人白细胞介素23受体在制备用于治疗癌症的药物中的用图
【专利说明】人白细胞介素23受体在制备用于治疗癌症的药物中的用 途
[0001] 本项目得到了中国国家自然科学基金的支持，批准号为30871283和81171944。
技术领域
[0002] 本发明涉及医药领域，涉及癌症治疗的领域。更具体地涉及人白细胞介素23受体 在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
【背景技术】
[0003] 白介素12家族包括至少4个细胞因子成员（IL-12, IL-23, IL-27和IL-35)，它 们在不同的T细胞亚型中扮演着不同的角色，并且是唯一形成功能性α或β异源二聚 的细胞因子家族（J〇nes，L.L等人，2011)。IL-12家族的α亚基包括 Ρ19，ρ28和ρ35,它 们各自同IL-12家族的β亚基结合（ρ40或Ebi3)。IL-12, IL-23, IL-27和IL-35的α / β 结合方式分别为 p35/p40，pl9/p40, p28/Ebi3and p35/Ebi3 (van Wanrooij 等人，2012; Vignali，D. A等人，2012)。上述配对的亚基可以被异源二聚体化的受体特异性识别。IL-12 向 IL-12R β 1 和 IL-12R β 2 发出信号（Chua, A. 0 等人，1994 ;Presky, D. H 等人 1996)，而 IL-23 向 IL-12R β 1 和 IL-23R 发出信号（Oppmann, B.等人，2000 ;Parham, C 等人 2002)。 然而，IL-27 识别 WSX-I (IL-27R)和 gpl30 (Pf lanz, S.等人，2004)，IL-35 结合于 gpl30 和 IL-12 β 2 (Collison，L. W等人，2012)。IL-12家族成员虽然结构相似，行使的免疫功能却差 异很大。一旦有病原微生物感染，IL-12和IL-23均可以由主要的抗原提呈细胞（APCs)如 树突状细胞、巨噬细胞等，释放到炎症部位。APCs连续分泌IL-12以及IFN-γ介导T hI分 化均需要一个正回馈循环。类似地，在通过增强IL-23R表达来调节IL-23产生这一过程中 也存在正回馈循环。与IL-12不同，IL-23不能介导细胞分化但可以正调控IL-17-T H17细 胞通路。然而，IL-27和IL-35均具有抑制或消除细胞炎症反应的特性。
[0004] 最初的观点认为IL-12R受体家族在免疫细胞中的表达是受到抑制的。然而，通 过对不同组织更加全面的检测，发现在许多非免疫组织和细胞中，包括人的癌细胞，IL-12/ 11^-121?家族成员的表达是可以被调控的（21^叩，乂.￥等人2006)。最近研宄表明，11^-12/ IL12R家族成员的遗传缺陷、结构缺陷和/或基因表达缺陷可能会引起一系列人类肿瘤 的发生，如食道癌（Tao，Y. P等人2012)、肺癌（Zhang，X. Y等人2006)、急性骨髓性白血病 (Ferretti，E等人2012)，食管鳞状细胞癌（Cardenes，M等人2010)和人慢性B细胞恶性肿 瘤（Airoldi，I等人2004)。因此，在病变组织中补充功能性的IL-12/IL-12R家族基因，可 能会产生巨大的治疗潜力。
[0005] 越来越多的证据表明，某些IL-12/IL12R家族成员具有抗增殖或促凋亡的作用。 Airoldi等人首次提到在人类B细胞慢性淋巴增殖性疾病中，IL-12R β 2可能作为肿瘤抑制 因子发挥作用，并且用IL-12治疗IL-12R转染的B淋巴细胞，可以明显抑制细胞增殖，减少 肿瘤生成（Airoldi，I等人2004)。在急性髓细胞性白血病细胞（Ferretti，E等人2010)和 卵巢癌细胞（Gorelik，E等人2004)中也发现了 IL-12诱导且由IL-12R介导产生的细胞凋 亡。过去的15年中，基于IL-12的肿瘤治疗备受关注，其在延长肿瘤患者的寿命方面取得 了很好的疗效（Bubenik，J，2011)。
[0006] 我们前期研宄表明，在不同的肿瘤细胞系和肺癌组织中，IL-23R剪接异构体可能 会产生缺陷的IL-23R，这也许可以解释某些人类肿瘤中的免疫逃逸现象（Zhang，X. Y等人 2006)。然而，hIL-23R能否作为治疗靶点抵抗人类肿瘤尚难以预期。
