一种改善睡眠的保健品的制作方法

本发明涉及一种保健品，该保健品可以改善睡眠障碍者的睡眠睡眠质量。

背景技术：

据世界卫生组织调查，在世界范围内约有30％左右的人受到睡眠障碍的困扰，我国有各类睡眠障碍者占人群的38％。睡眠障碍出现的比例随年龄增长，估计在老龄化社会中可能高达50％。这种高比例的睡眠障碍会引起严重的健康问题，如高血压、心脏病、卒中、糖尿病等。此外睡眠障碍还会影响人的情绪，严重地可表现为抑郁、焦虑、情绪失调等。睡眠问题不仅给个人带来巨大的生理和心理负担，也使社会医疗保健支出日益高涨。

目前解决睡眠问题的主要手段还是通过服用安眠药物，长期服用安眠药有可能带来不同程度的副作用，如成瘾、依赖及戒断症状等，很多人不愿长期服用。

因此，开发改善睡眠的保健品可以为睡眠障碍者提供更容易接收的选择。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种改善睡眠的保健品。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种具有改善睡眠作用的多糖，由如下步骤制备得到：

步骤s1，姬蕨多糖水提物的制备：

将姬蕨的干燥全草粉碎，用体积分数为95％的乙醇按照1kg全草加5l乙醇溶液的比例浸泡24h脱除脂溶性物质，双层滤布过滤。滤渣干燥后，按照1kg滤渣加5l蒸馏水的比例于85℃回流提取4h，离心分离，双层滤布过滤，滤渣重复提取一次，合并滤液，浓缩、冷冻干燥得到姬蕨多糖水提物；

步骤s2，姬蕨多糖的乙醇分级沉淀：

将姬蕨多糖水提物依次用体积分数为30％、40％的乙醇于4℃层析冷柜中分级沉淀12h，离心，沉淀用无水乙醇洗涤两次。自然风干乙醇后，用sevag法脱蛋白，反复进行两次，收集40％乙醇分级沉淀多糖；

步骤s3，透析纯化：

将40％乙醇分级沉淀多糖用蒸馏水溶解，用截留分子量为8000～10000d的透析袋透析24h，透析液浓缩、冷冻干燥得到40％乙醇分级沉淀纯化多糖。

优选地，步骤s1于4800r/min离心分离10min。

优选地，步骤s2用sevag法脱蛋白时，有机溶剂为氯仿与正丁醇按照体积比4:1混合。

上述多糖在制备改善睡眠的保健品中的应用。

下丘脑是参与睡眠调节的重要脑区，hypocretin、gaba和褪黑素是参与睡眠调节的主要神经递质hypocretin是中枢中的一类兴奋性神经递质，主要在下丘脑外侧区合成，其与hypocretin受体2结合后会使睡意减少，促进觉醒。有研究发现，下丘脑内hypocretin受体2的下调能抑制hypocretin的促觉醒作用。gaba是中枢神经系统重要的抑制性神经递质，与相应的gaba受体结合后能降低神经元的活性，防止中枢神经过度兴奋，具有脑部安定、抗焦虑和助眠的作用。gabaa受体是中枢神经系统的主要抑制性受体，其诱导产生的抑制性突触后电位能快速中断兴奋性信号的传入，从而抑制神经元的兴奋性。gabaa受体的α2亚基在脑内含量丰富，是gabaa受体重要的功能基团，因此测定α2的表达量能反映gabaa受体的含量。研究发现，褪黑素具有调整时差、诱导睡眠的作用。褪黑素受体有1a、1b、1c三个亚类，分布于脑内的多为褪黑素受体1a，且在下丘脑内含量最高，褪黑素与其受体结合后通过信号传导产生促眠等生物学效应。本发明40％乙醇分级沉淀纯化多糖(f40)可以有效抑制hypocretin、hypocretin受体2基因的表达，并可以有效促进gabaa受体α2、褪黑素受体1a基因的表达。因此，40％乙醇分级沉淀纯化多糖可用于制备改善睡眠的保健品，如与常规的保健品辅料混合后直接装胶囊或制成颗粒后再装胶囊，或者制成乳剂、口服液等。

附图说明

图1为不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin基因表达的影响；

图2为不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin受体2基因表达的影响；

图3为不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对gabaa受体α2基因表达的影响；

图4为不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对褪黑素受体1a基因表达的影响。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

姬蕨的干燥全草购于亳州中药材市场，鉴定为蕨类姬蕨科姬蕨hypolepispunctata(thunb.)mett.的干燥全草。95％乙醇(食品级)购自上海励致化工有限公司。

透析袋(8000～10000d)购自美国sigma公司。

二、实验方法

1、姬蕨多糖水提物的制备

将姬蕨的干燥全草粉碎，用体积分数为95％的乙醇按照1kg全草加5l乙醇溶液的比例浸泡24h脱除脂溶性物质，双层滤布过滤。滤渣干燥后，按照1kg滤渣加5l蒸馏水的比例于85℃回流提取4h，4800r/min离心分离10min，双层滤布过滤，滤渣重复提取一次，合并滤液，浓缩、冷冻干燥得到姬蕨多糖水提物。

