本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一类萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物及其制备方法和应用。
背景技术：
黄酮类化合物广泛分布于自然植物中，数量种类繁多，结构类型复杂多样，具有广泛的药理活性，如可以抗肿瘤、抗炎抑菌、抗氧化、增强免疫力，以及预防心脑血管疾病和呼吸系统疾病。正因如此，该类化合物近年来一直是国内外研究的热点，随着对其构效关系的深入研究，黄酮类化合物的研究进入一个新的层次。
萘酰亚胺类化合物作为抗肿瘤小分子一直受到研究人员的广泛关注，多个衍生物已进入临床研究阶段，如氨萘菲特、米托萘胺等，但大多未能上市，主要原因是该类化合物具有多种毒副作用，如剂量限值、血液毒性等。
多胺，广泛存在于生物(包括人体)内的原核细胞和真核细胞中。研究表明在快速生长和分化的细胞中，多胺的含量以及与它们合成代谢相关的酶的活性都得到显著提高，因而它们能影响细胞的增殖、分裂等多种生理进程，具有多种重要的生理功能，进一步的研究显示，多胺修饰抗肿瘤化合物后能赋予化合物一些新的功能，因此，多胺在抗肿瘤方面的研究越来越多的引起人们的关注。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明目的在于提出一类萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物。
为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
一类萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物，具有式i所示结构：
其中a取0、1或2；m取1、2或3；n取1、2、3或4；r1为
具体的，所述r1为
上述萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物的合成路线如下：
其制备方法包括如下步骤：
(1b)化合物6与三氯氧磷，n,n-二甲基甲酰胺于90～95℃反应1-5h后倾入水中，减压抽滤得化合物7；
(2b)化合物7在koh溶液中与
(3b)化合物8在丙酮中与硫酸二甲酯反应制备化合物9；
(4b)化合物9在冰醋酸液中以重铬酸钾氧化制备化合物10；
(5b)化合物10与
其中，步骤(5b)中化合物10与
所述萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
所述萘酰亚胺取代的“黄酮-多胺”缀合物在制备抗肿瘤药物先导化合物方面的应用。
进一步的，所述肿瘤是指人结肠癌、人肝癌、人宫颈癌。
上述制备方法步骤(5b)中的化合物
化合物
(a1)取1,3-丙二胺或1,4-丁二胺溶于三乙胺甲醇溶液，与含有boc2o的甲醇溶液反应，减压蒸除，萃取，洗涤，收集，干燥，浓缩得化合物1；
(a2)取化合物1溶于乙腈，加无水碳酸钾，于45-50℃，分批加入3-溴丙基邻苯二甲酰亚胺或4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺，反应6-18h，减压蒸除，萃取，洗涤，收集，干燥，减压浓缩后与二叔丁氧基甲酸酐完全反应，减压蒸除，萃取，水洗；用石油醚和乙酸乙酯的混合液洗脱、纯化，得产物2；
(a3)取化合物2于无水乙醇中，加水合肼，室温搅拌6-18h，减压蒸除，萃取，洗涤，收集，浓缩得化合物3。
(a4)取化合物3溶于乙腈，加无水碳酸钾，于45-50℃，分批加入n-(3-溴丙基)邻苯二甲酰亚胺，反应6-18h；减压蒸除，萃取，洗涤，收集，干燥，减压浓缩后与二叔丁氧基甲酸酐反应，减压蒸除，萃取，水洗，用石油醚和乙酸乙酯混合液洗脱纯化得产物4；将化合物4溶于无水乙醇中，加水合肼，室温搅拌过夜，减压蒸除，萃取，洗涤，收集，浓缩得化合物
