本发明属于制药领域，涉及一种新的抗生素。具体而言，本发明涉及一类16-元环脱碳霉糖泰乐内酯的20,23位修饰的新型衍生物、该类衍生物的可以药用的盐、制备该类衍生物的方法以及该类衍生物的应用。
背景技术
自从人类在1920年代发现青霉素，1940年代发现链霉素以来，许许多多新的具有抗菌活性的化合物被不断发现并作为抗生素使用，从而挽救了成千上万的生命并极大地促进了现代畜牧业的发展。但是随着时间的推移，细菌可以对现有药物产生耐药性，使感染难以治愈甚至无法控制。目前，对抗生素具有耐药性的细菌已经成为一个日益严重的公共卫生威胁，存在已久的耐药细菌mrsa和最近出现的超级细菌ndm-1即为这类严重威胁的集中反映。事实上，几乎所有的抗生素类药物的临床使用，最终都会导致耐药细菌的出现与存在，例如：革兰氏阳性细菌的耐药株，如耐甲氧西林葡萄球菌，链球菌，耐青霉素和耐万古霉素的肠球菌等等。这些耐药细菌可能会对受其感染的患者或动物导致严重甚至致命的后果。在药物研究领域，开发新的抗生素是解决耐药菌问题的重要手段。
大环内脂是一类含有一个或多个6元糖环取代的14-16元环的抗生素，包括红霉素，泰乐菌素，替米考星，罗红霉素，地红霉素，阿奇霉素，克拉霉素，螺旋霉素，泰拉霉素，竹桃霉素，碳霉素，氟红霉素等等。大环内酯类抗生素的作用机制是与原核生物的核糖体50s亚基结合，其结合位点与氯霉素和林可酰胺类抗生素的作用位点密切相关或相同。大环内酯与核糖体结合后可以阻止转移核糖核酸的易位，进而破坏细菌蛋白质的合成。大环内酯类药物选择性地仅与原核生物的核糖体50s结合，而对哺乳动物的核糖体则没有亲和力。
对大环内酯类抗生素具有抗药性的细菌也已经出现。其耐药机制主要有：(1)通过降低细菌细胞壁的通透性或者获得性外排机制减少药物在细胞内的积累；(2)由erma、ermb和ermc基因介导的50s核糖体的结合位点的甲基化从而大大降低了抗菌药物与核糖体结合位点的亲和力；(3)细菌受诱导产生酯水解酶从而使药物失活。
泰乐菌素及其相关的16元环大环内酯衍生物(见式一)早已被证明能有效地对抗某些革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的家禽、牛和猪等动物的感染。(柯斯特(kirst)等人，美国专利号4468511，4920103；陶(tao)等人，美国专利号4921947；卢卡奇(lukacs)等人，美国专利号5032581)。但它的缺点是相对低的生物利用度，胃肠道副作用，和有限的抗菌活性谱。替米考星是泰乐菌素的20位修饰的脱糖衍生物，替米考星的优势主要在于其药物动力学，特别是较长的半衰期(美国专利号5545624)。它的缺点是心脏毒性，尤其是注射给药时。式一：
另一个与泰乐菌素相关的大环内酯衍生物zuprevo则在保留了替米考星的20位哌啶结构的基础上，进一步修饰了23位的取代基，并同样以哌啶基取代了6-脱氧-d-阿洛糖，获得了针对巴氏杆菌有较高活性的新抗菌药物(us6514946b1；中国发明专利，公开号cn101506220a)。zuprevo与泰拉霉素都含有三个碱性的氨基，这一特征与它们在肺部组织和支气管液中的富集以及较长的半衰期有密切的关系。然而，双哌啶结构在提高该药物的合成效率及降低成本方面虽然有所帮助，但并不一定是最佳的药效基团。事实上，斯蒂芬·都士威特(stephendouthwaite)等人最近对泰乐菌素类的16元大环内酯衍生物与细菌核糖体结合部位的相互作用的计算机模拟研究就表明，zuprevo分子23位的哌啶基与细菌核糖体结合部位的内壁接触，而且该部位的相互作用与哌啶基上氨基氮的质子化状态有密切关系。(acschem.biol.2012,7,1351-1355。)
泰乐菌素类大环内酯的结构改造已多有报道。例如最近hongfu等人对泰乐内酯的9位和20位进行了改造，获得了一定的成功(bioorganic&medicinalchemistryletters16(2006)1259–1266)。在体外试验中发现了与酮内酯类似的，对耐大环内酯类药的肺炎链球菌和诱导型耐药的金黄色葡萄球菌菌株有活性的衍生物。
技术实现要素：
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一类涉及16-元环抗生素泰乐内酯的20,23位修饰的新型三胺内酯衍生化合物及其盐。
本发明的另一目的是提供一种上述化合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种上述化合物在治疗和预防人或动物细菌感染和支原体感染方面的应用。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