2、姬蕨多糖的乙醇分级沉淀

将姬蕨多糖水提物依次用体积分数为30％、40％、50％、60％、70％的乙醇于4℃层析冷柜中分级沉淀12h，离心，沉淀用无水乙醇洗涤两次。自然风干乙醇后，用sevag法(氯仿与正丁醇体积比为4:1)脱蛋白，反复进行两次，依次得到30％、40％、50％、60％、70％乙醇分级沉淀多糖。

3、透析纯化

分别将30％、40％、50％、60％、70％乙醇分级沉淀多糖用蒸馏水溶解，分别用截留分子量为8000～10000d的透析袋透析24h，透析液浓缩、冷冻干燥分别得到30％、40％、50％、60％、70％乙醇分级沉淀纯化多糖(f30、f40、f50、f60、f70)。

4、睡眠改善实验

将66只体重为30-35g的6周龄昆明种小白鼠单笼饲养，自由饮食。每天7:00-19:00给予光照，其余时间给予黑暗。动物房温度为23-25℃。小鼠随机分成6只/组(对照组和f30、f40、f50、f60、f70低剂量、高剂量组)，对照组灌胃pbs，f30、f40、f50、f60、f70低剂量组灌胃f30、f40、f50、f60、f70的pbs溶液0.25g/kgbw，f30、f40、f50、f60、f70高剂量组灌胃f30、f40、f50、f60、f70的pbs溶液0.50g/kgbw，持续灌胃6周。

最后一次灌胃6小时后，处死小鼠并立即用trizol试剂(美国invitrogen公司)将小鼠下丘脑总rna提取出来后，再反转录成cdna。各样品设3复孔，采用表1所示的引物并按如下反应程序进行qpcr：(1)预变性：95℃，3min；(2)变性：95℃，5s；(3)退火延伸：55.0℃(hypocretin：52.5℃；hypocretin受体2：56.5℃；gabaa受体α2：55.6℃；褪黑素受体1a：55.4℃)，30s；总共40个循环。采用法计算睡眠相关基因的mrna相对表达量。qpcr实验相关试剂和反转录试剂盒购自大连takara公司。

表1睡眠相关基因的引物

5、统计学方法

数据统计及分析采用spss19.0，组间分析比较采用one-wayanova，以均数±标准差表示；实时荧光定量pcr数据分析及绘图采用graphpadprism6。p<0.05差异显著。

三、实验结果

不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin基因表达的影响如表2和图1所示。不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin受体2基因表达的影响如表3和图2所示。不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对gabaa受体α2基因表达的影响如表4和图3所示。不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对褪黑素受体1a基因表达的影响如表5和图4所示。

表2不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin基因表达的影响

表3不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对hypocretin受体2基因表达的影响

表4不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对gabaa受体α2基因表达的影响

表5不同剂量f30、f40、f50、f60、f70对褪黑素受体1a基因表达的影响

下丘脑是参与睡眠调节的重要脑区，hypocretin、gaba和褪黑素是参与睡眠调节的主要神经递质hypocretin是中枢中的一类兴奋性神经递质，主要在下丘脑外侧区合成，其与hypocretin受体2结合后会使睡意减少，促进觉醒。有研究发现，下丘脑内hypocretin受体2的下调能抑制hypocretin的促觉醒作用。gaba是中枢神经系统重要的抑制性神经递质，与相应的gaba受体结合后能降低神经元的活性，防止中枢神经过度兴奋，具有脑部安定、抗焦虑和助眠的作用。gabaa受体是中枢神经系统的主要抑制性受体，其诱导产生的抑制性突触后电位能快速中断兴奋性信号的传入，从而抑制神经元的兴奋性。gabaa受体的α2亚基在脑内含量丰富，是gabaa受体重要的功能基团，因此测定α2的表达量能反映gabaa受体的含量。研究发现，褪黑素具有调整时差、诱导睡眠的作用。褪黑素受体有1a、1b、1c三个亚类，分布于脑内的多为褪黑素受体1a，且在下丘脑内含量最高，褪黑素与其受体结合后通过信号传导产生促眠等生物学效应。

上述实验结果表明，40％、50％、70％乙醇分级沉淀纯化多糖(f40、f50、f70)可以有效抑制hypocretin、hypocretin受体2基因的表达，并可以有效促进gabaa受体α2、褪黑素受体1a基因的表达，而30％、60％乙醇分级沉淀纯化多糖(f30、f60)不具备这样的作用。因此，40％、50％、70％乙醇分级沉淀纯化多糖可以用于制备改善睡眠的保健品。比如，将其与常规的保健品辅料混合后直接装胶囊或制成颗粒后再装胶囊，或者制成乳剂、口服液等。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。