本发明属于医药
技术领域：
：，涉及一类新型的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其盐和其溶剂化物；还涉及该类化合物的制备方法和他们在制备抗肿瘤药物方面的用途。
背景技术：
：：癌症是因为控制细胞生长增殖机制的失常而引起的疾病。癌症的治疗方法目前主要包括放射疗法、手术疗法、药物疗法，靶向病灶的药物治疗已经成为当今临床肿瘤治疗的主要手段，但是由于肿瘤细胞耐药性产生快，现阶段人们对于肿瘤的转移与复发基本仍是束手无策。赖氨酸甲基转移酶能够对组蛋白和非组蛋白进行甲基化修饰，其异常表达与多种肿瘤的发生密切相关，十几年来一度成为表观遗传领域的一个热点。靶向赖氨酸甲基转移酶，逆转异常的组蛋白或非组蛋白甲基化水平被视为肿瘤治疗的又一新方法。prc2(polycombrepressivecomplex2)是一种多亚基蛋白的复合物，由ezh1(enhancerofzestehomologue1,kmt6b)或ezh2(enhancerofzestehomologue2,kmt6a)、suz12(suppressorofzeste12)、eed(embyronicectodermdevelopment)组成，用于催化h3k27三甲基化。pcr2复合物通过ezh2的set结构域对核小体蛋白h3k9、27位赖氨酸进行甲基化修饰，然后触发pcr1复合物在特定基因位点聚集从而沉默靶基因(cdkn1c、cdh1、runx3等)，促进细胞增殖。研究表明无论ezh2过表达或者发生set区域突变(y641f、y641n、a687v、a677g点突变)都导致h3k27me3的异常升高，促进多种类型肿瘤的生长发展，如乳腺癌、前列腺癌、白血病等。自2012年以来，knutson等通过hts得到第一个ezh2抑制剂后，陆续不断涌现出大量的ezh2小分子抑制剂。目前开发出来的ezh2小分子抑制剂主要分为嘧啶酮类、2-吡啶酮类、4-吡啶酮类、四甲基哌啶类、sah衍生物、丹参二醇类。结构中含有2-吡啶酮结构的ezh2抑制剂的研发占比较多，到目前为止进入临床研究的主要都是2-吡啶酮类ezh2抑制剂，包括cpi-1205(vaswanirg,etal.identificationof(r)-n-((4-methoxy-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydropyridin-3-yl)methyl)-2-methyl-1-(1-(1-(2,2,2-trifluoroethyl)piperidin-4-yl)ethyl)-1h-indole-3-carboxamide(cpi-1205),apotentandselectiveinhibitorofhistonemethyltransferaseezh2,suitableforphaseiclinicaltrialsforb-celllymphomas.jmedchem.2016,59(21):9928-9941.)用于b细胞淋巴瘤的治疗处于i期临床研究；tazemetostat(knutsonsk,etal.selectiveinhibitionofezh2byepz-6438leadstopotentantitumoractivityinezh2-mutantnon-hodgkinlymphoma.molcancerther.2014,13(4):842-54.)用于治疗非霍奇金淋巴瘤处于ii期临床研究；valemetostat(internationalnonproprietarynamesforpharmaceuticalsubstances(inn).whodruginformation,vol.31,no.4,2017.)用于治疗白血病和非霍奇金淋巴瘤。它们都属于吡啶酮类ezh2抑制剂。除此之外，还有许多其他ezh2抑制剂处于临床前研究。本发明在已有ezh2的研究基础之上，总结了ezh2抑制剂的构效关系，通过计算机辅助药物设计，设计合成了一系列新型以吡咯-3-甲酰胺为母核的ezh2抑制剂。意在开发更多结构多样的抑制剂，以从中寻找出适合作为药物的化合物。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题在于提供一类具有抗肿瘤活性的吡咯-3-甲酰胺类化合物，该类化合具有明显的抗肿瘤活性。解决上述技术问题所采用的技术方案是：本发明提供了式(i)或(ii)的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐：其中：x为氢，亚甲基，次甲基；r1为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r2为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r3为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；n为0或1；r5为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r5的位置可以是在吡咯的4位或5位；r4、r6为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基，3-7元环烷基，取代或者未取代的氨基甲基或羟甲基，取代或未取代的6-10元芳香基或苯并杂环基，取代或未取代的5-10元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基包含1-3个n、o或s的杂原子，取代基在芳杂环的任何位置；所述取代基为：卤素；-no2；-cn；-or；-sr；-n(r)2；-c(o)r；-co2r；-c(o)c(o)r；-c(o)ch2c(o)r；-s(o)r；-s(o)2r；-c(o)n(r)2；-so2n(r)2；-oc(o)r；-n(r)c(o)r；-n(r)n(r)2；c1-c6烷基；羟基、3-7元环烷基、c6-c10芳香基、5-10元杂环基或杂芳基；所述的杂环基或杂芳基含有1-3个n杂原子，其中r为c1～c6烷基；本发明优选如下的式(i)或(ii)的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐：其中：x为氢，亚甲基，次甲基；r1为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r2为氢，卤素，c1～c6的烷基，c1～c6烷氧基；优选为氢或c1～c6烷基。r3为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r5为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基；r5的位置可以是在吡咯的4位或5位；r4、r6为氢，卤素，c1～c6烷基，c1～c6烷氧基，3-7元环烷基，取代或者未取代的氨基甲基或羟甲基，取代或未取代的苯基或萘基或苯并杂环基，取代或未取代的5-6元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基包含1-3个n、o或s的杂原子，取代基在芳杂环或杂环基的任何位置；所述取代基为：卤素；-no2；-cn；-or；-sr；-n(r)2；-c(o)r；-co2r；-c(o)c(o)r；-c(o)ch2c(o)r；-s(o)r；-s(o)2r；-c(o)n(r)2；-so2n(r)2；-oc(o)r；-n(r)c(o)r；-n(r)n(r)2；c1-c6烷基；羟基、3-7元环烷基、c6-c10芳香基、5-10元杂环基或杂芳基；所述的杂环基或杂芳基含有1-3个n杂原子，其中r为c1～c6烷基，所述苯或萘的取代位置可位于苯环的邻、间、对位或萘环的任何位置。本发明优选如下的式(i)或(ii)的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐：x为氢，亚甲基，次甲基；r1为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；r2为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；优选为氢。r3为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；r5为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；r5的位置可以是在吡咯的4位或5位；r4、r6为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基，3-7元环烷基，取代或者未取代的氨基甲基或羟甲基，取代或未取代的苯基，苯并杂环基，萘基，取代或未取代的5-6元杂环基或杂芳基，所述杂环基或杂芳基包含1-3个n、o或s的杂原子，取代基在芳杂环或杂环基的任何位置；所述取代基为：卤素；-no2；-cn；-or；-sr；-n(r)2；-c(o)r；-co2r；-c(o)c(o)r；-c(o)ch2c(o)r；-s(o)r；-s(o)2r；-c(o)n(r)2；-so2n(r)2；-oc(o)r；-n(r)c(o)r；-n(r)n(r)2；c1-c6烷基；羟基、3-7元环烷基、c6-c10芳香基、5-10元杂环基或杂芳基；所述的杂环基或杂芳基含有1-3个n杂原子，其中r为c1～c6烷基，所述苯或萘的取代位置可位于苯环的邻、间、对位或萘环的任何位置。本发明优选如下的式(i)或(ii)的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐：r1为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；r2为氢，卤素，c1～c4的烷基，c1～c4烷氧基；优选为氢。r3为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；优选为氢、甲基、甲氧基、三氟甲基。r5为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基；r5的位置可以是在吡咯的4位或5位；r4、r6为氢，卤素，c1～c4烷基，c1～c4烷氧基，3-7元环烷基，取代或者未取代的氨基甲基或羟甲基，取代或未取代的苯或萘，取代或未取代的吡啶环、噻吩环、嘧啶环、吲哚环、喹啉环、异喹啉环、吡咯环、吡唑环、苯并咪唑、苯并吡咯环、苯并吡唑环，；取代或未取代的吡啶环、吲哚环、嘧啶环、吲哚环、喹啉环、异喹啉环、吡咯环、吡唑环、苯并咪唑、苯并吡咯环、苯并吡唑环，所述取代基为c1～c6烷基、甲氧基、c6-c10芳香基、5-10元杂环基或杂芳基，所述的杂环基或杂芳基含有1-3个n杂原子。本发明吡咯-3-甲酰胺类化合物优选下列化合物1～52中的任意一种：化合物1：1-苄基-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-01)化合物2：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-02)化合物3：1-(环丙基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-03)化合物4：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(2,3,4-三甲氧基苄基)-1h-吡咯-3--甲酰胺(d-04)化合物5：1-(4-溴苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-05)化合物6：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-06)化合物7：1-(4-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-07)化合物8：1-(3-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-08)化合物9：1-(2-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-09)化合物10：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-氟苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-10)化合物11：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-氟苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-11)化合物12：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-氟苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-12)化合物13：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-13)化合物14：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-14)化合物15：1-(2,4-二氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-15)化合物16：1-(3,5-二甲氧基苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-16)化合物17：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-甲氧基苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-17)化合物18：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-甲氧基苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