本申请涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种trpml1特异性激动剂，还涉及该特异性激动剂的用途以及肿瘤治疗药物。
背景技术
随着人类寿命的延长，癌症跃升为近年的主要死亡原因。国家癌症中心发布的《2018年全国最新癌症报告》显示，2014年全部恶性肿瘤新发病例数380.4万例，平均每天超过1万人被确诊为癌症，每分钟有7个人被确诊为癌症。全国恶性肿瘤发病第一位的是肺癌，其次为胃癌、结直肠癌、肝癌和乳腺癌。癌症已成为我国人口死亡的首要原因。
关于癌症的治疗，科学家们展开了大量的研究工作。新的抗癌药品不断发现。目前已有20余种肿瘤的治愈率达到30％以上。而药物作用机理的亚细胞水平及分子水平的研究，大大开拓了抗癌药物在应用方面的研究。细胞动力学、药物作用动力学及免疫学方面研究的快速发展，也使得药物的筛选、剂量的调整、给药途径的确定日趋完善。现已联合用药、大剂量间歇用药、辅助化疗以及配合中药的治疗，使恶性肿瘤治疗取得很好的疗效。当今，对恶性肿瘤治疗以手术、放射治疗、化学药物治疗、中医中药的治疗及免疫治疗等手段为主。对抗癌药物的选择、毒性作用及抗药性等方面起着影响其疗效，因为抗癌药物在杀伤肿瘤细胞的同时，也对正常组织的细胞有杀伤，尤其是增殖旺盛的骨髓造血细胞及胃肠道细胞，这样一来限制抗癌药的剂量，并且使患者免疫功能降低，甚至患者难以忍受胃肠反应，而被迫中断治疗，使治疗失败。抗癌药物能杀伤癌细胞，但由于其细胞毒性，所以要找到一种既能治疗癌症同时又不对人体造成伤害或者伤害较小的药物一直是科学家们奋斗的目标。
trpml1是一种溶酶体膜上的阳离子释放通道。近年的研究发现，trpml1通过参与各种细胞活动及信号传导包括细胞内吞，外吐，及细胞膜修复来行使溶酶体的功能。ml-sa1、ml-sa3等是trpml1通道的特异性小分子激动剂。属于小分子化合物的激动剂可以通透细胞膜进入细胞内，特异性激活溶酶体上的trpml1通道，trpml1通道开放后，可以释放溶酶体内的钙离子、铁离子及锌离子等阳离子进入细胞浆。通过实验发现利用某些小分子激动剂特异性激活trpml1通道后可以抑制自噬活动的进行。肿瘤细胞为了向自身提供过增长的能量需求，自噬信号被激活从而不断降解自身蛋白来满足肿瘤细胞的恶性增殖需求，所以很多种类的肿瘤细胞的基础自噬水平比正常细胞显著增高，实验发现发现利用该类激动剂阻断自噬后，可以杀死人源肿瘤细胞，但是对于人体正常细胞并无显著致死作用。
经过大量的筛选，我们发现trpml1离子通道的特异性小分子激动剂可以作为自噬抑制剂使用，尤其是对于肿瘤细胞的自噬活性具有明显的抑制作用，是潜在的抗肿瘤药物。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明通过无数次对trpml1离子通道的多种特异性小分子激动剂进行反复筛选，获得了一种可以抑制细胞自噬活动的激动剂，并验证了其通过抑制肿瘤细胞的自噬活性，具有限制肿瘤细胞生长的功能。
为了实现上述目的，根据本申请的第一个方面，提供了一种trpml1离子通道的特异性激动剂mk6-83。
mk6-83为小分子化合物，其化学结构式如下所示：
为了实现上述目的，根据本申请的第二个方面，提供了mk6-83作为自噬抑制剂的应用或其在制备自噬抑制剂中应用。
为了实现上述目的，根据本申请的第三个方面，提供了mk6-83在制备肿瘤治疗药物中的应用。
进一步的，所述肿瘤包括胰腺癌、乳腺癌和胃癌。
为了实现上述目的，根据本申请的第四个方面，提供了一种用于治疗肿瘤的药物组合物。该药物组合物的活性成分为mk6-83。
进一步的，所述肿瘤包括胰腺癌、乳腺癌和胃癌。
进一步的，所述物组合物制成口服液、颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、滴丸剂、注射剂、纳米制剂、靶向制剂以及其他医学上可接受的剂型。
本申请提供的trpml1特异性小分子激动剂mk6-83通过抑制自噬活动，在对各种正常组织细胞无明显毒性的作用下，对包括胰腺癌、乳腺癌及胃癌在多种肿瘤细胞系有强烈的致死能力。而且mk6-83对在小鼠上移植的乳腺癌肿块生长有明显的抑制作用，并且显著地延长了成瘤小鼠的寿命。解决了传统技术中因为抗癌药物以及癌症治疗方式在杀伤肿瘤细胞的同时，也对正常组织的细胞有杀伤的技术问题。
