提高植物耐旱能力的方法与流程

文档序号：17814313发布日期：2019-06-05 21:25阅读：832来源：国知局

本发明提供了一种通过特定表达acc脱氨酶来提高植物耐旱性的方法。

背景技术：

人口的持续增长，对于农业可持续发展带来了两个挑战。其一是，更多的人口需要消耗更多的农作物产品，而农作物生产需要大量的水资源。而另一个挑战是，人口增加会竞争性地占用更多的可用水，这会进一步加剧农业用水的缺口。要保证农业生产的持续性，就需要增加农作物水资源利用效率。培育耐旱作物，是维持农业可持续性的一个重要途径。

植物适应干旱胁迫进化出了三种不同的机制[1]。逃旱性植物一般可以通过调控生长时期，将用水较多的时期(例如，开花期)，通过滞后或是提前，来逃避干旱胁迫。避旱性植物一般会在干旱胁迫的时候，通过调控气孔提前关闭，减少蒸腾。气孔提前关闭会同时减少二氧化碳的摄入，影响植物生长。抗旱性植物是在一定的干旱条件下，通过调整自身的水势，降低活性氧的浓度，来耐受干旱并维持一定的生长。三种不同机制在不同植物上都有相应的进化价值；逃旱性植物一般会在干旱条件下花期或是生长期有所改变。避旱性机制可以通过气孔关闭的情况加以鉴定；往往在轻度干旱的情况下，避旱性机制起到很大作用。不同植物在不同干旱胁迫条件下，会采用一种或多种机制；对于作物上来讲，抗旱性机制更有应用价值。

植物干旱胁迫响应的分子机制非常复杂，根据信号通路的区分，可以区分为脱落酸(aba)依赖和不依赖的两种途径。脱落酸是一种植物生长调节因子，在干旱条件下根部产生并富集，通过导管进入叶片调控水势或是抗氧化能力。另外有研究表明叶片中也可以产生脱落酸。脱落酸一般通过结合其受体并改变受体同蛋白磷酸酶的相互作用，进而调控下游磷酸激酶的磷酸化状态，激活依赖脱落酸的信号通路。不依赖脱落酸的信号通路往往会依赖一类特殊的ap2类的转录子，干旱响应元件结合蛋白(dreb，dehydrationdependedelementbindingprotein)。两种机制相互之间会协同参与抗旱性的增强；其中其它生长调节因子，例如乙烯，参与调节着两种机制的对话。

乙烯也参与了植物对干旱胁迫的响应。干旱胁迫下往往会影响乙烯的合成。植物体内乙烯合成起始于蛋氨酸(methionine，met)；在三磷酸腺苷(atp)的参与下，腺苷蛋氨酸合成酶将蛋氨酸首先转变成s-腺苷蛋氨酸(sam)。接着在氨基环丙烷羧酸合成酶(acc合成酶)作用下将sam转变成1-氨基环丙烷羧酸(acc)和甲硫腺苷(mta)。mta可以通过水解和蛋氨酸途径重新合成蛋氨酸。acc是乙烯生物合成的直接前体，acc合成酶是乙烯合成的限速步骤。acc氧化酶催化acc产生乙烯，这个过程也很重要。在玉米中敲除acc合成酶6，抑制了干旱诱导的叶片衰老；利用rna沉默技术降低acc合成酶6的表达，通过大田实验验证，基因沉默的株系对比与对照显著提高了干旱胁迫下的产量[2]。在玉米中过表达乙烯信号传递的负调控因子，zmargos8，也提高了植物的抗旱性[3]。acc脱氨酶(accdeaminase)可以降解acc产生氨和丁酮酸，降低乙烯的合成。acc脱氨酶广泛存在真菌、细菌和酵母中；有一些土壤根际微生物，在同植物共生的时候，可以提高植物对干旱的耐受能力。在西红柿和辣椒根际施用皮氏无色杆菌arv8，提高了抗旱性[4]；类似的结果也在玉米、小麦以及豌豆中发现。当将这些植物益生菌中的acc脱氨酶基因敲出后，发现其对植物抗旱性的效果大幅降低，这就说明acc脱氨酶在植物抗旱中起到了重要的作用。目前认为可能的机制是当益生菌同根系互作的时候，植物的acc可以分泌到根际，通过微生物中的acc脱氨酶降解acc，间接地降低植物乙烯的合成。微生物中acc脱氨酶在植物抗旱性的直接证据并没有太多报道和证明。另一方面acc脱氨酶在植物中同源基因并没有报道。本发明通过过表达的方法，验证并筛选了一类微生物来源的acc脱氨酶可以提高植物的耐旱能力，并且也预测了通过植物本身的氨基转移酶，通过合适的改造，可以提高耐旱能力。

技术实现要素：

本发明的一些实施方案如下：

1.acc脱氨酶或者编码acc脱氨酶的多核苷酸序列用于提高植物耐旱能力的用途。

2.根据实施方案1所述的用途，其中所述acc脱氨酶为喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌(burkholderiacaledonica)lmg19076的acc脱氨酶。

3.根据实施方案2所述的用途，其中所述acc脱氨酶的氨基酸序列如seqidno:7所示。

4.根据实施方案1所述的用途，其中所述编码acc脱氨酶的多核苷酸序列源自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因。

5.根据实施方案4所述的用途，其中所述编码acc脱氨酶的多核苷酸序列如seqidno:5或seqidno:6所示。

6.具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶或者编码具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶的多核苷酸序列用于提高植物耐旱能力的用途。

7.根据实施方案6所述的用途，其中所述具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶源自植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶。

8.根据实施方案7所述的用途，其中所述植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶为玉米氨基转移酶、水稻氨基转移酶或拟南芥氨基转移酶。

9.根据实施方案8所述的用途，其中所述玉米氨基转移酶的氨基酸序列如seqidno:15所示。

10.根据实施方案8所述的用途，其中所述水稻氨基转移酶的氨基酸序列如seqidno:19所示。

11.根据实施方案8所述的用途，其中所述拟南芥氨基转移酶的氨基酸序列如seqidno:17所示。

12.根据实施方案6所述的用途，其中所述编码具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶的多核苷酸序列源自植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因。

13.根据实施方案12所述的用途，其中所述植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因为玉米氨基转移酶基因、水稻氨基转移酶基因或拟南芥氨基转移酶基因。

14.根据实施方案13所述的用途，其中所述玉米氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:14所示。

15.根据实施方案13所述的用途，其中所述水稻氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:18所示。

16.根据实施方案13所述的用途，其中所述拟南芥氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:16所示。

17.根据实施方案1-16中任一项所述的用途，其中所述植物为双子叶植物或单子叶植物，例如禾本科(gramineae)植物，例如玉蜀黍属(zea)植物；优选地，所述植物选自由下列各项组成的组：玉米、小麦、水稻、高粱、拟南芥、大豆、番茄、向日葵、菠菜和油菜。

18.一种提高植物耐旱能力的方法，其包括在所述植物中过表达编码acc脱氨酶的多核苷酸序列或者编码具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶的多核苷酸序列。

19.根据实施方案18所述的方法，所述编码acc脱氨酶的多核苷酸序列源自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因。

20.根据实施方案19所述的方法，其中所述编码acc脱氨酶的多核苷酸序列如seqidno:5或seqidno:6所示。

21.根据实施方案18所述的方法，其中所述编码具备acc识别和脱氨功能的经改造的植物氨基转移酶的多核苷酸序列源自植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因。

22.根据实施方案21所述的方法，其中所述植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因为玉米氨基转移酶基因、水稻氨基转移酶基因或拟南芥氨基转移酶基因。

23.根据实施方案22所述的方法，其中所述玉米氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:14所示。

24.根据实施方案22所述的方法，其中所述水稻氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:18所示。

25.根据实施方案22所述的方法，其中所述拟南芥氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:16所示。

26.根据实施方案18-25中任一项所述的方法，其中所述过表达由植物泛素启动子或植物肌动蛋白启动子来驱动。

27.根据实施方案26所述的方法，其中所述植物泛素启动子为玉米泛素启动子przmubi1。

28.根据实施方案27所述的方法，其中所述玉米泛素启动子przmubi1的序列如seqidno:4所示。

29.根据实施方案26所述的方法，其中所述植物肌动蛋白启动子为水稻肌动蛋白启动子pract1。

30.根据实施方案29所述的方法，其中所述水稻肌动蛋白启动子pract1的序列如seqidno:9所示。

31.根据实施方案18-25中任一项所述的方法，其中所述过表达由植物诱导型启动子或植物器官特异性启动子来驱动。

32.根据实施方案31所述的方法，其中所述植物诱导型启动子为拟南芥干旱诱导启动子pratrd29a或其他干旱诱导启动子。

33.根据实施方案31所述的方法，其中所述植物器官特异性启动子为绿色器官特异性启动子prospsi33kd、气孔特异性启动子prat1g22690或类似的启动子。

