本发明涉及一类新化合物的制备与应用；具体是联苯二酚酰胺衍生物及其作为抗癌药物的应用。
背景技术：
2005年，charles等[wo2005099688]描述了以2-硝基-6-溴苯酚为原料合成了8-(2,4-二甲基苯基)-2-甲基-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮：
2007年，kuo等[us20070265252]描述了以6-溴-2-氨基苯酚合成8-(3-(三氟甲基)苯基)-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮。该联苯噁嗪酮衍生物作为胆固醇酯转移蛋白(cetp)抑制剂。其制备工艺如下：
2010年，russo等[wo2010111626]描述了以6-溴-2-甲基-2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮为原料合成联苯噁嗪酮，该联苯噁嗪酮可抑制parp，可延缓细胞内dna修复并得到增强癌症治疗的作用。其制备工艺如下：
2016年，john等[wo2016038582]描述了以2-氨基-6-溴-4-氯苯酚为原料制备了联苯噁嗪酮，发现其能够作为raf激酶抑制剂，可用于治疗与过量raf激酶活性相关的某些疾病，包括由细胞增殖引发的癌症等疾病。其中优秀化合物对c-raf的ic50值为0.02μg/l，表现出较强的抑制活性。其制备工艺如下：
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是提供一类联苯二酚酰胺衍生物、其制备方法、药物组合物和用途。
为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是化学结构式ⅰ所示的联苯二酚酰胺衍生物：
其中，r选自：c2～c4直链烯基或c1～c4卤代烷基；卤代选自：氟代、氯代、溴代或碘代。
本发明技术方案的第一方面是化学结构式ⅱ所示的联苯二酚酰胺衍生物：
其中，r1选自：氢、c1～c3直链烷基。
进一步，优选的化合物选自：3’,5-二烯丙基-3,5’-二(2-氯乙酰氨基)-1,1’-联苯-2,4’-二酚、3’,5-二烯丙基-3,5’-二丙烯酰氨基-1,1’-联苯-2,4’-二酚或6’,8-二烯丙基-2h,2’h-[6,8’-二苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3’(4h,4’h)-二酮。
本发明技术方案的第二方面是提供了第一方面所述的联苯二酚酰胺衍生物(ⅰ)的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：
其中，r选自：c2～c4直链烯基或c1～c4卤代烷基；卤代选自：氟代、氯代、溴代或碘代。
本发明技术方案的第二方面是提供了第一方面所述的联苯二酚酰胺衍生物(ⅱ)的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：
其中，r1选自：氢、c1～c3直链烷基。
本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的联苯二酚酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1％～95％重量百分比。
本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。
为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明技术方案的第四方面是提供本发明第一方面所述联苯二酚酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备抗癌药方面的应用。
有益技术效果：
本发明的联苯二酚酰胺衍生物是一类具有抗癌活性的新化合物。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
实施例1
3',5-二烯丙基-3,5'-二亚硝基-1,1'-联苯-2,4'-二酚的制备
10mmol和厚朴酚、30mmol亚硝酸钠、25ml乙腈和5ml水，室温下滴加5ml浓盐酸(36～38％)，约1h滴加完毕，继续反应0.5h，tlc检测反应完全。加水猝灭，二氯甲烷萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析提纯，得黄色固体3',5-二烯丙基-3,5'-二亚硝基-1,1'-联苯-2,4'-二酚，收率79.3％；mp.57～59℃；1hnmr(400mhz，cdcl3)δ11.04(s，1h，oh)，11.01(s，1h，oh)，8.19(s，1h，c6h2)，7.97(s，1h，c6h2)，7.70(s，1h，c6h2)，7.46(s，1h，c6h2)，6.12～5.86(m，2h，2×ch＝)，5.20～5.13(m，4h，2×＝ch2)，3.55(d，j＝6.6hz，2h，ch2)，3.43(d，j＝6.6hz，2h，ch2)；13cnmr(100mhz，cdcl3)δ153.03，151.09，138.52，135.71，134.88，133.99，133.42，132.23，131.45，130.27，127.54，124.12，123.57，117.49，117.18，38.86，33.74。
实施例2
3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚的制备
