本发明涉及藻类培养基，具体涉及一种适用于锥囊藻生长的改良dy-iv培养基及配制方法和应用。
背景技术：
锥囊藻属隶属金藻门，是一个广泛分布于淡水水体、对贫营养型水体具有重要指示作用的类群。由于没有细胞壁包围，原生质极易被降解破坏，种类鉴定较为困难，分类系统复杂多变。目前关于锥囊藻的实验室培养还未有报道，对其研究仅限于野外采集样本之后，用鲁哥氏碘液固定进行形态学观察。
起初对锥囊藻的培养采用的是dy-iv培养基，dy-iv培养基配方为cacl2.2h2o0.02g/l，mgso4.7h2o0.074g/l，na2hpo40.0066g/l，nano30.02g/l，nasio3.9h2o0.015g/l，nh4no30.01g/l，kcl0.01g/l，mesbuffer0.25g/l，金属溶液1ml/l，维生素溶液1ml/l。
所述的金属溶液的组分及其含量：mncl20.2g/l，znso40.04g/l，namoo40.02g/l，cocl20.008g/l，na2edta.2h2o8g/l，fecl30.7g/l，h3bo30.8g/l。
所述的维生素溶液的组分及其含量：维生素b10.2g/l，维生素b70.0005g/l，维生素b120.0005g/l。
但是使用dy-iv培养基培养的藻细胞很难进行生长，不能实现对野外采集到的锥囊藻进行实验室人工培养。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种适用于锥囊藻生长的改良dy-iv培养基及配制方法和应用，实现对野外采集到的锥囊藻进行实验室人工培养。
为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
一种适用于锥囊藻生长的改良dy-iv培养基，其组分及其浓度：cacl2.2h2o0.018-0.022g/l，mgso4.7h2o0.072-0.076g/l，nano30.018-0.022g/l，nasio3.9h2o0.013-0.017g/l，nh4cl0.008-0.012g/l，kcl0.008-0.012g/l，na2hpo40.0064-0.0068g/l，mesbuffer0.248-0.252g/l，金属溶液1-1.2ml/l，维生素溶液0.5-0.7ml/l；
所述的金属溶液的组分及其含量：mncl20.18-0.2g/l，znso40.038-0.042g/l，namoo40.018-0.022g/l，cocl20.0078-0.0082g/l，na2edta.2h2o7.8-8.2g/l，fecl30.68-0.72g/l，h3bo30.78-0.82g/l；
所述的维生素溶液的组分及其含量：b10.18-0.22g/l，维生素b70.0008-0.0012g/l，维生素b120.0008-0.0012g/l。
一种适用于锥囊藻生长的改良dy-iv培养基的制备方法，包括如下步骤：
1)于灭菌的1l容器中加900ml蒸馏水，按照上述培养基组分及其浓度，将除了金属溶液、维生素以外的各组分加入上述容器中；
2)待所有无机盐组分加入后，加入蒸馏水至容器中液体总体积成为1l；
3)用封口膜封盖容器口，置于高温灭菌锅，120℃高温灭菌30min；
4)灭菌完成后，冷却至室温，加入上述组分浓度规定量的金属溶液和维生素溶液，金属溶液和维生素溶液需先使用无菌过滤头过滤；
5)培养基置于4℃冰箱存储。
一种锥囊藻的培养方法，包括如下步骤：
1)用浮游网在野外采集锥囊藻，放入干净的采集瓶中；
2)样品带回实验室后，在倒置显微镜下挑取锥囊藻于二十四孔板内；
3)将二十四孔板置于光照培养箱中培养，培养条件为13-15℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时；
4)待藻体发育到对数生长期时，将其转入装有上述改良dy-iv培养基的锥形瓶中进行后续培养，设置培养温度为13-15℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时。
与现有技术相比，本发明提供了一种适合锥囊藻生长的改良培养基及培养方法，弥补了锥囊藻实验室培养方面的空白。利用本发明改良dy-iv培养基可以将野外采集到的锥囊藻标本在实验室得到纯培养的单一藻种，并观察到良好的生长结果(见图1-8)。最终实现了对野外采集到的锥囊藻的实验室人工培养。
附图说明：
图1：山西宁武采集的锥囊藻藻体形态(显微镜40x物镜下)
图2：山西宁武锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜10x物镜下)
图3：山西宁武锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜20x物镜下)
图4：山西宁武锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜40x物镜下)
图5：山西榆社采集的锥囊藻藻体形态(显微镜40x物镜下)
图6：山西榆社锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜10x物镜下)