34.根据实施方案18-33中任一项所述的方法，其中所述植物为双子叶植物或单子叶植物，例如禾本科植物，例如玉蜀黍属植物；优选地，所述植物选自由下列各项组成的组：玉米、小麦、水稻、高粱、拟南芥、大豆、番茄、向日葵、菠菜和油菜。

35.一种通过对在植物中的氨基转移酶基因进行突变或基因编辑来提高植物耐旱能力的方法，其包括基于蛋白质序列和结构分析，和/或自然/诱导突变信息，改造在植物中的氨基转移酶基因使其所编码的酶具备降解acc的功能。

36.根据实施方案35所述的方法，其中所述在植物中的氨基转移酶基因为植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因。

37.根据实施方案36所述的方法，其中所述植物内源性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶基因为玉米氨基转移酶基因、水稻氨基转移酶基因或拟南芥氨基转移酶基因。

38.根据实施方案37所述的方法，其中所述玉米氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:14所示。

39.根据实施方案37所述的方法，其中所述水稻氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:18所示。

40.根据实施方案37所述的方法，其中所述拟南芥氨基转移酶基因的编码框序列如seqidno:16所示。

41.根据实施方案35-40中任一项所述的方法，其中所述植物为双子叶植物或单子叶植物，例如禾本科植物，例如玉蜀黍属植物；优选地，所述植物选自由下列各项组成的组：玉米、小麦、水稻、高粱、拟南芥、大豆、番茄、向日葵、菠菜和油菜。

附图说明

图1显示了双元载体20049的图谱。

图2显示了两组jhax地上部分的干重的比较。左边的柱为进行干旱处理的野生型jhax；右边的柱为正常浇水的野生型jhax。

图3显示了喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌acc脱氨酶、拟南芥氨基转移酶、水稻氨基转移酶和玉米氨基转移酶的蛋白同源性比对。

图4显示了双元载体19982的图谱。

图5显示了双元载体19953的图谱。

序列表信息

seqidno:1为prhvlpt2(大麦糊粉层特异脂转移蛋白启动子)。

seqidno:2为crfp(红色荧光蛋白基因)。

seqidno:3为tpi-15(西红柿蛋白酶抑制因子ii终止子)。

seqidno:4为przmubi1(玉米泛素启动子)。

seqidno:5为cbcalmg19076(玉米密码子优化后的来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

seqidno:6为cbcalmg19076(来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

seqidno:7为cbcalmg19076(来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，蛋白序列)。

seqidno:8为tubi1(玉米泛素终止子)。

seqidno:9为pract1(水稻肌动蛋白启动子)。

seqidno:10为cpat(大豆密码子优化的草胺膦乙酰转移酶基因)。

seqidno:11为t35s(花椰菜花叶病毒35s终止子)。

seqidno:12为cpmi(6-磷酸甘露糖异构酶基因)。

seqidno:13为tnos(农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子)。

seqidno:14为cgrmzm2g151440(玉米氨基转移酶基因，编码框序列)。

seqidno:15为cgrmzm2g151440(玉米氨基转移酶基因，蛋白序列)。

seqidno:16为catacd1(拟南芥氨基转移酶基因，编码框序列)。

seqidno:17为catacd1(拟南芥氨基转移酶基因，蛋白序列)。

seqidno:18为cloc_os02g53330(水稻氨基转移酶基因，编码框序列)。

seqidno:19为cloc_os02g53330(水稻氨基转移酶基因，蛋白序列)。

seqidno:20为zmadh1正向引物。

seqidno:21为zmadh1反向引物。

seqidno:22为zmadh1探针。

seqidno:23为pmi正向引物。

seqidno:24为pmi反向引物。

seqidno:25为pmi探针。

seqidno:26为red正向引物。

seqidno:27为red反向引物。

seqidno:28为red探针。

seqidno:29为zmef正向引物。

seqidno:30为zmef反向引物。

seqidno:31为zmef探针。

seqidno:32为bcalmg19076-accd正向引物。

seqidno:33为bcalmg19076-accd反向引物。

seqidno:34为bcalmg19076-accd探针。

seqidno:35为cbunmti641-accd(来自草根围伯克霍尔德氏菌(paraburkholderiaunamae)mti-641的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

seqidno:36为cbunmti641-accd(来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因，蛋白序列)。

seqidno:37为cbunmti641-accd(玉米密码子优化后的来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

seqidno:38为crlepb172-accd(来自豌豆根瘤菌(rhizobiumleguminosarum)pb172的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

seqidno:39为crlepb172-accd(来自豌豆根瘤菌pb172的acc脱氨酶基因，蛋白序列)。

seqidno:40为crlepb172-accd(玉米密码子优化后的来自豌豆根瘤菌pb172的acc脱氨酶基因，编码框序列)。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1.在玉米中过表达来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌的acc脱氨酶(bcalmg19076-accd，seqidno:5-7)

1.1.双元载体20049的构建

从ncbi数据库中调出喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076中的acc脱氨酶(bcalmg19076-accd，seqidno:6-7)；将其序列进行玉米密码子优化(seqidno:5)，设计双端带有bsmbi酶切位点，并在金斯瑞(genscript)合成。bsmbi酶切后连入bamhi/spei片段化的中间载体上。壮观霉素阳性克隆(spec+)通过pvui/noti酶切验证。正确的克隆进一步通过测序验证连接处无误。玉米泛素启动子(seqidno:4)，用于bcalmg19076-accd的表达(图1)。

1.2.玉米的农杆菌转化

实验中玉米转化品种为jhax。采用农杆菌转化方法，具体操作见参考文献[5]。载体中含有6-磷酸甘露糖异构酶基因(pmi，seqidno:12)表达盒作为植物中的筛选标记；选择pmi阳性的植株进行拷贝数分析(采用seqidno:23-25)。

1.3.t0代转基因拷贝数鉴定

从每个pmi阳性苗收集10毫克叶片，采用改进的tris-sds法提取基因组dna[6]。内参基因和目的基因的taqman引物和探针均利用美国appliedbiosystem公司的primerexpress3.0软件设计，并由invitrogen公司合成，序列信息见表1和表2。

表1.内参基因实时荧光定量pcr的引物和探针序列(拷贝数)

表2.目的基因实时荧光定量pcr的引物和探针序列(拷贝数)

实时荧光定量pcr(qpcr)反应体系和反应条件

反应体系：qpcr反应总体系为25μl，其中含有12.5μljumpstart^tmtaqreadymix^tm、5μl植物基因组dna、各0.4μl内参基因和目的基因引物探针组(引物终浓度为300nm，探针终浓度为100nm)、0％至10％浓度(v/v)的dmso和无核酸酶的纯净水。

反应程序：taqman实时荧光定量pcr使用标准制式的applied7900快速实时pcr系统。表3为pcr反应程序。pcr结束后，使用sds2.4软件分析结果。

表3.pcr反应程序

带有1个拷贝转基因的t0植株移栽到温室(表4)。

表4.转基因拷贝数及表达分析

1.4.t2代种子繁育

带有1个拷贝转基因的t0在温室中自交产生t1代种子。通过taqman检测转基因拷贝数(同1.3)，保留带有1个拷贝转基因的t1代植株。在玉米生长到v9时期时，将最新一片完全展开的叶片取样，用trizol^tm的标准流程提取rna。基因表达检测同样使用taqman的方法，内参基因和目的基因的taqman引物和探针序列信息见表5和表6。选择zmef基因做为内参，每个样品重复三次，同时三个生物学重复；用2^-δδct方法对基因表达进行相对定量分析。如表4，bcalmg19076-accd在所有选择的t1代植株中都有较高表达(非转基因对照表达量为零)。

表5.内参基因实时荧光定量pcr的引物和探针序列(基因表达)