如通式(i)或通式(ii)所代表的化合物或其药学上可接受的盐，
其中，
r1是任意取代的c1-6的烷基或c3-8的环烷基，其取代基选自芳基或羟基；
r2是氢、任意取代的c1-6的烷基或c3-8的环烷基，其取代基选自芳基或羟基；
或者r1与r2以化学键相连使r1-n-r2基团构成任意取代的3-5元或7-9元杂环基团，其取代基选自c1-3的烷基或羟基；
r3和r4分别独立地选自氢或c1-3的烷基。
在本发明中，一种优选的方案为r1是任意取代的c1-4的烷基或c3-8的环烷基，其取代基选自苯、吡啶或羟基。
在本发明中，一种优选的方案为r1是任意取代的c1-2的烷基，其取代基选自苯、吡啶或羟基。
在本发明中，一种优选的方案为r1是乙基、正丙基、异丙基、丁基、苄基、2-羟基乙基、2-吡啶甲基、3-吡啶甲基、4-吡啶甲基或者环己基。
在本发明中，一种优选的方案为r2是氢或任意取代的c1-4的烷基，其取代基选自苯、吡啶或羟基。
在本发明中，一种优选的方案为r2是氢或任意取代的c1-2的烷基，其取代基选自苯、吡啶或羟基。
在本发明中，一种优选的方案为r2是氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或2-羟基乙基。
在本发明中，一种优选的方案为r1与r2以化学键相连使r1-n-r2基团构成5元或9元杂环基团，其取代基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基或羟基。
在本发明中，一种优选的方案为r1与r2以化学键相连使r1-n-r2基团构成四氢吡咯基、3-羟基吡咯烷基、3,5-二甲基哌啶基或者异吲哚啉基。
在本发明中，一种优选的方案为r3和r4分别独立地选自氢或甲基。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-6”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括6个碳原子)。含1－4个碳原子的烷基称为低级烷基。当低级烷基没有取代基时，称其为未取代的低级烷基。更优选的是，烷基是有1-4个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等，进一步优选的是烷基是有1-2个碳原子的烷基。
“环烷基”表示全部为碳的单环或稠合的环(“稠合”环意味着系统中的每个环与系统中的其它环共享毗邻的一对碳原子)基团，其中一个或多个环不具有完全连接的π电子系统，环烷基的实例(不局限于)为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。环烷基可为取代的和未取代的。本申请书中提到的数字范围，例如“3-8”，是指该基团中可以含3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子等，直至包括8个碳原子，本申请中的环烷基优选采用c5-6的环烷基。
“芳基”表示1至12个碳原子的全碳或含杂原子的单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。其中杂原子一般为n、o和s，杂原子的数目可以为一个、两个、三个或四个。芳基的非限制性实例有苯基、吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡唑基、嘧啶基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、四唑基、三嗪基、萘基和蒽基等。芳基可以是取代的或未取代的。本发明中的芳基优选为苯基或吡啶基。
“杂环基”表示单环或稠合环基团，在环中具有3到9个环原子，其中一个或两个环原子是选自n、o或s(o)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，其余环原子是c。这些环可以具有一条或多条双键，但这些环不具有完全共轭的π电子系统。未取代的杂脂环基的非限制性实例有吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪子基、吗啉代基、硫代吗啉代基、高哌嗪子基、吲哚啉基、异吲哚啉基等。本发明中的杂环基优选为吡咯烷基、哌啶基、或者异吲哚啉基。
“羟基”表示-oh基团。
“取代基选自”是指前述的各基团可以由后续所列举的一个或多个具体基团所取代。例如“取代基选自芳基或羟基”是指前述基团可以被一个或多个芳基或羟基所取代。
“任意取代”表示“被取代”或“未被取代”两种情形，例如任意取代的烷基是指“被取代的烷基”或“未被取代的烷基”。