附图说明
构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，使得本申请的其它特征、目的和优点变得更明显。本申请的示意性实施例附图及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1显示了蛋白免疫印迹的方法检测的hela细胞中，mk6-83、baf-a1及二者联用加药后1小时，自噬标记蛋白lc3的两种形式的转化结果，其中，附图1中的相关内容翻译或解释如下：lc3代表微管相关蛋白1轻链3，normalizedlc3ii代表归一化的lc3ii值，tubulin代表微管蛋白，ctl代表空白对照组，starvation代表饥饿处理组，baf-a1代表巴弗洛霉素a1；
图2显示了蛋白免疫印迹的方法检测的hela细胞中，mk6-83、baf-a1及二者联用加药后12小时，自噬标记蛋白lc3的两种形式的转化结果，其中，附图2中的相关内容翻译或解释如下：lc3代表微管相关蛋白1轻链3，normalizedlc3ii代表归一化的lc3ii值，tubulin代表微管蛋白，ctl代表空白对照组，baf-a1代表巴弗洛霉素a1；
图3显示了蛋白免疫印迹的方法检测的hela细胞中，mk6-83、cq、rap及mk6-83与cq联用加药后12小时，自噬标记蛋白lc3的两种形式的转化结果及p62蛋白的水平结果，其中，附图3中的相关内容翻译或解释如下：lc3代表微管相关蛋白1轻链3，normalizedlc3ii代表归一化的lc3ii值，tubulin代表微管蛋白，gapdh代表gapdh内参蛋白，p62代表自噬选择性底物p62蛋白，p62/gapdh代表gapdh表达水平的归一化值，ctl代表空白对照组，starvation代表饥饿处理组，cq代表氯喹，rap代表雷帕霉素；
图4显示了mk6-83(5μm)处理过的patu8988t细胞台盼蓝染色结果，其中，附图4中的相关内容翻译或解释如下：control代表对照组；
图5显示了台盼蓝实验后的胰腺导管上皮细胞系hpde6c7及胰腺癌细胞系patu8988t活性对照及不同浓度mk6-83处理下的差异，其中，附图5中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中ctl代表空白对照组，纵坐标cellviability代表细胞活性；
图6显示了乳腺癌细胞系mcf-7的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的差异，其中，附图6中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中ctl代表空白对照组，纵坐标cellviability代表细胞活性；
图7显示了正常乳腺导管上皮细胞系mcf10a的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的差异，其中，附图7中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中ctl代表空白对照组，纵坐标cellviability代表细胞活性；
图8显示了胃癌细胞系sgc-7901的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的差异，其中，附图8中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中ctl代表空白对照组，纵坐标cellviability代表细胞活性；
图9显示了正常胃黏膜上皮细胞系ges-1的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的差异，其中，附图9中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中ctl代表空白对照组，纵坐标cellviability代表细胞活性；