相对于现有技术，本发明所述的萘酰亚胺取代的黄酮-多胺缀合物具有以下优势：
本发明以苯并-γ-吡喃酮为原料，在其2-位引入活性基团萘酰亚胺骨架，合成新的萘酰亚胺取代的类黄酮药效团，并以多胺链修饰之，设计合成了一种萘酰亚胺取代的黄酮-多胺缀合物。该类化合物保持萘酰亚胺类化合物的活性的同时，也兼具了黄酮类化合物低毒的特性，改善了原有分子的生物学活性，提高了目标分子的抗肿瘤活性。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[(2-二甲基氨基)-乙基]}-1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-二酮}盐酸盐(12a)的制备：
(a1)取1,3-丙二胺或1,4-丁二胺(25mmol)溶于15ml10v％的三乙胺甲醇溶液，于冰浴下将10mmolboc2o(2.15g)的甲醇溶液10ml缓慢滴入上述溶液，滴毕升至室温搅拌12h；反应完毕后减压蒸出溶剂，残余物先用二氯甲烷萃取，再用饱和na2co3溶液洗涤，收集有机层，无水na2so4干燥，浓缩得化合物1；
(a2)取2.25g(11.45mmol)化合物1溶于50ml乙腈，加无水碳酸钾2.25g(16mmol)，室温搅拌15min后，升温至45℃，分批加入2.28(10.2mmol)3-溴丙基邻苯二甲酰亚胺或4-溴丁基邻苯二甲酰亚胺，于45℃反应12h。反应结束，减压蒸除溶剂，残余物先用二氯甲烷萃取，萃取后用质量分数10％的na2co3水溶液洗涤，收集有机层，无水na2so4干燥，减压浓缩后于乙醇中与14.34mmol(3.08g)二叔丁氧基甲酸酐反应至一种原料反应完，减压蒸出溶剂，残余物氯仿萃取，水洗；用体积比石油醚:乙酸乙酯＝4:1洗脱纯化得产物2；
(a3)取1.05g(2.15mmol)化合物2于50ml无水乙醇中，加水合肼0.64g(12.5mmol)，室温搅拌12h，减压蒸除溶剂，残余物先用二氯甲烷萃取，再用质量分数10％的na2co3水溶液洗涤，收集有机层，浓缩得化合物3，不需分离直接用于下步反应；
(a4)取4mmol化合物3溶于25ml乙腈，加无水碳酸钾1.13g(8mmol)，室温搅拌15min后，升温至45℃，分批加入1.04g(4mmol)n-(3-溴丙基)邻苯二甲酰亚胺，于45℃反应12h。反应结束，减压蒸除溶剂，残余物先用二氯甲烷萃取，再用质量分数10％na2co3溶液洗涤，收集有机层，无水na2so4干燥，减压浓缩后于乙醇中与9.6mmol(2.07g)二叔丁氧基甲酸酐反应，减压蒸出溶剂，残余物氯仿萃取，水洗，用体积比石油醚︰乙酸乙酯＝4:1洗脱纯化得产物4；将化合物4溶于25ml无水乙醇中，加水合肼0.64g(12.5mmol)，室温搅拌过夜，减压蒸除溶剂，残余物先用二氯甲烷萃取，再用质量分数10％的na2co3溶液洗涤，收集有机层，浓缩得n,n-二甲基乙二胺，不需分离直接用于下步反应；
(b1)取4.5mmol(0.69g)化合物6与0.63ml三氯氧磷混合，由滴液漏斗慢慢加n,n-二甲基甲酰胺0.63ml，加毕与90～95℃反应3h后倒入13.5ml冰水中，搅拌有大量褐色粘稠固体生成，减压抽滤，水洗得化合物7；
(b2)取15mmol(2.04g)邻羟基苯乙酮于100ml圆底烧瓶中，加19.5mmol(3.55g)化合物7，加乙醇11ml，然后冰浴下磁力搅拌，溶液呈黄色，待其全部溶解后，用恒压滴液漏斗滴加由6ml水和6g氢氧化钾固体配成的50％的溶液12g，然后当瓶内固体充分溶解后撤去冰浴，转移至油浴，在搅拌下，维持反应温度52℃反应5.5h，反应结束后，反应液呈棕红色，然后蒸出部分乙醇，将冷却后反应液倒入约盛有200ml冰水中，生成橙红色絮状沉淀，用hcl调ph到3-4左右，有大量深红色絮状沉淀生成，静置减压抽滤，收集橘红色固体；