-18)化合物19：1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-19)化合物20：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(4-甲基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-20)化合物21：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(萘-2-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-21)化合物22：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-(二甲氨基)乙基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-22)化合物23：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-羟乙基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-23)化合物24：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-01)化合物25：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-氟苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-02)化合物26：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-03)化合物27：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(3,4,5-三甲氧基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-04)化合物28：1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-05)化合物29：1-(3,4-二甲氧基苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-06)化合物30：1-(4-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-07)化合物31：1-(3-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-08)化合物32：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-氟苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-09)化合物33：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-10)化合物34：1-(2,4-二氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-11)化合物35：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-12)化合物36：1-(3,5-二甲氧基苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-13)化合物37：1-(环丙基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-14)化合物38：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(萘-2-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-15)化合物39：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-甲基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-16)化合物40：2,4-二甲基-n-((4-甲基-2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-17)化合物41：2,4-二甲基-n-((2-氧代-2,5,6,7-四氢-1h-环戊二烯并[b]吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-18)化合物42：2,4-二甲基-n-((4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-19)化合物43：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(吡啶-4-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-20)化合物44：2,4-二甲基-n-((6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-21)化合物45：n-((6-异丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-22)化合物46：n-((6-异丁基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-23)化合物47：2,4-二甲基-n-((2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-24)化合物48：n-((6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-25)化合物49：n-((6-乙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-26)化合物50：n-((5,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-27)化合物51：n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-28)化合物52：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(1-(4-(三氟甲基)苯基)乙基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-29)本发明所述化合物的制备方法如下：当r1和r3都为甲基时，经过环合、还原两步得到化合物片段：当r3不为甲基时，以取代的酮或环酮为原料，经过缩合、环合、还原三步得到化合物片段：当r5取代基位置在吡咯4位时，以乙酰乙酸乙酯为起始原料，经过hantzsch吡咯合成、脱羧、烃化、水解、缩合反应得到一系列化合物：当r5取代基在吡咯5位时，以乙酰乙酸乙酯为起始原料，经过knorr吡咯合成、烃化、水解、缩合反应得到一系列化合物：各步的反应条件如下：(a)acetylacetone,k2co3,h2o,rt；(b)ni,h2,meoh,nh4oh,60℃；(c)na,ether；(d)piperidineacetate,reflux；(e)ni,h2,meoh,nh4oh,60℃；(f)(i)nano2,hoac,rt,(ii)ethylacetoacetate,zn,hoac,70℃；(g)10nhclaqueous；(h)substitutedbenzylchloride(bromine),nah,dmf,0℃-rt；(i)(i)60％naohaqueous,70℃,ii(6nhclaqueous)；(j)edci,hobt,et3n,dcm,rt；(k)chloroacetone,nh4oh,0℃-rt；(l)substitutedbenzylchloride(bromine),nah,dmf,0℃-rt；(m)(i)60％naohaqueous,70℃,(ii)6nhclaqueous；(n)edci,hobt,et3n,dcm,rt.本发明所述的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐可以与药学上可接受的载体制备药物组合物。本发明所述的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐或其药物组合物可以与药学上可接受的载体按照各种制剂的常规制备工艺制成药物制剂，所述的药物制剂可以是片剂、颗粒剂、胶囊剂等。本发明的吡咯-3-甲酰胺类化合物及其药学上可接受的盐或其药物组合物对肿瘤细胞的增殖具有良好的抑制作用，表明其可用于制备抗肿瘤药物。该类化合物即可以独自用药，也可与其它药物联合使用，也可以其盐或溶剂化物的形式用于抗肿瘤药物的制备。附图说明图1为ezh2蛋白在nci-h1650、hcc827、nci-h1975、pc-9、hcc4006、a549、h460、nci-h446、nci-h1688、k562细胞系中的表达水平图2为h3k27me3蛋白在nci-h1650、hcc827、nci-h1975、pc-9、hcc4006、a549、h460、nci-h446、nci-h1688、k562细胞系中的表达水平图3为化合物gsk126、d-01、d-02、d-03、d-04在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图4为化合物gsk126、d-01、d-05、d-06、d-07在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图5为化合物gsk126、d-08、d-09、d-10、d-11在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图6为化合物gsk126、d-12、d-13、d-14、d-15在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图7为化合物gsk126、d-16、d-17、d-18、d-19在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图8为化合物gsk126、d-22、d-23在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图9为化合物tazemetostat、dm-01、dm-02在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图10为化合物tazemetostat、dm-03在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图11为化合物tazemetostat、dm-04、dm-05在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图12为化合物tazemetostat、dm-06、dm-07在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图13为化合物tazemetostat、dm-08在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图14为化合物tazemetostat、dm-09、dm-10在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图15为化合物tazemetostat、dm-11、dm-12在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图16为化合物tazemetostat、dm-13、dm-14在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响图17为化合物tazemetostat、dm-15、dm-16在5μm和10μm浓度下对k562细胞h3k27me3蛋白表达水平的影响。具体实施方式：下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。下面实施例中所用试剂均为分析纯。化合物结构确定所用的核磁共振数据由brukerarx-600核磁共振仪测定，内标为tms；电喷雾电离质谱(esi-ms)由agilent1100seriesmsdtrap(sl)测定。化合物熔点使用x-4型数字显示熔点仪测定(温度未经校正)。薄层分离使用自制gf254硅胶板，所用试剂均为分析纯或化学纯。实施例1化合物的制备4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-腈的制备向250ml三口瓶中加入13.8g(0.1mol)碳酸钾，100ml水溶解，加入11.0g(0.1mol)乙酰丙酮，于室温条件下分批加入8.4g(0.1mol)氰基乙酰胺，加料过程中温度缓慢上升10℃左右，并随着反应的进行有大量固体析出，24h后tlc(meoh:dcm＝1:20)停止反应，抽滤，滤饼用水洗涤三次，干燥得到14g白色固体，固体用1l甲醇重结晶，得到13.0g白色针状固体，收率：87.8％。m.p.280-281℃(文献值：286℃)，esi-ms(m/z):149.1[m+h]+,1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):6.16(s,1h),2.30(s,3h),2.22(s,3h)。3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐的制备向500ml单口瓶中加入5.0g(0.034mol)4,6-二甲基-3-氰基嘧啶-2-酮，250ml甲醇，不全溶，25ml25％氨水，约5.0g镍，氩气置换三次，氢气置换三次，升温至50℃，反应11h后tlc反应完全，停止反应，反应液过硅藻土抽滤，蒸干滤液得到6.3g米黄色固体。