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙烯酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、(d)或(l)苹果酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、肉桂酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸、硬脂酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、n-甲基葡糖胺、奎宁等。
“药物组合物”指将本发明中的化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或前药与别的化学成分，例如药学上可接受的载体，混合。药物组合物的目的是促进给药给动物的过程。
在本发明的化合物或其药学上可接受的盐中，所述化合物具体可以选自：
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((二乙基氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-15-((二丙基氨基)甲基)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((丁基氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)-15-(吡咯烷-1-基甲基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基(甲基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((二(2-羟基乙基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((环己基氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基(乙基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基(异丙基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-15-((甲基(吡啶-3-基甲基)氨基)甲基)-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-(异吲哚啉-2-基甲基)-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基(异丙基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-5,9,13-三甲基-15-((甲基(吡啶-3-基甲基)氨基)甲基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-15-(异吲哚啉-2-基甲基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((苄基(甲基)氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基-15-(哌碇-1-基甲基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-15-((二乙基氨基)甲基)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮；
(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-15-((3,5-二甲基哌碇-1-基)甲基)-16-乙基-4-羟基-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮。
本发明提供了一种通式i或通式ii的化合物的制备方法，具体包括如下步骤：
步骤一、泰乐菌素脱红霉糖还原胺化缩合：将泰乐菌素与相应取代的六氢吡啶或异吲哚啉反应，生成脱红霉糖还原胺化中间体1a或1b；
步骤二、脱6-脱氧-d-阿洛糖：中间体1a或1b在无机酸作用下，脱6-脱氧-d-阿洛糖生成中间体2a或2b；
步骤三、活化：中间体2a或2b与碘在三苯基磷和吡啶的作用下反应，生成碘化物3a或3b；
步骤四、胺化：中间体3a或3b在碱性条件下与有机胺反应，生成产物4a或4b；
