化硅，占组合物重量的约0.1至1.0％；以及
(g)十二烷基硫酸钠，占组合物重量的约0.1至1.0％。
纳武单抗已被fda批准用于治疗不可切除或转移性肾细胞癌瘤，并且通常以3mg/kg的剂量作为静脉输注剂以每2周一次经60分钟施用。通常，可用于本发明的纳武单抗或其它免疫检查点抑制剂的量将取决于正治疗的患者的体格、体重、年龄和病况、病症或病况的严重程度以及处方医师的判断。
由于可能需要施用活性化合物的组合(例如，为了治疗特定疾病或病情)，落在本发明的范围内的是，两种或更多种药物组合物(其中至少一种含有根据本发明的化合物)可以方便地以适于共同施用组合物的试剂盒的形式组合。因此，本发明的试剂盒包括两种或更多种单独的药物组合物(其中至少一种含有本发明的化合物)以及用于分别保留所述组合物的装置(如容器、分开的瓶子或分开的箔包)。这种试剂盒的示例是用于包装片剂、胶囊等的熟悉的泡罩包装。
本发明的试剂盒特别适用于施用不同的剂型，例如口服和肠胃外，用于以不同的剂量间隔施用单独的组合物，或用于将单独的组合物相互滴定。为了帮助顺应性，所述试剂盒通常包括施用说明书并且可以设有记忆辅助物。
以下示例更详细地解释本发明。给出以下制剂和示例以使本领域技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。然而，本发明的范围不受示例性实施例的限制，这些实施例仅用于说明本发明的单个方面，并且功能上等同的方法在本发明的范围内。实际上，根据前面的描述和附图，除了本文描述的那些之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员而言将变得显而易见。这些修改旨在落入所附权利要求书的范围内。
本说明书中引用的每篇文献的内容通过引用整体并入本文。
范例
示例1-cd8+t细胞的测量
可以部分地通过测量cd8+t细胞群来评估本发明的有效性。扩大或增加cd8+t细胞(如t-浸润淋巴细胞(til))的密度可以帮助增加肿瘤识别并最终使肿瘤消退。dudley等人(2010)《临床癌症研究(clin.cancerresearch)》，16:6122-6131。可以使用herr等人，(1996)《免疫学方法杂志(j.immunol.methods)》191:131-142；herr等人，(1997)《免疫学方法杂志(j.immunol.methods)》203:141-152；和scheibenbogen等人，(2000)《免疫学方法杂志(j.immunol.methods)》244:81-89中描述的方法检测、分离和定量cd8+t细胞。这些出版物中的每一篇的全部公开内容在此通过引用并入本文。
示例2-肾细胞癌异种移植模型
为了评估本发明对人cd8+效应t细胞的存在、treg细胞在肿瘤微环境中的积累的影响以及最终对肾细胞癌的影响，可以使用人rcc异种移植模型，如pavia-jimenez等人，(2014)《自然实验手册(natureprotocols)》9:1848-1859；grisanzio等人(2011)《病理学杂志(jpathol)》225:212-221所述。这些出版物中的每一篇的全部公开内容在此通过引用并入本文。
示例3-评价实体瘤患者反应的标准
可以使用recist1.1，eisenhauer等人(2009)《欧洲癌症杂志(eur.j.cancer)》，45:228-247中所述的标准评价实体瘤患者对治疗的反应，其全部公开内容在此通过引用并入本文。
示例4-细胞因子和趋化因子研究
对用x4p-001和纳武单抗治疗对rcc细胞产生趋化因子的体内作用评估如下：
通过rt-pcr分析从经受示例1和2中的x4p-001和纳武单抗治疗的小鼠切除的肿瘤，分析药物诱导的m-csf(csf-1)、cxcl1(mgsa/gro-)、cxcl2(mip-2/gro-)、mip-2/gro-、cxcl5(ena-78)、cxcl6(gcp-2)、cxcl8(il-8)、gm-csf、vegf、tnf、ccl22和ccl28的表达变化。已知列出的各种含有elr的cxcl趋化因子激活cxcr2(gale和mccoll(1999)《生物学论文集(bioessays)》21:17-28)，这是最近涉及mdsc募集的趋化因子受体(highfill等人(2014)《科学转化医学(scitranslmed)》6:ra67)。细胞因子vegf、gm-csf和tnf也被认为介导mdsc进入肿瘤组织的趋化性。ccl22和ccl28同样涉及treg细胞的募集(facciabene等人(2011)，《自然(nature)》475:226-230；montane等人(2011)《临床研究期刊(jclininvest)》2011；121:3024-8)。
已经显示许多趋化因子和其它炎症介质调节mdsc向肿瘤组织中的运输(highfill等人(2014)《科学转化医学(scitranslmed)》6:ra67；acharyya等人(2012)《细胞(cell)》150:165-7813；zhao等人(2012)《临床研究(clininvest)》122:4094-4104)。为了确定在用vegf靶向疗法治疗期间哪种趋化因子/细胞因子导致mdsc流入rcc，从经历用纳武单抗治疗的荷瘤小鼠的脾中分离cd11b+/gr-1+mdsc。然后用小的汇集的慢病毒shrna文库(decodegipz，thermoscientific)感染mdsc，用于g蛋白偶联的选定组和已知调节mdsc运输的其它受体。所述文库将包括tnfr-1和-2、il-4r的shrna以及cxcr和ccr趋化因子受体的整个系列(cxcr1-5、ccr1-9)。其中一些(例如cxcr-1、-2和-4)结合已知促进mdsc募集的趋化因子(highfill等人(2014)《科学转化医学(scitranslmed)》6:ra67；acharyya等人(2012)《细胞(cell)》150:165-7813；zhao等人(2012)《临床研究(clininvest)》122:4094-4104)。