图10显示了pbs对照组与mk6-83(5μm)注射组的小鼠生存曲线，其中，附图10中的相关内容翻译或解释如下：横坐标daysafterinjection代表注射后天数，纵坐标survival代表存活率；
图11显示了pbs对照组与mk6-83(5μm)注射组的肿瘤体积，其中，附图11中的相关内容翻译或解释如下：横坐标中pbs代表磷酸缓冲盐溶液，纵坐标relativetumorvolume(fold)代表相对肿瘤体积(倍)。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“包括”以及他的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列部分的整体，不必限于清楚地列出的那些部分，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些整体固有的其它部分。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
需要说明的是，本申请实施例中的未具体列明的具体操作均适用于本领域内的常规操作或常规实验手段，应当理解为本领域技术人员依据现有技术可以合理获知。
在无特殊说明的情况下，本申请中的术语可以做以下解释，或者本领域技术人员根据本领域内的公知常识做合理的扩大或限缩解释，凡是本领域人员可以根据本申请的申请日之前的现有技术内容合理获知均可。
自噬：自噬是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，并与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹的内容物的过程，藉此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。
western-blot检测法：蛋白免疫印迹法，是应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法，并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法，是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
ep管：微型离心管，实验室耗材，是一种小型的离心管，与微型离心机配套使用，用于微量试剂的分离。
ddh2o：doubledistilledwater的缩写，即双蒸水，是将经过一次蒸馏后的水再次蒸馏所得到的水。
bca反应工作液：bca是bicinchoninicacid(二奎林甲酸蛋白)的缩写，bca法是一种广为使用的蛋白定量法，其中用到的bca反应工作液是试剂a(bca碱性溶液)和试剂b(硫酸铜溶液)的混合液，试剂a与试剂b的比例为50:1。
loadingbuffer：western-blot检测法中使用的上样缓冲液，用于显示电泳的进程以及使样品沉到点样孔中而不漂浮起来。
acr-bis：丙烯酰胺:亚甲基双丙烯酰胺溶液。
tris-hcl缓冲液：三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液。
sds缓冲液：十二烷基硫酸钠缓冲液。
temed：四甲基乙二胺，用于配制sds-page胶。
marker：蛋白标记，预染或非预染各种分子量的蛋白，用于标示电泳中蛋白的大小和示踪。
pvdf膜：聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidenefluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。
tbst：含有tris-hcl，nacl和tween20，是蛋白免疫印迹法中常用的一种缓冲液。
hela细胞：海拉细胞，是一种人工培养、具有无限增殖能力的细胞，在医学界被广泛应用于肿瘤研究、生物实验或者细胞培养。
台盼蓝实验法：是利用台盼蓝只能将死细胞染成蓝色而活细胞不能被染上的方法检测细胞存活率的一种快速简便的方法。
下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。
