CD137特异性的双环肽配体的制作方法

本发明涉及与分子支架共价结合的多肽，使得两个或多个肽环在与支架的附着点之间相对(subtend)。特别地，本发明描述了作为cd137的高亲和力结合物的肽。本发明还包括包含与一个或多个效应物和/或官能团缀合的所述肽的药物缀合物、包含所述肽配体和药物缀合物的药物组合物、以及所述肽配体和药物缀合物在预防、抑制或治疗cd137介导的疾病或病症中的用途。

背景技术：

环肽能够以高亲和力和靶标特异性结合蛋白质靶标，因此对于开发治疗剂是有吸引力的分子类别。实际上，临床上已经成功使用了几种环肽，例如抗菌肽万古霉素、免疫抑制剂药物环孢霉素或抗癌药奥曲肽(driggers等人(2008)，natrevdrugdiscov7(7)，608-24)。良好的结合特性是由于肽和靶标之间形成的相对大的相互作用表面以及环结构的构象柔韧性降低。通常，大环结合至数百平方埃的表面，例如环肽cxcr4拮抗剂cvx15(wu等人(2007)，science330，1066-71)、具有arg-gly-asp基序与整联蛋白αvb3结合的环肽(xiong等人(2002)，science296(5565)，151-5)或与尿激酶型纤溶酶原激活剂结合的环肽抑制剂upain-1(zhao等人(2007)，jstructbiol160(1)，1-10)。

由于其环状结构，肽大环比线性肽的柔韧性差，导致与靶标结合后熵损失较小，并导致更高的结合亲和力。与线性肽相比，降低的柔韧性还导致锁定靶标特异性构象，增加结合特异性。这种作用已通过基质金属蛋白酶8(mmp-8)的有效且选择性的抑制剂得到了例证，该抑制剂在开环时失去了对其他mmp的选择性(cherney等人(1998)，jmedchem41(11)，1749-51)。通过大环化获得的有利的结合特性在具有多于一个肽环的多环肽中更为显著，例如在万古霉素、乳链菌肽和放线菌素中。

不同的研究团队先前已将具有半胱氨酸残基的多肽附着到合成的分子结构上(kemp和mcnamara(1985)，j.org.chem；timmerman等人(2005)，chembiochem)。meloen及其同事已使用三(溴甲基)苯和相关分子将多个肽环快速定量地环化到合成的支架上，以结构模拟蛋白质表面(timmerman等人(2005)，chembiochem)。在wo2004/077062和wo2006/078161中公开了产生候选药物化合物的方法，其中所述化合物通过将含半胱氨酸的多肽连接至分子支架(例如三(溴甲基)苯)而产生。

已经开发了基于噬菌体展示的组合方法来产生和筛选针对感兴趣靶标的双环肽的大文库(heinis等人(2009)，natchembiol5(7)，502-7和wo2009/098450)。简而言之，在噬菌体上展示包含三个半胱氨酸残基和两个区域的六个随机氨基酸的线性肽(cys-(xaa)6-cys-(xaa)6-cys)的组合文库，并通过将半胱氨酸侧链共价连接至小分子(三(溴甲基)苯)而环化。

技术实现要素：

根据本发明的第一方面，提供了cd137特异性的肽配体，其包含多肽以及分子支架，所述多肽包含至少三个被至少两个环序列隔开的反应性基团，所述分子支架与所述多肽的反应性基团形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物缀合物，其包含与一个或多个效应物和/或官能团缀合的本文定义的肽配体。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的本文所定义的肽配体或药物缀合物。

根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的肽配体或药物缀合物，其用于预防、抑制或治疗由cd137介导的疾病或病症。

附图说明

图1：使用双环肽bcy592进行cd137细胞活性测定法的结果。

图2：如通过荧光偏振所测量的，cd137l或单克隆抗体乌托米单抗(utomilumab)与荧光标记的肽bcy640竞争结合cd137。

图3：如通过荧光偏振所测量的，单克隆抗体乌托米单抗(utomilumab)或乌瑞鲁单抗(urelumab)与荧光标记的肽bcy640竞争结合cd137。

具体实施方式

根据可能提及的本发明的一个特定方面，提供了cd137特异性的肽配体，其包含多肽和分子支架，所述多肽包含至少三个被至少两个环序列隔开的半胱氨酸残基，以及所述分子支架与所述多肽的半胱氨酸残基形成共价键，使得在分子支架上形成至少两个多肽环。

在一个实施方案中，所述环序列包含5或6个氨基酸。

在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成。

在进一步的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，其中一个环序列由5个氨基酸组成，另一个环序列由6个氨基酸组成。

在一个实施方案中，所述肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

ci-i-e-e-g-q-y-cii-x1-x2-d-x3-y/q/m-x4-ciii(seqidno:20)；

ci-d-i-g-p-p-y-cii-y-r/a-d-m/p-y-m-ciii(seqidno:21)；

ci-d-e-w-g-l-f/y-cii-i/f-p/a-h-s/p-d-ciii(seqidno:22)；和

ciiepgpfciiyadpymciii(seqidno:19)；

其中x1-x4代表任何氨基酸残基，ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基或其药学上可接受的盐。

对本发明所选的肽进行了丙氨酸扫描实验。丙氨酸扫描用于预测哪些氨基酸位置最适合取代，并进一步优化亲和力和/或其他所需特性。基于相对于亲本肽序列(bcy7151；seqidno:92)的亲和力，将丙氨酸扫描肽表征为三类：1.无亲和力损失；2.亲和力减弱2-10倍；和3.亲和力减弱>10倍。第1类和第2类中的肽可以使用替代的氨基酸取代进行广泛的sar测试。第3类中的肽保持固定或仅被高度相似的氨基酸取代。丙氨酸扫描的结果示于表2，其中可以看出，在第9位的天冬氨酸(d)氨基酸残基对于结合是最重要的，因为用丙氨酸残基代替该氨基酸残基消除了结合活性。