表6.目的基因实时荧光定量pcr的引物和探针序列(基因表达)

t1转基因植株开花时，人工去雄；用野生型jhax花粉授雌穗产生t2代种子(表4)。t2种子会分离出转基因阳性植株和非转基因植株。t2代植株用于耐旱性分析。

实施例2.过表达bcalmg19076-accd提高了玉米水利用效率

水利用效率(wateruseefficiency)是积累单位重量干物质所需要的水量；需要的水量越少，反应了植物避旱能力的提高。在干旱初期和/或轻度干旱下，避旱能力越强，可以使植物更好的应对干旱胁迫。

选择3个转基因事件的t2代种子进行水利用效率分析(表7)。通过种子糊粉层的红色荧光标记(rfp)，将转基因和非转基因t2代种子各挑出50粒。准备9cm×9cm的方盆，装入类似重量的培养土。t2种子直播在方盆中间位置，1厘米深。正常浇水和施肥直到长至v3期。选中大小相近的30个转基因植株和30个非转基因植株；满水放置2小时后，用塑料盖封盖，然后控水干旱。剩余的苗，收获地上部分，称量起始鲜重(initialfw)和起始干重(initialdw)。干旱处理前，称取盆和植株总重量；7天控水后，再称取盆和植株总重；两者之差就是累计水利用量。同时收获植株地上部分并称量最终鲜重(finalfw)和最终干重(finaldw)。总用水量＝累计水利用量–(最终鲜重–起始鲜重)，水利用效率＝总水利用/(最终干重–起始干重)。利用t-test进行统计分析。

来自a009a和a014a的t2植株，转基因植株显著地提高了玉米水利用效率(表7，p<0.05)。来自a050a的t2植株中，过表达bcalmg19076-accd也明显地提高了水利用效率(p＝0.07)。因为是在植物激素水平上进行调节，不同转化事件中水利用效率的差别跟植物体内乙烯含量不同直接相关，而这种不同可以是受bcalmg19076-accd表达水平的调控(表4)，也可以是受转录后调控。

表7.水利用效率比较

实施例3.过表达bcalmg19076-accd增加了玉米抗旱性

抗旱性是植物通过调节自身水势，降低活性氧浓度，降低细胞膜破裂，来在干旱胁迫下维持一定的生长和产量。重度干旱会导致农作物绝产，在实际生产上往往会避免重度干旱。因此在中度干旱胁迫下，通过提高作物抗旱性增加稳产能力，至关重要。中度干旱在玉米上定义为田间减产40-60％的胁迫条件。

在温室中，配对干旱实验用于测试植物抗旱能力的区别。由于生物量同产量的显著相关性，配对干旱实验中40-60％生物量减少的干旱胁迫处理对应地定义为中度干旱。在这一条件下，对来自两个转化事件的t2植株进行了测试(表8)。平行地，10对野生型jhax正常浇水，同时10对野生型jhax进行干旱处理。胁迫结束后，测量两组jhax地上部分的干重。干旱处理导致了47％的减少(图2)，即为中度干旱胁迫。

t2种子通过rfp分选，在每个转化事件中挑出30粒转基因和30粒非转基因种子，播种到发芽盘中。正常浇水施肥直至v3期，挑选植株大小类似的转基因和非转基因植株，两两配对，移栽到34×28厘米的大盆中。移栽后，满水浇灌。然后一直控水进行干旱处理，直至同一转化事件内非转基因90％叶片卷曲程度到‘σ’型时停止干旱处理。收获地上部分，每棵苗单独一个袋子；在烘箱中80℃烘干2天后记录干重。利用t检验进行显著性分析。

过表达bcalmg19076-accd也显著地提高了玉米抗旱能力(表8)。

表8.中度干旱下生物量比较

实施例4.改造植物氨基转移酶来增加玉米抗旱性

acc脱氨酶是一类依赖于5'磷酸吡哆醛(pyridoxal5’-phosphate(plp))的脱氨酶，在植物上的同源基因一直没有明确的报道。植物体内有很多氨基转移酶(aminotransferase)，可以转移氨基酸上的氨基基团。grmzm2g151440，就是其中一个代表性的依赖于5'磷酸吡哆醛的氨基转移酶。通过蛋白序列和结构比对，可以通过基因编辑，蛋白质工程等方法改造内源氨基转移酶，使其具备acc识别和脱氨功能，来进一步提高作物抗旱能力。类似的还有水稻氨基转移酶基因(loc_os02g53330)和拟南芥atacd1基因(at1g48420)，可以用于改造并提高植物抗旱能力。

实施例5.过表达bcalmg19076-accd和rlepb172-accd并不能增加玉米抗旱性

选出来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因bunmti641-accd(seqidno:35-36)和来自豌豆根瘤菌pb172的acc脱氨酶基因rlepb172-accd(seqidno:38-39)。通过玉米密码子优化(分别为seqidno:37和seqidno:40)，分别连入植物双元载体19982(图4)和19953(图5)。同bcalmg19076-accd一样，t2代植株进行了配对干旱实验测试。结果表明，这两种acc脱氨酶基因未实现提高植物抗旱性的效果(表9)。

表9.中度干旱下生物量比较

结论：不是所有的acc脱氨酶都可以提高植物抗旱性。

参考文献

[1]fangyj,xionglz.generalmechanismsofdroughtresponseandtheirapplicationindroughtresistanceimprovementinplants.cellmollifesci.2015feb；72(4):673-89.

[2]habbenje,baox,batenj,debruinjl,doland,hasegawad,helentjaristg,lafitterh,lovann,moh,reimannk,schusslerjr.transgenicalterationofethylenebiosynthesisincreasesgrainyieldinmaizeunderfielddrought-stressconditions.plantbiotechnolj.2014aug；12(6):685-93.

[3]shij,habbenje,archibaldrl,drummondbj,chamberlinma,williamsrw,lafittehr,weersbp.overexpressionofargosgenesmodifiesplantsensitivitytoethylene,leadingtoimproveddroughttoleranceinbotharabidopsisandmaize.plantphysiol.2015sep；169(1):266-82.

[4]shimonm,tsiporat,bernardrg.plantgrowth-promotingbacteriathatconferresistancetowaterstressintomatoesandpeppers.plantscience166(2004)525–530.

[5]ishiday,hieiy,komarit.agrobacterium-mediatedtransformationofmaize.natprotoc.2007；2(7):1614-21.

[6]lih,lij,congxh,duanyb,lil,weipc,luxz,yangjb.improvementofagrobacterium-mediatedtransformationinhi-iimaize(zeamays)usingstandardbinaryvectors.plantcellrep.2008feb；27(2):297-305.

序列表

<110>先正达参股股份有限公司(syngentaparticipationsag)

先正达生物科技（中国）有限公司(syngentabiotechnologychinaco.,ltd.)