(b3)取11.5mmol(3.45g)上述得到的橙红色固体放于250ml圆底烧瓶中，然后依次加入35.5mmol(2.0g)koh以及150ml甲醇，加氢氧化钾时将块状的固体用研钵将其研碎，使其更好的溶解在溶剂中，冰浴搅拌下待瓶中固体完全溶解后，用恒压滴液漏斗缓慢滴加22.5ml30％过氧化氢，20min内滴完，滴毕撤去冰浴恢复室温搅拌过夜，反应结束后蒸出部分甲醇，大约至剩余80ml溶液时，后加入约75ml冰水，稀盐酸中和，有大量橙黄色沉淀生成，减压抽滤，得化合物8；
(b4)取7.96mmol(2.5g)上步得到的化合物8于250ml的圆底烧瓶中，然后加入60ml丙酮，温水浴完全溶解后，依次加入24mmol(2.4g)碳酸钾以及31mmol(3.9g)硫酸二甲酯，在56℃下回流5h，反应结束后，蒸干溶剂，缓慢滴加适量稀氢氧化钠溶液，使溶液呈中性或弱碱性，滴加的过程中要充分摇晃，使溶液充分与未反应的硫酸二甲酯接触，以除去未反应的硫酸二甲酯，然后用二氯甲烷萃取，收集有机相，加无水硫酸钠干燥后，减压抽滤，用二氯甲烷洗涤，直至无水硫酸钠呈白色，收集滤液蒸干所得物硅胶柱分离纯化得产品9；
(b5)取7.5mmol(2.45g)上述得到的化合物9放入250ml圆底烧瓶中，依次加入33ml冰醋酸、12.4g重铬酸钾，最后加入0.5ml硫酸，此时，溶液呈橙黄色，加热回流5h后，冷却0.5h，将反应液倒入100ml冰水中，有大量暗绿色絮状沉淀生成，静置，减压抽滤，水洗。将所得固体收集，真空干燥箱充分干燥，得化合物10；取2mmol(0.75g)所得化合物10于100ml圆底烧瓶中，然后加入2.8mmoln,n-二甲基乙二胺，加入适量无水乙醇，使其完全溶解，加热回流3h，溶液呈褐色，反应瓶底部有部分不溶的黄色沉淀，将溶剂蒸干，后硅胶柱分离纯化(体积比二氯甲烷︰甲醇＝100:5洗脱纯化得纯品11a；取1mmol所得化合物11a于10ml无水乙醇中，冰浴搅拌下滴加4mhcl的乙醇(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)溶液0.5ml，滴毕，室温搅拌12h至大量固体出现，过滤，收集固体，用重蒸过的无水乙醇洗涤三次，干燥得化合物12a，产率：86％：1hnmr(300mhz,dmso)δ:8.56～8.64(m,2h,ar-h),8.04(d,j＝5.60hz,1h,ar-h),8.19(t,j＝8.62hz,1h,ar-h)；7.82～7.93(m,2h,ar-h),7.68(d,j＝5.68hz,1h,ar-h),7.59((t,j＝8.23hz,1h,ar-h),4.21(t,j＝6.28hz,1h,ar-h),3.06(s,3h,1×o-ch3),2.61～2.64(m,2h,1×ch2)；2.29(s,6h,2×ch3).13cnmr(75mhz,dmso)δ179.00,168.65,168.39,160.60,159.64,147.01,139.56,139.18,137.13,136.47,138.08,134.41,134.05,133.51,132.74,130.62,130.38,129.37,129.22,127.74,123.78,65.31,61.15,49.84.esi-mim/z:443.3[m+h-hcl]+.anal.calcdforc26h23cln2o5:c65.20,h4.84％,n5.85；foundc65.38％,h5.01％,n5.49％.