还对本发明所选择的肽进行了d-丙氨酸扫描实验。所有双环肽的默认制备均为l-构型，因此，d-丙氨酸扫描显示哪些氨基酸位置适合d-氨基酸取代。d-丙氨酸扫描的结果显示在表2中，其中可以看出，相对于参考肽，用d-ala替代第4位甘氨酸(g)改善了亲和力。这意味着d-ala4肽(bcy7297；seqidno:106)很重要，因为它提供了改善的亲和力以及与非天然d异构体氨基酸相关的其他优点。

在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成，并且所述肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

ci-i-e-e-g-q-y-cii-x1-x2-d-x3-y/q/m-x4-ciii(seqidno:20)；

ci-d-i-g-p-p-y-cii-y-r/a-d-m/p-y-m-ciii(seqidno:21)；和

ciiepgpfciiyadpymciii(seqidno:19)；

其中x1-x4代表任何氨基酸残基，ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，x1选自y、f和h。

在一个实施方案中，x2选自r、a和s。

在一个实施方案中，x3选自m、p和h。

在一个实施方案中，x4选自m、y、l和f。

在一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列中的第一环序列由6个氨基酸组成，第二环序列由5个氨基酸组成，并且所述肽配体包括以下氨基酸序列：

ci-d-e-w-g-l-f/y-cii-i/f-p/a-h-s/p-d-ciii(seqidno:22)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，ci-i-e-e-g-q-y-cii-x1-x2-d-x3-y/q/m-x4-ciii(seqidno：20)的肽配体包含选自seqidno：1-14中任一个的氨基酸序列：

ciieegqyciiyrdmymciii(seqidno：1)；

ciieegqyciiyadpymciii(seqidno：2)；

ciieegqyciiyadpyyciii(seqidno：3)；

ciieegqyciiysdpyyciii(seqidno：4)；

ciieegqyciifadpymciii(seqidno：5)；

ciieegqyciiyadhqlciii(seqidno：6)；

ciieegqyciihadpyyciii(seqidno：7)；

ciieegqyciihadpyfciii(seqidno：8)；

ciieegqyciiyadhymciii(seqidno：9)；

ciieegqyciiyadpylciii(seqidno：10)；

ciieegqyciiysdpylciii(seqidno：11)；

ciieegqyciifadpylciii(seqidno：12)；

ciieegqyciihadpymciii(seqidno：13)；和

ciieegqyciihadpqmciii(seqidno：14)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，ci-i-e-e-g-q-y-cii-x1-x2-d-x3-y/q/m-x4-ciii(seqidno：20)的肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

a-(seqidno：1)-a(本文称为74-01-00-n004)；

a-(seqidno：2)-a(本文称为74-01-01-n001)；

a-(seqidno：3)-a(本文称为74-01-02-n001)；

a-(seqidno：4)-a(本文称为74-01-03-n001)；

a-(seqidno：5)-a(本文称为74-01-04-n001)；

a-(seqidno：6)-a(本文称为74-01-05-n001)；

a-(seqidno：7)-a(本文称为74-01-06-n001)；

a-(seqidno：8)-a(本文称为74-01-07-n001)；

a-(seqidno：9)-a(本文称为74-01-08-n001)；

a-(seqidno：10)-a(本文称为74-01-09-n001)；

a-(seqidno：10)-svg(本文称为74-01-09-t03-n002)；

a-(seqidno：11)-a(本文称为74-01-10-n001)；

a-(seqidno：12)-a(本文称为74-01-11-n001)；

a-(seqidno：13)-a(本文称为74-01-13-n001)；和

a-(seqidno：14)-a(本文称为74-01-14-n001)。

在另一个实施方案中，ci-d-i-g-p-p-y-cii-y-r/a-d-m/p-y-m-ciii(seqidno:21)的肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

cidigppyciiyrmymciii(seqidno:15)；和

cidigppyciiyadpymciii(seqidno:16)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，ci-d-i-g-p-p-y-cii-y-r/a-d-m/p-y-m-ciii(seqidno:21)的肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

a-(seqidno:15)-a(本文称为74-01-16-n001)；和

a-(seqidno:16)-a(本文称为74-01-17-n001)。

在另一个实施方案中，ci-d-e-w-g-l-f/y-cii-i/f-p/a-h-s/p-d-ciii(seqidno:22)的肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

cidewglfciiiphsdciii(seqidno:17)；和

cidewglyciifahpdciii(seqidno:18)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，ci-d-e-w-g-l-f/y-cii-i/f-p/a-h-s/p-d-ciii(seqidno:22)的肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

ac-a-(seqidno:17)-a(本文称为74-02-00-n004)；和

a-(seqidno:18)-a(本文称为74-02-01-n001)。

在一个实施方案中，ciiepgpfciiyadpymciii(seqidno:19)的肽配体包含以下氨基酸序列：

a-(seqidno:19)-nrv(本文称为74-19-00-t01-n002)。

在一个实施方案中，分子支架选自1,1',1”-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(tata)，肽配体包含选自以下的氨基酸序列：