<120>提高植物耐旱能力的方法

<130>81748-cn-reg-org-nat-1

<141>2018-12-05

<160>40

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>856

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>prhvlpt2（大麦糊粉层特异脂转移蛋白启动子）

<400>1

ctctagagctagtggatctcgatgtgtagtctacgagaagggttaaccgtctcttcgtga60

gaataaccgtggcctaaaaataagccgatgaggataaataaaatgtggtggtacagtact120

tcaagaggtttactcatcaagaggatgcttttccgatgagctctagtagtacatcggacc180

tcacatacctccattgtggtgaaatattttgtgctcatttagtgatgggtaaattttgtt240

tatgtcactctaggttttgacatttcagttttgccactcttaggttttgacaaataattt300

ccattccgcggcaaaagcaaaacaattttattttacttttaccactcttagctttcacaa360

tgtatcacaaatgccactctagaaattctgtttatgccacagaatgtgaaaaaaaacact420

cacttatttgaagccaaggtgttcatggcatggaaatgtgacataaagtaacgttcgtgt480

ataagaaaaaattgtactcctcgtaacaagagacggaaacatcatgagacaatcgcgttt540

ggaaggctttgcatcacctttggatgatgcgcatgaatggagtcgtctgcttgctagcct600

tcgcctaccgcccactgagtccgggcggcaactaccatcggcgaacgacccagctgacct660

ctaccgaccggacttgaatgcgctaccttcgtcagcgacgatggccgcgtacgctggcga720

cgtgcccccgcatgcatggcggcacatggcgagctcagaccgtgcgtggctggctacaaa780

tacgtaccccgtgagtgccctagctagaaacttacacctgcaactgcgagagcgagcgtg840

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<211>678

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>cred（红色荧光蛋白基因）

<400>2

atggcctcctccgagaacgtcatcaccgagttcatgcgcttcaaggtgcgcatggagggc60

accgtgaacggccacgagttcgagatcgagggcgagggcgagggccgcccctacgagggc120

cacaacaccgtgaagctgaaggtgaccaagggcggccccctgcccttcgcctgggacatc180

ctgtccccccagttccagtacggctccaaggtgtacgtgaagcaccccgccgacatcccc240

gactacaagaagctgtccttccccgagggcttcaagtgggagcgcgtgatgaacttcgag300

gacggcggcgtggcgaccgtgacccaggactcctccctgcaggacggctgcttcatctac360

aaggtgaagttcatcggcgtgaacttcccctccgacggccccgtgatgcagaagaagacc420

atgggctgggaggcctccaccgagcgcctgtacccccgcgacggcgtgctgaagggcgag480

acccacaaggccctgaagctgaaggacggcggccactacctggtggagttcaagtccatc540

tacatggccaagaagcccgtgcagctgcccggctactactacgtggacgccaagctggac600

atcacctcccacaacgaggactacaccatcgtggagcagtacgagcgcaccgagggccgc660

caccacctgttcctgtag678

<210>3

<211>318

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>tpi-15（西红柿蛋白酶抑制因子ii终止子）

<400>3

agacttgtccatcttctggattggccaacttaattaatgtatgaaataaaaggatgcaca60

catagtgacatgctaatcactataatgtgggcatcaaagttgtgtgttatgtgtaattgc120

tagttatctgaataaaagagaaagagatcatccatatttcttatcctaaatgaatgtcac180

gtgtctttataattctttgatgaaccagatgcatttcattaaccaaatccatatacatat240

aaatattaatcatatataattaatatcaattgggttagcaaaacaaatctagtctaggtg300

tgttttgcgaatgcggcc318

<210>4

<211>1993

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>przmubi1（玉米泛素启动子）

<400>4

ctgcagtgcagcgtgacccggtcgtgcccctctctagagataatgagcattgcatgtcta60

agttataaaaaattaccacatattttttttgtcacacttgtttgaagtgcagtttatcta120

tctttatacatatatttaaactttactctacgaataatataatctatagtactacaataa180

tatcagtgttttagagaatcatataaatgaacagttagacatggtctaaaggacaattga240

gtattttgacaacaggactctacagttttatctttttagtgtgcatgtgttctccttttt300

ttttgcaaatagcttcacctatataatacttcatccattttattagtacatccatttagg360

gtttagggttaatggtttttatagactaatttttttagtacatctattttattctatttt420

agcctctaaattaagaaaactaaaactctattttagtttttttatttaataatttagata480

taaaatagaataaaataaagtgactaaaaattaaacaaataccctttaagaaattaaaaa540

aactaaggaaacatttttcttgtttcgagtagataatgccagcctgttaaacgccgtcga600

cgagtctaacggacaccaaccagcgaaccagcagcgtcgcgtcgggccaagcgaagcaga660

cggcacggcatctctgtcgctgcctctggacccctctcgagagttccgctccaccgttgg720

acttgctccgctgtcggcatccagaaattgcgtggcggagcggcagacgtgagccggcac780

ggcaggcggcctcctcctcctctcacggcaccggcagctacgggggattcctttcccacc840

gctccttcgctttcccttcctcgcccgccgtaataaatagacaccccctccacaccctct900

ttccccaacctcgtgttgttcggagcgcacacacacacaaccagatctcccccaaatcca960

cccgtcggcacctccgcttcaaggtacgccgctcgtcctccccccccccccctctctacc1020

ttctctagatcggcgttccggtccatggttagggcccggtagttctacttctgttcatgt1080

ttgtgttagatccgtgtttgtgttagatccgtgctgctagcgttcgtacacggatgcgac1140

ctgtacgtcagacacgttctgattgctaacttgccagtgtttctctttggggaatcctgg1200

gatggctctagccgttccgcagacgggatcgatttcatgattttttttgtttcgttgcat1260

agggtttggtttgcccttttcctttatttcaatatatgccgtgcacttgtttgtcgggtc1320

atcttttcatgcttttttttgtcttggttgtgatgatgtggtctggttgggcggtcgttc1380

tagatcggagtagaattctgtttcaaactacctggtggatttattaattttggatctgta1440

tgtgtgtgccatacatattcatagttacgaattgaagatgatggatggaaatatcgatct1500

aggataggtatacatgttgatgcgggttttactgatgcatatacagagatgctttttgtt1560

cgcttggttgtgatgatgtggtgtggttgggcggtcgttcattcgttctagatcggagta1620

gaatactgtttcaaactacctggtgtatttattaattttggaactgtatgtgtgtgtcat1680

acatcttcatagttacgagtttaagatggatggaaatatcgatctaggataggtatacat1740

gttgatgtgggttttactgatgcatatacatgatggcatatgcagcatctattcatatgc1800

tctaaccttgagtacctatctattataataaacaagtatgttttataattattttgatct1860

tgatatacttggatgatggcatatgcagcagctatatgtggatttttttagccctgcctt1920

catacgctatttatttgcttggtactgtttcttttgtcgatgctcaccctgttgtttggt1980

gttacttctgcag1993

<210>5

<211>1017

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>cbcalmg19076（玉米密码子优化后的来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，编码框序列）