实施例1：mk6-83抑制自噬活性的检测
1.实验分组说明如下
空白对照组：正常培养基+10％胎牛血清
饥饿处理组：正常培养基(不含胎牛血清)
试验组1：bafilomycina1处理
试验组2：1μmmk6-83处理
试验组3：3μmmk6-83处理
试验组4：5μmmk6-83处理
试验组5：1μmmk6-83与bafilomycina1联合使用处理
试验组6：5μmmk6-83与bafilomycina1联合使用处理
试验组7：10μmcq处理
试验组8：5μmmk6-83与cq联合使用处理
试验组9：50μmrap处理
2.实验方法
采用western-blot检测法(蛋白质免疫印迹方法)对各组细胞进行后续的处理和检测，具体方法为：
a、蛋白质提取及浓度测定
(1)细胞：培养细胞的六孔板置于冰上，吸掉培养基，每孔加入100μl细胞裂解液，冰上静置3-5min，用细胞刮将细胞刮下，收集细胞裂解液于1.5ml离心管中，在混旋仪上振荡20s，冰上静置30min。
(3)将静置后的ep管置于低温离心机内，4℃离心(15000rpm×18min)。
(4)轻轻吸取上清于另一标好的ep管内，即得到总蛋白溶液。
(5)检测蛋白浓度：各样本取5μl蛋白溶液加入20μlddh2o稀释5倍，取10μl于96孔板中，每个样品做2个复孔。
(6)在96孔板的最前一列中加入蛋白标准品a-h，浓度由高到低。
(7)避光条件下配制bca反应工作液(a：b＝50：1)混匀，每孔加入100μl工作液，轻轻震荡混匀，用锡纸包裹避光37℃温箱内孵育30min。
(8)酶标仪检测562nm波长下各孔光密度(od)值，及蛋白样品的浓度。
(9)未使用蛋白分装后于–80℃保存。
b、蛋白变性
根据所需的蛋白量及实验上样次数计算加入的蛋白液体积。以每孔30μg总蛋白需上样4次以便检测不同的试验指标进行电泳为例，计算所需蛋白溶液体积(μl)＝(30μg蛋白/蛋白浓度)×5，再补ddh2o至15μl×5＝75μl，再加入3μl×5＝15μl的6×loadingbuffer(6×loadingbuffer:β-巯基乙醇＝9:1)，封好口，沸水中煮5min，4℃保存。
c、sds-page凝胶电泳
(1)制备10％的聚丙烯酰胺分离胶(2块胶量)：取配胶专用瓶，分别加入以下试剂，注意混匀：ddh2o4ml；30％acr-bis3.3ml；1.5mtris-hcl缓冲液(ph8.8)2.5ml；10％sds缓冲液0.1ml；10％过硫酸胺(ap)0.1ml，temed0.004ml，混匀，用1ml枪吸取分离胶注入电泳槽的玻璃平板夹层中，注意不要形成气泡，加入胶量约2/3小玻璃板高度即可，再缓缓加入约1ml异丙醇液封压线，室温聚合30min左右。
(2)制备5％聚丙烯酰胺浓缩胶(2块胶量)：取配胶专用瓶，分别加入以下试剂，注意混匀：ddh2o2.7ml；30％acr-bis0.67ml；1.0mtris-hcl缓冲液(ph6.8)0.5ml；10％sds缓冲液0.04ml；10％过硫酸胺0.04ml；temed0.004ml，混匀。
(3)将凝好的分离胶顶部的异丙醇轻轻倒去，用滤纸吸干残存液体，将浓缩胶注入夹层顶部，插入梳子，室温聚合30min。
(4)胶凝固后，将凝胶板固定于电泳装置的上缓冲液室，加入电泳液，拔出梳子，用微量进样器吸取18μl样品溶液加至加样孔，在第一个样孔加入marker，最后一个样孔加入1×loadingbuffer，放入以倒好1×tris-甘氨酸电泳缓冲液的电泳装置中。
(5)接通电源，浓缩胶电压为90v，电泳约30min，分离胶电压为120v，电泳直至溴酚兰抵达分离胶底部，原则上应根据目的蛋白分子量的大小，调节电压的大小和分离胶的时间。
(6)关闭电源，取下凝胶，根据marker切取包含目的蛋白的胶，供下一步的转膜用。
d、转膜(全湿法)
(1)根据裁剪的目的胶的大小剪取适当大小的pvdf膜，并在膜上剪角做标记，置于甲醇中浸湿1-3min，再转移到1×转膜缓冲液中。
(2)按负极侧-多孔滤棉-厚滤纸-胶-pvdf膜-厚滤纸-多孔滤棉-正极侧的顺序装好转膜装置，然后置入bio-rad电泳仪内，倒入1×转膜液，冰浴转膜，根据目的蛋白的分子量确定转膜时间，一般多用恒流350ma，转移2h，或400ma，转移1.5h。