5.0mmol3’,5-二烯丙基-3,5’-二亚硝基-1,1’-联苯-2,4’-二酚，1.0mmol氯化铵，用50ml乙醇和10ml水溶解，加入25mmol锌粉和2.5ml乙酸，室温反应0.5h。乙酸乙酯萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，经柱层析提纯，得棕色固体3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚，收率68.2％；mp.141～143℃。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ6.72(s，1h，c6h2)，6.62(s，1h，c6h2)，6.53(s，1h，c6h2)，6.45(s，1h，c6h2)，6.09～5.88(m，2h，2×ch＝)，5.30～5.19(m，2h，ch2＝)，5.07(d，j＝17.4hz，1h，ch2＝)，5.02(d，j＝10.1hz，1h，ch2＝)，4.02(br，4h)，3.41(d，j＝5.8hz，2h，ch2)，3.25(d，j＝6.4hz，2h，ch2)；13cnmr(100mhz，cdcl3)δ142.44，138.65，137.98，136.22，136.03，134.43，132.25，130.20，127.76，125.82，120.71，119.70，117.18，115.52，115.32，115.26，39.70，35.86。
实施例3
3',5-二烯丙基-3,5'-二(氯乙酰氨基)-1,1'-联苯-2,4'-二酚的制备
2.0mmol3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚用20ml四氢呋喃溶解，加入6.0mmol碳酸钾，室温搅拌下，滴加含有4.0mmol氯乙酰氯的2ml四氢呋喃溶液，10min滴加完毕。加水猝灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，脱溶，经柱层析提纯，得白色固体3',5-二烯丙基-3,5'-二(氯乙酰氨基)-1,1'-联苯-2,4'-二酚，收率53.3％；mp.174～176℃；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.83(s，1h)，9.76(s，1h)，9.03(s，1h)，8.72(s，1h)，7.59(s，1h，c6h2)，7.36(s，1h，c6h2)，7.10(s，1h，c6h2)，6.85(s，1h，c6h2)，6.03～5.88(m，2h，2×ch＝)，5.13～5.01(m，4h，2×ch2＝)，4.38(s，2h，coch2)，4.36(s，2h，coch2)，3.41(d，j＝6.6hz，2h，ch2)，3.30(d，j＝6.7hz，2h，ch2)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ165.95，146.02，144.39，138.33，137.21，131.52，130.37，129.92，128.12，127.72，127.21，126.13，122.63，122.56，116.23，116.14，43.76，39.29，34.53。
实施例4
3',5-二烯丙基-3,5'-二丙烯酰氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚的制备
1.0mmol3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚用10ml四氢呋喃溶解，加入3.0mmol碳酸钾，室温搅拌下，滴加含有2.0mmol丙烯酰氯的1ml四氢呋喃溶液，10min滴加完毕。加水猝灭，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，脱溶，经柱层析提纯，得棕色固体3',5-二烯丙基-3,5'-二丙烯酰氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚，收率47.5％；mp.80～82℃；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.28(s，1h)，10.19(s，1h)，9.63(s，1h)，9.26(s，1h)，7.44(s，1h，c6h2)，7.22(s，1h，c6h2)，7.16(s，1h，c6h2)，6.93(s，1h，c6h2)，6.67～6.58(m，2h，2×coch＝ch2)，6.33(dd，j＝16.8，6.1hz，2h，2×coch＝chahb)，6.06～5.91(m，2h，2×ch2ch＝ch2)，5.86～5.80(m，2h，ch2，2×coch＝chahb)，5.14～5.02(m，4h，2×ch2ch＝ch2)，3.43(d，j＝6.6hz，2h，ch2ch＝ch2)，3.33(d，j＝6.5hz，2h，ch2ch＝ch2)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ165.10，165.04，146.20，144.62，138.25，137.36，131.58，131.24，131.12，130.97，130.13，129.09，128.47，128.33，128.16，127.57，126.31，122.56，122.45，116.20，116.10，39.18，34.68。
实施例5
6',8-二烯丙基-2h,2'h-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'(4h,4'h)-二酮的制备