<400>5

atgaatctccagaggttcccacgctaccccctgactttcggccccactcccatccagcca60

ctcaagcgcctgtcggaccatctcggcggcaaggtgcacctgtacgctaagcgggaggac120

tgcaactcgggcttcgcgttcggtggcaataagacacgcaagctcgagtacctgatccca180

gaggctctcgctcagggctgcgacaccctggtgtcgatcggtggcattcagtctaaccag240

acgaggcaggttgctgctgtggctgctcatctcggcatgaagtgcgtgctggtccaggag300

aactgggtcaattacagcgacgccgtgtacgatcgggtcggcaatatccagatgtcgagg360

attctcggcgctgacgtcaggctggttccagacggcttcgatatcgggttcaggaagtca420

tgggaggatgctctggagtccgtgcgggctgctggcgggaagccatacgctattccagct480

ggctgcagcgaccaccctctcggcgggctgggcttcgtcgggttcgctgaggaggttcgc540

cagcaggaggctgagctcggcttcaagttcgattacatcgtggtctgctccgttaccggc600

agcacgcaggctggcatggttgtggggttcgctgctgacggcagggcggatagggtcatc660

gggattgacgcgtctgctaagcccgcccagacaagggagcagatcactcggattgcttca720

aggacggctgagaaggtcggcctcgggagggacatcatggccaaggacgtcgttctggat780

gagaggttcggtggcccagagtacggcctccctaacgatgggacactccaggctatcagg840

ctgtgcgctaggcaggagggcgttctgactgacccggtgtacgagggcaagtccatgcat900

gggatgattgatatggtgcggaacggcgagttccccgaggggagccgcgtcctctacgct960

catctcggcggggtgccagccctcaacgggtactctttcatcttcaggaatgggtag1017

<210>6

<211>1017

<212>dna

<213>喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌

<220>

<223>cbcalmg19076（来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，编码框序列）

<400>6

atgaatctgcagcgatttccccgctatccgctcaccttcgggccaacacccatccagccg60

ctcaagcggctgagcgatcatctgggcggcaaggtgcatctctatgccaagcgcgaggac120

tgcaacagcggcttcgcgttcggcggcaacaagacgcgcaagctcgaatacctgattccc180

gaagcactcgcgcaaggctgcgatacgctcgtgtcgatcggcggcatccagtcgaaccag240

acgcgccaggtcgcggcggttgccgcgcatctcggcatgaagtgcgtactcgtgcaggaa300

aactgggtcaactattcggacgccgtgtacgaccgcgtcggcaacattcagatgtcgcgc360

attctgggcgcggacgtccgcctcgtgccggacggcttcgacattggctttcgtaagagc420

tgggaagacgcgctcgaaagcgtgcgcgccgcgggcggcaagccatacgcgattccggca480

ggctgctccgaccatccgctgggcggtctcggctttgtcggtttcgccgaagaagtgcgc540

cagcaggaagcggaactcggcttcaagttcgactacatcgtggtgtgctcggtgacgggc600

agcacgcaggcaggcatggtggtgggtttcgccgccgacggccgcgcagatcgcgtgatc660

ggcatcgacgcgtccgcgaaaccggcgcagacccgcgagcagatcacgcgaatcgcgagt720

cgcaccgcagagaaagtgggcctcggacgagatatcatggctaaggacgtcgtgctcgac780

gaacgcttcggcggccccgaatacggcctgccgaacgacggcacgctacaggcgatccgc840

ctgtgcgcccgccaggaaggcgtgctcaccgatccggtgtacgaaggcaagtcgatgcac900

ggaatgatcgacatggtgcgcaacggcgaatttcccgagggctcgcgcgtgctctatgcg960

cacctcggcggcgtgcctgccctgaacggctatagctttatctttcgcaacggttaa1017

<210>7

<211>338

<212>prt

<213>喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌

<220>

<223>cbcalmg19076（来自喀里多尼亚伯克霍尔德氏菌lmg19076的acc脱氨酶基因，蛋白序列）

<400>7

metasnleuglnargpheproargtyrproleuthrpheglyprothr

151015

proileglnproleulysargleuserasphisleuglyglylysval

202530

hisleutyralalysarggluaspcysasnserglyphealaphegly

354045

glyasnlysthrarglysleuglutyrleuileproglualaleuala

505560

glnglycysaspthrleuvalserileglyglyileglnserasngln

65707580

thrargglnvalalaalavalalaalahisleuglymetlyscysval

859095

leuvalglngluasntrpvalasntyrseraspalavaltyrasparg

100105110

valglyasnileglnmetserargileleuglyalaaspvalargleu

115120125

valproaspglypheaspileglyphearglyssertrpgluaspala

130135140

leugluservalargalaalaglyglylysprotyralaileproala

145150155160

glycysserasphisproleuglyglyleuglyphevalglypheala

165170175

glugluvalargglnglnglualagluleuglyphelyspheasptyr

180185190

ilevalvalcysservalthrglyserthrglnalaglymetvalval

195200205

glyphealaalaaspglyargalaaspargvalileglyileaspala

210215220

seralalysproalaglnthrarggluglnilethrargilealaser

225230235240

argthralaglulysvalglyleuglyargaspilemetalalysasp

245250255

valvalleuaspgluargpheglyglyproglutyrglyleuproasn

260265270

aspglythrleuglnalaileargleucysalaargglngluglyval

275280285

leuthraspprovaltyrgluglylyssermethisglymetileasp

290295300

metvalargasnglyglupheprogluglyserargvalleutyrala

305310315320

hisleuglyglyvalproalaleuasnglytyrserpheilephearg

325330335

asngly

<210>8

<211>1035

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>tubi1（玉米泛素终止子）

<400>8

gtcatgggtcgtttaagctgccgatgtgcctgcgtcgtctggtgccctctctccatatgg60

aggttgtcaaagtatctgctgttcgtgtcatgagtcgtgtcagtgttggtttaataatgg120

accggttgtgttgtgtgtgcgtactacccagaactatgacaaatcatgaataagtttgat180

gtttgaaattaaagcctgtgctcattatgttctgtctttcagttgtctcctaatatttgc240

ctgcaggtactggctatctaccgtttcttacttaggaggtgtttgaatgcactaaaacta300

atagttagtggctaaaattagttaaaacatccaaacaccatagctaatagttgaactatt360

agctatttttggaaaattagttaatagtgaggtagttatttgttagctagctaattcaac420

taacaatttttagccaactaacaattagtttcagtgcattcaaacacccccttaatgtta480

acgtggttctatctaccgtctcctaatatatggttgattgttcggtttgttgctatgcta540

ttgggttctgattgctgctagttcttgctgaatccagaagttctcgtagtatagctcaga600

ttcatattatttatttgagtgataagtgatccaggttattactatgttagctaggttttt660

tttacaaggataaattatctgtgatcataattcttatgaaagctttatgtttcctggagg720

cagtggcatgcaatgcatgacagcaacttgatcacaccagctgaggtagatacggtaaca780

aggttcttaaatctgttcaccaaatcattggagaacacacatacacattcttgccagtct840

tggttagagaaatttcatgacaaaatgccaaagctgtcttgactcttcacttttggccat900

gagtcgtgacttagtttggtttaatggaccggttctcctagcttgttctactcaaaactg960

ttgttgatgcgaataagttgtgatggttgatctctggattttgttttgctctcaatagtg1020

gacgagattagatag1035

<210>9

<211>2181

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>pract1（水稻肌动蛋白启动子）

<400>9

tgcagcccatccctcagccgcctttcactatcttttttgcccgagtcattgtcatgtgaa60

ccttggcatgtataatcggtgaattgcgtcgattttcctcttataggtgggccaatgaat120

ccgtgtgatcgcgtctgattggctagagatatgtttcttccttgttggatgtattttcat180

acataatcatatgcatacaaatatttcattacactttatagaaatggtcagtaataaacc240

ctatcactatgtctggtgtttcattttatttgcttttaaacgaaaattgacttcctgatt300

caatatttaaggatcgtcaacggtgtgcagttactaaattctggtttgtaggaactatag360

taaactattcaagtcttcacttattgtgcactcacctctcgccacatcaccacagatgtt420

attcacgtcttaaatttgaactacacatcatattgacacaatattttttttaaataagcg480

attaaaacctagcctctatgtcaacaatggtgtacataaccagcgaagtttagggagtaa540

aaaacatcgccttacacaaagttcgctttaaaaaataaagagtaaattttactttggacc600

acccttcaaccaatgtttcactttagaacgagtaattttattattgtcactttggaccac660

cctcaaatcttttttccatctacatccaatttatcatgtcaaagaaatggtctacataca720

gctaaggagatttatcgacgaatagtagctagcatactcgaggtcattcatatgcttgag780

aagagagtcgggatagtccaaaataaaacaaaggtaagattacctggtcaaaagtgaaaa840

catcagttaaaaggtggtataaagtaaaatatcggtaataaaaggtggcccaaagtgaaa900

tttactcttttctactattataaaaattgaggatgtttttgtcggtactttgatacgtca960

tttttgtatgaattggtttttaagtttattcgcttttggaaatgcatatctgtatttgag1020

tcgggttttaagttcgtttgcttttgtaaatacagagggatttgtataagaaatatcttt1080

aaaaaaacccatatgctaatttgacataatttttgagaaaaatatatattcaggcgaatt1140

aattctcacaatgaacaataataagattaaaatagctttcccccgttgcagcgcatgggt1200

attttttctagtaaaaataaaagataaacttagactcaaaacatttacaaaaacaacccc1260

taaagttcctaaagcccaaagtgctatccacgatccatagcaagcccagcccaacccaac1320