上述各式中的基团定义如上所述。其中优选的，在步骤一的反应在甲酸作用下在甲苯或二氧六环中于70～85℃下进行；步骤二中的无机酸为氢溴酸，反应温度为50℃～60℃；步骤三中，反应溶剂为二氯甲烷，反应温度为0～20℃；步骤四中所用碱选自碳酸钾、碳酸钠或三乙胺，采用或不采用反应溶剂，反应温度为25～140℃。
本发明的另一种实施方案涉及一种药物组合物，其以本发明说明书中所涉及的各新化合物或其盐(特别是权利要求1～6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐)为活性成分，并辅以药用辅料制成药物制剂。
本发明中的化合物或其盐(特别是权利要求1～6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐)可应用于制备治疗或预防动物或人细菌或支原体感染药物方面，例如动物或人细菌感染方面，或动物或人支原体感染方面。具体的，本发明中的由细菌和支原体引起的动物(包括哺乳动物，鱼类和鸟类)的疾病包括但不仅限于：溶血巴斯德氏菌，巴氏杆菌和睡眠嗜血杆菌引起的牛呼吸系统疾病；多杀性巴氏杆菌引起的猪，山羊，绵羊和家禽的巴氏杆菌病；放线杆菌引起的猪传染性胸膜肺炎，猪链球菌感染；以及牛，猪，山羊，绵羊和家禽的支原体感染。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐具有优异的抗菌活性，应用于治疗和预防动物细菌感染和支原体感染，为该类疾病的治疗或预防提供了新的途径。
具体实施方式
本发明由以下实施例加以说明。但是本发明并不限于以下实施例的具体细节。
本发明涉及的化合物合成制备所需的试剂溶剂等除有特殊指明外，均为市售产品。化合物的分离纯化可以由色谱层析完成。所用材料如薄层层析硅胶，hg/t2354-92,gf254,化学纯，青岛海洋化工有限公司；羧甲基纤维素钠，300-800mpa·s，化学纯，30036328，国药集团化学试剂有限公司，300-400目硅胶制备板。本发明涉及的化合物结构鉴定可以由核磁共振和质谱等完成。如300-bruker核磁共振仪；shimadzulcms-2020，esi源。
实施例1.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-((((2r,3r,4r,5r,6r)-5-羟基-3,4-二甲氧基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)甲基)-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物1)
泰乐菌素(9.2克，0.01摩尔)，六氢吡啶(2.55克，0.03摩尔)，甲苯(30毫升)一起加入三口瓶，搅拌升温至75℃，慢慢滴加甲酸(2.5克，0.05摩尔)，控温在75℃左右，滴完甲酸，75-80℃反应2小时。反应结束后，加15％稀盐酸使下层粘稠物溶解，分出水层。苯层用90毫升稀盐酸洗两次，合并水层。用30％氢氧化钠水溶液中和至ph约为10左右，析出白色固体产物，水洗一次，烘干，得粗产品(化合物1)约10克，接近理论产率。质谱理论值：840.53，实测值：841.45(m+h+)。
实施例2.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-(羟基甲基)-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物2)
化合物1(9.0克，0.01摩尔)加入三口瓶中，再加入氢溴酸30毫升及水30毫升，57℃反应5个小时。冷却过滤，滤液用30％-40％的氢氧化钠溶液中和至ph约为10，析出产品为固体，可过滤。如果析出产品为粘稠物需脱水，烘干得粗品4.7克，产率为70％。质谱理论值：666.45，实测值：667.40(m+h+)。
实施例3.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15s,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-(碘甲基)-5,9,13-三甲基-7-(2-(哌啶-1-基)乙基)氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物3)
在三口瓶中加入化合物2(12.4克，0.02摩尔)二氯甲烷(40毫升)、三苯基磷(8克，0.03摩尔)、吡啶(2克，0.022摩尔)，冰浴，使温度低于13℃。分批加入碘(8克，0.03摩尔)，加完碘控温在15±3℃，并搅拌3小时。冷却过滤，滤液用30毫升15％稀盐酸提取两次，合并提取液，用30％氢氧化钠溶液中和至ph为9-10，析出灰白色固体产品，过滤出产品。将产品溶于少量二氯甲烷中，干燥浓缩，滴加沸程60-90℃的石油醚，使其析出晶体。过滤得碘化物粗品8.7克，产率为55％。质谱理论值：776.35，实测值：777.70(m+h+)。
