木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用的制造方法与工艺

本发明涉及中药技术领域，特别涉及木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用。

背景技术：
肿瘤(Tumor)是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。近几年恶性肿瘤的发病率也在逐年上升。国家卫生部统计资料表明目前中国恶性肿瘤患者达到1.15‰～1.27‰，由于恶性肿瘤而死亡人数居全部死因的第二位。近半个世纪以来，恶性肿瘤的治疗虽然取得很大进展，但目前还缺乏理想的治疗药物，无法满足临床需要，恶性肿瘤仍被人们视为难治疾病。寻找安全有效的抗肿瘤药物，仍然是各国医药界关注的热点和难点。肿瘤的生长、转移依靠新生血管提供营养和转移通道。抑制肿瘤血管生成，与阻断肿瘤的发生、发展、浸润和转移密切相关。近年来，人们对肿瘤血管生成机制的研究不断深入，许多抗肿瘤血管生成的药物已在临床上推广应用。这类药物不但可以用于大多数实体肿瘤的治疗，还可以用于肿瘤的预防和血液系统恶性肿瘤的治疗，同时对其他与血管生成有关的疾病如糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎、银屑病、血管瘤、动脉粥样硬化等的预防与治疗，都具有一定的理论和现实意义。但是，到目前还没有治疗效果比较好的药物和方法产生，很多方法和药物副作用大，且愈后易复发等问题还有待解决，亟需寻找新的抗肿瘤药物和方法。近年来，中药抗肿瘤研究逐渐引起人们的关注，而且由于很多中药组分属于天然提取药物，具有副作用小等优点，如将对其抗肿瘤机制做深入研究，很多都有可能成为临床抗肿瘤的候选药物。中药木蝴蝶又名千层纸、玉蝴蝶等，作为一常用中药始载于《滇南本草》，具有几百年的药用历史，《中国药典》2005年版将其收录其中，现代医学研究表明，木蝴蝶具有镇痛、抗炎、抗菌、抗氧化、抑制病毒及肿瘤生长等多种药理作用。种子提取物中含有苯甲酸(benzoicacid)，白杨素(chrysin)，木蝴蝶苷(oroxin)A、B，黄芩甙元(baicalein)，特土甙(tetuin)，5-羟基-6，7二甲氧基黄酮(5-hydroxy-6，7-dimethoxyflavone)，木蝴蝶素(oroxylin)A，5，6-二羟基-7-甲氧基黄酮(5，6-dihydroxy-7-methoxyflavone)等多种中药组分，其中木蝴蝶苷A(OA)是黄酮类化合物，是木蝴蝶的专属性成分，可作为木蝴蝶药材质量控制的重要指标。下面是两种中药单体的结构式：现有资料中未见关于木蝴蝶苷A在制备抗肿瘤药物中的报道。

技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用。本发明研究结果表明木蝴蝶苷A有抑制肿瘤血管生成的作用，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖和生长，诱导肿瘤细胞呈衰老样死亡、周期阻滞和细胞凋亡，抑制肿瘤细胞粘附、迁移、侵袭和血管生成；木蝴蝶苷A对荷瘤小鼠肿瘤的生长具有很好的抑制作用。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供了木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用。本发明采用木蝴蝶苷A进行了抑制肿瘤生长和血管生成的体外和体内试验。体外试验包括细胞增殖实验、Giemsa染色实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验、细胞粘附实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、血管生成实验，体内试验采用肿瘤细胞移植瘤实验。结果表明木蝴蝶苷A有抑制肿瘤血管生成的作用，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖和生长，诱导肿瘤细胞呈衰老样死亡、周期阻滞和细胞凋亡，抑制肿瘤细胞粘附、迁移、侵袭和血管生成。在本发明提供的一些实施例中，木蝴蝶苷A抑制肿瘤血管生成。在本发明提供的一些实施例中，木蝴蝶苷A抑制肿瘤细胞的增殖和生长。