a-(seqidno:1)-a(本文称为74-01-00-n004)；

a-(seqidno:2)-a(本文称为74-01-01-n001)；

a-(seqidno:3)-a(本文称为74-01-02-n001)；

a-(seqidno:4)-a(本文称为74-01-03-n001)；

a-(seqidno:5)-a(本文称为74-01-04-n001)；

a-(seqidno:6)-a(本文称为74-01-05-n001)；

a-(seqidno:7)-a(本文称为74-01-06-n001)；

a-(seqidno:8)-a(本文称为74-01-07-n001)；

a-(seqidno:9)-a(本文称为74-01-08-n001)；

a-(seqidno:10)-a(本文称为74-01-09-n001)；

a-(seqidno：10)-svg(本文称为74-01-09-t03-n002)；

a-(seqidno：11)-a(本文称为74-01-10-n001)；

a-(seqidno：12)-a(本文称为74-01-11-n001)；

a-(seqidno：13)-a(本文称为74-01-13-n001)；

a-(seqidno：14)-a(本文称为74-01-14-n001)；

a-(seqidno：15)-a(本文称为74-01-16-n001)；

a-(seqidno：16)-a(本文称为74-01-17-n001)；

ac-a-(seqidno：17)-a(本文称为74-02-00-n004)；和

a-(seqidno：18)-a(本文称为74-02-01-n001)。

如本文表1所示，该实施方案的支架/肽配体表现出优异的cd137竞争结合。

在另一个实施方案中，所述肽配体选自：

ciieegqyciifadpy(nle)ciii(seqidno：23)；

ciikegqyciifadpy(nle)ciii(seqidno：24)；

ciiekgqyciifadpy(nle)ciii(seqidno：25)；

ciiee(d-k)qyciifadpy(nle)ciii(seqidno：26)；

ciieegkyciifadpy(nle)ciii(seqidno：27)；

ciieegqyciikadpy(nle)ciii(seqidno：28)；

ciieegqyciifadky(nle)ciii(seqidno：29)；和

ciieegqyciifadpykciii(seqidno：30)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，所述肽配体包含n和c-末端修饰，并包含选自以下的氨基酸序列：

a-ciieegqyciifadpy(nle)ciii-a(seqidno：31；bcy3814)；

ac-a-ciieegqyciifadpy(nle)ciii-dap(seqidno：32；bcy7732)；

ac-a-ciikegqyciifadpy(nle)ciii-a(seqidno：33；bcy7733)；

ac-a-ciiekgqyciifadpy(nle)ciii-a(seqidno：34；bcy7734)；

ac-a-ciiee(d-k)qyciifadpy(nle)ciii-a(seqidno：35；bcy7735)；

ac-a-ciieegkyciiifadpy(nle)ciii-a(seqidno：36；bcy7736)；

ac-a-ciieegqyciikadpy(nle)ciii-a(seqidno：37；bcy7737)；

ac-a-ciieegqyciifadky(nle)ciii-a(seqidno：38；bcy7738)；和

ac-a-ciieegqyciifadpykciii-a(seqidno：39；bcy7739)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基，ac代表n-末端乙酰基，dap代表二氨基丙酸，或其药学上可接受的盐。

在另一个实施方案中，所述肽配体包含以下氨基酸序列：

cilppgqyciifpdlllciii(seqidno：40；74-22-00)

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基。

在一个可选的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成，并且所述肽配体包含以下氨基酸序列：

ci-i/l/m/v-e/d/p/s-p/e/a-g-p/q-y/f-cii-y-a-d-p-y/m-m/l/y-ciii(seqidno:41)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基。

在另一个实施方案中，所述氨基酸序列选自表1中列出的肽序列。在另一个实施方案中，所述氨基酸序列选自表1中列出的肽序列，不包括bcy7238、bcy7241、bcy7243和bcy7246的肽。在cd137直接结合测定法中测试了该实施方案的肽，并证明了良好的结合水平。

在另一个实施方案中，所述氨基酸序列选自表3中列出的肽序列。在cd137直接结合测定法中测试了该实施方案的肽，并证明了良好的结合水平。

在另一个实施方案中，所述氨基酸序列选自表4和5中列出的肽序列。在cd137spr测定法中测试了该实施方案的肽，并证明了良好的结合水平。

在另一个实施方案中，所述氨基酸序列选自bcy592。数据显示在本文的图1中，其表明双环肽bcy592在基于细胞的测定法中抑制了cd137l活性。

在一个可选的实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成，并且所述肽配体包含以下氨基酸序列：

ci-x5-x6-x7-x8-x9-x10-cii-x11-x12-d-x13-x14-x15-ciii(seqidno:266)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基；

x5代表ile、tbuala或chg；

x6代表glu、pro、asp、lys、aad、hyp或oxa；

x7代表glu、lys或aad；

x8代表gly、d-lys、d-ala、l-ala、d-phe、d-glu、d-gln、d-leu、d-ser或d-trp；

x9代表gln、lys、ala、pro、5,5-dmp、oic、oxa、hyp、aib或ac5c；

x10代表tyr、phe、3mephe、4mephe、4fphe、2nal、4meophe或4,4-bpa；

x11代表phe、lys、4mephe、2fphe、4fphe、4pal、4,4-bpa、4tbuphe、no2phe或4brphe；

x12代表ala或lys；

x13代表pro或lys；

x14代表tyr或lys；和

x15代表met、lys、nle、hleu或ahp。

在一个实施方案中，seqidno：266的肽配体选自以下肽的ci至ciii序列(即不存在任何n-末端和c-末端添加)：

bcy7239、bcy7240、bcy7242、bcy7244、bcy7245、bcy7247、bcy7248、bcy7249、bcy7416、bcy7287、bcy7297、bcy7154、bcy7156、bcy7157、bcy7158、bcy7162、bcy7165、bcy7166、bcy7167、bcy7168、bcy7169、bcy7170、bcy7174、bcy7175、bcy7177、bcy7178、bcy7179、bcy7183、bcy7185、bcy7195、bcy7198、bcy7211、bcy7311、bcy7768、bcy7770、bcy7772、bcy7773、bcy7774、bcy7775、bcy7776、bcy7796、bcy7798、bcy7801、bcy7802、bcy7936、bcy7941、bcy7942、bcy7944、bcy7950、bcy7954、bcy7958、bcy7959、bcy7960、bcy7952、bcy7961、bcy8656、bcy8659、bcy8663、bcy8668、bcy8669、bcy8674、bcy8675、bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

