一种生物碱及在诱导丹参毛状根中丹酚酸积累方面的应用的制作方法

本发明属于化学领域，涉及一种生物碱及在诱导丹参毛状根中丹酚酸积累方面的应用。

背景技术

丹参又称赤参、大红袍，为我国主要的大宗药材之一。丹参具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈的功效，可用于心烦不眠，月经不调，疮疡肿痛等的治疗。目前，丹参的需求量逐年上升。但目前国内丹参的品种混杂，种质退化严重，有效成分含量极不稳定，已经成为丹参药材产业化发展和走向国际市场的瓶颈。近年来，人们利用人工组织和细胞培养的方法替代丹参植株来生产各种有效成分取得了突破性的进展。其中丹参毛状根以其生长速度快，遗传性状稳定，培养基不需要添加激素等优点而逐渐受到重视。但其积累丹参有效成分特别是丹酚酸、丹参酮类成分的能力一直无法达到生药水平。

因此，有必要开发诱导丹参毛状根中丹酚酸、丹参酮积累的诱导剂。

技术实现要素：

本发明旨在提供一种生物碱及在诱导丹参毛状根中丹酚酸积累方面的应用。

本发明目的通过下面的技术方案实现：

一种生物碱，化学结构式如下：

上述生物碱用作诱导丹参毛状根中丹酚酸积累的诱导剂的用途。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

一种用于诱导丹参毛状根中丹酚酸积累的培养基，含有上述生物碱，及其它常规成分等。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

一种生物碱，化学结构式如下：

上述生物碱用作诱导丹参毛状根中丹酚酸积累的诱导剂的用途。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

一种用于诱导丹参毛状根中丹酚酸积累的培养基，含有上述生物碱，及其它常规成分等。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

一种生物碱，化学结构式如下：

上述生物碱用作诱导丹参毛状根中丹参酮积累的诱导剂的用途。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

一种用于诱导丹参毛状根中丹参酮积累的培养基，含有上述生物碱，及其它常规成分等。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

一种生物碱，化学结构式如下：

上述生物碱用作诱导丹参毛状根中丹参酮积累的诱导剂的用途。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

一种用于诱导丹参毛状根中丹参酮积累的培养基，含有上述生物碱，及其它常规成分等。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

一种生物碱，化学结构式如下：

上述生物碱用作诱导丹参毛状根中丹酚酸或丹参酮积累的诱导剂的用途。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

一种用于诱导丹参毛状根中丹酚酸或丹参酮积累的培养基，含有上述生物碱，以及其它常规成分等。

优选地，所述丹酚酸为丹酚酸b。

优选地，所述丹参酮为二氢丹参酮ⅰ。

有益效果：

本发明发现，美洛可宁b、美洛可宁c、美洛可宁g、美洛可宁h可以显著诱导丹参毛状根中丹酚酸的积累，而对丹参酮的积累无明显作用；相反，美洛可宁j、leuconolam可以显著诱导丹参毛状根中丹参酮的积累，而对丹酚酸的积累无明显作用；不过，美洛可宁a既可以诱导丹参毛状根中丹酚酸的积累，又可以诱导丹参毛状根中丹参酮的积累。

附图说明

图1为各组毛状根材料中丹酚酸b和二氢丹参酮ⅰ的相对含量。

具体实施方式

下面结合附图和实施例详细地介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

该实施例使用的生物碱的化学结构如下表所示，纯度不低于95％。

本实验用丹参毛状根是由发根农杆菌lba9402侵染丹参无菌苗获得，并在msoh液体培养基25℃暗室继代培养。

二、实验方法

1、丹参毛状根的培养

本实验用丹参毛状根是由发根农杆菌lba9402侵染丹参无菌苗获得，并在msoh液体培养基25℃暗室继代培养。msoh培养基是指在murashigeandskoog(ms)培养基的基础上由1g/l水解酪蛋白替代nh4no3(参考文献：huzb,alfermannaw.diterpenoidproductioninhairyrootculturesofsalviamiltiorrhiza.phytochemistry,1993)。

2、诱导剂母液的配制

以dmso为助溶剂，将美洛可宁b、美洛可宁c、美洛可宁g、美洛可宁h、美洛可宁j、leuconolam、美洛可宁a分别用去离子水溶解，配制成浓度为100mm的母液，备用。

3、丹参毛状根诱导处理

1g接种实验室保种的丹参毛状根于100mlmsoh液体培养基中，18d后在所培养的毛状根中分别添加美洛可宁b、美洛可宁c、美洛可宁g、美洛可宁h、美洛可宁j、leuconolam或美洛可宁a进行诱导处理，美洛可宁b、美洛可宁c、美洛可宁g、美洛可宁h、美洛可宁j、leuconolam或美洛可宁a的终浓度分别为100μm；同时设置空白对照组。每个处理重复3次，收集诱导处理10d后的毛状根材料并于-80℃冰箱中冷冻，然后置于冷冻干燥机中冻干，并储存于电子干燥器中备用。

4、丹参毛状根有效成分的提取

取冻干的丹参毛状根研磨成粉末，过40目筛，精密称取样品0.05g于10ml离心管中，加70％甲醇超声提取45min补足原体积，12000r/min离心10min，上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，即得样品提取液。

5、毛状根材料中丹酚酸b和二氢丹参酮ⅰ的含量测定

采用文献hplc方法(张顺仓等，诱导子对丹参毛状根酚酸类和丹参酮类成分积累的影响，中国中药杂志，2011年5月)测定各组毛状根材料中丹酚酸b和二氢丹参酮ⅰ的含量，然后用诱导组的含量除以空白对照组的含量得到各诱导组的相对含量。

6、数据统计

采用spss17.0处理，组间差异采用单因素方差分析法，p＜0.05为差异有统计学意义。

三、实验结果

各组毛状根材料中丹酚酸b和二氢丹参酮ⅰ的相对含量如表1和图1所示。

表1各组毛状根材料中丹酚酸b和二氢丹参酮ⅰ的相对含量

上述结果表明，美洛可宁b、美洛可宁c、美洛可宁g、美洛可宁h可以显著诱导丹参毛状根中丹酚酸的积累，而对丹参酮的积累无明显作用；相反，美洛可宁j、leuconolam可以显著诱导丹参毛状根中丹参酮的积累，而对丹酚酸的积累无明显作用；不过，美洛可宁a既可以诱导丹参毛状根中丹酚酸的积累，又可以诱导丹参毛状根中丹参酮的积累。

本领域技术人员知道，植物中化学成分的累计与相关的基因、酶表达水平有关，而这些基因、酶的表达又受到外界化学成分的影响，这种影响可能是激活，也可能是抑制，因此，只要筛选到这些基因、酶的有效激活剂或抑制剂就可以人为干预植物中特定化学成分的积累。

上述实施例的作用仅仅在于具体地介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围仅仅局限于上述具体实施例。