实施例4.泰乐内酯有机胺系列衍生化合物4a-4l
有机胺，甲苯，1,4-二氧六环事先均用无水硫酸钠干燥；三乙胺经干燥后重新蒸馏制得。
方法a：取0.5克碘化物(化合物3)，1毫升有机胺，2毫升甲苯，1毫升三乙胺，在氮气保护下加热回流24-48小时，冷却至室温，减压蒸馏后用制备层析板分离纯化。展开剂为乙酸乙酯：氯仿：甲醇＝1：1：1(v/v/v)，产率50％-60％。
方法b：取1.0克碘化物，0.2克无水碳酸钾，2-10毫升有机胺，在氮气保护下于25-140℃温度下搅拌反应，至碘化物原料基本消失为止(tlc检测)。反应结束后减压蒸去过量有机胺，加石油醚洗去残留的有机胺，得到粗产品。纯品用制备层析板提纯。
方法c：取0.5克碘化物，0.1克无水碳酸钾，5当量的有机胺，10毫升1,4-二氧六环，在110℃温度下搅拌反应，至碘化物原料基本消失为止(tlc检测)。反应结束后减压蒸去溶剂，加石油醚洗去残留的有机胺，得到粗产品。纯品用制备层析板提纯。
实施例5.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-15-((((2r,3r,4r,5r,6r)-5-羟基-3,4-二甲氧基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)甲基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物5)
泰乐菌素(19克，0.021摩尔)，3,5-二甲基哌啶(6.8克，0.060摩尔)，甲苯(60毫升)一起加入三口瓶，搅拌升温至75℃，慢慢滴加甲酸(4.6克，0.10摩尔)，控温在75℃左右，滴完甲酸，75-80℃反应2小时。反应结束后，加15％稀盐酸使下层粘稠物溶解，分出水层。苯层用180毫升稀盐酸洗两次，合并水层。用30％氢氧化钠水溶液中和至ph约为10左右，析出白色固体产物，水洗一次，烘干，得淡黄色固体22.5克。质谱理论值：868.57，实测值：869.55(m+h+)。
实施例6.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-15-(羟基甲基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物6)
化合物5(22.5克，粗品)加入三口瓶中，再加入水30毫升及氢溴酸30毫升，在57℃反应4小时。冷却过滤，滤液用30％-40％的氢氧化钠溶液中和至ph约为10，析出产品为粘稠物，取出后水溶解，然后加入氯化钠盐析，充分搅拌并过滤，烘干得粗品15克。质谱理论值：694.48，实测值：695.45(m+h+)。
实施例7.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15s,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-7-(2-(3,5-二甲基哌啶-1-基)乙基)-16-乙基-4-羟基-15-(碘甲基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物7)
化合物6(15克，约0.021摩尔)加入二氯甲烷(60毫升)中溶解，并加入无水硫酸钠干燥，过滤出干燥剂后加入三口瓶中，再加入三苯基磷(13克，0.050摩尔)、吡啶(3.2克，0.042摩尔)，冰浴，使温度低于13℃。分批加入碘(13克，0.051摩尔)，加完碘控温在15±3℃，并搅拌4小时。冷却过滤，滤液倒入分液漏斗中，用15毫升浓盐酸提取三次，分出下层，合并三次提取液，用30％氢氧化钠溶液中和至ph为9-10，析出灰白色固体产品，过滤出产品。将产品溶于20毫升水中，使其充分溶解，加入氯化钠盐析，如果仍然为粘稠物则滤出水后继续加20毫升水溶解，加入氯化钠盐析，过滤，干燥后，滴加沸程60-90℃的石油醚，使其析出晶体。过滤得产品7.3克。质谱理论值：804.38，实测值：805.35(m+h+)。
实施例8.泰乐内酯有机胺系列衍生化合物8a-8c
化合物8a-8c由化合物7应用实施例4中的方法b制备。
实施例9.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-((((2r,3r,4r,5r,6r)-5-羟基-3,4-二甲氧基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)甲基)-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物9)