图7：山西榆社锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜20x物镜下)
图8：山西榆社锥囊藻于培养基中生长状态(显微镜40x物镜下)
图9：山西宁武锥囊在dy-iv培养基和改良dy-iv培养基中的生长曲线图
图10：山西榆社锥囊在dy-iv培养基和改良dy-iv培养基中的生长曲线图
具体实施方式
实施例1(与dy-iv培养基作对比)
对山西宁武琵琶海采集到的锥囊藻进行人工培养，分别培养在dy-iv培养基和改良dy-iv培养基中进行培养。
a.锥囊藻在dy-iv培养基的培养实验：
制备1ldy-iv培养基：
培养基组分配比：
cacl2.2h2o0.02g/l，mgso4.7h2o0.074g/l，nano30.02g/l，na2hpo40.0066g/l，nasio3.9h2o0.015g/l，nh4no30.01g/l，kcl0.01g/l，mesbuffer0.25g/l，金属溶液1ml/l，维生素溶液1ml/l。
所述的金属溶液的组分及其含量：mncl20.2g/l，znso40.04g/l，namoo40.02g/l，cocl20.008g/l，na2edta.2h2o8g/l，fecl30.7g/l，h3bo30.8g/l。
所述的维生素溶液的组分及其含量：维生素b10.2g/l，维生素b70.0005g/l，维生素b120.0005g/l。
培养基配制方法：
1)于灭菌的1l容器中加900ml蒸馏水，按照上述培养基组分及其浓度计算各组分加入量，将除了金属溶液、维生素以外的各组分加入上述容器中；
2)待所有无机盐组分加入后，加入蒸馏水至容器中液体总体积成为1l；
3)用封口膜封盖容器口，置于高温灭菌锅，120℃高温灭菌30min；
4)灭菌完成后，冷却至室温，加入上述组分浓度规定量的金属溶液和维生素溶液，金属溶液和维生素溶液需先使用无菌过滤头过滤；
5)培养基置于4℃冰箱存储。
锥囊藻的培养方法如下：
1)用浮游网在野外采集锥囊藻，放入干净的采集瓶中；
2)样品带回实验室后，在倒置显微镜下挑取锥囊藻于二十四孔板内；
3)将二十四孔板置于光照培养箱中培养，培养条件为14℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时；
4)待藻体发育到对数生长期时，将其转入装有如权利要求2所制备的培养基的锥形瓶中进行后续培养，设置培养温度为14℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时。
b.锥囊藻在改良dy-iv培养基的培养实验：
制备1l改良dy-iv培养基：
培养基组分配比：
cacl2.2h2o0.021g/l，mgso4.7h2o0.073g/l，nano30.021g/l，na2hpo40.0067g/l，nasio3.9h2o0.016g/l，nh4cl0.009g/l，kcl0.011g/l，mesbuffer0.251g/l，金属溶液1ml/l，维生素溶液0.5ml/l。
所述的金属溶液的组分及其含量：mncl20.19g/l，znso40.039g/l，namoo40.019g/l，cocl20.0080g/l，na2edta.2h2o8.1g/l，fecl30.69g/l，h3bo30.80g/l。
所述的维生素溶液的组分及其含量：维生素b10.21g/l，维生素b70.0011g/l，维生素b120.0012g/l。
培养基配制方法：
1)于灭菌的1l容器中加900ml蒸馏水，按照上述培养基组分及其浓度计算各组分加入量，将除了金属溶液、维生素以外的各组分加入上述容器中；
2)待所有无机盐组分加入后，加入蒸馏水至容器中液体总体积成为1l；
3)用封口膜封盖容器口，置于高温灭菌锅，120℃高温灭菌30min；
4)灭菌完成后，冷却至室温，加入上述组分浓度规定量的金属溶液和维生素溶液，金属溶液和维生素溶液需先使用无菌过滤头过滤；
5)培养基置于4℃冰箱存储。
锥囊藻的培养方法如下：
1)用浮游网在野外采集锥囊藻，放入干净的采集瓶中；
2)样品带回实验室后，在倒置显微镜下挑取锥囊藻于二十四孔板内；
3)将二十四孔板置于光照培养箱中培养，培养条件为13-15℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时；
4)待藻体发育到对数生长期时，将其转入装有如权利要求2所制备的培养基的锥形瓶中进行后续培养，设置培养温度为13-15℃，光照强度为1000lx，光暗周期各为12小时。
培养结果如图1、2、3和4所示。
实施例2(与dy-iv培养基作对比)
对山西榆社云竹湖采集到的锥囊藻进行人工培养，培养基配制和培养方法同实施例1，具体实施结果如图5、6、7和8所示。
将实施例1和实施例2中的锥囊藻细胞数进行汇总，结果如图9和图10所示：生长于dy-iv培养基中的锥囊藻细胞没有增殖，而生长于本发明改良dy-iv培养基中的宁武锥囊藻细胞和榆社锥囊藻细胞生长速率快，藻细胞可持续生长时间长，由此说明，本发明改良dy-iv培养基最适合锥囊藻细胞生长。