柚皮苷的提取工艺的制作方法

文档序号：17132393发布日期：2019-03-16 01:29阅读：1669来源：国知局

本发明涉及一种天然产物的提纯方法，特别是涉及一种柚皮苷的提取工艺。

背景技术：

柚皮苷是一种从柚、葡萄柚和酸橙及其变种的果皮及果实中用现代的生物技术提取而成的天然色素。此外，它也是中草药骨碎补、枳实、枳壳、橘红的主要有效成分。作为一种双氢黄酮类化合物，由于a环和b环之间完全没有共轭，故而柚皮苷在282nm具有强烈的紫外吸收峰，使柚皮苷显示多种生物学活性和药理作用，比如包括抗炎、减少血栓的形成、改善局部微循环和营养供给等。

传统技术中提取柚皮苷的方法多为有机溶剂浸提法，即用乙醇、丙酮或其水溶液浸提柚皮苷。从目前国内外天然产物提取研究的总体趋势上看，有机溶剂浸提法是现有的主导技术，但提取率较低，无法满足现有需求。

技术实现要素：

基于此，有必要针对上述传统柚皮苷提取技术中提取率低的问题，提供一种提取率高的柚皮苷的提取工艺。

一种柚皮苷的提取工艺，提取工艺的步骤包括：

步骤一：将柚子皮烘干、粉碎、过筛，得到粗品，之后将所述粗品放入溶剂中浸泡，去除溶液后得到柚子皮粉末；

步骤二：将所述柚子皮粉末加入表面活性剂的水溶液中，充分浸泡之后进行蒸馏提取，同时利用超声波进行超声处理，之后进行固液分离并保留滤液；

步骤三：对所述滤液进行蒸发浓缩，得到柚皮苷浓缩液；

步骤四：将所述柚皮苷浓缩液上样至大孔树脂，用以分离所述柚皮苷浓缩液中的目标组分和杂质组分，上样之后的所述大孔树脂中保留有所述目标组分，随后分别采用预处理洗脱液和目标洗脱液对所述目标组分进行梯度洗脱，分别得到预处理流出液和目标流出液，并保留目标流出液，所述预处理洗脱液为水，所述目标洗脱液为有机溶剂或有机溶剂的水溶液；

步骤五：对所述目标流出液进行蒸发浓缩、冷却结晶，分离后得到结晶固体，所述结晶固体为柚皮苷。

该工艺主要采取超声波辅助表面活性剂的方式进行提取，是一种较理想的提取新工艺。其中，超声波与表面活性剂协同作用，可在溶剂中形成分子液膜，增加液固接触面积，互相促进预提取成分与溶剂的融合速度，可极大提升提取率。其中，超声波具有空化作用，能加速预提取成分的浸出提取，而且超声波还具有次级效应包括如机械、乳化、扩散、击碎、化学效应等，可加速预提取成分的扩散并充分与溶剂混合，有利于提取。另外，表面活性剂具有双亲结构，能降低表面张力，增强溶剂对柚子皮粉末的润湿性和渗透性，并且对天然产物的有效成分具有增溶作用，可增加预提取成分浸出效能和提取率。此外，该工艺以水蒸馏提取，不仅绿色环保，而且提取条件温和，不易破坏预提取成分的生物活性。

在其中一个实施例中，所述步骤二中，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠，十二烷基硫酸钠的水溶液中十二烷基硫酸钠的质量分数为0.15％～0.25％，所述十二烷基硫酸钠的水溶液与所述柚子皮粉末的质量比为2:1～3:1；所述柚子皮粉末在所述十二烷基硫酸钠的水溶液中的浸泡时间为1.4h～2.6h。

在其中一个实施例中，所述步骤二中，所述超声波的功率为350w～550w，所述蒸馏提取操作的温度为60℃～85℃。

在其中一个实施例中，所述步骤一中，将柚子皮烘干、粉碎后过40目筛，得到40目以下的粗品，所述溶剂与所述粗品的液固比为6：1，所述粗品在溶剂中浸泡的时间为16.8h～31.2h，所述溶剂为石油醚。