在另一个实施方案中，seqidno：266的肽配体选自以下肽的全序列(即，包括所有n-末端和c-末端添加)：

bcy7239、bcy7240、bcy7242、bcy7244、bcy7245、bcy7247、bcy7248、bcy7249、bcy7416、bcy7287、bcy7297、bcy7154、bcy7156、bcy7157、bcy7158、bcy7162、bcy7165、bcy7166、bcy7167、bcy7168、bcy7169、bcy7170、bcy7174、bcy7175、bcy7177、bcy7178、bcy7179、bcy7183、bcy7185、bcy7195、bcy7198、bcy7211、bcy7311、bcy7768、bcy7770、bcy7772、bcy7773、bcy7774、bcy7775、bcy7776、bcy7796、bcy7798、bcy7801、bcy7802、bcy7936、bcy7941、bcy7942、bcy7944、bcy7950、bcy7954、bcy7958、bcy7959、bcy7960、bcy7952、bcy7961、bcy8656、bcy8659、bcy8663、bcy8668、bcy8669、bcy8674、bcy8675、bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

这些肽或者在本文所述的直接结合或spr测定法中均显示出良好的结合水平，或者代表了耐受被lys残基取代的肽。

在一个实施方案中，x5代表ile或tbuala。

在一个实施方案中，x6代表lys、glu或pro。

在一个实施方案中，x7代表glu或d-lys。

在一个实施方案中，x8代表gly、d-lys、d-phe或d-ala。

在一个实施方案中，x9代表gln、lys或pro。

在一个实施方案中，x10代表tyr或4mephe。

在一个实施方案中，x11代表phe或4fphe。

在一个实施方案中，x12代表ala。

在一个实施方案中，x13代表pro。

在一个实施方案中，x14代表tyr。

在一个实施方案中，x15代表met或nle。

在另一个实施方案中，所述肽配体包含被两个环序列隔开的三个半胱氨酸残基，所述两个环序列均由6个氨基酸组成，并且所述肽配体包含以下氨基酸序列：

ci-x5-x6-x7-x8-x9-x10-cii-x11-a-d-p-y-x15-ciii(seqidno:267)；

其中ci、cii和ciii分别代表第一、第二和第三半胱氨酸残基；

x5代表ile或tbuala；

x6代表lys、glu或pro；

x7代表glu或d-lys；

x8代表gly、d-lys、d-phe或d-ala；

x9代表gln、lys或pro；

x10代表tyr或4mephe；

x11代表phe或4fphe；和

x15代表met或nle。

在一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的ci至ciii序列(即不存在任何n-末端和c-末端添加)：bcy7239、bcy7240、bcy7242、bcy7416、bcy7156、bcy7166、bcy7174、bcy7774、bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

在另一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的全序列(即包括所有n-末端和c-末端添加)：bcy7239、bcy7240、bcy7242、bcy7416、bcy7156、bcy7166、bcy7174、bcy7774、bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

这些肽或者在本文所述的直接结合或spr测定法中均显示出优异的结合水平，或者代表了耐受被lys残基取代的肽。

在一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的ci至ciii序列(即不存在任何n-末端和c-末端添加)：bcy7239、bcy7240、bcy7242和bcy7416。

在另一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的全序列(即包括所有n-末端和c-末端添加)：bcy7239、bcy7240、bcy7242和bcy7416。

这些肽代表耐受被lys残基取代的肽。

在一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的ci至ciii序列(即不存在任何n-末端和c-末端添加)：bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

在另一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的全序列(即包括所有n-末端和c-末端添加)：bcy9273、bcy3814、bcy7527和bcy7965。

这些肽或者在本文所述的直接结合或者在spr测定法中均显示出良好的结合水平。

在一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的ci至ciii序列(即不存在任何n-末端和c-末端添加)：bcy7156、bcy7166、bcy7174和bcy7774。

在另一个实施方案中，seqidno：267的肽配体选自以下肽的全序列(即包括所有n-末端和c-末端添加)：bcy7156、bcy7166、bcy7174和bcy7774。

这些肽或者在本文所述的直接结合或者在spr测定法中均显示出优异的结合水平。

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义，例如在肽化学、细胞培养和噬菌体展示、核酸化学和生物化学领域中。将标准技术用于分子生物学、遗传和生化方法(参见sambrook等人，molecularcloning:alaboratorymanual,第3版，2001，coldspringharborlaboratorypress，coldspringharbor，ny；ausubel等人，shortprotocolsinmolecularbiology(1999)第4版，johnwiley&sons，inc.)，在此引用作为参考。

命名法

编号

当提及式(i)化合物内的氨基酸残基位置时，由于半胱氨酸残基是不变的，因而从编号中省略了半胱氨酸残基(ci、cii和ciii)，因此，式(i)化合物内的氨基酸残基的编号如下所示：

-ci-i1-e2-e3-g4-q5-y6-cii-y7-r8-d9-m10-y11-m12-ciii-(seqidno:1)

为了说明的目的，假定所有双环肽都用tbmb(1,3,5-三(溴甲基)苯)或1,1'，1”-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(tata)环化，并生成三取代结构。用tbmb和tata的环化发生在ci、cii和ciii上。

分子形式

向序列的左侧或右侧添加向双环核心序列的n或c-末端延伸，并以连字符隔开。例如，n-末端βala-sar10-ala尾将表示为：

βala-sar10-a-(seqidno:x)

肽配体

如本文所指，肽配体是指与分子支架共价结合的肽。通常，这样的肽包含两个或多个能够与支架形成共价键的反应性基团(即半胱氨酸残基)，以及在所述反应性基团之间相对的序列，因为肽与支架结合时该序列形成环，因而其被称为环序列。在当前情况下，肽包含至少三个半胱氨酸残基(在本文中称为ci、cii和ciii)，并在支架上形成至少两个环。

肽配体的优势

本发明的某些双环肽具有许多有利的性质，使得它们被认为是适合于注射、吸入、鼻、眼、口或局部施用的类药物分子。这些有利的性质包括：

-物种交叉反应。这是临床前药效学和药代动力学评估的常规要求；

-蛋白酶稳定性。双环肽配体理想地应表现出对血浆蛋白酶、上皮(“膜锚定”)蛋白酶、胃和肠蛋白酶、肺表面蛋白酶、细胞内蛋白酶等的稳定性。应当在不同物种之间保持蛋白酶的稳定性，以便可以在动物模型中开发双环前导候选物，并有信心施用于人；