用甲醇溶解产品，置于冰盐浴中，搅拌下滴加4n盐酸乙醇溶液20ml，滴毕，继续于冰浴下搅拌1h后析出大量白色固体，抽滤得到白色固体，用乙醇洗涤两次，抽滤，干燥得到5.0g白色固体，收率为96.9％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.84(br,1h),8.04(s,3h),5.97(s,1h),3.77(s,1h),2.21(s,3h),2.16(s,3h)。4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈的制备向500ml三口瓶中加入300ml无水乙醚，称取3.2g(0.14mol)钠，剪碎加入到反应瓶中，反应装置置于冰盐浴冷却，向滴液漏斗中加入8.0g(0.14mol)丙酮和10.3g(0.14mol)甲酸乙酯，缓慢滴加，维持温度不超过20℃，1h后滴加完毕，并伴随大量固体产生，继续于冰浴下反应5h后，发现钠全部溶解，停止反应，抽滤，滤饼用无水乙醚洗涤，于红外下烘干得到10.9g近白色固体，直接用于下一步反应。向100ml单口瓶中加入10g(0.09mol)3-氧代丁-1-烯-1-酸钠，8.2g(0.097mol)氰基乙酰胺，加入50ml水溶解产品，于室温下搅拌10min后，向反应液中加入6ml乙酸哌啶，升温至100℃继续反应2h后，停止反应。用冰浴降温，用10nhcl调ph至4-5，析出大量棕色固体，抽滤，滤饼分别用水、乙醚洗涤，干燥得到9.0g棕色固体，用150ml甲醇重结晶得到7.0g黄色固体，收率为74.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.56(br,1h),8.01(d,j＝6.1hz,1h),6.21(d,j＝5.7hz,1h),2.27(s,3h).根据实施例如上方法合成了一系列相似片段：5,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-腈20.0g土黄色固体，收率为54.1％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.46(br,1h),7.94(s,1h),2.23(s,3h),1.98(s,3h).6-异丁基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈7.5g黄色固体，收率为35.5％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.52(br,1h),8.04(d,j＝7.3hz,1h),6.21(d,j＝7.4hz,1h),2.41(d,j＝7.4hz,2h),1.98-1.91(m,1h),0.87(d,j＝6.6hz,6h).2-氧代-2,5,6,7-四氢-1h-环戊二烯并[b]吡啶-3-甲腈7.2g黄色固体，收率为20.5％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.75(br,1h),8.01(s,1h),2.80(t,j＝7.6hz,2h),2.64(t,j＝7.3hz,2h),2.06-2.01(m,2h).2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-甲腈7.0g黄色固体，收率为25.1％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.64(br,1h),7.89(s,1h),2.56(t,j＝6.1hz,2h),2.42(t,j＝6.2hz,2h),1.70-1.60(m,4h).6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈13.0g灰白色固体，收率为23.6％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.27(br,1h),6.19(s,1h),2.52-2.48(q,4h),2.32(s,3h),1.15(t,j＝7.6hz,3h).6-异丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈12.0g近白色固体，收率为28.5％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.27(br,1h),6.17(s,1h),2.36(d,j＝7.4hz,2h),2.32(s,3h),1.97-1.90(m,1h),0.87(d,j＝6.6hz,6h).4-甲基-2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-甲腈20.0g白色固体，收率为31.3％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.32(br,1h),2.72(t,j＝5.9hz,2h),2.38(t,j＝6.3hz,2h),2.21(s,3h),1.68-1.66(m,4h).2-氧代-6-丙基-1,2-二氢吡啶-3-腈4.0g近白色固体，收率为41.2％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.54(br,1h),8.04(d,j＝7.4hz,1h),6.23(d,j＝7.3hz,1h),2.52-2.49(t,2h),1.63-1.57(m,2h),0.88(t,j＝7.4hz,3h).4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢吡啶-3-腈15.0g近白色固体，收率为25.0％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.29(br,1h),6.19(s,1h),2.46(t,j＝7.4hz,2h),2.32(s,3h),1.64-1.56(m,2h),0.88(t,7.4hz,3h).雷尼镍的活化方法如下：于2l烧杯中，把190g氢氧化钠溶解在800ml蒸馏水中，搅拌，在冰浴上冷至10℃。在搅拌下，把150g镍一铝合金分批小量加到碱液中，加入的速度应控制在使溶液温度不超过25℃(在冰浴上)。当全部加完(约需2小时)后，停止搅拌，将烧杯从冰浴上取下，使反应液升至室温。当氢气发生缓慢时，可在沸水浴上徐徐加热(避免升温太快，以防产气过多，使反应液溢出)，直到气泡发生再度变慢为止(约8-12小时，此时溶液的体积应靠补加蒸馏水维持基本恒定)。然后静置，让镍粉沉下，倾去上清液。加蒸馏水至原体积，搅拌溶液使镍粉悬浮，再次静置使镍粉沉下，倾去上清液。然后转移到2l烧杯中，储去上清液，加入250ml含25g氢氧化钠的水溶液，搅拌，放置，倾去上清液。再加入500ml蒸馏水，搅拌，放置，倾去上清液。如此水洗重复数次，直到洗出液对ph试纸呈中性后，再洗10次(约洗涤20-40次)。转移到充有水的磨口瓶中(不得与空气接触)，催化剂必须保存在液面下，悬浮在液体中的w-2型拉尼镍重约70g。上述含氰基化合物的还原的一般方法如下所示：向100ml单口瓶中加入2g氰基化合物，20ml甲醇，5ml25％氨水，2g镍，氩气置换三次，氢气置换三次，升温至50℃，反应5-11h后tlc(dcm:meoh＝10:1)反应完全，停止反应，反应液过硅藻土抽滤，蒸干滤液得到产物。于冰浴下向剩余物中滴加氯化氢的乙酸乙酯溶液，搅拌30min后，析出白色固体，抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，干燥得到产品的盐酸盐。得到一系列氨基化合物如下所示：2,5-二甲基-1h-吡咯-3-羧酸乙酯的制备取100ml三颈瓶加入32ml25％-28％(0.229mol)的氨水，冰浴下滴加10g(76.8mmol)乙酰乙酸乙酯，滴加过程中析出白色固体，控制温度<20℃，15min滴毕。然后滴加7.84g(76.8mmol)2-氯代丙酮，滴加过程中白色固体逐渐减少，反应液逐渐变黄，4min滴毕，之后移至室温35℃反应3.5h，tlc(ea:pe＝1:5)显示反应完全。在冰浴下滴加浓盐酸调ph至6，析出大量淡黄色固体，抽滤得到6.3g，收率48.8％。1hnmr(600mhz,cdcl3),δ(ppm)：7.94(br,1h),6.20(d,j＝1.98hz,2h),4.25(q,j＝7.08hz,2h),2.48(s,3h),2.19(s,3h),1.32(t,j＝7.14hz,3h).2,5-二甲基-1h-吡咯-3-羧酸的制备向250ml单口瓶中加入10g(0.06mol)2,5-二甲基-1h-吡咯-3-羧酸乙酯，60％氢氧化钾水溶液[16.8g(0.5mol)+28ml水]，升温至90℃。11h后发现固体未完全溶解，补加16.8g(0.5mol)氢氧化钾，20ml水，反应过夜，次日固体全部溶解后，倒入等体积的水中，用冰浴降温，用浓盐酸调ph5-6，控制温度在30℃以下，析出大量棕色固体，抽滤，滤饼水洗三次，自然晾干得到8g棕色固体。n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-06)向25ml单口瓶中加入2,5-二甲基-1h-吡咯-3-羧酸(0.3g,2.16mmol)，edci(0.62g,3.23mmol)，hobt(0.437g,3.23mmol)，et3n(1.09g,10.8mmol)，二氯甲烷10ml(无水硫酸镁干燥)，室温下搅拌1h，然后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(0.4g,2.16mmol)，室温搅拌5h，产生较多固体，加入水10ml搅拌均匀后抽滤，得到0.2g棕色固体，收率为33.9％。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.45(s,1h),10.62(s,1h),7.18(t,j＝5.22hz,1h),5.96(d,1h),5.84(s,1h),4.18(d,j＝5.28hz,2h),2.33(s,3h),2.15(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.3,163.7,149.1,142.8,130.8,124.8,123.0,114.2,108.0,104.9,34.9,19.3,18.6,13.0,12.8.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc19h21n2o3na:296.1369；found:296.1379.当r5为甲基且位置在吡咯环的5位时，中间体的合成一般方法：向25ml三颈瓶中加入2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酸乙酯(1equiv)，用无水dmf(3ml)溶解，置于冰盐浴中冷却至0℃以下，分批缓慢加入60％(2equiv)钠氢，完毕后在冰浴下继续搅拌30min，后于冰浴下滴加取代的卤化物(1.5equiv)，滴毕后在室温下反应6h，tlc监测(ea:pe＝1:5)，反应完全后将反应液倒入20ml水中，加入二氯甲烷萃取(20ml×3)，合并有机层，分别用水(10ml×1)，饱和氯化钠溶液(10ml×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤蒸干得到得到烃化产物中间体。水解的一般操作过程如下：直接向上一步烃基化产物中加入5ml乙醇，60％naoh(30equiv)，油浴90℃反应3h，tlc监测，反应液倒入20ml水，于冰浴条件下用浓盐酸调ph至1，析出固体，抽滤得到目标产物。缩合反应的一般合成方法如下：向25ml单口瓶中加入上一步水解产物(1equiv)，edci(1.5equiv)，hobt(1.5equiv)，et3n(5equiv)，二氯甲烷10ml(无水硫酸镁干燥)，室温下搅拌1h后，然后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(1equiv)，室温搅拌12h，产生较多固体，tlc监测反应完全后，加入水10ml搅拌均匀后抽滤，滤饼分别用1n盐酸、饱和碳酸氢钠、水洗涤，干燥得到目标产物。根据上述合成方法主要合成式iii结构的化合物(d-01～d-05,d-07～d-23)。1-苄基-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-01)0.34g白色固体，收率为42.5％。m.p.178-181℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm)：11.47(s,1h),7.35(t,j＝5.2hz,1h),7.31(t,j＝7.5hz,2h),7.23(t,j＝7.4hz,1h),6.87(d,j＝7.4hz,2h),6.19(s,1h),5.85(s,1h),5.07(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),2.35(s,3h),2.18(s,3h),2.11(s,3h),2.04(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.2,163.7,149.3,142.9,138.5,132.4,129.1,127.5,127.3,126.1,122.9,114.2,108.1,105.7,46.3,35.0,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h25n3o2na:386.1839；found:386.1847.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-02)0.15g白色固体，收率为33.3％。