【发明内容】
[0007] 在一些实施方式中，提供了人白细胞介素 23受体在制备用于治疗哺乳动物中癌 症的药物中的用途。
[0008] 在一些实施方式中，哺乳动物选自：人、小鼠和大鼠。
[0009] 在一些实施方式中，癌症选自：食道癌、肺癌、急性骨髓性白血病、食管鳞状细胞 癌、慢性B细胞恶性肿瘤、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、喉癌、肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、结 直肠癌、前列腺癌、鼻咽癌、膀胱癌、舌癌、皮肤癌、骨肉瘤、淋巴瘤、脑瘤、白血病、神经母细 胞瘤、胶质瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤。
[0010] 在一些实施方式中，癌症优选为宫颈癌、胰腺癌、喉癌、肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺 癌、淋巴瘤、白血病。
[0011] 在一些实施方式中，其中所述药物为适合用于基因疗法的药物，包括但不限于表 达IL-23R、IL-23R衍生物（IL-23R的点突变或缺失突变）的重组病毒表达载体、靶向性药 物。在一些实施方式中，所述药物为重组蛋白质或多肽类药物。在一些实施方式中，其中所 述药物为单克隆抗体。
[0012] 在一些实施方式中，人白细胞介素 23受体的氨基酸序列如GenBank登录号 ΝΜ_144701· 2 所示。
【附图说明】
[0013] 图IA至图IC :过量表达IL-23R抑制人胚肾细胞系293ΕΤ细胞增殖。将IL-23R以 剂量增加的方式（〇, 3和6 μ g)分别转染293ΕΤ细胞24, 48和72hrs。收获转染细胞并用 CCK-8试剂盒检测450nm的吸光度。通过标准曲线计算各个剂量下的细胞数。根据每一剂 量的3~4个独立实验计算均值土标准偏差，并作t检验。p值〈0. 05时认为差异显著。
[0014] 图2A :人IL-23R促进人胚肾细胞系293ET细胞凋亡。利用Annexin V/PI双染以 及流式细胞仪分析检测IL-23R转染后的293ET细胞凋亡。
[0015] 图2B:人IL-23R促进人胚肾细胞系293ET细胞凋亡。晚期凋亡细胞的定量。对 Annexin V+/PI+双阳性细胞进行计数。根据四个独立转染实验计算均值土标准偏差，并作 t检验。p值〈0.05时认为差异显著。
[0016] 图3A :人IL-23R促进人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡。晚期凋亡细胞的定量。利用 Annexin V/PI双染以及流式细胞仪分析检测IL-23R转染后的HeLa细胞凋亡。对Annexin V+/PI+双阳性细胞进行计数。根据四个独立转染实验计算均值土标准偏差，并作t检验。 P值〈0.05时认为差异显著。
[0017] 图3B :人IL-23R促进人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡。通过caspase 3/7活性检 测凋亡细胞。转染48h后，将HeLa细胞溶解于Caspase-Glo 3/7试剂中。利用光度计检测 每个反应产物的光信号强度。根据四个独立转染实验计算均值土标准偏差，并作t检验。 P值〈0.05时认为差异显著。
[0018] 图4A :IL-23R介导的293ET细胞凋亡与内在线粒体途径密切相关。IL-23R以剂 量依赖的方式抑制Bcl-xL表达。
[0019] 图4B:IL-23R介导的293ET细胞凋亡与内在线粒体途径密切相关。利用 anti-cytochrome c, anti Apaf-1, anti caspase 9, anti-PARP-1 和 anti-caspase 三抗体 进行蛋白印迹分析。内参为β-肌动蛋白。在图4A和4B中，以β-肌动蛋白为标准，利用 Quantity One软件计算每条带的相对强度。
[0020] 图5A :IL-23R介导的HeLa细胞凋亡也和内在线粒体途径密切相关。I