-理想的溶解度曲线。这是带电荷的亲水与疏水残基的比例和分子内/分子间氢键的函数，这对于配制和吸收目的很重要；和

-循环中最佳的血浆半衰期。根据临床适应症和治疗方案，可能需要开发一种在急性疾病管理环境中短时间暴露的双环肽，或者开发一种在循环中具有增强的保留的双环肽，因此对于管理较慢性的疾病状态是最佳的。导致期望的血浆半衰期的其他因素是要求获得最大的治疗效率而需要持续暴露，以及由于试剂的持续暴露而伴随的毒理学。

-选择性。本发明的某些肽配体对其他cd表现出良好的选择性。

药学上可接受的盐

应当理解，盐形式在本发明的范围内，并且提及肽配体时包括所述配体的盐形式。

本发明的盐可以通过常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成，所述常规化学方法例如在pharmaceuticalsalts:properties，selection，anduse，p.heinrichstahl(编辑)，camilleg.wermuth(编辑)，isbn:3-90639-026-8，hardcover，第388页，2002年8月中描述的那些方法。通常，这些盐可以通过将这些化合物的游离酸或碱形式与适当的碱或酸在水中、或在有机溶剂中、或在两者的混合物中反应来制备。

可以用多种无机和有机酸形成酸加成盐(单盐或二盐)。酸加成盐的示例包括与酸形成的单盐或二盐，所述酸选自乙酸、2，2-二氯乙酸、己二酸、藻酸、抗坏血酸(例如l-抗坏血酸)、l-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)樟脑、樟脑磺酸、(+)-(1s)-樟脑-10磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳酸、龙胆酸、葡庚糖酸、d-葡萄糖酸、葡糖醛酸(例如d-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如l-谷氨酸)、α-氧代戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢卤酸(例如氢溴酸、盐酸、氢碘酸)、羟乙磺酸、乳酸(例如(+)-l-乳酸、(±)-dl-乳酸)、乳糖醛酸、马来酸、苹果酸、(-)-l-苹果酸、丙二酸、(±)-dl-扁桃酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟碱酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸、磷酸、丙酸、丙酮酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、单宁酸、(+)-l-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、十一碳烯酸和戊酸、以及酰化的氨基酸和阳离子交换树脂。

一组特定的盐由以下的酸形成的盐组成：乙酸、盐酸、氢碘酸、磷酸、硝酸、硫酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、苹果酸、羟乙磺酸、富马酸、苯磺酸、甲苯磺酸、硫酸、甲磺酸(甲磺酸)、乙磺酸、萘磺酸、戊酸、丙酸、丁酸、丙二酸、葡糖醛酸和乳糖醛酸。一种特定的盐是盐酸盐。另一种特定的盐是乙酸盐。

如果化合物是阴离子的，或具有可以是阴离子的官能团(例如，cooh可以是-coo^-)，则可以与有机或无机碱形成盐，生成合适的阳离子。合适的无机阳离子的示例包括但不限于碱金属离子如li⁺、na⁺和k⁺，碱土金属阳离子如ca²⁺和mg²⁺，以及其他阳离子如al³⁺或zn⁺。合适的有机阳离子的示例包括但不限于铵离子(即，nh4⁺)和取代的铵离子(例如，nh3r⁺、nh2r2⁺、nhr3⁺、nr4⁺)。一些合适的取代铵离子的示例是衍生自以下的那些：甲胺、乙胺、二乙胺、丙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，例如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的示例是n(ch3)4⁺。

当式(i)的化合物包含胺官能团时，它们可以例如根据技术人员众所周知的方法通过与烷基化剂反应形成季铵盐。这样的季铵化合物在式(i)的范围内。

修饰的衍生物

应当理解，本文所定义的肽配体的修饰衍生物在本发明的范围内。此类合适的修饰衍生物的示例包括一种或多种选自以下的修饰：n-末端和/或c-末端修饰；用一个或多个非天然氨基酸残基替换一个或多个氨基酸残基(例如用一个或多个等位或等电子氨基酸替换一个或多个极性氨基酸残基；用其他非天然等位或等电子氨基酸替换一个或多个非极性氨基酸残基)；添加间隔基团；用一个或多个氧化抗性氨基酸残基替换一个或多个氧化敏感性氨基酸残基；用丙氨酸替换一个或多个氨基酸残基，用一个或多个d-氨基酸残基替换一个或多个l-氨基酸残基；双环肽配体内一个或多个酰胺键的n-烷基化；用替代性键替换一个或多个肽键；肽主链长度修饰；用其他化学基团取代一个或多个氨基酸残基的α-碳上的氢，用合适的胺、巯基、羧酸和酚反应性试剂修饰氨基酸(例如半胱氨酸、赖氨酸、谷氨酸/天冬氨酸和酪氨酸)，使得所述氨基酸官能化，以及引入或替换引入适合于官能化的正交反应性氨基酸，例如叠氮或带有炔基的氨基酸，其分别允许用带有炔或叠氮的部分进行官能化。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括n-末端和/或c-末端修饰。在另一个实施方案中，其中所述修饰的衍生物包括使用合适的氨基反应化学的n-末端修饰，和/或使用合适的羧基反应化学的c-末端修饰。在另一个实施方案中，所述n-末端或c-末端修饰包括添加效应基团，所述效应基团包括但不限于细胞毒性剂、放射螯合剂或发色团。

在另一个实施方案中，修饰的衍生物包括n-末端修饰。在另一个实施方案中，n-末端修饰包括n-末端乙酰基。在该实施方案中，在肽合成过程中，n-末端半胱氨酸基团(在本文中称为ci的基团)被乙酸酐或其他合适的试剂封端，从而产生n-末端乙酰化的分子。该实施方案提供了去除氨基肽酶的潜在识别点的优点，避免了双环肽降解的可能性。