0.5mmol3',5-二烯丙基-3,5'-二(氯乙酰氨基)-1,1'-联苯-2,4'-二酚用5ml四氢呋喃溶解后，加入3.0mmol三乙胺和0.3mmol4-二甲氨基吡啶(dmap)，回流反应12h。反应液脱溶，经柱层析提纯，得白色固体6',8-二烯丙基-2h,2'h-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'(4h,4'h)-二酮，收率63.2％；mp.160～162℃；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ10.70(s，1h，nh)，10.66(s，1h，nh)，6.94(s，1h，c6h2)，6.90(s，1h，c6h2)，6.74(s，1h，c6h2)，6.71(s，1h，c6h2)，6.01～5.88(m，2h，ch＝)，5.14～5.02(m，4h，ch2＝)，4.59(s，2h，coch2)，4.50(s，2h，coch2)，3.37～3.32(m，4h，ch2)；13cnmr(100mhz，dmso-d6)δ165.77，165.48，140.99，139.12，138.00，136.82，134.43，131.13，129.29，128.52，127.71，127.36，124.73，124.10，116.44，116.37，115.35，115.23，67.38，67.31，39.23，33.72。
实施例6
6',8-二烯丙基-2h,2'h-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'(4h,4'h)-二酮的制备
2.0mmol3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚、20ml四氢呋喃、10mmol三乙胺、0.3mmol4-二甲氨基吡啶，搅拌下，滴加含有4.0mmol氯乙酰氯的2ml四氢呋喃溶液，10min滴加完毕；回流12h。反应液脱溶，经柱层析提纯，得白色固体6',8-二烯丙基-2h,2'h-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'(4h,4'h)-二酮。
实施例7
6',8-二烯丙基-2,2’-二甲基-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'-二酮的制备
2.0mmol3',5-二烯丙基-3,5'-二氨基-1,1'-联苯-2,4'-二酚、20ml四氢呋喃、10mmol三乙胺、0.3mmol4-二甲氨基吡啶，搅拌下，滴加含有4.0mmol2-氯丙酰氯的2ml四氢呋喃溶液，10min滴加完毕；回流12h。反应液脱溶，经柱层析提纯，得6',8-二烯丙基-2,2’-二甲基-[6,8'-联苯并[b][1,4]噁嗪]-3,3'-二酮。
实施例8
联苯二酚酰胺衍生物的抗癌活性
1.抗肿瘤活性原理
mtt法又称mtt比色法，是一种用于确定活细胞中线粒体脱氢酶活性的经典方法。mtt分析法以活细胞代谢还原剂噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5二苯基溴化四氮唑；3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,mtt]为基础。mtt是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与nadp相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的mtt转化为不溶性的蓝紫色甲瓒(formazn)，而死细胞则无此功能。用dmso溶解甲瓒后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，即可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞株的抑制作用。
2.抗肿瘤活性实验
试样：实施例化合物
细胞系：肺腺癌细胞a549、慢性粒细胞性白血病细胞株k562和人肝癌细胞hepg2
试剂：噻唑蓝(mtt)、rpmi1640培养液(美国hyclone公司)、新生牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司)、抗生素(美国英杰生命技术公司)；96孔培养板(美国美国康宁公司)；二甲基亚砜(美国sigma公司)。
仪器：hfsafe-1500型超净工作台、forma3111co2培养箱(美国thermo公司)；ix70荧光倒置显微镜(日本olympus有限公司)；synergyhtx多功能微孔板检测仪(美国伯腾仪器有限公司)；puremaximals纯水仪(英国elga公司)。
实验操作：试样对人肺腺癌细胞a549、慢性粒细胞性白血病细胞株k562和人肝癌细胞hepg2的体外抑制活性测试。实验过程中，每种试样设置五个浓度梯度(浓度梯度设置范围为128μmol/l～8μmol/l)，每个浓度六个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔od值，检测波长490nm。
3.抗肿瘤活性评价
1)细胞抑制率计算：
2)ic50值计算
试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件spss13.0计算试样对细胞的半数抑制浓度ic50值列入下表。
活性测试结果表明，联苯二酚酰胺衍生物及其在药学上可接受的盐对人肺腺癌细胞a549、慢性粒细胞性白血病细胞株k562细胞或人肝癌细胞hepg2具有良好的抑制活性，可用于制备抗癌药物。