一种治疗癌症的联合用药物的制作方法

本发明涉及一种治疗癌症的联合用药物。
背景技术：
：随着生活节奏的加快，癌症的病发率越来越高，严重威胁着人类的生命健康。癌症是指机体在各种致瘤因素作用下，局部细胞异常增生而形成的局部肿块，细胞生长失控和细胞周期的失调是所有癌症共有的特征。目前发现的癌症包括肝癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌等等。肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤；后者称为肉瘤，与原发性肝癌相比较较为少见。CI994，Tacedinaline，其结构式为CAS号为112522-64-2，是一种新型的具有广泛抗肿瘤活性的化合物，其作用机制可能涉及抑制组蛋白脱乙酰作用和细胞周期阻滞。CAY10683，SantacruzamateA，其结构式为CAS号为1477949-42-0，是一种组蛋白脱乙酰化酶抑制剂，具有抑制结肠癌的作用。未见将二者联合使用的报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种治疗癌症的联合用药物，以克服单独使用CI994药效不佳的缺陷。本发明治疗癌症的联合用药物，它含有不同规格的单位制剂，用于同时或者分别给CI994和CAY10683，以及药学上可接受的载体。CI994，Tacedinaline，其结构式为CAS号为112522-64-2。CAY10683，SantacruzamateA，其结构式为CAS号为1477949-42-0。优选地，所述CI994和CAY10683的摩尔配比为：CI9940.25～600份，CAY106830.0001～30份；进一步优选地，CI9940.25～2份，CAY106830.0001～0.1份；再进一步优选地，所述CI994和CAY10683的摩尔配比为：CI9942份，CAY106830.1份。其中，所述制剂为注射制剂。本发明还提供了CI994和CAY10683在制备治疗癌症的联合用药物中的用途。优选地，所述CI994和CAY10683的摩尔配比为：CI9940.25～600份，CAY106830.0001～30份；进一步优选地，CI9940.25～2份，CAY106830.0001～0.1份；再进一步优选地，所述CI994和CAY10683的摩尔配比为：CI9942份，CAY106830.1份。其中，所述治疗癌症的药物是治疗肝癌的药物。本发明联合用药物可以有效治疗癌症，效果明显优于CAY10683和CI994单独使用，特别是治疗肝癌的疗效明确，说明二者在本发明特定配比下配合使用后具有协同增效的作用，临床应用前景良好。下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。附图说明图1细胞形态图图2细胞周期分布图图3细胞凋亡率图具体实施方式本发明各种材料和试剂均为市售品。实验例1本发明联合用药物治疗肝癌的作用1、实验材料细胞株：HepG2细胞、Huh7细胞抑制剂：CI994(Tacedinaline)(IC50＝0.57μM，设置实验浓度为2μM)，HDAC2特异性抑制剂SantacruzamateA(CAY10683)(IC50＝119pM，设置实验浓度为100nM)，广谱性HDAC抑制剂Vorinostat(SAHA)(IC50<86nM，设置实验浓度为5μM)。细胞培养相关试剂：1640培养基，DMEM高糖培养基，进口胎牛血清，胰酶。检测试剂：细胞凋亡检测试剂Anexin-V、细胞周期检测试剂PI。2、实验方法实验分组：对照组；CI994组；CAY10683组；CI994+CAY10683组和SAHA组。(1)肝癌细胞株HepG2细胞和Huh7细胞的培养将HepG2细胞、Huh7细胞分别复苏接种在10mm培养皿中，接种密度为3×107个。HepG2细胞培养基为含10％胎牛血清的RPI1640培养基，Huh7细胞培养基为含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基。接种后37℃、5％CO2环境下孵箱培养8小时让细胞贴壁。(2)HDAC1特异性抑制剂CI994和HDAC2特异性抑制剂CAY10683对肝癌细胞的诱导对照组：不作处理；CI994组：在培养第3天时加入CI994，加入时的浓度为2μMCAY10683组：在第2天时加入CAY10683，加入时的浓度为100nM；CI994+CAY10683组：在培养第2天时加入CAY10683，加入时的浓度为100nM；在培养第3天时加入CI994，加入时的浓度为2μM；加入CI994时和CAY10683时的体积相同。SAHA组：在培养第3天时加入SAHA，加入时的浓度为5μM；培养5天后，进行检测；(3)使用倒置显微镜对肝癌细胞形态的观察；(4)使用碘化丙啶(propidiumiodide,PI)标记细胞DNA并通过流式细胞术分析细胞周期分布；(5)使用AnnexinV-FITC/PI双染细胞并通过流式细胞术检测细胞凋亡。3、实验结果3.1联合用药CI994+CAY10683导致细胞形态改变按照相应浓度加入HDAC抑制剂并培养3天后，首先观察了抑制剂对肝癌细胞形态的影响。结果由图1可见，CI994或者CAY10683均不影响HepG2细胞的成团重叠生长的特性，广谱性HDAC抑制剂SAHA也不影响HepG2细胞的成团重叠生长的特性；而联合用药CI994+CAY10683则导致HepG2细胞无法成团生长，且明显可见死亡漂浮细胞。在Huh7细胞中，单一性的CI994或者单一性的CAY10683培养的细胞形态和对照相比无任何差别；广谱性HDAC抑制剂SAHA使得部分细胞形态稍有变化；而联合用药CI994+CAY10683则导致Huh7细胞形态显著性改变。