m.p.89-92℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.45(br,1h),7.35(t,j＝5.1hz,3h),7.21-7.24(m,2h),6.80-6.82(dd,j＝2.2,8.2hz,2h),6.44(s,1h),6.38(d,j＝7.6hz,1h),6.19(s,1h),5.85(s,1h),5.03(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),3.40(s,3h),2.35(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.04(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.2,163.7,160.0,149.3,142.9,140.2,132.4,130.3,127.3,122.9,118.0,114.2,112.4,112.1,108.0,55.4,46.2,35.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h27n3o3na:416.1945；found:416.1955.1-(环丙基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-03)0.15g白色固体，收率为30.0％。m.p.108-110℃。1hnmr(600mhz,d6-dmso):δ(ppm):11.51(s,1h),7.25(t,j＝6.8hz,5.2hz,1h),6.08(s,1h),5.84(s,1h),4.19(d,j＝5.3hz,2h),3.68(d,j＝6.5hz,2h),2.44(s,3h),2.16(s,3h),2.13(s,3h),2.10(s,3h),1.04-0.99(m,1h),0.48-0.45(m,2h),0.27-0.25(m,2h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.2,162.7,148.1,141.8,130.7,125.6,121.9,112.8,106.9,104.3,45.7,33.9,18.3,17.6,11.7,10.9,10.5,3.0.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc19h25n3o2na:350.1839；found:350.1836.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(2,3,4-三甲氧基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-04)0.10g白色固体，收率为35.7％。m.p.180-182℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.45(s,1h),7.35(t,j＝5.2hz,1h),6.20(s,1h),6.19(s,2h),5.85(s,1h),6.44(s,1h),4.98(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),3.66(s,6h),3.62(s,3h),2.38(s,3h),2.16(s,3h),2.11(s,3h),2.08(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):167.4,165.2,163.7,153.6,149.3,142.9,136.9,134.2,132.4,127.4,114.2,108.0,105.6,103.4,60.5,56.3,46.4,35.1,19.3,18.6,12.5,11.4.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc25h31n3o5na:476.2156；found:476.2161.1-(4-溴苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-05)0.33g白色固体，收率为76.7％。m.p.148-151℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.46(s,1h),7.53-7.50(m,2h),7.37(t,j＝5.2hz,1h),6.82(d,j＝8.5hz,2h),6.21(s,1h),5.85(s,1h),5.05(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.03(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.1,163.7,149.3,142.9,138.0,132.3,132.1,128.3,127.2,122.9,120.5,114.4,108.0,105.8,45.8,35.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24brn3o2na:464.0944；found:466.0937.1-(4-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-07)0.30g白色固体，收率为66.7％。m.p.165-167℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.46(s,1h),7.39-7.36(m,3h),6.88(d,j＝8.5hz,2h),6.21(d,j＝0.5hz,1h),5.85(s,1h),5.07(s,2h),4.20(d,j＝5.3hz,2h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.03(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.1,163.7,149.3,142.9,137.6,132.3,132.0,129.1,128.0,127.2,122.9,114.4,108.0,105.8,45.7,35.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:420.1449；found:420.1441.1-(3-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-08)0.30g白色固体，收率为66.7％。m.p.128-130℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.46(s,1h),7.39(t,j＝5.2hz,1h),7.37-7.31(m,2h),6.91(s,1h),6.79(d,j＝7.6hz,1h),6.22(d,j＝0.5hz,1h),5.85(s,1h),5.10(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),2.34(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.04(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.1,163.7,149.3,142.9,141.2,133.9,132.3,131.1,127.5,127.3,125.9,124.7,122.9,114.4,108.0,105.9,45.8,35.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:420.1449；found:420.1452.1-(2-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-09)0.60g白色固体，收率为66.7％。m.p.219-221℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.47(s,1h),7.51(d,j＝7.9hz,1h),7.41(t,j＝5.2hz,1h),7.31-7.24(m,2h),6.27(s,1h),6.16(d,j＝7.5hz,1h),5.86(s,1h),5.09(s,2h),4.21(d,j＝5.2hz,2h),2.32(s,3h),2.18(s,3h),2.11(s,3h),2.01(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.0,163.7,149.3,142.9,135.6,132.4,131.3,129.8,129.4,128.3,127.3,126.7,122.9,114.6,108.0,106.0,44.4,35.1,19.4,18.6,12.1,11.0.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:420.1449；found:420.1454.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-氟苄基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-10)0.19g白色固体，收率为41.3％。m.p.219-220℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.46(s,1h),7.39-7.35(m,2h),7.09-7.06(m,2h),6.68-6.66(m,2h),6.22(d,j＝0.7hz,1h),5.85(s,1h),5.10(s,2h),4.20(d,j＝5.2hz,2h),2.35(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.04(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.1,163.7,162.9(j＝242.8hz),149.3,142.9,141.6(j＝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r(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.2,163.7,149.3,148.1,146.7,142.9,132.3,127.3,122.9,119.1,114.3,108.9,108.0,107.7,105.7,101.5,46.0,35.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h25n3o4na:430.1737；found:430.1744.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(4-甲基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-20)0.42g白色固体，收率为59.6％。m.p.146-147℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.48(s,1h),7.35(s,1h),7.12(d,j＝7.8hz,2h),6.77(d,j＝7.9hz,2h),6.18(s,1h),5.86(s,1h),5.01(s,2h),4.20(d,j＝4.9hz,2h),2.35(s,3h),2.25(s,3h),2.18(s,3h),2.11(s,3h),2.03(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.2,163.7,149.3,142.9,136.6,135.4,132.3,129.7,127.3,126.0,122.9,114.1,108.0,105.6,46.1,35.1,21.1,19.4,18.6,12.4,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h27n3o2na:400.1995；found:400.1994.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,5-二甲基-1-(萘-2-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-21)0.25g白色固体，收率为56.8％。m.p.148-149℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.47(s,1h),8.19(d,j＝8.3hz,1h),7.99(d,j＝8.0hz,1h),7.83(d,j＝8.2hz,1h),7.66-7.59(m,2h),7.42(t,j＝5.0hz,1h),7.37(t,j＝7.6hz,1h),6.30(s,1h),6.19(d,j＝7.0hz,1h),5.87(s,1h),5.55(s,2h),4.23(d,j＝5.1hz,2h),2.34(s,3h),2.20(s,3h),2.12(s,3h),2.02(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.2,163.8,149.3,142.9,134.1,133.5,132.6,130.2,129.1,127.8,127.6,126.9,126.6,126.2,123.4,122.9,121.8,114.4,108.0,105.8,44.4,35.1,19.4,18.7,12.2,11.1.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc26h27n3o2na:436.1995；found:436.2007.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-(二甲氨基)乙基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-22)0.10g白色固体，收率为30.3％。