在其中一个实施例中，所述步骤二中，所述蒸馏提取操作中的液固比为25:1。

在其中一个实施例中，所述步骤二中，所述蒸馏提取的次数为2次，每次所述蒸馏提取的时间为21min～39min。

在其中一个实施例中，所述步骤三中，在真空状态下蒸发浓缩滤液，所述真空状态的真空度为0.05mpa～0.1mpa。

在其中一个实施例中，所述步骤三中，滤液的浓缩温度为55℃～65℃，滤液浓缩至原体积的1/10。

在其中一个实施例中，所述步骤四中，所述大孔树脂与上样量的质量比是1:2～1:5，吸附时间为2h～3h。

在其中一个实施例中，所述步骤四中，洗脱速度为1ml/min～3ml/min。

附图说明

图1为本发明一实施方式的柚皮苷的提取工艺的流程图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

请参见图1，一实施方式的柚皮苷提取工艺，提取工艺的步骤包括：

s10、步骤一：将柚子皮烘干、粉碎、过筛，得到粗品，之后将粗品放入溶剂中浸泡，固液分离之后保留固体，得到柚子皮粉末。

优选地，柚子皮在50℃～60℃下烘干。使柚子皮在水分蒸发的同时也防止了柚子皮中的柚皮苷被高温破坏；通过机械方式对柚子皮进行粉碎处理，可使柚子皮粉碎得更为均匀彻底，利于下一步的操作。

优选地，将柚子皮烘干、粉碎后过40目筛，得到40目以下的柚子皮粉末粗品。该粗品与溶剂的液固比为6:1。

优选地，粗品在溶剂中浸泡的时间为16.8h～31.2h。有利于杂质在溶剂中充分溶解而在后续操作中被去除。

更优地，粗品在溶剂中浸泡的时间为24h。使柚子皮粉末中的杂质充分地溶解在溶剂中。

优选地，溶剂为石油醚。石油醚能够充分溶解柚子皮粉末中的杂质。

s20、步骤二：将步骤s10得到的柚子皮粉末加入含有表面活性剂的水溶液中，充分浸泡之后进行蒸馏提取，同时利用超声波进行超声处理，之后进行固液分离并保留滤液。

优选地，表面活性剂为十二烷基硫酸钠，十二烷基硫酸钠的水溶液中十二烷基硫酸钠的质量分数为0.15％～0.25％，十二烷基硫酸钠的水溶液与柚子皮粉末的质量比为2:1～3:1。大量实验证明，在上述范围内，十二烷基硫酸钠的水溶液对柚皮苷具有更佳的增溶作用，可增加柚皮苷浸出效能和提取率。其中，柚子皮粉末在表面活性剂的水溶液中的浸泡时间为1.4h～2.6h，能够进一步提高柚皮苷的浸出效能和提取率。

此外，在充分浸泡之后、蒸馏提取操作之前，还可以包括以下步骤：与水混合。具体的，步骤s20中，先采用表面活性剂的浓度较高的水溶液对柚子皮粉末进行浸泡，浸泡之后与水混合进行蒸馏提取。这样能够缩短浸泡时间，提高蒸馏提取的效率。

当然，亦可以在含有表面活性剂的水溶液中加入足够蒸馏提取的溶剂水，充分浸泡之后直接进行蒸馏提取。

优选地，超声波的功率为350w～550w。在此范围内能更好地与表面活性剂协同作用，互相促进柚皮苷与溶剂的融合速度，提升提取率。优选地，蒸馏提取的温度为60℃～85℃。该方式有利于蒸馏过程中柚皮苷与其他组分的分离。

优选地，蒸馏提取操作中的液固比为25:1。具体的，蒸馏提取操作中的液体为此时溶液中的所有液体，蒸馏提取操作中的固体为柚子皮粉末。

优选地，蒸馏提取的次数为2次，每次蒸馏提取的时间为21min～39min。该方式可减少柚皮苷的损失。更优地，每次蒸馏提取的时间为30min。既能较为充分地提取柚皮苷，又能节约实验时间。