实施例2：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-2-[(4-氨基)-丁基]-1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-二酮}盐酸盐(12b)的制备：
除第(b5)步中用1b代替n,n-二甲基乙二胺，滴加2ml4mhcl乙醇(v盐酸:v乙醇＝1:2)溶液外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％：1hnmr(300mhz,dmso)δ:8.62(d,j＝7.53hz,1h,ar-h),8.55(d,j＝6.75hz,1h,ar-h),8.37(d,j＝8.31hz,1h,ar-h),8.16(t,j＝7.23hz,2h,ar-h),8.01(s,2h,nh-h),7.81～7.92(m,2h,ar-h),7.66(d,j＝8.40hz,1h,ar-h),7.54(t,j＝7.51hz,1h,ar-h),4.10(t,j＝6.39hz,2h,1×n-ch2),3.65(s,3h,1×o-ch3),2.83(s,2h,1×nh2-ch2),1.65～1.74(m,4h,2×ch2).13cnmr(75mhz,dmso+d2o)δ174.53,163.87,163.58,155.61,155.05,142.11,135.02,134.15,132.09,131.80,130.39,129.59,129.04,128.74,127.68,125.97,125.50,124.15,124.09,122.55,118.80,60.70,24.56.esi-msm/z:430.2[m+1-hcl]+.anal.calcdforc26h24cl2n2o55:c60.59％,h4.69％,n5.44％；foundc60.64％,h4.50％,n5.42％.
实施例3：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[3-(3-氨基丙基)–氨基丙基]1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-酮}二盐酸盐(12c)的制备：
除第(b5)步中用3a代替n,n-二甲基乙二胺，滴加2ml4mhcl乙醇溶液(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％，白色固体：1hnmr(300mhz,d2o)δ:8.16(t,j＝7.59hz,2h,ar-h),7.74～7.82(m,2h,ar-h),7.65(d,j＝7.89hz,2h,ar-h),7.49(t,j＝7.80hz,2h,ar-h),7.33(t,j＝7.53hz,1h,ar-h),7.20(t,j＝7.50hz,1h,ar-h),6.95(d,j＝8.31hz,1h,ar-h),4.15(t，j＝5.40hz,2h,1×n-ch2),3.43(s,3h,1×o-ch3),3.29(t,j＝7.69hz,4h,2×ch2),3.21(t,j＝7.77hz,2h,1×ch2),2.15～2.27(m,4h,2×ch2).13cnmr(75mhz,d2o)δ175.15,164.26,163.88,154.72,154.31,141.40,134.66,133.12,131.84,131.67,129.98,129.23,127.82,127.69,126.75,125.37,124.33,122.54,122.30,120.83,117.38,60.74,45.56,44.79,37.50,36.64,24.38,23.84.esi-mim/z:486.20[m+h-2hcl]+.anal.calcdforc28h29cl2n3o5:c60.22％,h5.23％,n7.52％；foundc60.37％,h5.51％,n7.45％.
实施例4：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[(4-氨基丁基)–氨基丁基]1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-酮}二盐酸盐(12d)的制备：
除第(b5)步中用化合物3b代替n,n-二甲基乙二胺，滴加1.0ml4mhcl乙醇溶液(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％，白色固体：1hnmr(300mhz,d2o)δ：8.08(d,j＝7.35hz,2h,ar-h),7.78(d,j＝8.43hz,1h,ar-h),7.71(d,j＝7.75hz,1h,ar-h),7.62(d,j＝7.98hz,1h,ar-h),7.44(t,j＝7.89hz,1h,ar-h),7.32(t,j＝7.50hz,1h,ar-h),7.17(t,j＝7.48hz,1h,ar-h),6.94(d,j＝8.28hz,1h,ar-h),3.98(t,j＝6.87hz,2h,1×n-ch2),3.40(s,3h,1×o-ch3),3.13～3.15(m,4h,1×ch2),3.04～3.08(m,2h,1×ch2),1.73～1.81(m,8h,4×ch2).13cnmr(75mhz,d2o)δ175.54,164.38,163.96,154.91,154.54,141.41,134.75,132.87,131.87,131.51,129.91,129.28,127.84,127.70,126.76,125.42,124.45,122.69,122.35,120.98,117.45,60.78,47.18,46.94,39.80,38.83,24.39,23.97,23.27,22.82.esi-mim/z:514.23[m+h-2hcl]+.anal.calcdforc30h33cl2n3o5:c61.44％,h5.67％,n7.16％；foundc61.36％,h5.90％,n7.49％.