m.p.114-116℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.44(s,1h),7.25(t,j＝5.2hz,1h),6.06(d,j＝0.4hz,1h),5.84(s,1h),4.18(d,j＝5.3hz,2h),3.81(t,j＝7.3hz,2h),2.44(s,3h),2.34(t,j＝7.3hz,2h),2.17(s,6h),2.15(s,3h),2.13(s,3h),2.10(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.1,162.6,148.1,141.8,130.9,125.8,121.9,112.8,106.9,106.8,104.2,58.0,44.7,40.3,33.9,20.0,18.3,18.2,17.6,11.3,10.1.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc19h28n4o2na:367.2104；found:367.2106.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-羟乙基)-2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(d-23)0.20g白色固体，收率为40.0％。m.p.188-189℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.44(s,1h),7.22(t,j＝5.0hz,1h),6.06(s,1h),5.84(s,1h),4.89(t,j1＝5.2hz,1h),4.18(d,j＝5.2hz,2h),3.80(t,j＝6.2hz,2h),3.51-3.48(q,j＝5.9hz,11.7hz,2h),2.43(s,3h),2.15(s,3h),2.12(s,3h),2.10(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.3,163.7,149.2,142.9,132.3,127.2,123.0,113.7,108.0,105.2,60.8,45.7,35.0,19.3,18.6,12.6,11.4.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc17h23n3o3na:340.1632；found:340.1635.2-(叔丁基)-4-乙基3,5-二甲基-1h-吡咯-2,4-二羧酸酯的制备向500ml三口瓶中加入40g(0.25mol)乙酰乙酸叔丁酯，80ml冰醋酸，置于冰盐浴中降温至10℃，缓慢滴加18.8g(0.27mol)亚硝酸钠水溶液(28ml)，维持温度在8-10℃之间，40min后滴加完毕，撤去冰浴，于室温下继续反应，2.5h后，将反应瓶置于冰水浴中，分批加入32.8g(0.5mol)锌粉，维持温度在25-30℃之间，加毕，升温至回流1h，停止反应，降至室温，有大量白色固体析出，抽滤，滤饼用冰醋酸洗涤两次，水洗两次，抽滤得到黄色固体，干燥得到20.0g粗品，用120ml95％乙醇重结晶得到16.0g纯品，收率为24.0％。1hnmr(600mhz,cdcl3):δ(ppm):8.90(br,1h),4.30-4.27(q,j＝7.1hz,14.2hz,2h),2.53(s,3h),2.50(s,3h),1.57(s,9h),1.36(t,j＝7.1hz,3h).2,4-二甲基-1h-吡咯-3-羧酸乙酯的制备向100ml单口瓶中加入原料(10g,0.037mol)，乙醇50ml，加热使原料全部溶解，然后加入10n的盐酸(8ml,0.075mol)，tlc监测(ea:pe＝1:5)，反应完全后减压蒸馏除去乙醇，加入水50ml和二氯甲烷萃取(50ml×3)，水洗(50ml×1)，饱和氯化钠洗(50ml×1)，无水硫酸镁干燥，抽滤，减压浓缩得到2.7g棕色固体，收率为43.5％。1hnmr(600mhz,cdcl3):δ(ppm):8.03(br,1h),6.35(s,1h),4.30-4.25(q,j＝3.4hz,14.3hz,2h),2.49(s,3h),2.24(s,3h),1.35(t,j＝7.1hz,3h).当r5为甲基且处于吡咯环的4位时，化合物中间体的一般合成方法：向25ml三颈瓶中加入无水dmf3ml，60％的钠氢(2equiv)，将反应液冷却到0℃以下，滴加2,5-二甲基-1h-吡咯-3-甲酸乙酯(1equiv,加少量无水dmf溶解)，滴加完毕后在室温下反应30min。反应液再次冷却到0℃，滴加取代的卤化苄(1.5equiv)，滴毕后在室温下反应6h，tlc(ea:pe＝1:5)监测，反应完全后将反应液倒入20ml水中，加入二氯甲烷萃取(20ml×3)，合并有机层，有机层水洗(10ml×1)，饱和氯化钠洗(10ml×1)，无水硫酸钠干燥，抽滤蒸干得到棕褐色油状液体，直接用于下一步水解反应。水解步骤的一般合成方法：向上一步烃基化产物中加入5ml乙醇，60％naoh(30equiv)，油浴90℃反应3h，tlc监测，反应液倒入20ml水中，用稀盐酸调ph至1，析出固体，抽滤得到目标产物。缩合反应的一般合成方法：向25ml单口瓶中加入上一步水解产物(1equiv)，edci(1.5equiv)，hobt(1.5equiv)，et3n(5equiv)，二氯甲烷10ml(无水硫酸镁干燥)，室温下搅拌1h，然后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1h)-酮盐酸盐(1equiv)，室温搅拌6h，产生大量固体，tlc监测反应完全后直接抽滤，滤饼分别用1n盐酸、饱和碳酸氢钠、水洗涤，干燥得到目标产物。根据上述的合成方法，合成了如式iv和式v结构通式的化合物：n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-01)0.60g白色固体，收率为72.5％。m.p.180-182℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.52(br,1h),7.70(d,j＝8.22hz,2h),7.21-7.20(m,3h),6.56(s,1h),5.86(s,1h),5.14(s,2h),4.22(d,2h),2.21(d,6h),2.1(s,3h),2.08(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,147.8,142.7,141.9,130.3,127.3,127.2(j＝36.7hz),126.6,124.9(j＝3.5hz),123.6(j＝270.3hz),121.9,118.9,115.8,115.2,106.9,48.0,34.2,18.3,17.6,11.2,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h24f3n3o2na:454.1713；found:454.1704.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-氟苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-02)0.34g白色固体，收率为73.9％。m.p.173-175℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.18(t,j＝5.4hz,1h),7.17-7.13(m,2h),7.09-7.06(m,2h),6.52(s,1h),5.85(s,1h),4.99(s,2h),4,22(d,j＝5.4hz,2h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,160.7(j＝241.6hz),147.7,141.9,133.9(j＝3.0hz),130.2,128.0(j＝8.5hz),121.9,118.7,115.3(j＝87.1hz),114.7(j＝21.0hz),106.9,47.7,34.2,18.3,17.5,11.2,10.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24fn3o2na:404.1745；found:404.1745.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-03)0.16g白色固体，收率为36.4％。m.p.174-175℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.64(d,1h),7.56(t,j＝7.7hz,1h),7.47(s,1h),7.25-7.21(m,2h),6.57(s,1h),5.86(s,1h),5.13(s,2h),4.22(d,j＝5.3hz,2h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.07(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.1,163.2,148.2,142.4,139.8,130.7,130.6,129.7,129.1(j＝31.2hz),124.0(j＝281.1hz),123.9(j＝3.8hz),123.1(j＝3.9hz),122.4,119.3,116.2,115.7,107.4,48.4,34.7,18.8,18.1,11.7,10.8.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h24f3n3o2na:454.1713；found:454.1730.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(3,4,5-三甲氧基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-04)0.23g白色固体，收率为53.5％。m.p.131-132℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.50(br,1h),7.18(t,j＝5.2hz,1h),6.52(s,1h),6.42(s,2h),5.85(s,1h),4.89(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),3.70(s,6h),3.62(s,3h),2.27(s,3h),2.2(s,3h),2.1(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.7,162.7,152.4,147.7,141.9,136.1,133.1,130.3,121.9,118.6,115.4,114.9,106.9,103.9,59.4,55.3,48.6,34.2,18.3,17.6,11.3,10.4.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc25h31n3o5na:476.2156；found:476.2139.1-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-05)0.44g白色固体，收率为65.2％。m.p.223-225℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.50(br,1h),7.17(t,j＝5.3hz,1h),6.85(d,j＝8.0hz,1h),6.63(d,j＝1.4hz,1h),6.53-6.52(dd,j＝1.4hz,7.9hz,1h),6.50(s,1h),5,97(s,2h),5.85(s,1h),4.88(s,2h),4.22(d,j＝5.5hz,2h),2.22(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.05(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,147.7,146.9,145.7,141.9,131.4,130.2,121.9,119.4,118.6,115.5,114.8,107.6,106.7,100.4,48.2,34.2,18.3,17.5,11.2,10.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h25n3o4na:430.1737；found:430.1733.1-(3,4-二甲氧基苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-06)0.17g白色固体，收率为43.9％。m.p.138-140℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.16(t,j＝5.3hz,1h),6.88(d,j＝8.3hz,1h),6.79(d,j＝1.7hz,1h),6.51-6.47(m,2h),5.86(s,1h),4.89(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),3.7(s,6h),2.25(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,149.2,148.7,148.5,143.0,131.4,130.9,123.0,119.7,119.4,116.4,115.8,112.3,111.4,108.0,56.0,49.3,35.3,19.4,18.6,12.4,11.4.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc24h29n3o4na:446.2050；found:446.2067.1-(4-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-07)0.07g白色固体，收率为46.7％。