本发明属于药物化学领域，具体而言，涉及一种盐酸吉西他滨氧化杂质的制备方法。
背景技术：
：盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)，化学名：2-脱氧-2，2-盐酸二氟脱氧胞苷(β-异构体)，是美国礼来公司(elilillyandcompany)于1983年开发的一种新型二氟核苷类抗肿瘤药物，该药于1995年在南非、瑞典、荷兰、澳大利亚等国家获准上市，1996年在美国fda获批，商品名为健择(gemzar)，临床用于非小细胞肺癌和胰腺癌的一线治疗，是目前治疗晚期胰腺癌的金标准。2000年底被批准用于治疗膀胱癌。盐酸吉西他滨目前已经在100多个国家得到广泛临床应用。在欧美及亚洲地区，已被批准用于转移性乳腺癌的一线治疗、铂类治疗后复发的卵巢癌的治疗。药物的氧化杂质是影响药品质量的主要因素之一，对原料药及药物制剂的制备、稳定性及生物利用度等方面有着不可忽视的影响。盐酸吉西他滨作为一种新型二氟核苷类抗肿瘤药物，在治疗晚期胰腺癌以及减少不良反应方面都具有明显的优势，因此，对其氧化杂质的研究具有重要意义。通过对盐酸吉西他滨氧化杂质的研究，可以定性、定量的分析药品中杂质的水平，从而可以提高盐酸吉西他滨的质量标准，为病人的安全用药提供了保障。经强制降解试验、影响因素试验和稳定性留样试验确认，盐酸吉西他滨在氧化和长时间贮存放置过程中可能会生成如下氧化杂质：技术实现要素：为了提高盐酸吉西他滨的质量，降低临床用药的风险，本发明提供了一种新的制备盐酸吉西他滨氧化杂质的化学方法，该方法所用化学试剂简单易得，操作简便，收率高，制得的杂质产物能够作为对照品，用于控制、检测盐酸吉西他滨的纯度。本发明的目的是提供一种新的盐酸吉西他滨氧化杂质的制备方法。在本发明的实施方案中，本发明提供了一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，包括如下步骤：以盐酸吉西他滨为起始原料，依次经溴代反应和水解反应，从而得到4-氨基-1-((2r,4r,5r)-3,3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-5-羟基嘧啶-2(1h)-酮，即氧化杂质(1)，具体反应式如下:在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，所述溴代反应中采用了溴代试剂，所述溴代试剂为液溴。在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，所述水解反应采用了水解试剂，所述水解试剂可以选自n,n-二异丙基乙胺(dipea)、三甲基吡啶、或氢氧化钠，优选dipea。在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，所述的溴代反应中起始原料与溴代试剂的摩尔比为1:0.1～10。在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，起始原料(即盐酸吉西他滨)与所述的水解反应中的水解试剂的摩尔比为1:0.1～20。在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，所述溴代反应的反应温度为0～20℃，反应时间为0.5～3h。在本发明的实施方案中，本发明提供的一种盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法，其中，所述水解反应的反应温度为20～90℃，反应时间为0.5～50h。与现有技术相比，本发明提供的盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的制备方法具有所用试剂简单易得，合成路线简短，操作简单，收率较高，所得杂质产物纯度较高(hplc纯度99％以上)，可应用于对照品研究等特点。具体实施方式通过下述实施例将有助于理解本发明，但不限制本发明的内容。实施例1取盐酸吉西他滨(10g，0.033mol)，加280ml水搅拌溶解，降温至0～5℃，加液溴(9ml，0.176mol)，待体系颜色不再消失，保温搅拌1h，向体系中加入120ml正己烷洗涤除去过量的液溴，收集水相。