3.2联合用药CI994+CAY10683导致细胞周期分布改变由于肿瘤细胞具有高增殖活性，我们通过流式检测了细胞周期分布。结果如图2所示，在HepG2细胞中，对照组细胞的G1期细胞比例为55.37％、S期细胞比例为35.55％、G2期细胞比例为9.08％。CI994抑制组的G1：S：G2＝59.88％：31.77％：8.35％，CAY10683组的G1：S：G2＝58.46％：34.86％：6.68％，SAHA抑制组G1：S：G2＝57.55％：35.16％：7.29％，以上几组抑制剂对HepG2细胞周期的影响均无显著性差异。而CI994+CAY10683抑制组的G1：S：G2＝70.02％：25.39％：4.6％。同样的，在Huh7细胞中相应的细胞比例为：对照组G1：S：G2＝62.23％：24.59％：13.18％；CI994抑制组G1：S：G2＝62.4％：29.35％：8.24％；CAY10683抑制组G1：S：G2＝65.69％：25.15％：9.16％；SAHA抑制组G1：S：G2＝64.13％：22.99％：12.88％；而CI994+CAY10683抑制组G1：S：G2＝76.75％：20％：3.25％。细胞周期中处于增殖周期的细胞(S期+G2期)显示细胞增殖活性，在我们的实验中，单一性抑制剂均未使肝癌细胞的S期+G2期比例出现较大下降，而联合用药CI994+CAY10683使S期+G2期细胞比例降低了约15％，可见联合用药CI994+CAY10683能显著性抑制HepG2细胞的增殖，从而起到治疗肝癌的作用。3.3联合用药CI994+CAY10683导致细胞凋亡率上升我们进一步检测了细胞凋亡比例。通过AnexinV染色，流式分析，结果显示如图3，HepG2细胞对照组的凋亡比例为8.16％，CI994抑制组为6.35％，CAY10683抑制组为8.09％，SAHA抑制组为4.5％，而CI994+CAY10683抑制组则上升到21.48％；Huh7细胞对照组的凋亡比例为11.34％，CI994抑制组为18.05％，CAY10683抑制组为14.44％，SAHA抑制组为24.39％，而CI994+CAY10683抑制组则上升到28.44％。从以上结果可见联合运用CI994+CAY10683可显著性提高肝癌细胞的凋亡，从而起到治疗肝癌的作用。根据以上结果可以看出，本发明将CI994+CAY10683联合使用，可以有效抑制肝癌细胞、治疗肝癌的作用，而且联合使用的效果优于CI994、CAY10683单独使用效果的总和，说明二者联合使用发挥了协同增效的作用。实验例2本发明联合用药物治疗肝癌的作用1、实验材料细胞株：HepG2细胞抑制剂：CI994(Tacedinaline)，HDAC2特异性抑制剂SantacruzamateA(CAY10683)，广谱性HDAC抑制剂Vorinostat(SAHA)。细胞培养相关试剂：1640培养基，DMEM高糖培养基，进口胎牛血清，胰酶。检测试剂：细胞凋亡检测试剂Anexin-V、细胞周期检测试剂PI。2、实验方法实验分组：对照组；不同浓度的CI994组；不同浓度的CAY10683组；不同浓度的CI994+CAY10683组、不同浓度的SAHA组。(1)肝癌细胞株HepG2细胞的培养将HepG2细胞复苏接种在10mm培养皿中，接种密度为3×107个。HepG2细胞培养基为含10％胎牛血清的RPI1640培养基。接种后37℃、5％CO2环境下孵箱培养8小时让细胞贴壁。(2)HDAC1特异性抑制剂CI994和HDAC2特异性抑制剂CAY10683对肝癌细胞的诱导对照组：不作处理；CI994组：在培养第3天时加入CI994，加入时的浓度分别为0.25μM、0.5μM、1μM和2μM；CAY10683组：在第2天时加入CAY10683，加入时的浓度分别为0.1nM、1nM、10nM、100nM；CI994+CAY10683组1：在培养第2天时加入CAY10683，加入时的浓度分别为0.25μM、0.5μM、1μM和2μM；在培养第3天时加入CI994，加入时的浓度分别为0.1nM、1nM、10nM、100nM；SAHA组：在培养第3天时加入SAHA，加入时的浓度为100nM，500nM，1μM和5μM；培养5天后，进行检测；使用AnnexinV-FITC/PI双染细胞并通过流式细胞术检测细胞凋亡。3、实验结果本实验在HepG2细胞株中进行了浓度梯度摸索实验检测，结果如下表所示：组别凋亡率对照组8.16％CI994(0.25μM)7.37％CI994(0.5μM)6.03％CI994(1μM)7.93％CI994(2μM)6.35％CAY10683(0.1nM)7.59％CAY10683(1nM)6.51％CAY10683(10nM)7.61％CAY10683(100nM)8.09％CI994(0.25μM)+CAY10683(0.1nM)8.13％CI994(0.5μM)+CAY10683(1nM)12.72％CI994(1μM)+CAY10683(10nM)13.47％CI994(2μM)+CAY10683(100nM)21.48％SAHA(100nM)8.77％SAHA(500nM)8.36％SAHA(1μM)7.35％SAHA(5μM)4.5％实验结果说明，本发明将CI994(0.25～600μM)+CAY10683(0.0001～30μM)联合使用，可以有效抑制肝癌细胞、治疗肝癌的作用，并且在CI994(2μM)+CAY10683(0.1μM)时，联合使用的效果优于CI994、CAY10683单独使用效果的总和，说明二者联合使用发挥了协同增效的作用。综上，本发明联合用药物可以有效治疗癌症，特别是对肝癌的疗效明确，而且效果明显优于CAY10683和CI994单独使用，说明二者在本发明特定配比下配合使用后具有协同增效的作用，临床应用前景良好。当前第1页1 2 3