(3)转膜结束后，将pvdf膜剪去一角以标记膜的正反面，使marker在左侧并且由下到上为增大顺序，剪角在左上，用1×tbst溶液漂洗3次×10min。
e、免疫反应
(1)将漂洗后的转印膜放入5％脱脂奶粉封闭液中室温封闭2h，并在摇床上缓慢摇动。
(2)将一抗用5％脱脂奶粉封闭液稀释至适当浓度，在膜上覆盖适量的抗体，4℃孵育过夜。
(3)用1×tbst洗3次×15min，在摇床上摇动。
(4)5％脱脂奶粉封闭液稀释二抗至适当浓度，在膜上覆盖适量的抗体，室温湿盒孵育1-2h。
(5)用1×tbst洗3次×15min，在摇床上摇动。
(6)将ecl中的a和b两种试剂等体积混合，均匀加到膜上(避光)，用化学发光凝胶图像系统拍照。
3.实验结果
试验结果参见图1-图3。
本实验采用蛋白免疫印迹的方法检测了hela细胞中，mk6-83(1μm、3μm和5μm)加药前后自噬标记蛋白lc3的两种形式的转化。当lc3i转化成lc3ii的水平增加时，说明自噬水平受到调控。如图1和图2所示，我们看到从一个小时开始，mk6-83加药后lc3ii的转化明显增加，揭示mk6-83对自噬有迅速的调控作用。而且当联合mk6-83与bafilomycina1(baf-a1；一种溶酶体抑制剂)用药后，lc3ii的转化没有进一步增加，提示mk6-83抑制了自噬活动。
如图3所示，采用另一种溶酶体抑制剂氯喹(cq)联合mk6-83使用(试验组8)，发现对于lc3ii的转化作用有没有进一步增加，揭示了mk6-83对于自噬的抑制作用。并且发现雷帕霉素(rapamycin)处理组(试验组9)及饥饿处理组具有减少p62蛋白水平的作用，相反的，mk6-83处理组增加了p62蛋白的水平，进一步验证了mk6-83抑制自噬活动。
4.结论
trpml1特异性小分子激动剂mk6-83可以抑制hela细胞自噬活动的进行，可以作为自噬抑制剂使用。
实施例2：mk6-83对人胰腺癌细胞patu8988t致死能力的测试
1.试验方法
采用台盼蓝实验法对细胞进行检测，具体为将对照组(control)细胞和加药组细胞用胰酶消化后，和固定体积的台盼蓝试剂混匀。再用移液器吸取10μl的混匀液加入白细胞计数器，放置到显微镜下进行计数。染有台盼蓝的细胞计为死细胞，反之为活细胞。最终每组活细胞与总细胞数的比率计为细胞活性。
2.试验结果
图4为mk6-83(5μm)处理过的patu8988t细胞台盼蓝染色结果图(三幅图分别为对照组、加药组24h后的图像和加药组72h后的图像)；图4表明，经5μmmk6-83处理过的patu8988t细胞的死亡率与对照组相比都明显增加，说明mk6-83对patu8988t有致死效果。箭头标明的是被台盼蓝染色的死细胞。
图5为台盼蓝实验后的胰腺导管上皮细胞系hpde6c7及胰腺癌细胞系patu8988t细胞活性对照及不同浓度mk6-83处理下的差异图；柱状图显示在正常胰腺导管上皮细胞系hpde6c7细胞中，加药组与对照组的细胞活性并没有显著差异(p>0.05)；与此相比，在胰腺癌patu8988t细胞中，mk6-83显著降低了细胞活性，并呈时间和计量依存趋势。
3.结论
trpml1特异性小分子激动剂mk6-83对胰腺癌细胞patu8988t有致死能力，但对于正常胰腺导管上皮细胞hpde6c7无杀伤力。
实施例3：mk6-83对人乳腺癌细胞mcf-7致死能力的测试
1.试验方法
采用台盼蓝实验法对细胞进行检测，具体为将对照组(control)细胞和加药组细胞用胰酶消化后，和固定体积的台盼蓝试剂混匀。再用移液器吸取10μl的混匀液加入白细胞计数器，放置到显微镜下进行计数。染有台盼蓝的细胞计为死细胞，反之为活细胞。最终每组活细胞与总细胞数的比率计为细胞活性。
2.试验结果
图6为乳腺癌细胞系mcf-7的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的结果图(三个数据柱分别对应空白对照组ctl、1μmmk6-83加药组和5μmmk6-83加药组)；图7为正常乳腺导管上皮细胞系mcf10a的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的结果图(三个数据柱分别对应空白对照组ctl、1μmmk6-83加药组和5μmmk6-83加药组)；