m.p.197-198℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.46(br,1h),7.39(d,j＝8.4hz,2h),7.20(t,j＝5.1hz,1h),7.04(d,j＝8.5hz,2h),6.53(s,1h),5.85(s,1h),5.01(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),2.20(s,3h),2.19(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,147.7,141.9,136.8,131.1,130.2,127.9,127.8,121.8,118.8,115.6,115.0,106.9,47.7,34.2,18.3,17.6,11.2,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:420.1449；found:420.1435.1-(3-氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-08)0.38g白色固体，收率为84.4％。m.p.220-222℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.37-7.31(m,2h),7.21(t,j＝5.3hz,1h),7.09(s,1h),6.97(d,j＝7.4hz,1h),6.54(s,1h),5.86(s,1h),5.03(s,2h),4.22(d,j＝5.5hz,2h),2.20(s,6h),2.10(s,3h),2.07(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,147.8,141.9,140.4,132.7,130.2,130.0,126.6,125.8,124.6,121.9,118.8,115.7,115.1,107.0,47.8,34.2,18.3,17.6,11.2,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:420.1449；found:420.1454.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-氟苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-09)0.32g白色固体，收率为69.6％。m.p.230-231℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.50(br,1h),7.38-7.35(m,1h),7.21(t,j＝5.3hz,1h),7.10-7.06(m,1h),6.86-6.82(m,2h),6.54(s,1h),5.86(s,1h),5.04(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),2.20(s,6h),2.10(s,3h),2.07(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,162.8(j＝242.7hz),148.8,143.0,141.8(j＝6.8hz),131.2(j＝32.9hz),131.1,123.0(j＝2.0hz),122.9,119.9,116.8,116.2,114.5(j＝20.8hz),113.7(j＝21.9hz),108.0,48.9,35.3,19.4,18.6,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24fn3o2na:404.1745；found:404.1752.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(2-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-10)0.28g白色固体，收率为62.2％。m.p.176-177℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.25(m,1h),7.19(t,j＝5.3hz,1h),7.00(d,j＝8.1hz,1h),6.86(t,j＝7.4hz,1h),6.51(d,j＝7.1hz,1h),6.45(s,1h),5.86(s,1h),4.91(s,2h),4.23(d,j＝5.4hz,2h),3.83(s,3h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,156.5,148.8,143.0,131.6,129.1,127.5,126.4,123.0,120.9,119.9,116.3,115.9,111.0,108.0,55.8,44.8,35.3,19.4,18.6,12.4,11.1.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h27n3o3na:416.1945；found:416.1954.1-(2,4-二氯苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-11)0.28g白色固体，收率为62.2％。m.p.239-240℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.52(br,1h),7.66(d,j＝2.1hz,1h),7.39-7.37(dd,j＝2.1hz,8.4hz,1h),7.25(t,j＝5.3hz,1h),6.50-6.46(m,2h),5.86(s,1h),5.06(s,2h),4.23(d,j＝5.5hz,2h),2.21(s,3h),2.18(s,3h),2.11(s,3h),2.07(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.5,162.7,147.7,141.9,134.3,132.0,131.4,130.4,128.4,128.1,127.3,121.8,118.8,115.9,115.4,106.9,45.9,34.2,18.3,17.6,11.2,10.0.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cl2n3o2na:454.1060；found:454.1065.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苄基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-12)0.30g白色固体，收率为66.7％。m.p.192-194℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.23(t,j＝7.9hz,1h),7.19(t,j＝5.3,1h),6.83-6.81(m,1h),6.61(s,1h),6.57(d,j＝7.6hz,1h),6.51(s,1h),5.85(s,1h),4.97(s,2h),4.22(d,j＝5.3hz,2h),3.71(s,3h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,159.9,148.8,143.0,140.0,131.4,130.2,123.0,119.9,119.1,116.5,115.9,113.1,112.6,108.0,55.5,49.4,35.3,19.4,18.6,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h24cln3o2na:416.1945；found:416.1941.1-(3,5-二甲氧基苄基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-13)0.29g白色固体，收率为65.9％。m.p.216-217℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.50(br,1h),7.19(t,j＝5.3,1h),6.50(s,1h),6.38(t,j＝2.1hz,1h),6.16(d,j＝2.1hz,2h),5.85(s,1h),4.91(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),3.69(s,6h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.7,160.1,147.7,141.9,140.1,130.4,121.9,118.9,115.4,114.8,106.9,104.2,97.7,54.5,48.4,34.2,18.3,17.6,11.2,10.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc24h29n3o4na:446.2050；found:446.2065.1-(环丙基甲基)-n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-14)0.29g白色固体，收率为68.0％。m.p.192-193℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(s,1h),7.12(t,j＝5.2hz,1h),6.46(s,1h),5.86(s,1h),4.23(d,j＝5.4hz,2h),3.58(d,j＝6.9hz,2h),2.30(s,3h),2.21(s,3h),2.10(s,3h),2.04(s,3h),1.08-1.01(m,1h),0.48-0.45(m,2h),0.29-0.27(m,2h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.8,162.7,147.6,141.9,129.8,122.0,118.0,114.9,114.3,106.9,49.0,34.2,18.3,17.6,11.3,11.1,10.2,2.9.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc19h25n3o2na:350.1839；found:350.1845.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(萘-2-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-15)0.25g白色固体，收率为56.8％。m.p.229-230℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.53(s,1h),8.08(d,j＝8.2hz,1h),7.98(d,j＝7.7hz,1h),7.85(d,j＝8.2hz,1h),7.61-7.56(m,2h),7.41(t,j＝7.5hz,1h),7.25(t,j＝5.2hz,1h),6.58(d,j＝7.0hz,1h),6.47(s,1h),5.87(s,1h),5.51(s,2h),4.25(d,j＝5.3hz,2h),2.24(s,3h),2.22(s,3h),2.10(s,3h),2.09(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.7,162.7,147.7,141.9,133.3,132.5,130.8,129.4,127.9,127.0,125.8,125.4,125.0,122.6,122.4,121.9,118.9,115.5,115.0,106.9,46.4,34.2,18.3,17.6,11.3,10.1.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc26h27n3o2na:436.1995；found:436.2013.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-甲基苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-16)0.28g白色固体，收率为60.9％。m.p.235-236℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(s,1h),7.16(t,j＝5.1hz,1h),7.12(d,j＝7.8hz,2h),6.94(d,j＝7.8hz,2h),6.49(s,1h),5.85(s,1h),4.94(s,2h),4.22(d,j＝5.3hz,2h),2.25(s,3h),2.21(s,3h),2.20(s,3h),2.10(s,3h),2.06(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,148.7,143.0,136.8,135.7,131.4,129.6,127.1,123.0,119.8,116.4,115.8,108.0,49.3,35.3,21.1,19.4,18.6,12.3,11.4.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h27n3o2na:400.1995；found:400.1995.2,4-二甲基-n-((4-甲基-2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-17)0.10g白色固体，收率为32.3％。