在一个可选的实施方案中，n-末端修饰包括添加分子间隔基团，该分子间隔基团促进效应基团的缀合并保留双环肽对其靶标的效力。

在另一个实施方案中，修饰的衍生物包括c-末端修饰。在另一个实施方案中，c-末端修饰包含酰胺基。在该实施方案中，c-末端半胱氨酸基团(本文中称为ciii的基团)在肽合成过程中作为酰胺合成，从而产生c-末端被酰胺化的分子。该实施方案提供了去除羧肽酶的潜在识别点的优点，降低了双环肽被蛋白水解降解的可能性。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括用一个或多个非天然氨基酸残基替换一个或多个氨基酸残基。在该实施方案中，可以选择具有等位/等电子侧链的非天然氨基酸，其既不被降解蛋白酶识别，也不对靶标效力产生任何不利影响。

备选地，可以使用具有受约束的氨基酸侧链的非天然氨基酸，使得附近肽键的蛋白水解性水解在构象和空间上受到阻碍。具体地，这涉及脯氨酸类似物、庞大的侧链、cα-二取代的衍生物(例如氨基异丁酸、aib)和环氨基酸，简单的衍生物是氨基-环丙基羧酸。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括添加间隔基团。在另一个实施方案中，修饰的衍生物包括向n-末端半胱氨酸(ci)和/或c-末端半胱氨酸(ciii)添加间隔基团。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括用一个或多个氧化抗性氨基酸残基替换一个或多个氧化敏感性氨基酸残基。在另一个实施方案中，修饰的衍生物包括用萘基丙氨酸或丙氨酸残基替换色氨酸残基。该实施方案提供了改善所得双环肽配体的药物稳定性谱的优点。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括用一个或多个疏水性氨基酸残基替换一个或多个带电荷的氨基酸残基。在另一个实施方案中，修饰的衍生物包括用一个或多个带电荷的氨基酸残基替换一个或多个疏水性氨基酸残基。带电荷的氨基酸残基与疏水性氨基酸残基的正确平衡是双环肽配体的重要特征。例如，疏水性氨基酸残基影响血浆蛋白结合的程度，从而影响血浆中可用的游离组分的浓度，而带电荷的氨基酸残基(尤其是精氨酸)可能会影响肽与细胞表面磷脂膜的相互作用。两者的组合可能影响肽药物的半衰期、分布体积和暴露量，并且可以根据临床终点进行调整。另外，带电荷的氨基酸残基与疏水性氨基酸残基的正确组合和数量可以降低注射部位的刺激性(如果肽药物已通过皮下施用)。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括用一个或多个d-氨基酸残基替换一个或多个l-氨基酸残基。该实施方案被认为是通过空间位阻和通过d-氨基酸稳定β-转角构象的倾向来增加蛋白水解稳定性(tugyi等人(2005)pnas，102(2)，413–418)。

在一个实施方案中，修饰的衍生物包括去除任何氨基酸残基并用丙氨酸取代。该实施方案提供了去除潜在的蛋白水解攻击位点的优点。

应当注意的是，每个上述修饰都用于有意地改善肽的效力或稳定性。通过以下机制可以实现基于修饰的进一步效能的效力改善：

-并入利用疏水作用并导致较低的解离率的疏水部分，从而实现更高的亲和力；

-并入利用长距离离子相互作用的带电荷的基团，从而导致更快的结合速率和更高的亲和力(参见例如schreiber等人，rapid，electrostaticallyassistedassociationofproteins(1996)，naturestruct.biol.3，427-31)；和

-并入另外的对肽的约束，例如通过正确地约束氨基酸的侧链以使得在靶标结合时熵的损失最小，约束主链的扭转角以使得在靶标结合时熵的损失最小，并且出于相同的原因在分子中引入另外的环化。

(关于综述，参见gentilucci等人，curr.pharmaceuticaldesign,(2010)，16，3185-203，和nestor等人，curr.medicinalchem(2009)，16，4399-418)。

同位素变异

本发明包括本发明的所有药学上可接受的(放射性)同位素标记的肽配体，其中一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量序数不同于通常天然存在的原子质量或质量序数的原子取代，以及在其中连接了能够容纳相关(放射性)同位素的金属螯合基团(称为“效应物”)的本发明肽配体，以及在其中某些官能团被相关(放射性)同位素或同位素标记的官能团共价所取代的本发明肽配体。

适用于包含在本发明的肽配体中的同位素的示例包括：氢的同位素(例如²h(d)和³h(t))、碳的同位素(例如¹¹c、¹³c和¹⁴c)、氯的同位素(例如³⁶cl)、氟的同位素(例如¹⁸f)、碘的同位素(例如¹²³i、¹²⁵i和¹³¹i)、氮的同位素(例如¹³n和¹⁵n)、氧的同位素(例如¹⁵o、¹⁷o和¹⁸o)、磷的同位素(例如³²p)、硫的同位素(例如³⁵s)、铜的同位素(例如⁶⁴cu)、镓的同位素(例如⁶⁷ga或⁶⁸ga)、钇的同位素(例如⁹⁰y)和镏的同位素(例如¹⁷⁷lu)和铋的同位素(例如²¹³bi)。

本发明的某些同位素标记的肽配体，例如掺入放射性同位素的那些肽配体，可用于药物和/或物质组织分布研究中，并在临床上评估患病组织上cd137靶标的存在和/或缺乏。本发明的肽配体还可进一步具有有价值的诊断特性，在于它们可用于检测或鉴定标记的化合物与其他分子、肽、蛋白质、酶或受体之间的复合物的形成。该检测或鉴定方法可以使用用标记试剂标记的化合物，例如放射性同位素、酶、荧光物质、发光物质(例如，鲁米诺、鲁米诺衍生物、荧光素、水母发光蛋白和荧光素酶)等。由于放射性同位素氚，即³h(t)和碳-14，即¹⁴c易于掺入并且检测方法容易，因而它们对于本发明的目的特别有用。