ccaacccaacccaccccagtccagccaactggacaatagtctccacacccccccactatc1380

accgtgagttgtccgcacgcaccgcacgtctcgcagccaaaaaaaaaaaaagaaagaaaa1440

aaaagaaaaagaaaaaacagcaggtgggtccgggtcgtgggggccggaaacgcgaggagg1500

atcgcgagccagcgacgaggccggccctccctccgcttccaaagaaacgccccccatcgc1560

cactatatacatacccccccctctcctcccatccccccaaccctaccaccaccaccacca1620

ccacctccacctcctcccccctcgctgccggacgacgagctcctcccccctccccctccg1680

ccgccgccgcgccggtaaccaccccgcccctctcctctttctttctccgttttttttttc1740

cgtctcggtctcgatctttggccttggtagtttgggtgggcgagaggcggcttcgtgcgc1800

gcccagatcggtgcgcgggaggggcgggatctcgcggctggggctctcgccggcgtggat1860

cgatccggcccggatctcgcggggaatggggctctcggatgtagatctgcgatccgccgt1920

tgttgggggagatgatggggggtttaaaatttccgccatgctaaacaagatcaggaagag1980

gggaaaagggcactatggtttatatttttatatatttctgctgcttcgtcaggcttagat2040

gtgctagatctttctttcttctttttgtgggtagaatttgaatccctcagcattgttcat2100

cggtagtttttcttttcatgatttgtgacaaatgcagcctcgtgcggagcttttttgtag2160

gtagaagctggctgacgccgg2181

<210>10

<211>552

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>cpat（大豆密码子优化的草胺膦乙酰转移酶基因）

<400>10

atgtctccagagagaaggccagttgagattagacctgctactgcggccgatatggcagct60

gtttgtgatattgttaaccattatattgagacttctactgttaacttcagaactgagcca120

caaactcctcaagagtggattgatgatcttgagagacttcaagatagatacccttggctt180

gttgctgaggttgagggagttgttgctggaattgcttatgctggaccttggaaggctaga240

aacgcttatgattggactgttgagtctactgtttatgtttctcatagacatcaaagactt300

ggacttggatctactctttatactcatcttcttaagtctatggaggctcaaggattcaag360

tctgttgttgctgttattggacttccaaacgatccatctgttagacttcatgaggctctt420

ggatatactgctagaggaactcttagagctgctggatataagcatggaggatggcatgat480

gttggattctggcaaagagatttcgagcttccagctccaccaagaccagttagaccagtt540

actcaaatttga552

<210>11

<211>70

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>t35s（花椰菜花叶病毒35s终止子）

<400>11

cttagtatgtatttgtatttgtaaaatacttctatcaataaaatttctaattcctaaaac60

caaaatccag70

<210>12

<211>1176

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>cpmi（6-磷酸甘露糖异构酶基因）

<400>12

atgcaaaaactcattaactcagtgcaaaactatgcctggggcagcaaaacggcgttgact60

gaactttatggtatggaaaatccgtccagccagccgatggccgagctgtggatgggcgca120

catccgaaaagcagttcacgagtgcagaatgccgccggagatatcgtttcactgcgtgat180

gtgattgagagtgataaatcgactctgctcggagaggccgttgccaaacgctttggcgaa240

ctgcctttcctgttcaaagtattatgcgcagcacagccactctccattcaggttcatcca300

aacaaacacaattctgaaatcggttttgccaaagaaaatgccgcaggtatcccgatggat360

gccgccgagcgtaactataaagatcctaaccacaagccggagctggtttttgcgctgacg420

cctttccttgcgatgaacgcgtttcgtgaattttccgagattgtctccctactccagccg480

gtcgcaggtgcacatccggcgattgctcactttttacaacagcctgatgccgaacgttta540

agcgaactgttcgccagcctgttgaatatgcagggtgaagaaaaatcccgcgcgctggcg600

attttaaaatcggccctcgatagccagcagggtgaaccgtggcaaacgattcgtttaatt660

tctgaattttacccggaagacagcggtctgttctccccgctattgctgaatgtggtgaaa720

ttgaaccctggcgaagcgatgttcctgttcgctgaaacaccgcacgcttacctgcaaggc780

gtggcgctggaagtgatggcaaactccgataacgtgctgcgtgcgggtctgacgcctaaa840

tacattgatattccggaactggttgccaatgtgaaattcgaagccaaaccggctaaccag900

ttgttgacccagccggtgaaacaaggtgcagaactggacttcccgattccagtggatgat960

tttgccttctcgctgcatgaccttagtgataaagaaaccaccattagccagcagagtgcc1020

gccattttgttctgcgtcgaaggcgatgcaacgttgtggaaaggttctcagcagttacag1080

cttaaaccgggtgaatcagcgtttattgccgccaacgaatcaccggtgactgtcaaaggc1140

cacggccgtttagcgcgtgtttacaacaagctgtaa1176

<210>13

<211>253

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>tnos（农杆菌胭脂碱合成酶基因终止子）

<400>13

gatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcg60

atgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgc120

atgacgttatttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatac180

gcgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatct240

atgttactagatc253

<210>14

<211>1260

<212>dna

<213>玉米

<220>

<223>cgrmzm2g151440（玉米氨基转移酶基因，编码框序列）

<400>14

atgaccgtcacttcgactctcccactcctctgtcgcttccgccgacacctgagtcttgtc60

gctgccgccgggatggccggagtcaccgccaccgggatggccggagttcccgccaccttc120

tcctcagccaccgctcagatcgggggcttcctctcgaagaagccttacgcgccgccgttg180

tgggccacgcacctctcccccatgccttgccataccttctcgctcggccatttcccaaca240

ccgattcacaagtggaatctgcccaatttgccggaaggaacggaagtgtggatcaagcga300

gacgatttatcaggcatgcagttgagtggaaacaaggtccggaagctggagttcttgatg360

gcagatgccgtagcacaaggcgcagactgcgttattactgttgggggtatacagagtaac420

cactgccgtgccacagccgtggctgctaagtatctcaatcttgattgctacctgatacta480

cgtacctccaagcttcttgtggataaggaccctggtttggttggcaatcttcttgtcgag540

agactagttggggcacacgttgatcttgtgtcaaaagaagaatatggaaaaattggtagt600

gtggctttagctgacctgctgaaaaaaaggcttctggaagaagggaggaagccgtatgtg660

attcctgttggtggatcaaactcattgggaacttggggatatattgaggcaataagggag720

attgagcagcaaattcagcaatcttctgatgttcagtttgatgatattgttgttgcatgt780

ggcagtggtggaaccattgctggccttgctttaggatccagattgagcagcttaaataca840

aaagttcatgcattctctgtttgtgatgaccctgaatacttctatgactatgtccaaggc900

ctgattgatggacttaattctggtttcgattcacatgatatagttagcatggaaaatgct960

aaggggttaggctatgccatgaacacagctgaggagcttaagtttgtcaaagacatagct1020

gcatcaacaggcattgtccttgatccagtctacagtgggaaggcggtttatggtttgcta1080

aaagacatggctggcaatccagccaaatggaaaggtcgaaaagttctgtttatccacaca1140

ggtggtcttcttgggttgtatgataaggctgaccagttgtcatctttggctgggagctgg1200

cgcagaatggatcttgaagattctgttccacgcaaagatggcactggtaagatgttctga1260

<210>15

<211>419

<212>prt

<213>玉米

<220>

<223>cgrmzm2g151440（玉米氨基转移酶基因，蛋白序列）

<400>15

metthrvalthrserthrleuproleuleucysargpheargarghis

151015

leuserleuvalalaalaalaglymetalaglyvalthralathrgly

202530

metalaglyvalproalathrpheserseralathralaglnilegly

354045

glypheleuserlyslysprotyralaproproleutrpalathrhis

505560

leuserprometprocyshisthrpheserleuglyhispheprothr

65707580

proilehislystrpasnleuproasnleuprogluglythrgluval

859095

trpilelysargaspaspleuserglymetglnleuserglyasnlys

100105110

valarglysleuglupheleumetalaaspalavalalaglnglyala

115120125

aspcysvalilethrvalglyglyileglnserasnhiscysargala

130135140

thralavalalaalalystyrleuasnleuaspcystyrleuileleu

145150155160

argthrserlysleuleuvalasplysaspproglyleuvalglyasn

165170175

leuleuvalgluargleuvalglyalahisvalaspleuvalserlys

180185190

gluglutyrglylysileglyservalalaleualaaspleuleulys

195200205

lysargleuleuglugluglyarglysprotyrvalileprovalgly

210215220

glyserasnserleuglythrtrpglytyrileglualaileargglu

225230235240

ilegluglnglnileglnglnserseraspvalglnpheaspaspile

245250255

valvalalacysglyserglyglythrilealaglyleualaleugly

260265270

serargleuserserleuasnthrlysvalhisalapheservalcys

275280285

aspaspproglutyrphetyrasptyrvalglnglyleuileaspgly

290295300

leuasnserglypheaspserhisaspilevalsermetgluasnala

305310315320

lysglyleuglytyralametasnthralaglugluleulyspheval

325330335

lysaspilealaalaserthrglyilevalleuaspprovaltyrser

340345350

glylysalavaltyrglyleuleulysaspmetalaglyasnproala