泰乐菌素(9.5克，0.011摩尔)，甲酸(2.7克，0.059摩尔)，异吲哚啉(3.7克，0.031摩尔)，1,4-二氧六环(10毫升)一起加入三口瓶，升温至70℃搅拌反应2小时。反应结束后，减压蒸去溶剂，粗产品溶于30毫升水中，用20％稀氢氧化钠溶液中和至ph9-10，溶液变成乳白色，取出固体，将固体用无水乙醚洗去绿色的表面，再用石油醚清洗固体，在研钵中研细，过滤干燥得固体粉末。质谱理论值：874.52，实测值：893.50(m+h3o+)。
实施例10.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15r,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-(羟基甲基)-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物10)
化合物9(9.8克，粗品)加入三口瓶中，再加入水50毫升及氢溴酸45毫升，在58℃反应3.5小时。冷却过滤，滤液用30％的氢氧化钠溶液中和至ph约为9-10，过滤出固体，将固体用石油醚洗一次，研细，并溶解在30毫升二氯甲烷中，加无水硫酸钠、无水硫酸镁各10克干燥过滤。滤液直接用于下一步反应。质谱理论值：700.43，实测值：719.40(m+h3o+)。
实施例11.(4r,5s,6s,7r,9r,11e,13e,15s,16r)-6-(((2r,3r,4s,5s,6r)-4-(二甲基氨基)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2h-吡喃-2-基)氧)-16-乙基-4-羟基-15-(碘甲基)-7-(2-(异吲哚啉-2-基)乙基)-5,9,13-三甲基氧杂十六环-11,13-二烯-2,10-二酮(化合物11)
实施例10中的化合物10的二氯甲烷溶液(30毫升)加入三口瓶中，再加入三苯基磷(4.2克，0.016摩尔)、吡啶(2.5克，0.033摩尔)，冰浴，使温度低于15℃。分批加入碘(4.4克，0.017摩尔)，加完碘在20℃搅拌3.5小时。冷却过滤，滤液倒入分液漏斗中，用25毫升浓盐酸提取二次，分出下层，合并二次提取液，用30％氢氧化钠溶液中和至ph为9-10，析出灰白色固体产品，过滤出产品。如有油状产品，将其溶于20毫升水中，使其充分溶解，加入氯化钠盐析，过滤干燥后得产品。质谱理论值：810.33，实测值：811.20(m+h+)。
实施例12.泰乐内酯有机胺系列衍生化合物12a-12d
化合物12a-12d由化合物11应用实施例4中的方法b制备。
体外抑菌活性试验
(1)菌株
质控菌：大肠杆菌别c25922、金黄色葡萄球菌29213。猪大肠杆菌1498，c83543(80年代分离)；猪大肠杆菌0039(2011年分离)。鸡沙门氏菌533，c79-13；鸡沙门氏菌0008(2011年分离)。猪金黄色葡萄球菌546，c56023(1989年分离)；猪金黄色葡萄球菌5-1(2011年分离)。禽多杀氏巴氏杆菌2株。肺炎链球菌2株。肺炎克雷伯菌2株。猪胸膜肺炎放线菌2株。支原体菌株等等。
(2)培养基
用ca，mg调节的m-h培养基(大肠、沙门、金葡、巴氏)，ca，mg调节的加5％绵羊血的马丁肉汤(链球菌)，用ca，mg调节的加1/100000nad的tsb(胰蛋白胨大豆肉汤)(胸膜肺炎放线菌)。
(3)方法
药物的配制：准确称取5120微克(5.12毫克)，加入1毫升容量瓶，用95％酒精滴加溶解后，加入三蒸水至1毫升。含量为5120微克/毫升。
用96孔板，将不同的化合物用相应肉汤做倍比稀释，使其浓度依次为320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156微克/毫升，或根据需要调整其浓度梯度。将上述不同菌株在新鲜营养琼脂上37度培养18-24小时，挑取，用m-h肉汤悬浮，调准浓度，使其为0.5麦氏单位。
将0.5麦氏单位的菌液稀释100倍后，与上述不同稀释度的化合物等量混合，37度培养18-24小时，然后取出判读结果，能抑制细菌生长的最低化合物浓度即为最低抑菌浓度。
抑菌活性检测结果(μg/ml，微克/毫升)
a:肺炎放线菌血清1型；b:肺炎放线菌血清7型；c:巴氏杆菌8217；d:巴氏杆菌8229；e:大肠杆菌in-f6-7；f:大肠杆菌25922(质控菌)；g:金葡菌5-1；h:金葡菌29213(质控菌)；i:沙门氏菌ld4-8；j:肺炎克雷伯菌3753；k:肺炎克雷伯菌3699；l:肺炎链球菌2349；m:肺炎链球菌49619(质控菌)。
支原体敏感性检测结果