图7表明，正常乳腺导管上皮细胞系mcf10a细胞中，加药组与对照组的细胞活性并没有显著差异(p>0.05)；图6表明，在乳腺癌mcf-7细胞中，48小时的mk6-83处理显著降低了细胞活性，并呈计量依存趋势。
3.结论
trpml1特异性小分子激动剂mk6-83对乳腺癌细胞mcf-7有致死能力，但对于正常乳腺导管上皮细胞mcf10a无杀伤力。
实施例4：mk6-83对人胃腺癌细胞sgc-7901致死能力的测试
1.试验方法
采用台盼蓝实验法对细胞进行检测，具体为将对照组(control)细胞和加药组细胞用胰酶消化后，和固定体积的台盼蓝试剂混匀。再用移液器吸取10μl的混匀液加入白细胞计数器，放置到显微镜下进行计数。染有台盼蓝的细胞计为死细胞，反之为活细胞。最终每组活细胞与总细胞数的比率计为细胞活性。
2.试验结果
图8为胃癌细胞系sgc-7901的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的结果图(三个数据柱分别对应空白对照组ctl、1μmmk6-83加药组和5μmmk6-83加药组)；图9为正常胃黏膜上皮细胞系ges-1的细胞活性在不同浓度mk6-83处理下的结果图(三个数据柱分别对应空白对照组ctl、1μmmk6-83加药组和5μmmk6-83加药组)；
图9表明，正常胃黏膜上皮细胞系ges-1细胞中，加药组与对照组的细胞活性并没有显著差异(p>0.05)；图8表明，在胃癌sgc-7901细胞中，48小时的mk6-83处理显著降低了细胞活性，并呈计量依存趋势。
3.结论
trpml1特异性小分子激动剂mk6-83对胃腺癌细胞sgc-7901有致死能力，但对于正常胃黏膜上皮细胞ges-1无杀伤力。
实施例5：mk6-83抑制小鼠胰腺癌肿瘤的生长并延长小鼠生存寿命的实验
1.实验方法
a裸鼠皮下成瘤实验：
1、待patu8988t细胞达80-90％左右密度时，收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的pbs洗两遍，目的为去除细胞中的血清。
3、用pbs或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为(1-5)×106个细胞/支，接种体积为0.1ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×107个细胞/ml。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
5、选择的裸鼠在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率。
7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
b小鼠在瘤药物注射及肿瘤体积测量方法
1、待小鼠肿瘤超过一公分后，每天在瘤注射pbs或相应浓度的mk6-83大约100l，每天用游标卡尺测量肿瘤体积并计算。肿瘤体积＝长径*短径*短径/2
2、等待小鼠自然死亡，并记录生存时间。
3、小鼠死亡后取出肿块，测量最终的肿瘤体积并记录。
2.试验结果
图10显示了pbs对照组与mk6-83(5μm)注射组的小鼠生存曲线；描画了pbs(下方图线)对照组和mk6-83(上方图线)注射组的小鼠的生存曲线。注射mk6-83(5μm)后，小鼠的生存时间比对照组明显增加。
图11显示了pbs对照组与mk6-83(5μm)注射组的肿瘤体积。描画了12组pbs对照组和11组的mk6-83注射组的小鼠最终的肿瘤体积比较。与12组的pbs小鼠肿瘤相比，11组的mk6-83注射小鼠的肿瘤体积整体显著降低。(***p<0.001)
3.结论
trpml1特异性小分子激动剂mk6-83能够抑制小鼠胰腺癌肿瘤的生长并延长小鼠生存寿命。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。