355360365

lystrplysglyarglysvalleupheilehisthrglyglyleuleu

370375380

glyleutyrasplysalaaspglnleuserserleualaglysertrp

385390395400

argargmetaspleugluaspservalproarglysaspglythrgly

405410415

lysmetphe

<210>16

<211>1206

<212>dna

<213>拟南芥

<220>

<223>catacd1（拟南芥氨基转移酶基因，编码框序列）

<400>16

atgagaggacgaagcttgacactctcaagagtaaagctcgagcttgcgagaagaagcatg60

tctgcaacatccgtaccttcaatggcggattttctcaccaaaaaaccttactctcctcct120

tcttgggcttctcatcttcgtccgcttccttctcacactttctccctcgctcaccttcct180

actccgatccatcgatggaatcttcctggtcttcctaatggcacagaactctggatcaag240

cgagatgatttcaccggaatggaattgagtggaaacaaagtacgaaaactcgaattctta300

atggcggaagctgttgatcaacacgctgatactgtaatcactatcggcggtattcagagc360

aatcattgtcgtgctacagccactgcatctaactatcttaatctcaattctcatcttatt420

ctccgtacttccaagcttcttgctgatgaagatcctggattggttgggaatctccttgtc480

gagcgtctcgttggagctaatgttcatctaatctctaaagaagagtattcttccattggg540

agtgaggctcttactaatgctctgaaagagaaactggaaaaagaaggaaagaaaccctat600

gttattccagtcggtggatcgaactctttgggaacttggggttatatagaagcagcaagg660

gaaattgaggagcagctgaattatagacccgatgacctgaaatttgatgatattgtggta720

gcatgtggcagtggtggtacaattgctggtatttcattggggtcttggttgggagctcta780

aaagccaaggttcatgctttctcggtttgcgatgatcctgattacttctatgactttgtc840

caagggcttctggatggacttcacgctggtgttaactctcgtgatatcgtcaacatccac900

aatgccaaaggaaaaggatatgccatgaacacgtcagaggagcttgagtttgtaaagaaa960

gtagcaagttcaactggtgttattcttgatccggtttacagtgggaaagctgcgtatggt1020

ttgataaatgagatcaccaaagatcccaaatgttgggagggaaggaagatattgttcata1080

cacactggtgggcttcttgggttgtatgataaggttgatcaaatggcatctctgatgggt1140

aattggtcccggatggatgtttcagaatccgttccaagaaaagatggtgttgggaaaatg1200

ttctag1206

<210>17

<211>401

<212>prt

<213>拟南芥

<220>

<223>catacd1（拟南芥氨基转移酶基因，蛋白序列）

<400>17

metargglyargserleuthrleuserargvallysleugluleuala

151015

argargsermetseralathrservalprosermetalaasppheleu

202530

thrlyslysprotyrserproprosertrpalaserhisleuargpro

354045

leuproserhisthrpheserleualahisleuprothrproilehis

505560

argtrpasnleuproglyleuproasnglythrgluleutrpilelys

65707580

argaspaspphethrglymetgluleuserglyasnlysvalarglys

859095

leuglupheleumetalaglualavalaspglnhisalaaspthrval

100105110

ilethrileglyglyileglnserasnhiscysargalathralathr

115120125

alaserasntyrleuasnleuasnserhisleuileleuargthrser

130135140

lysleuleualaaspgluaspproglyleuvalglyasnleuleuval

145150155160

gluargleuvalglyalaasnvalhisleuileserlysgluglutyr

165170175

serserileglyserglualaleuthrasnalaleulysglulysleu

180185190

glulysgluglylyslysprotyrvalileprovalglyglyserasn

195200205

serleuglythrtrpglytyrileglualaalaarggluilegluglu

210215220

glnleuasntyrargproaspaspleulyspheaspaspilevalval

225230235240

alacysglyserglyglythrilealaglyileserleuglysertrp

245250255

leuglyalaleulysalalysvalhisalapheservalcysaspasp

260265270

proasptyrphetyraspphevalglnglyleuleuaspglyleuhis

275280285

alaglyvalasnserargaspilevalasnilehisasnalalysgly

290295300

lysglytyralametasnthrserglugluleugluphevallyslys

305310315320

valalaserserthrglyvalileleuaspprovaltyrserglylys

325330335

alaalatyrglyleuileasngluilethrlysaspprolyscystrp

340345350

gluglyarglysileleupheilehisthrglyglyleuleuglyleu

355360365

tyrasplysvalaspglnmetalaserleumetglyasntrpserarg

370375380

metaspvalsergluservalproarglysaspglyvalglylysmet

385390395400

phe

<210>18

<211>1698

<212>dna

<213>水稻

<220>

<223>cloc_os02g53330（水稻氨基转移酶基因，编码框序列）

<400>18

atggcgcgtggggcccaccaggcaccaggtgggttttggactgtagctgctgccccgacg60

cgctgctcgctgccccactctctccccattcccctccacgccgccgccgccgccgccgcg120

tggatggccggagtttccgccgcctccgccgccgggaagatcgggagcttcctctccaag180

aggccgtacgcgccgccgtcctgggcctcgcacctgtcccccgccccctcgcagaccttc240

tcgctcggccatttcccgacgccgatccacaagtggaatctgcccaatttgccgaatggc300

acggaggtgtggatcaagcgagacgacatctcaggcatgcagttgagcgggaacaaggtc360

cggaagctcgagttcctgatggcagatgccgtcgcgcagggcgctgactgcgttataact420

gtaggtggcatccagagcaatcactgccgtgccaccgcagtggctgcaaagtatataaat480

cttgattgttatctgatactgcgcacatccaagcttcttgtggataaggaccctggtttg540

gttgggaatctccttgttgagagattggtgggagcgcatattgatcttgtttcaaaagaa600

gaatatggaaaaattggcagtgtggctttagcggacttgctgaaaaagaagcttttggaa660

gaaggccgaaaaccatatgttattcctgttggtggatcaaactctctaggaacttgggga720

tatatagaagcaataagggagattgaacatcaaattcagatatcaggtgatgttcagttt780

gacgacattgttgttgcatgtggcagcggtggaaccattgctggtcttgctttaggatca840

aaattgagtagcttaaaggcaaaagtccatgctttctctgtttgtgatgatcctggatat900

ttccattcctatgttcaagacctgattgatggacttcattctgatttgcgttcacatgat960

ttagtcaacattgaaaatgctaagggcttaggttatgccatgaacacagctgaggagctt1020

aagtttgttaaagatatagctacagcaacaggcattgtccttgatccagtctacagtgga1080

aaggcagcatatggaatgctgaaagacatgggtgctaatccagctaagtgggaagggcga1140

aaaattctttttgtacatacaggtggtcttcttggtttgtatgataaggttgatgagtta1200

tcatctttgagtgggagttggcgcagaatggatcttgaagaatctgttccacgcaaagat1260

ggaactgtcccatcacaggtaattcatgaagaattcagagaaggctgcagaatcattacc1320

tgcttggacttggattcagcttgcaggatctccagtacctccttatcggggttgatccca1380

tacctcgcctgcacgttcatctccataaactccagcagaggaatcaaagctacacaaagt1440

caaaaaccaacggtaaatcagatgcaaaacctgtcaatcttttctgaaccagaatttgct1500

gaacaagagaagaaactgaaaaggcaaaagaaaaaaaaaatgcaatgcccctacatacgt1560

gagccggtgctcttccagagctccttgtggctggcatctgctcctttgggaaggacatgg1620

acgaggatgatccggtcgccggccttcaccaggttatccaccgcccacttcgccgcggcc1680

ttgctcgacggcgagtag1698

<210>19

<211>565

<212>prt

<213>水稻

<220>

<223>cloc_os02g53330（水稻氨基转移酶基因，蛋白序列）

<400>19

metalaargglyalahisglnalaproglyglyphetrpthrvalala

151015

alaalaprothrargcysserleuprohisserleuproileproleu

202530

hisalaalaalaalaalaalaalatrpmetalaglyvalseralaala

354045

seralaalaglylysileglyserpheleuserlysargprotyrala

505560

proprosertrpalaserhisleuserproalaproserglnthrphe

65707580

serleuglyhispheprothrproilehislystrpasnleuproasn

859095

leuproasnglythrgluvaltrpilelysargaspaspilesergly

100105110

metglnleuserglyasnlysvalarglysleuglupheleumetala

115120125

aspalavalalaglnglyalaaspcysvalilethrvalglyglyile

130135140

glnserasnhiscysargalathralavalalaalalystyrileasn

145150155160

leuaspcystyrleuileleuargthrserlysleuleuvalasplys

165170175

aspproglyleuvalglyasnleuleuvalgluargleuvalglyala

180185190

hisileaspleuvalserlysgluglutyrglylysileglyserval

195200205

alaleualaaspleuleulyslyslysleuleuglugluglyarglys

210215220

protyrvalileprovalglyglyserasnserleuglythrtrpgly

225230235240

tyrileglualailearggluilegluhisglnileglnilesergly

245250255

aspvalglnpheaspaspilevalvalalacysglyserglyglythr

260265270

ilealaglyleualaleuglyserlysleuserserleulysalalys

275280285

valhisalapheservalcysaspaspproglytyrphehissertyr

290295300

valglnaspleuileaspglyleuhisseraspleuargserhisasp

305310315320

leuvalasnilegluasnalalysglyleuglytyralametasnthr

325330335

alaglugluleulysphevallysaspilealathralathrglyile