示例5-临床治疗方案
用x4p-001作为单一疗法或与检查点抑制剂(如纳武单抗)组合的治疗可以周期性地进行，例如按2周、4周、6周或8周的周期。在某些实施例中，周期为4周长。每天一次或每天两次以分剂量口服施用每日200mg至1200mg的确定剂量的x4p-001。快到给药时间时，为患者说明给药时间表和与食物或饮料有关的要求。
给药时间表。早晨第一件事是服用日剂量。在剂量分开的情况下，第一日剂量在早晨服用，第二日剂量在大约12小时后服用，使用以下指南：
给药应该是在每天的同一时间±2小时。
对于每日两次给药，连续剂量之间的间隔不应<9小时，也不应>15小时。如果间隔时间>15小时，则应省略剂量，并在下一剂量时恢复通常的时间表。
与食物有关的限制。吸收受食物影响，患者将被指示如下：
对于早晨剂量
-午夜后至给药时间期间不得食用或饮用(水除外)
-给药后2小时内不得食用或饮用(水除外)。
对于第二日剂量，如果适用的话
-给药前1小时内不得食用或饮用(水除外)
-给药后2小时内不得食用或饮用(水除外)。
施用纳武单抗与规定的标记信息一致。可以施用x4p-001和纳武单抗的联合治疗，从第1天开始每日施用x4p-001。在第4周和第7周就诊时，通过静脉内输注以3mg/kg临床施用纳武单抗的初始治疗超过60分钟。经临床医生批准，患者可以改变纳武单抗的给药时间表或剂量，
临床医生可以适当地调整x4p-001和/或纳武单抗的剂量。根据临床医生的判断，可以降低x4p-001和/或纳武单抗的剂量。如果接受x4p-001与纳武单抗组合的患者出现>2级的不良事件，则可根据临床医生的判断降低x4p-001和/或纳武单抗的剂量。如果患者成功完成前4周治疗，即没有经历任何大于2级的不良事件，则可以增加x4p-001和/或纳武单抗的日剂量，与临床医生的判断一致。
对治疗和疾病状态的响应的评价。如therasse等人(2000)在《美国国家癌症研究所杂志(j.nationalcancerinstitute)》，92:205-216描述的实体肿瘤组中的反应评价标准(“recist”)，可以根据编码的肿瘤反应评价进行肿瘤反应的分类。ccrcc的放射学评估通过切片厚度≤5mm的计算机断层扫描(ct)和对比来完成。ct在治疗前(基线)进行，并且可以在治疗期间间隔进行以确定反应。
关键术语：
可测量的非淋巴结病变-最长直径≥10mm。
可测量的淋巴结病变-短轴≥15mm
不可测量的病变-较小的病变，包括那些无法测量的病变。
可测量的疾病-存在至少一个可测量的病变。
靶病变
在基线处，鉴定、记录四(4)个可测量的病变，每个个体器官两(2)个，并记录每个的适当直径。如果存在可测量的肾外病变，则还可以识别、记录可测量的肾外病变，并记录适当的直径。基于大小选择病变，以代表疾病，并且适合于可重复的重复测量。靶病变可包括可测量的淋巴结。
在治疗期间，如下评估每个靶病变的完全反应、部分反应、稳定疾病或进行性疾病：
完全反应(cr)
(a)所有非淋巴结病变消失，并且
(b)缺乏病理性淋巴结a。
部分反应(pr)
(a)靶病变的sod从基线开始下降≥30％
稳定疾病(sd)
(a)持续不符合pr或pd标准的疾病
进行性疾病(pd)
a)与最小总和相比，靶病变的sod增加≥20％，可能是在基线时或在治疗时；以及(b)sod绝对增加≥5mm。
非靶病变
应当记录在基线处存在的所有其它病变，包括病理节点(定义为短轴中>10mm的节点)(不需要定量测量)，以便它们可以在随访中分类为存在、不存在或明确的进展。
完全反应(cr)
(a)所有非靶病变消失，和
(b)缺乏病理性淋巴结a。
非cr/非pd
一种或多种非靶病变持续
进行性疾病(pd)
现有非靶病变的明确进展。
[注意：a＝所有淋巴结，无论是否指定靶病变或非靶病变，具有的短轴直径≤10mm]
新病变
新病变应该是明确的(例如，不能归因于技术的变化)；包括未在基线扫描的位置的病变。
药代动力学评估
如果需要，可以进行血液样本的x4p-001和纳武单抗的血浆水平的药代动力学评估。按计划收集血样。使用具有ms/ms检测的反相高效液相色谱(rp-hplc)分析样本的x4p-001浓度。所述生物分析方法的经验证范围为在血浆中30至3,000ng/ml。
对纳武单抗的药代动力学评估可以使用技术，如glassman和balthasar(2014)《癌症生物学与医学(cancerbiol.med.)》11:20-33；wang等人(2014)《癌症免疫学研究(cancerimmunologyresearch)》，2:1-11；或欧洲药品管理局(ema)对纳武单抗emea的评估报告(评估报告ema/chmp/76688/2015，2015年4月23日)中所述的那些来完成。这些文献的全部公开内容特此通过引用并入本文。
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