m.p.150-152℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.54(br,1h),7.70(d,j＝8.3hz,2h),7.29(t,j＝5.4hz,1h),7.21(d,j＝8.2hz,2h),6.55(s,1h),5.13(s,2h),4.25(d,j＝5.4hz,2h),2.77(t,j＝5.2hz,2h),2.37(t,j＝4.8hz,2h),2.19(s,3h),2.09(s,3h),2.08(s,3h),1.64-1.62(m,4h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.5,161.2,148.2,142.7,139.5,130.3,127.2(j＝31.3hz),126.5,124.9(j＝4.0hz),123.6(j＝270.3hz),121.2,118.9,115.7,111.1,48.0,33.9,25.9,23.6,21.5,21.4,15.3,11.3,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc26h28f3n3o2na:494.2026；found:494.2028.2,4-二甲基-n-((2-氧代-2,5,6,7-四氢-1h-环戊二烯并[b]吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-18)0.13g白色固体，收率为43.3％。m.p.171-173℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.82(br,1h),7.72(d,j＝8.0hz,2h),7.42(t,j＝5.6hz,1h),7.24-7.22(m,3h),6.59(s,1h),5.16(s,2h),4.14(d,j＝5.5hz,2h),2.70(t,j＝7.2hz,2h),2.60(t,j＝7.1hz,2h),2.21(s,3h),2.12(s,3h),2.02-1.97(m,2h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,163.0,147.2,143.7,134.6,131.1,128.3(j＝31.6hz),127.7,126.5,126.0(j＝3.4hz),124.7(j＝270.3hz),119.9,117.2,117.0,116.5,49.1,39.1,31.0,29.7,23.0,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc24h24f3n3o2na:466.1713；found:466.1719.2,4-二甲基-n-((4-甲基-2-氧代-6-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-19)0.18g白色固体，收率为60.0％。m.p.152-154℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.49(br,1h),7.70(d,j＝8.2hz,2h),7.24(t,j＝5.3hz,1h),7.21(d,j＝8.0hz,2h),6.56(s,1h),5.88(s,1h),5.14(s,2h),4.23(d,j＝5.4hz,2h),2.35(t,j＝7.4hz,2h),2.22(s,3h),2.20(s,3h),2.08(s,3h),1.59-1.53(m,2h),0.86(t,j＝7.3hz,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.6,163.9,148.8,146.9,143.7,131.4,128.3(j＝31.7hz),127.6,126.0(3.4hz),125.6,123.8,123.2,120.0,116.8,116.3,107.4,49.0,35.3,34.3,22.0,19.4,13.9,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc25h28f3n3o2na:482.2026；found:482.2034.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(吡啶-4-基甲基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-20)0.10g白色固体，收率为56.8％。m.p.150-152℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):11.52(br,1h),8.50-8.29(q,j＝1.4hz,4.6hz,2h),7.24(t,j＝5.3hz,1h),6.95(d,j＝5.8hz,2h),6.54(s,1h),5.86(s,1h),5.08(s,2h),4.22(d,j＝5.4hz,2h),2.21(s,3h),2.17(s,3h),2.11(s,3h),2.08(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,163.1,143.7,136.9,131.0,128.3(j＝31.7hz),127.7,126.4,126.0(j＝3.4hz),125.6,123.8,119.9,117.2,116.5,104.1,49.1,38.5,18.7,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc21h24n4o2na:387.1791；found:387.1789.2,4-二甲基-n-((6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-21)0.18g白色固体，收率为64.3％。m.p.206-208℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.63(br,1h),7.72(d,j＝8.2hz,2h),7.43(t,j＝5.8hz,1h),7.24(d,j＝7.9hz,2h),7.18(d,j＝6.8hz,1h),6.58(s,1h),5.97(d,j＝6.9hz,1h),5.16(s,2h),4.13(d,j＝5.7hz,2h),2.21(s,3h),2.14(s,3h),2.12(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,163.1,143.7,136.9,131.0,128.3(j＝31.7hz),127.7,126.4,126.0(j＝3.4hz),125.6,124.7(j＝270.3hz),119.9,117.2,116.5,104.1,40.1,38.5,18.7,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc22h22f3n3o2na:440.1556；found:440.1571.n-((6-异丁基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-22)0.15g白色固体，收率为46.9％。m.p.143-145℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.47(br,1h),7.70(d,j＝8.2hz,2h),7.24(t,j＝5.3hz,1h),7.21(d,j＝8.0hz,2h),6.56(s,1h),5.85(s,2h),5.14(s,2h),4.24(d,j＝5.4hz,2h),2.25(d,j＝7.3hz,2h),2.22(s,3h),2.19(s,3h),2.08(s,3h),1.93-1.87(m,1h),0.85(d,j＝6.6hz,6h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.8,147.6,145.1,142.7,130.3,127.2(j＝31.5hz),126.6,124.9(j＝3.4hz),123.6(j＝270.3hz),122.1,118.9,115.8,115.2,107.1,48.0,40.4,34.3,27.1,21.4,18.4,11.2,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc26h30f3n3o2na:496.2182；found:496.2202.n-((6-异丁基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-23)0.13g白色固体，收率为41.9％。m.p.143-145℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.60(br,1h),7.72(d,j＝7.9hz,2h),7.45(t,j＝5.5hz,1h),7.25(d,j＝7.9hz,2h),7.21(d,j＝6.7hz,1h),6.59(s,1h),5.97(d,j＝6.8hz,1h),5.16(s,2h),4.15(d,j＝5.4hz,2h),2.30(d,j＝7.1hz,2h),2.22(s,3h),2.13(s,3h),1.93-1.88(m,1h),0.86(d,j＝6.5hz,6h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,163.2,146.9,143.7,136.7,131.1,128.3(j＝31.6hz),127.7,126.7,126.0(j＝3.4hz),124.7(j＝270.3hz),119.9,117.2,116.5,104.3,49.1,41.5,38.5,28.3,22.4,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc25h28f3n3o2na:482.2026；found:482.2043.2,4-二甲基-n-((2-氧代-1,2,5,6,7,8-六氢喹啉-3-基)甲基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-24)0.16g白色固体，收率为53.3％。m.p.149-150℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.38(br,1h),7.72(d,j＝8.2hz,2h),7.45(t,j＝5.8hz,1h),7.24(d,j＝8.0hz,2h),7.02(s,1h),6.59(s,1h),5.16(s,2h),4.13(d,j＝5.6hz,2h),2.44(t,j＝5.3hz,2h),2.35(t,j＝5.9hz,2h),2.21(s,3h),2.12(s,3h),1.67-1.62(m,4h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,162.2,143.7,140.7,138.8,131.0,128.3(j＝31.7hz),127.7,126.8,126.0(j＝4.0hz),124.7(j＝270.3hz),119.9,117.3,116.5,111.7,49.1,38.6,26.2,26.1,22.6,21.7,12.2,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc25h26f3n3o2na:480.1869；found:480.1891.n-((6-乙基-4-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-25)0.16g白色固体，收率为53.3％。m.p.177-179℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.70(d,j＝8.2hz,2h),7.24(t,j＝5.3hz,1h),7.21(d,j＝8.0hz,2h),6.56(s,1h),5.88(s,1h),5.14(s,2h),4.23(d,j＝5.4hz,2h),2.42-2.38(q,j＝7.5hz,15.1hz,2h),2.22(s,3h),2.20(s,3h),2.08(s,3h),1.12(t,j＝7.6hz,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):164.6,162.8,147.8,147.3,142.7,130.3,127.1(j＝31.7hz),126.5,124.9(j＝3.9hz),124.5(j＝270.3hz),122.7,122.2,118.9,115.7,115.2,105.3,48.0,34.3,24.6,18.4,12.3,11.2,10.2.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc24h26f3n3o2na:468.1869；found:468.1887.n-((6-乙基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-26)0.07g白色固体，收率为48.3％。m.p.169-172℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.62(br,1h),7.72(d,j＝8.2hz,2h),7.44(t,j＝5.8hz,1h),7.24(d,j＝8.0hz,2h),7.21(d,j＝6.9hz,1h),6.59(s,1h),5.99(d,j＝6.9hz,1h),5.16(s,2h),4.14(d,j＝5.6hz,2h),2.46-2.42(q,j＝7.5hz,15.1hz,2h),2.21(s,3h),2.12(s,3h),1.13(t,j＝7.6hz,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,163.1,149.2,143.8,136.9,131.0,128.3(j＝31.7hz),127.7,126.7,126.0(j＝3.4hz),124.7(j＝270.3hz),119.9,117.2,116.5,102.5,49.1,38.5,25.7,13.5,12.3,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h24f3n3o2na:454.1713；found:454.1729.n-((5,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-27)0.08g白色固体，收率为55.2％。