实施例5：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[3-(3-(3-氨基丙基)氨基丙基)-氨基丙基]-胺}1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-酮}三盐酸盐(12e)的制备：
除第(b5)步中用化合物5a代替n,n-二甲基乙二胺，滴加2ml4mhcl乙醇溶液(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％，白色固体：1hnmr(300mhz,d2o)δ：8.19(d,j＝3.30hz,2h,ar-h),7.79～7.87(m,2h,j＝8.0hz,ar-h),7.67(d,j＝8.46hz,1h,ar-h),7.53(t,j＝7.38hz,1h,ar-h),7.38(t,j＝5.54hz,1h,ar-h),7.23(t,j＝7.29hz,1h,ar-h),6.98～7.00(m,1h,ar-h),4.17(t,j＝6.85hz,2h,1×n-ch2,3.43(s,3h,1×o-ch3),3.24～3.30(m,8h,4×ch2),3.16(t,j＝7.77hz,2h,1×ch2),2.10～2.29(m,6h,3×ch2).13cnmr(75mhz,d2o)δ175.23,164.26,163.87,154.75,154.33,141.41,134.65,133.12,131.84,131.67,130.00,129.24,127.83,127.70,126.74,125.39,124.39,122.54,122.31,120.83,117.39,60.77,45.62,44.79,44.72,37.58,36.59,24.40,23.79,22.80.esi-mim/z:543.3[m+h-3hcl]+.anal.calcdforc31h37cl3n4o5:c57.11％,h5.72％,n8.59％；foundc56.86％,h6.01％,n8.43％.
实施例6：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[3-(4-(3-氨基丙基)氨基丁基)-氨基丙基]-胺}1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-酮}三盐酸盐(12f)的制备：
除第(b5)步中用化合物5c代替n,n-二甲基乙二胺，滴加3ml4mhcl乙醇溶液(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％：1hnmr(300mhz,d2o)δ:8.24～8.27(m,2h,ar-h),7.95(d,1h,j＝8.52hz,ar-h),7.88(d,j＝7.68hz,1h,ar-h),7.72(d,j＝7.71hz,1h,ar-h),7.60(t,j＝7.85hz,1h,ar-h),7.44(t,1h,j＝7.31hz,ar-h),7.28(t,j＝7.69hz,1h,ar-h),7.05(t,j＝8.40hz,1h,ar-h),4.20(t,j＝6.39hz,2h,1×n-ch2),3.42(s,3h,1×o-ch3),3.09～3.25(m,10h,5×ch2),2.05～2.18(m,4h,2×ch2),1.83-1.85(m,4h,2×ch2).13cnmr(75mhz,d2o)δ175.84,164.83,164.40,155.41,154.63,141.49,134.88,134.81,133.17,132.23,131.97,130.08,129.43,127.96,127.80,126.97,125.39,124.40,122.76,122.33,121.01,117.64,60.83,57.36,47.00,45.34,44.51,37.48,36.48,24.36,23.71,22.80,16.72.esi-mim/z:557.4[m+h-3hcl]+.anal.calcdforc32h39cl3n4o5:c57.71％,h5.90％,n8.41％；foundc58.00％,h5.84％,n8.58％.