向水相中加入dipea(100ml，0.574mol)，加入1.6g四正丁基溴化铵，升温至55～60℃搅拌反应1h，hplc监控反应进程，反应完成后降至室温，分液，保留水相，水相用100ml二氯甲烷进行洗涤，将水相浓缩至干，并用70ml甲苯带水，浓缩完毕后得红棕色油状物，多次用水打浆后过滤，滤饼用甲醇溶解，过滤，旋干得深灰色固体(6.58g，70.8％)，即为盐酸吉西他滨氧化杂质(1)。产物表征数据见实施例5。实施例2取盐酸吉西他滨(10g，0.033mol)，加280ml纯化水搅拌溶解，降温至0～5℃，加液溴(9ml，0.176mol)，待体系颜色不再消失，保温搅拌1h，向体系中加入120ml正己烷洗涤除去过量的液溴，收集水相。向水相中加入三甲基吡啶(45ml，0.34mol)，加入1.6g四正丁基溴化铵，室温下搅拌反应48h，hplc监控反应进程，反应完成后降至室温，分液，保留水相，水相用100ml二氯甲烷进行洗涤，将水相浓缩至干，并用70ml甲苯带水，浓缩完毕后得红棕色油状物，多次用水打浆后过滤，滤饼用甲醇溶解，过滤，旋干得深灰色固体(2.01g，21.6％)，即为盐酸吉西他滨氧化杂质(1)。产物表征数据见实施例5。实施例3取盐酸吉西他滨(10g，0.033mol)，加280ml纯化水搅拌溶解，降温至0～5℃，加液溴(9ml，0.176mol)，待体系颜色不再消失，保温搅拌1h，向体系中加入120ml正己烷洗涤除去过量的液溴，收集水相。向水相中加入氢氧化钠(3.96g，0.099mol)，加入1.6g四正丁基溴化铵，升温至85～90℃搅拌反应18h，hplc监控反应进程，反应完成后降至室温，分液，保留水相，水相用100ml二氯甲烷进行洗涤，将水相浓缩至干，并用70ml甲苯带水，浓缩完毕后得红棕色油状物，多次用水打浆后过滤，滤饼用甲醇溶解，过滤，旋干得深灰色固体(1.31g，14.1％)，即为盐酸吉西他滨氧化杂质(1)。产物表征数据见实施例5。实施例4有关盐酸吉西他滨氧化杂质(1)的hplc纯度测定方法：取实施例1制备的盐酸吉西他滨氧化杂质(1)，加水溶解并稀释制成每1ml中约含盐酸吉西他滨氧化杂质(1)2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。采用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.14mol/l磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠13.8g与磷酸2.5ml，加水溶解并稀释至1000ml，ph值应为2.5±0.1)-甲醇(0.14mol/l磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为97：3)为流动相a，以0.14mol/l磷酸盐缓冲盐-甲醇(0.14mol/l磷酸盐缓冲液与甲醇的体积比为50:50)为流动相b，按下表进行梯度洗脱，控制流速为1.0ml/min，检测波长为275nm，柱温为25℃，精密量取20μl供试品溶液注入液相色谱仪(agilent1260高效液相色谱仪)，记录色谱图和结果。梯度洗脱表该色谱图的结果如下：峰编号保留时间类型峰宽(min)峰面积mau·s峰高(mau)峰面积％110.613bb0.22811918.05322129.53123100.0000总计1918.05322129.53123实施例5盐酸吉西他滨氧化杂质(1)结构确证数据分别测定实施例1制备的产物的紫外吸收光谱、红外吸收光谱、质谱和核磁共振谱,另实施例2和实施例3结构确证数据同实施例1。紫外吸收光谱(uv)：shimadzuuv-2500pc紫外光谱仪，溶剂为甲醇，波长为200～500nm。紫外吸收光谱(uv)数据溶剂λmax(nm)ελmax(nm)ε甲醇294.56675220.01.23*104在甲醇溶液中，λmax294.5nm、220.0nm为4-氨基-5-羟-2(1h)-酮片段共轭体系的π→π*跃迁特征吸收。