另外，该步骤中，固液分离后的滤渣可用于二次提取，二次提取滤渣有助于提取得更为充分，节约原料。

s30、步骤三：对步骤s20得到的滤液进行蒸发浓缩，得到柚皮苷浓缩液。

优选地，在真空状态下蒸发浓缩滤液，真空状态的真空度为0.05mpa～0.1mpa。真空蒸发可降低溶液沸点，利用低温热源，降低能耗。

优选地，滤液的浓缩温度为低温状态55℃～65℃，有助于减少柚皮苷的蒸发。优选地，将滤液浓缩至原体积的1/10。可方便下一步的操作。

s40、步骤四：将步骤s30得到的柚皮苷浓缩液上样至大孔树脂，用以分离柚皮苷浓缩液中的目标组分和杂质组分，上样之后的大孔树脂中保留有目标组分，随后分别采用预处理洗脱液和目标洗脱液对目标组分进行梯度洗脱，分别得到预处理流出液和目标流出液，并保留目标流出液，该预处理洗脱液为水，该目标洗脱液为有机溶剂或有机溶剂的水溶液。

步骤四中，大孔树脂作为填料起到吸附作用。在使用大孔树脂之前，先对大孔树脂进行纯化处理。处理方式为首先用体积分数为95％的乙醇水溶液浸泡大孔树脂24h，使大孔树脂充分溶胀，再用体积分数为95％的乙醇水溶液清洗至大孔树脂的流出液体不再呈白色浑浊状态，最后用去离子水清洗至无醇味。未处理的大孔树脂残留物较多，用乙醇浸泡、清洗大孔树脂，有利于纯化大孔树脂的孔，保证其吸附性能；最后用去离子水清洗大孔树脂残留的乙醇，目的是避免引入新的杂质。在该柚皮苷提取工艺中使用纯化后的大孔树脂，可使所得的柚皮苷外观美观、不会脱色、纯度高。

优选地，预处理洗脱液为去离子水，避免引入新的杂质。优选地，有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮或乙腈。更优地，目标洗脱液使用体积分数为30％～50％的乙醇水溶液，可很好地溶解目标组分。

优选地，大孔树脂与上样量的质量比为1:2～1:5，吸附时间为2h～3h。

优选地，洗脱速度为1ml/min～3ml/min。

s50、步骤五：对步骤s40得到的目标流出液进行蒸发浓缩、冷却结晶，分离后得到结晶固体，结晶固体为柚皮苷。

优选地，将目标流出液真空蒸发浓缩至上样液量的1/2，室温静置24h。室温下静置可使柚皮苷固体析出，过滤，之后得到的固体再用冰水洗涤2～3次，60℃下真空干燥过夜。该操作在挥发掉溶剂的同时减少了柚皮苷的挥发量，并且去除了残余的乙醇，最终制得柚皮苷纯品。

以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

以下实施例中所用的仪器包括：超声波清洗机，型号为scq-5201e，生产厂家为上海声彦超声波仪器有限公司；其它仪器均为常规仪器。

以下实施例中所用的的原料包括：沙田柚幼果，批号为se1704003，生产厂家为江西金柚家园农业开发有限公司；石油醚，批号为mfc00179135，生产厂家为南京化学试剂股份有限公司；十二烷基硫酸钠，批号为mfc00164356，生产厂家为南京化学试剂股份有限公司；大孔树脂，型号为hpd400，生产厂家为北京英莱克科技发展有限公司；其它原材料均为常规材料。

实施例1

将沙田柚幼果去表皮，在60℃下烘干表皮，粉碎机粉碎，过40目筛，得到40目以下的柚子皮粉末粗品。称取柚子皮粉末粗品100.3g，加入石油醚601ml，搅拌均匀后静置24h后过滤，去除石油醚，该粉末挥干石油醚后备用。

将十二烷基硫酸钠的水溶液加入到装有柚子皮粉末的烧瓶中，其中，十二烷基硫酸钠的水溶液中十二烷基硫酸钠的质量分数为0.2％，十二烷基硫酸钠的水溶液与柚子皮粉末的质量比为2:1，形成固液混合物，浸泡2h，之后加水混合并将装有该固液混合物的烧瓶转移到超声波清洗机中，并连接蒸馏装置，超声波清洗机的超声功率为400w，超声频率为40khz。在超声波的作用下进行蒸馏提取，蒸馏提取的温度为60℃，液固比为25:1，提取两次，每次提取时间为30min。过滤后合并滤液，滤液用于制备柚皮苷，滤渣可用于二次提取。