340345350

valleuaspprovaltyrserglylysalaalatyrglymetleulys

355360365

aspmetglyalaasnproalalystrpgluglyarglysileleuphe

370375380

valhisthrglyglyleuleuglyleutyrasplysvalaspgluleu

385390395400

serserleuserglysertrpargargmetaspleuglugluserval

405410415

proarglysaspglythrvalproserglnvalilehisglugluphe

420425430

arggluglycysargileilethrcysleuaspleuaspseralacys

435440445

argileserserthrserleuserglyleuileprotyrleualacys

450455460

thrpheileserileasnserserargglyilelysalathrglnser

465470475480

glnlysprothrvalasnglnmetglnasnleuserilepheserglu

485490495

progluphealagluglnglulyslysleulysargglnlyslyslys

500505510

lysmetglncysprotyrilearggluprovalleupheglnserser

515520525

leutrpleualaseralaproleuglyargthrtrpthrargmetile

530535540

argserproalaphethrargleuserthralahisphealaalaala

545550555560

leuleuaspglyglu

565

<210>20

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmadh1正向引物

<400>20

gaacgtgtgttgggtttgcat21

<210>21

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmadh1反向引物

<400>21

tccagcaatccttgcacctt20

<210>22

<211>24

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmadh1探针

<400>22

tgcagcctaaccatgcgcagggta24

<210>23

<211>29

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>pmi正向引物

<400>23

gctgtaagagcttactgaaaaaattaaca29

<210>24

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>pmi反向引物

<400>24

cgatctgcaggtcgacgg18

<210>25

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>pmi探针

<400>25

tgccgccaacgaatcaccgg20

<210>26

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>red正向引物

<400>26

aagtccatctacatggccaagaa23

<210>27

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>red反向引物

<400>27

gtgggaggtgatgtccagctt21

<210>28

<211>27

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>red探针

<400>28

cagctgcccggctactactacgtggac27

<210>29

<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmef正向引物

<400>29

gcgccgtcaccgtatcc17

<210>30

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmef反向引物

<400>30

gctcgtcgggcgtcagta18

<210>31

<211>27

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>zmef探针

<400>31

atcagaggcgagcagaaaccacaccac27

<210>32

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>bcalmg19076-accd正向引物

<400>32

ctagtgcgccagctcgtca19

<210>33

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>bcalmg19076-accd反向引物

<400>33

ggagagagggcaccagacg19

<210>34

<211>25

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>bcalmg19076-accd探针

<400>34

caggcacatcggcagcttaaacgac25

<210>35

<211>1017

<212>dna

<213>草根围伯克霍尔德氏菌

<220>

<223>cbunmti641-accd（来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因，编码框序列）

<400>35

atgaacctccagcgcttcccccggtaccccctcacgttcgggccgacgccaatccagccg60

ctcaagcgcctgagccagcatctcggcggcaaggtcgagctctatgcgaaacgcgaggac120

tgcaacagcgggctcgcgttcggcggcaacaagacgcgcaagctcgaatacctgattccc180

gacgcacttgcgcaaggttgcgacacgctggtgtcgatcggcggcattcagtcgaaccag240

actcgccaggtcgcggccgttgccgcgcatctcggcatgaagtgcgtacttgttcaggag300

aactgggtaaattactccgacgccgtctacgaccgcgtcggcaacatccagatgtcacgc360

atgatgggcgcggacgtgcggctcgtggcggacggcttcgatatcggcattcgcccgagc420

tgggaggaggcgctcgaaagcgtgcgccaggcgggcggcaaaccgtacgcgataccggca480

gggtgctccgagcatccgctcgggggcctcggcttcgtgggctttgccgaggaagtgcgg540

cagcaggaagccgagctcggcttcaagtttgactacatcgtcgtgtgctcggtcacgggc600

agcacgcaggcggggatggtggtgggcttcgccgccgacggccgcgcgaatcgcgtgatc660

ggtatcgacgcctccgctacgcccgaaaaaacgcacgcacagatcacgcgcatcgcgcgt720

cacacggcgggtctggtcgacctcagccgcgatatcggcgagcaggacgtgattctcgac780

acgcgctacggcgggcccgaatacgggctgccgaacgagggcacgctggaggcgattcgc840

ctgtgcgcgcggatggaaggcatgctgaccgacccggtgtacgaaggcaagtcgatgcac900

ggcatgatcgacaaagtgcgcctcggtgagttcgagccgggttcgaaggtgctgtatgcc960

catctgggcggcgtgcccgcgttgagcgcatacagcttcattttccgcgacggttga1017

<210>36

<211>338

<212>prt

<213>草根围伯克霍尔德氏菌

<220>

<223>cbunmti641-accd（来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因，蛋白序列）

<400>36

metasnleuglnargpheproargtyrproleuthrpheglyprothr

151015

proileglnproleulysargleuserglnhisleuglyglylysval

202530

gluleutyralalysarggluaspcysasnserglyleualaphegly

354045

glyasnlysthrarglysleuglutyrleuileproaspalaleuala

505560

glnglycysaspthrleuvalserileglyglyileglnserasngln

65707580

thrargglnvalalaalavalalaalahisleuglymetlyscysval

859095

leuvalglngluasntrpvalasntyrseraspalavaltyrasparg

100105110

valglyasnileglnmetserargmetmetglyalaaspvalargleu

115120125

valalaaspglypheaspileglyileargprosertrpglugluala

130135140

leugluservalargglnalaglyglylysprotyralaileproala

145150155160

glycyssergluhisproleuglyglyleuglyphevalglypheala

165170175

glugluvalargglnglnglualagluleuglyphelyspheasptyr

180185190

ilevalvalcysservalthrglyserthrglnalaglymetvalval

195200205

glyphealaalaaspglyargalaasnargvalileglyileaspala

210215220

seralathrproglulysthrhisalaglnilethrargilealaarg

225230235240

histhralaglyleuvalaspleuserargaspileglygluglnasp

245250255

valileleuaspthrargtyrglyglyproglutyrglyleuproasn

260265270

gluglythrleuglualaileargleucysalaargmetgluglymet

275280285

leuthraspprovaltyrgluglylyssermethisglymetileasp

290295300

lysvalargleuglygluphegluproglyserlysvalleutyrala

305310315320

hisleuglyglyvalproalaleuseralatyrserpheilephearg

325330335

aspgly

<210>37

<211>1017

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>cbunmti641-accd（玉米密码子优化后的来自草根围伯克霍尔德氏菌mti-641的acc脱氨酶基因，编码框序列）

<400>37

atgaatctccagcggttccctcggtaccccctcactttcggccccacacccatccagcca60

ctgaagcgcctgtcccagcacctcggcggcaaggtggagctctacgccaagcgcgaggac120

tgcaactcgggcctggcgttcggtggcaataagacaaggaagctcgagtacctgatccca180

gacgctctcgctcagggctgcgatacactggtgtcgatcggcgggattcagtctaaccag240

actaggcaggtggctgctgtcgctgctcacctcggcatgaagtgcgtcctggttcaggag300

aactgggtcaattacagcgacgccgtctacgatagggttggcaatatccagatgtcgcgc360

atgatgggggctgacgttaggctcgtggctgacggcttcgatatcgggattcggccatca420

tgggaggaggctctggagtccgtccgccaggcgggcgggaagccatacgctatcccagct480

ggctgcagcgagcatcctctcggcgggctgggcttcgtggggttcgctgaggaggtccgc540

cagcaggaggctgagctcggcttcaagttcgactacatcgtggtctgctccgtgaccggc600

agcacgcaggctggcatggttgtggggttcgctgctgacggcagggcgaacagggtcatc660

gggattgatgcttccgccacacccgagaagactcacgcccagatcaccaggattgctagg720

catacggctggcctcgttgacctgagcagggatatcggcgagcaggacgtgattctcgat780

acccgctacggtggcccagagtacggcctgcctaacgaggggacgctcgaggctatcagg840

ctgtgcgctcggatggagggcatgctgaccgacccggtgtacgagggcaagtctatgcac900

gggatgattgataaggtcaggctcggcgagttcgagccagggtcaaaggttctgtacgct960

cacctcggcggggttccagctctctcggcttactcgttcatcttcagggacggctga1017

<210>38

<211>1017

<212>dna

<213>豌豆根瘤菌

<220>

<223>crlepb172-accd（来自豌豆根瘤菌pb172的acc脱氨酶基因，编码框序列）

<400>38