红外吸收光谱(ir)：brukertensor27型红外光谱仪，采用kbr压片法测定。红外吸收光谱(ir)数据3347cm-1:o-h伸缩振动；1405cm-1:o-h弯曲振动；1203、1130、1071、837cm-1：c-o伸缩振动。证明本品结构中存在伯醇、仲醇和酚(ar-oh)结构；3347cm-1:n-h伸缩振动；1590cm-1：n-h弯曲振动；1359cm-1:c-n伸缩振动。证明本品结构中存在伯胺(ar-nh2)结构；2935cm-1:-c-h伸缩振动。证明本品结构中含饱和c-h结构；1359、1146、779cm-1:c-f伸缩振动。证明本品结构中含-chf2基团；1672、1590、1509、1405cm-1:c＝o、c＝c、c＝n伸缩振动。证明本品结构中含取代嘧啶环结构；1291、1071、875cm-1:c-o-c伸缩振动。证明本品结构中含环醚和二烷醚(ror’)结构。由红外光谱可知，本品结构中有伯醇、仲醇、酚(ar-oh)、伯胺(ar-nh2)、环醚、二烷醚(ror’)、取代嘧啶环、饱和c-h和-chf2基团等。上述红外光谱数据与盐酸吉西他滨氧化杂质(1)结构相符。质谱(watersq-tofmicro：质谱仪，溶剂甲醇，esi(+)，20v；esi(-)，20v)。由此可知，盐酸吉西他滨氧化杂质的[m+h]+和[m-h]-峰的质荷比分别为280和278，本品的分子量为279，与盐酸吉西他滨氧化杂质的分子量相符；本品的分子量为奇数，分子中应含奇数个n原子，这与本品含3个n原子相符。核磁共振谱：(nmr)brukerav-500型核磁共振仪，溶剂dmso-d6，内标tms，温度为303k。核磁氢谱(1h-nmr)数据化学位移(ppm)质子数峰形归属备注10～3nhbr多个活泼质子7.131hsh66.151hth7j＝8.4hz4.131hmh9，h10、h113.782hm3.621hddh11j＝3.6,12.5hz除去δ10～3的5个活泼质子外，1h-nmr给出5组峰，其积分比(由低场至高场)为1∶1∶1∶2∶1，共6个质子。由化学位移值和峰形可知：δ7.13(1h,s)，为烯质子h6；δ6.15(1h,t)、4.13(1h,m)、3.78(2h,m)和3.62(1h,dd)，为3,3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃上的5个非活泼质子，由其化学位移值可知，δ6.15(1h,t)为h7；δ3.62(1h,dd)为其中1个h11；δ4.13(1h,m)和3.78(2h,m)则为h9、h10和另一个h11。核磁碳谱(13c-nmr)数据由碳谱可知，碳谱中除溶剂峰外有14个峰，本品分子中含9个c，这是由两个氟原子对c的偶合裂分引起的。由峰形、峰强度和化学位移值可知：δ121.2、127.2、153.7和161.4：4个不饱和c，结合吉西他滨的化学位移值可知，它们分别为c5、c6、c2和c4；δ69.1(t)、83.6(t)和123.2(t)：3个受2个氟原子裂分的饱和c，由其偶合常数和化学位移值可知，它们分别为c9、c7和c8；δ59.0和80.3：2个不受氟原子裂分的饱和c，由其化学位移值可知，它们分别为c10和c11。由nmr谱可知，本品的nmr数据与盐酸吉西他滨氧化杂质(1)结构一致，即本品为盐酸吉西他滨氧化杂质(1)。综上所述，本品为4-氨基-1-((2r,4r,5r)-3,3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-5-羟基嘧啶-2(1h)-酮，即为盐酸吉西他滨氧化杂质(1)，结构式如下，结构确证相关图谱(质谱、红外、紫外、核磁)。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改、等同的替换和改进等，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改、等同的替换和改进等，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页12