用更重的同位素，例如氘(即²h(d))取代，由于其更高的代谢稳定性，可以提供某些治疗优势，例如，增加体内的半衰期或减少剂量要求，因此在某些情况下可能是优选的。

用正电子发射同位素(例如¹¹c、¹⁸f、¹⁵o和¹³n)取代，可用于正电子发射断层扫描(pet)研究，以检查靶标占有率。

通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例中描述的那些方法类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替之前使用的非标记试剂，来制备本发明肽配体的同位素标记的化合物。

分子支架

分子支架描述于例如wo2009/098450和其中引用的参考文献，特别是wo2004/077062和wo2006/078161。

如前述文献所述，分子支架可以是小分子，例如有机小分子。

在一实施方案中，分子支架可以是大分子。在一个实施方案中，分子支架是由氨基酸、核苷酸或碳水化合物组成的大分子。

在一个实施方案中，分子支架包含能够与多肽的官能团反应以形成共价键的反应性基团。

分子支架可以包含与肽形成连接的化学基团，例如胺、巯基、醇、酮、醛、腈、羧酸、酯、烯烃、炔烃、叠氮化物、酸酐、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、烷基卤化物和酰基卤化物。

在一个实施方案中，分子支架可以包含六氢-1,3,5-三嗪，尤其是1,3,5-三丙烯酰基六氢-1,3,5-三嗪('tata')或其衍生物，或由其组成。

在一实施方案中，分子支架是2,4,6-三(溴甲基)均三甲苯。该分子类似于1,3,5-三(溴甲基)苯(tbmb)，但包含三个另外的连接至苯环的甲基。这样做的优点是，另外的甲基可以与多肽形成进一步的接触，因此增加了另外的结构约束。

本发明的分子支架包含化学基团，其允许本发明的编码文库的多肽的官能团与分子支架形成共价连接。所述化学基团选自多种官能团，包括胺、巯基、醇、酮、醛、腈、羧酸、酯、烯烃、炔烃、酸酐、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、叠氮化物、烷基卤化物和酰基卤化物。

可以用于在分子支架上与半胱氨酸的巯基反应的支架反应性基团是烷基卤化物(或也称为卤代烃或卤代烷)。

示例包括溴甲基苯或碘乙酰胺。用于选择性地将化合物与蛋白质中的半胱氨酸偶联的其他支架反应性基团是马来酰亚胺、包含αβ不饱和羰基的化合物和包含α卤代甲基羰基的化合物。可以在本发明中用作分子支架的马来酰亚胺的示例包括：三-(2-马来酰亚胺基乙基)胺、三-(2-马来酰亚胺基乙基)苯、三-(马来酰亚胺基)苯。包含αβ不饱和羰基的化合物的示例是1,1',1”-(1,3,5-三嗪烷-1,3,5-三基)三丙-2-烯-1-酮(tata)(angewandtechemie，国际版(2014)，53(6)，1602-1606)。包含α卤代甲基羰基的化合物的示例是n,n',n”-(苯-1,3,5-三基)三(2-溴乙酰胺)。硒代半胱氨酸也是一种天然氨基酸，其与半胱氨酸具有相似的反应性，可用于相同的反应。因此，无论在何处提及半胱氨酸，除非上下文另外指出，否则通常都可以用硒代半胱氨酸代替。

反应性基团

本发明的分子支架可以通过多肽上的官能团或反应性基团与多肽键合(即共价键合)。这些通常由多肽聚合物中存在的特定氨基酸的侧链形成。这样的反应性基团可以是半胱氨酸侧链、赖氨酸侧链或n-末端胺基或任何其他合适的反应性基团。细节可以在wo2009/098450中找到。

天然氨基酸的反应性基团的示例是半胱氨酸的巯基、赖氨酸的氨基、天冬氨酸或谷氨酸的羧基、精氨酸的胍基、酪氨酸的酚基或丝氨酸的羟基。非天然氨基酸可提供广泛的反应性基团，包括叠氮化物、酮羰基、炔烃、乙烯基或芳基卤化物基团。多肽末端的氨基和羧基也可以用作反应性基团与分子支架/分子核心形成共价键。

在一个实施方案中，反应性基团包括半胱氨酸残基。在一个替代实施方案中，反应性基团包括青霉胺。

本发明的多肽包含至少三个反应性基团。所述多肽还可以包含四个或多个反应性基团。使用的反应性基团越多，在分子支架中可以形成越多的环。

在一个优选的实施方案中，产生具有三个反应性基团的多肽。所述多肽与具有三重旋转对称性的分子支架/分子核心的反应产生单一产物异构体。由于多种原因，单一产物异构体的产生是有利的。化合物文库的核酸仅编码多肽的一级序列，而不编码在多肽与分子核心反应时形成的分子的异构状态。如果仅可以形成一种产物异构体，则明确限定了产物异构体的核酸分配。如果形成多种产物异构体，则核酸不能提供关于在筛选或选择过程中分离出的产物异构体性质的信息。如果合成本发明文库的特定成员，则单一产物异构体的形成也是有利的。在这种情况下，多肽与分子支架的化学反应产生单一产物异构体而不是异构体的混合物。

在本发明的另一个实施方案中，产生具有四个反应性基团的多肽。所述多肽与具有四面体对称性的分子支架/分子核心反应，产生两种产物异构体。即使两种不同的产物异构体由一个相同的核酸编码，也可以通过化学合成两种异构体、分离这两种异构体并测试这两种异构体与靶标配体的结合来确定分离的异构体的异构性质。

在本发明的一个实施方案中，多肽的至少一个反应性基团对于其余的反应性基团是正交的。正交反应性基团的使用允许将所述正交反应性基团引导至分子核心的特定位点。包括正交反应性基团的连接策略可用于限制形成的产物异构体的数目。换句话说，针对至少三个键中的一个或多个，而选择与针对至少三个键中其余部分所选择的那些基团有区别的或不同的反应性基团，可以有效地实现键合的特定顺序，或将多肽的特定反应性基团引导至分子支架上的特定位置。