在本发明提供的一些实施例中，木蝴蝶苷A诱导肿瘤细胞衰老样死亡、周期阻滞和细胞凋亡。在本发明提供的一些实施例中，木蝴蝶苷A抑制肿瘤细胞粘附、迁移、侵袭。在本发明提供的一些实施例中，癌症为乳腺癌、淋巴瘤、白血病、T淋巴细胞瘤、肿瘤干细胞、骨肉瘤、黑色素瘤、脑胶质瘤、肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、肾癌、骨髓瘤、卵巢癌或宫颈癌。本发明还提供了一种治疗癌症的药物，包括木蝴蝶苷A和药学上可接受的载体。在本发明提供的一些实施例中，木蝴蝶苷A在药物中的质量百分含量为0.1％～99.5％。作为优选，木蝴蝶苷A在药物中的质量百分含量为0.5％～95％。有效成分木蝴蝶苷A制备治疗癌症的药物用常规药用制剂的形式来使用。所述的常规药用制剂含作为活性成分的木蝴蝶苷A该活性成分在制剂与药学上可接受的载体如适宜于胃肠内给药的有机或无机的固体或液体赋形剂混合。在本发明提供的一些实施例中，药物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、悬浮剂、糖浆剂、乳剂。但本发明并不局限于此，本领域技术人员认可的剂型均在本发明的保护范围之内。在本发明提供的另一些实施例中，药物的剂型为注射剂。作为优选，药物的口服剂量不大于70mg/天。本发明的活性成分木蝴蝶苷A制成各种剂型的口服药物，成人口服，常用剂量一次25mg，1日3次，最大剂量的木蝴蝶苷A含量应为每天75mg，饭后服用，儿童用药酌情减量。在本发明提供的一些实施例中，治疗肿瘤的药物中药学上可接受的载体为药物制剂辅助物质、稳定剂、润湿剂、增溶剂和/或其它常用的添加剂，如乳糖、滑石粉、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉、果胶、吐温-80、聚乙烯醇等。但本发明并不局限于此，本领域技术人员认可的药学上可接受的载体均在本发明的保护范围之内。本发明提供了木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用。本发明采用木蝴蝶苷A进行了抑制肿瘤生长和血管生成的体外和体内试验。体外试验包括细胞增殖实验、Giemsa染色实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验、细胞粘附实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、血管生成实验，体内试验采用肿瘤细胞移植瘤实验。结果表明木蝴蝶苷A有抑制肿瘤血管生成的作用，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖和生长，诱导肿瘤细胞呈衰老样死亡、周期阻滞和细胞凋亡，抑制肿瘤细胞粘附、迁移、侵袭和血管生成。本发明进一步考察了木蝴蝶苷A对MCF-7荷瘤小鼠的疗效，结果显示木蝴蝶苷A对荷瘤小鼠肿瘤的生长具有很好的抑制作用。附图说明图1示本发明实施例1木蝴蝶苷A对人肿瘤细胞MCF-7细胞增殖的影响；图2示本发明实施例2木蝴蝶苷A对人乳腺癌细胞形态的影响(400×)；图3示本发明实施例7木蝴蝶苷A对体外肿瘤细胞MCF-7血管生成作用结果(40×)；图4示本发明实施例8木蝴蝶苷A对荷瘤小鼠体重的影响结果；图5示本发明实施例8木蝴蝶苷A对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用结果。具体实施方式本发明公开了木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本

技术实现要素：
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本发明提供的木蝴蝶苷A在制备治疗癌症药物中的应用中所用原料药或辅料均可由市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：实施例1木蝴蝶苷A抑制多种恶性肿瘤细胞增殖的体外实验(一)实验材料(1)肿瘤细胞株(34株)：人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞系BEL-7402、QGY-7703、HCC-8910、小鼠前肿瘤干细胞3B5C、PMKO-102-3#、p3B11、2C4G2、PMKO-891-5#、人慢性髓原白血病细胞K562、人胶质瘤细胞SHG