m.p.118-121℃。1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.51(br,1h),7.72(d,j＝8.2hz,2h),7.45(t,j＝5.8hz,1h),7.25(d,j＝8.0hz,2h),7.10(s,1h),6.60(s,1h),5.16(s,2h),4.14(d,j＝5.6hz,2h),2.22(s,3h),2.12(s,3h),2.11(s,3h),1.94(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):166.2,162.4,143.7,140.3,140.1,131.0,128.3(j＝31.4hz),127.7,126.2,126.0(j＝3.3hz),124.7(j＝270.2hz),119.9,117.3,116.5,110.4,49.1,38.5,16.5,16.2,12.2,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h24f3n3o2na:454.1713；found:454.1734.n-((4-甲氧基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-28)1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):12.08(br,1h),7.71(d,j＝8.0hz,2h),7.65(s,1h),7.22(d,j＝8.0hz,2h),6.60(s,1h),6.31(s,1h),5.16(s,2h),4.25(s,2h),3.86(s,3h),2.25(s,3h),2.21(s,3h),2.09(s,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6,dm-28)δ(ppm):166.5,164.0,147.1,143.7,131.9,128.4,128.2,127.6,126.1,126.0,125.6,123.8,120.2,116.5,116.2,106.4,95.7,56.9,49.1,32.8,19.3,12.2,11.3.esi-hrms:m/z[m+na]+calcdforc23h24f3n3o3na:470.1662；found:470.1681.n-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基-1-(1-(4-(三氟甲基)苯基)乙基)-1h-吡咯-3-甲酰胺(dm-29)1hnmr(600mhz,dmso-d6):δ(ppm):11.53(br,1h),7.69(d,j＝8.2hz,2h),7.26(d,j＝8.1hz,2h),7.21(t,j＝5.4hz,1h),6.70(s,1h),5.86(s,1h),5.49-5.45(q,j＝6.9hz,13.9hz,1h),4.25-4.18(m,2h),2.20(s,3h),2.18(s,3h),2.10(s,3h),2.09(s,3h),1.71(d,j＝7.0hz,3h).13cnmr(150mhz,dmso-d6):δ(ppm):165.7,163.8,148.8,148.5,14.0,131.4,128.2(j＝31.7hz),127.1,126.0(j＝3.9hz),124.7(j＝270.4hz),122.9,116.8,116.2,116.0,108.0,53.8,35.3,22.0,19.3,18.6,12.5,11.3.实施例2化合物对人慢性髓系白血病细胞株k562中ezh2活性影响的实验1、实验样品和材料1.1、受试品d-01、d-02、d-03、d-04、d-05，d-06、d-07、d-08、d-09、d-10、d-11、d-12、d-13、d-14、d-15、d-16、d-17、d-18、d-19、d-21、d-22、d-23dm-01、dm-02、dm-03、dm-04、dm-05、dm-06、dm-07、dm-08、dm-09、dm-10、dm-11、dm-12、dm-13、dm-14、dm-15、dm-161.2、实验细胞株及来源k562购自atcc1.3、实验试剂2、实验原理westernblot采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，蛋白质经变性并携带上大量的负电荷，细胞或组织蛋白质在凝胶中泳动，蛋白质分子量因大小不同而被分离开；经过电泳分离的蛋白质样品，转移到pvdf膜上，pvdf膜以非共价健形式吸附蛋白质；以pvdf膜上的蛋白质作为抗原，与待检测相应的抗体发生免疫结合，再与标记有辣根过氧化物酶的二抗发生反应，经过辣根过氧化物酶水解底物产生化学发光来检测靶标蛋白。ezh2的组蛋白底物为h3k27me3，其表达水平直接反映ezh2的活性水平，本课题通过检测化合物处理后该蛋白表达水平评价ezh2活性。3、实验方法3.1、细胞培养以rpmi1640培养基作为基础培养液，配制成内含10％胎牛血清的细胞培养液。在含有5％co2的37℃培养箱中传代培养。3.2、药物配制39种化合物及阳性药gsk126、tazemetostat均用dmso配制成相同浓度的母液(100mm)，储存于-20℃。试验药物及阳性药gsk126分别稀释为相应5μm和10μm进行加药，作用时间为48h。3.3、westernblot1)细胞总蛋白提取收集细胞1000rpm离心5min，弃上清；pbs重悬，1000rmp离心，5min，弃上清；每个样品加入适量遇冷的ripa细胞裂解液(另加100mmpmsf、100mmnaf、100mm正反酸钠)，重悬细胞；超声破碎仪进行细胞裂解；冰上孵育30min，12000g离心15min，收集上清液。2)bca法测定①稀释bsa标准品表1.bsa标准品稀释②配置bca工作液根据所需bca工作液的总量，将试剂a和试剂b按照50:1的体积比配制bca工作液，充分混匀。③微孔检测法按照表1将稀释好的标准品或者样品各20μl分别加到标记好的96孔板中，每个样本做3个平行反应。然后每孔加入200μlbca工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30min。冷却至室温，用酶标仪检测562nm处的吸光度。3)裂解产物蛋白总量测定使用bca方法，检测各组样本的总蛋白浓度，以排除细胞数目对荧光素酶表达水平的影响。取裂解产物各20ul加到标记好的96孔板中，每个样本做2个平行反应。然后每孔加入200μlbca工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30min。冷却至室温，用酶标仪检测562nm处的吸光度。4)免疫印迹根据不同蛋白分子质量配置不同浓度分离胶，使用去离子水压线，室温放置1h；分离胶凝固后，滤纸吸去残余水，配置5％的浓缩胶，插上样品梳，室温放置30min；电泳槽加入适量电泳缓冲液，将maker及适量蛋白样品按顺序加入样品孔；浓缩胶电压80v，电泳30min，分离胶电压120v，待目的蛋白跑到合适位置，停止电泳。将滤纸浸泡于预冷的阳ⅰ、阳ⅱ及阴缓冲液中；按照阳ⅰ、阳ⅱ、pvdf膜、胶、阴顺序放置于半干转仪中，设置转膜电压22v，转膜时间依不同分子量蛋白而异，一般转膜时间在20-60min；pvdf膜置于5％封闭液中，室温封闭1h；一抗按说明书使用1％bsa稀释至适当浓度，4℃孵育膜过夜；tbst洗膜3次，每次10min；二抗按说明书使用，用1％bsa稀释至适当浓度，室温孵育1h；弃去二抗，tbst洗3次，每次10min；使用蛋白质成像系统，将适量ecl发光液滴加到pvdf膜上，进行蛋白质图像采集。4、实验结果4.1、bca法标准品的od结果如表2所示，根据结果拟合的标准曲线为y＝0.8487x+0.07，r2＝0.9909。表2.稀释bca标准品的吸光度a)ezh2蛋白在nci-h1650、hcc827、nci-h1975、pc-9、hcc4006、a549、h460、nci-h446、nci-h1688、k562细胞系中的表达水平：由图1可以看出：ezh2蛋白在nci-h1650、h460、nci-h446、nci-h1688、k562细胞中的表达量相比于在hcc827、nci-h1975、pc-9、hcc4006、a549细胞中明显上调。b)h3k27me3蛋白在nci-h1650、hcc827、nci-h1975、pc-9、hcc4006、a549、h460、nci-h446、nci-h1688、k562细胞系中的表达水平：由图2可以看出：h3k27me3蛋白在hcc827、nci-h1975、pc-9、a549、k562中的表达量相比于在nci-h1650、hcc4006、h460、nci-h446、nci-h1688细胞中明显上调。由图3可以看出：化合物d-01、d-02、d-03、d-04分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调。由图4可以看出，化合物d-01、d-05、d-06、d-07分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调。由图5可以看出:化合物d-08以5μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调；化合物d-08以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，h3k27me3蛋白表水平与空白组相差不大；化合物d-09、d-10分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调；化合物d-10以5μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调；化合物d-10以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图6可以看出：化合物d-12、d-14分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调；化合物d-13以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调；化合物d-15以5μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调；化合物d-15以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调由图7可以看出：化合物d-16、d-17、d-18、d-19分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图8可以看出：化合物d-22、d-23分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平上调。a)化合物对k562细胞中h3k27me3蛋白表水平：由图9可以看出：化合物dm-01、dm-02分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图10可以看出，化合物dm-03分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图11可以看出:化合物dm-04、dm-05分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图12可以看出：化合物dm-06分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调；化合物dm-07以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图13可以看出：化合物dm-08以10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图14可以看出：化合物dm-09、dm-10分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图15可以看出：化合物dm-11、dm-12分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图16可以看出：化合物dm-13、dm-14分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。由图17可以看出：化合物dm-15、dm-16分别以5μm和10μm对人慢性髓系白血病细胞株k562进行处理，与空白组相比，h3k27me3蛋白表水平下调。从实验结果可知，阳性药gsk126可以明显抑制ezh2的活性，说明实验方法准确稳定。化合物d-16、d-17、d-18、d-19在药物浓度为5μm和10μm时，h3k27me3蛋白表达水平下调，化合物d-10、d-13、d-15在药物浓度为10μm时，h3k27me3蛋白表达水平下调。说明化合物d-10、d-13、d-15、d-16、d-17、d-18、d-19具有抑制ezh2蛋白表达的作用。化合物dm-01、dm-02、dm-03、dm-04、dm-05、dm-06、dm-09、dm-10、dm-11、dm-12、dm-13、dm-14、dm-15、dm-16在药物浓度为5μm和10μm时，h3k27me3蛋白表达水平下调，dm-07、dm-08在药物浓度为10μm时，h3k27me3蛋白表达水平下调。说明化合物dm-01、dm-02、dm-03、dm-04、dm-05、dm-06、dm07、dm08、dm-09、dm-10、dm-11、dm-12、dm-13、dm-14、dm-15、dm-16具有抑制ezh2活性的作用。当前第1页12当前第1页12