实施例7：
6-[2-(3-甲氧基-4h-1-苯并吡喃-4-酮)]-{2-[4-(4-(4-氨基丁基)氨基丁基)-氨基丁基]-胺}1h-苯并异喹啉-1,3(2h)-酮}三盐酸盐(12g)的制备：
除第(b5)步中用化合物5b代替n,n-二甲基乙二胺，滴加1.5ml4mhcl乙醇溶液(v4m盐酸:v乙醇＝1:2)外，其它合成及提纯方法同实施例1。产率：86％，白色固体：1hnmr(300mhz,d2o)δ:8.25(t,j＝6.03hz,2h,ar-h),7.94(d,j＝7.92hz,1h,ar-h),7.87(d,j＝6.96hz,1h,ar-h),7.75(d,j＝7.98hz,1h,ar-h),7.61(t,j＝7.77hz,1h,ar-h),7.44(t,j＝6.99hz,1h,ar-h),7.30(t,j＝7.50hz,1h,ar-h),7.09(t,j＝8.22hz,1h,ar-h),4.10(s,2h,1×n-ch2),3.45(s,3h,1×o-ch3),3.07～3.20(m,10h,5×n-ch2),1.81～1.84(m,2h,1×ch2).13cnmr(75mhz,d2o)δ175.28,164.08,163.70,154.84,154.42,141.52,134.63,133.07,131.76,131.61,129.89,129.19,127.79,127.58,126.71,125.42,124.47,122.64,122.38,120.94,117.40,60.77,47.23,46.97,39.81,38.84,24.40,23.95,23.31,22.91,22.88,22.79.esi-mim/z:584.4[m+h-3hcl]+.anal.calcdforc34h43cl3n4o5:c58.83％,h6.24％,n8.07％；foundc58.65％,h6.34％,n8.03％.
生物活性评价
(1)化合物体外抑制肿瘤细胞生长活性测定：
选择实施例1-7制备的化合物，分别取对数生长期的hct-116(人结肠癌细胞)、hepg2(人肝癌细胞)、hela(人宫颈癌细胞)、smmc7721(人肝癌细胞)四种肿瘤细胞株及qsg-7701(人正常肝细胞)，以每孔5000-8000个细胞埋入96孔板，90μl/孔。培养24h后，加入10、50、100、300、500μm的样品，对每个细胞株，每个浓度都有四个复孔，在37℃，5v％co2条件下培养48h后，加mtt50μl(即噻唑蓝)，继续培养4h后弃上清，每孔加入100μldsmo，轻轻振荡15min，用酶标仪在570nm波长处测其吸光度a值。按下面的公式计算被测物对不同肿瘤细胞生长的抑制率，实验重复三次，并由统计软件求出ic50值。结果见表1，其中，肿瘤细胞生长抑制率(％)＝(od对照-od实验)/(od对照-od空白)×100％。
表1各实施例化合物对肿瘤细胞的生长抑制活性。
由表1数据可以看出，实施例1至7的化合物分别对hct-116(人结肠癌细胞)、hepg2(人肝癌细胞)、hela(人宫颈癌细胞)、smmc7721(人肝癌细胞)四种肿瘤细胞的细胞毒作用方面起着不同程度的作用，相比对照药物氨萘菲特在体外对多种肿瘤细胞的增殖显示出更明显的抑制活性。其中实施例1、3、6对四种肿瘤细胞株的抑制能力优于阳性对照；实施例7对肝癌细胞hepg2和smmc7721的抑制能力弱于样性对照，但是对hela和hct-116细胞有较好选择选择性；尤其实施例6化合物对hct-116、hepg2、hela三种肿瘤细胞具有较好的选择性，表明该类化合物能有效抑制所测试肿瘤细胞株的增殖，具有成药性的潜力。
上述实施例为本发明实施方式的举例说明，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它任何未背离本发明精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。