44、人原髓细胞白血病细胞HL-60、人宫颈癌细胞Hela、人骨肉瘤细胞MG-63、U-2OS、人胃癌细胞N87、人胶质瘤细胞A172、人骨髓瘤细胞系LP-1、人黑色素瘤高转移细胞株A375、人单核细胞白血病细胞THP-1、人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)KP-N-NS、人结肠癌细胞系SW480、人Burkitt′s淋巴瘤细胞Raji、NAMALWA、人成巨核细胞白血病细胞Dami、人回盲肠癌细胞CCL-244、小鼠肿瘤内皮细胞3B11、人宫颈癌肠转移细胞Caski、人肺癌细胞系NCI-H292、人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat、人恶性胚胎横纹肌瘤细胞RD、人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞CCD-1095SK、人肾透明细胞癌皮肤转移细胞Caki-1、人盲肠腺癌细胞Hce-8693均来自本所实验室细胞库。细胞培养基RPMI1640和DMEM(高糖)为Hyclone公司产品。Alamarblue试剂为INVITROGEN公司产品。(2)受试药物：木蝴蝶苷A(从商业公司购买)用二甲基亚砜(DMSO)助溶，用培养基稀释成所需浓度。(二)实验方法细胞培养：细胞用含体积分数10％小牛血清及1％双抗(抗青霉素和抗链霉素)的RPMI1640或DMEM(高糖)培养液常规培养。每48-72h用0.25％胰酶消化，1:2～1:4扩瓶传代。(1)贴壁细胞用0.25％胰酶消化贴壁细胞，离心后计数，以合适的浓度接种于96孔板，37℃、5％CO2培养箱中培养24h，分别加入不同浓度的木蝴蝶苷A，另外以单纯的培养液和未经药物作用的细胞作为空白对照和阴性对照，每组设3个复孔，培养46h后，加入AlamarBlue试剂10ul/孔，继续培养2h，用微孔检测仪进行测定荧光下OD560nm/OD590nm，按以下公式计算平均抑制率：细胞抑制率(％)＝1-(加药孔RFU-空白对照RFU)/(对照组RFU-空白对照RFU)×100％。(2)悬浮细胞吸取悬浮细胞悬液，离心计数，以合适的浓度与不同浓度的木蝴蝶苷A混合后，接种于96孔板，分别以单纯的培养液和未经药物作用的细胞作为空白对照和阴性对照，每组设3个复孔，37℃、5％CO2培养箱中培养46h后，加入AlamarBlue试剂10ul/孔，继续培养2h，用微孔检测仪进行测定荧光下OD560nm/OD590nm，按上述公式计算平均抑制率。(三)实验结果表1木蝴蝶苷A对34种肿瘤细胞增殖的影响编号细胞株细胞株来源IC501MCF-7人乳腺癌细胞27.32BEL-7402人肝癌细胞系40.63QGY-7703人肝癌细胞系45.843B5C小鼠前肿瘤干细胞79.35K562人慢性髓原白血病细胞80.36SHG44人胶质瘤细胞84.07PMKO-102-3#小鼠前肿瘤干细胞86.78HL-60人原髓细胞白血病细胞87.59Hela人宫颈癌细胞89.310p3B11小鼠前肿瘤干细胞92.711MG-63人骨肉瘤细胞103.312PMKO-891-5#小鼠前肿瘤干细胞103.513N87人胃癌细胞108.0142C4G2小鼠前肿瘤干细胞111.015A172人胶质瘤细胞120.516LP-1人骨髓瘤细胞系121.717A375人黑色素瘤高转移细胞株122.718THP-1人单核细胞白血病细胞123.019KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)124.320SW480人结肠癌细胞系124.521Raji人Burkitt′s淋巴瘤细胞127.522Dami人成巨核细胞白血病细胞127.723CCL-244人回盲肠癌细胞129.3243B11小鼠肿瘤内皮细胞130.525Caski人宫颈癌肠转移细胞131.026NCI-H292人肺癌细胞系135.027U-2OS人骨肉瘤细胞151.528NAMALWA人Burkitt′s淋巴瘤细胞165.529Jurkat人T淋巴细胞白血病细胞165.530RD人恶性胚胎横纹肌瘤细胞171.531HCC-8910人肝癌细胞196.532CCD-1095SK人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞200.533Ca...