在另一个实施方案中，本发明多肽的反应性基团与分子接头反应，其中所述接头能够与分子支架反应，使得接头将以最终键合状态插入分子支架和多肽之间。

在一些实施方案中，多肽文库或多肽组中成员的氨基酸可以被任何天然或非天然氨基酸替代。从这些可交换氨基酸中排除带有用于将多肽交联至分子核心的官能团的氨基酸，使得仅环序列是可交换的。可交换的多肽序列具有随机序列、恒定序列或具有随机和恒定氨基酸的序列。具有反应性基团的氨基酸位于多肽内的限定位置，因为这些氨基酸的位置决定了环的大小。

巯基介导的缀合的替代方法，可用于通过共价相互作用将分子支架连接到肽上。或者，在根据本发明选择或分离多肽后，这些技术可用于修饰或将其他部分(例如不同于分子支架的感兴趣的小分子)连接至多肽，——那么在此实施方案中，显然连接不一定是共价的，可以包含非共价的连接。通过产生噬菌体，使噬菌体展示带有具有必需化学反应性基团的非天然氨基酸的蛋白质和肽、组合具有互补反应性基团的小分子，或通过在选择/分离阶段之后制备分子时，将非天然氨基酸并入化学或重组合成的多肽，可以使用这些方法代替巯基介导的方法(或与其组合使用)。进一步的细节可以在wo2009/098450或heinis等人，natchembiol2009，5(7)，502-7中找到。

效应物和官能团

根据本发明的另一方面，提供了一种药物缀合物，其包含与一个或多个效应物和/或官能团缀合的本文定义的肽配体。

效应物和/或官能团可以连接至例如多肽的n和/或c末端、多肽内的氨基酸或分子支架。

适当的效应基团包括抗体及其部分或片段。例如，效应基团可以包括抗体轻链恒定区(cl)、抗体ch1重链结构域、抗体ch2重链结构域、抗体ch3重链结构域或其任意组合，以及一个或多个恒定区结构域。效应基团还可包含抗体的铰链区(通常在igg分子的ch1和ch2结构域之间存在的这样的区域)。

在本发明该方面的另一个实施方案中，根据本发明的效应基团是igg分子的fc区。有利地，根据本发明的肽配体效应基团包含肽配体fc融合体，或由其组成，所述肽配体fc融合体具有一天或更长、两天或更长、3天或更长、4天或更长、5天或更长、6天或更长或7天或更长的tβ半衰期半衰期。最有利地，根据本发明的肽配体包含具有一天或更长tβ半衰期的肽配体fc融合体、或由其组成。

官能团通常包括结合基团、药物、用于连接其他实体的反应性基团、有助于将大环肽摄入细胞中的官能团等。

肽穿透入细胞的能力将使针对细胞内靶标的肽有效。可以被具有穿透入细胞能力的肽所接近的靶标包括转录因子、细胞内信号传导分子(例如酪氨酸激酶)和参与细胞凋亡途径的分子。能够穿透细胞的官能团包括肽或已经被添加到肽或分子支架中的化学基团。肽，例如衍生自如vp22、hiv-tat、果蝇的同源盒蛋白的肽(触角蛋白)，例如描述在如chen和harrison，biochemicalsocietytransactions(2007)第35卷，第4部分，第821页；gupta等人inadvanceddrugdiscoveryreviews(2004)第57卷9637。已显示可有效通过质膜转运的短肽的示例包括来自果蝇触角蛋白的16个氨基酸的渗透素肽(derossi等人(1994)jbiol.chem.第269卷，第10444页)、18个氨基酸的“模型两亲性肽”(oehlke等人(1998)biochimbiophysacts第1414卷，第127页)和hivtat蛋白的富含精氨酸的区域。非肽方法包括使用易于与生物分子连接的小分子模拟物或smoc(okuyama等人(2007)naturemethods第4卷，第153页)。将胍基基团添加至分子的其他化学策略也增强细胞穿透性(elson-scwab等人(2007)jbiolchem第282卷，第13585页)。可以将小分子量分子(如类固醇)添加到分子支架中以增强细胞内摄入。

可以与肽配体连接的一类官能团包括抗体及其结合片段，例如fab、fv或单结构域片段。特别地，可以使用与能够增加肽配体体内半衰期的蛋白质结合的抗体。

在一个实施方案中，根据本发明的肽配体-效应基团的tβ半衰期选自：12小时或更长、24小时或更长、2天或更长、3天或更长、4天或更长、5天或更长、6天或更长、7天或更长、8天或更长、9天或更长、10天或更长、11天或更长、12天或更长、13天或更长、14天或更长、15天或更长、或20天或更长。有利地，根据本发明的肽配体效应基团或组合物具有12至60小时的tβ半衰期。在另一个实施方案中，其具有一天或更长的tβ半衰期。仍然在另一个实施方案中，其范围是12至26小时。

在本发明的一个特定实施方案中，官能团选自金属螯合剂，其适合于络合具有药物相关性的金属放射性同位素。

可能的效应基团还包括酶，例如用于酶/前药疗法的羧肽酶g2，其中肽配体替代adept中的抗体。

在本发明的一个特定实施方案中，官能团选自药物，例如用于癌症治疗的细胞毒性剂。合适的示例包括：烷基化剂，例如顺铂和卡铂、以及奥沙利铂、二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺；抗代谢药物，包括嘌呤类似物硫唑嘌呤和巯基嘌呤或嘧啶类似物；植物生物碱和萜类，包括长春花生物碱，例如长春新碱、长春花碱、长春瑞滨和长春地辛；鬼臼毒素及其衍生物依托泊苷和替尼泊苷；紫杉烷类，包括紫杉醇，最初称为紫杉醇(taxol)；拓扑异构酶抑制剂，包括喜树碱：伊立替康和托泊替康，以及ii型抑制剂包括安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷和替尼泊苷。其他试剂可包括抗肿瘤抗生素，其包括免疫抑制剂放线菌素(用于肾脏移植)、阿霉素(doxorubicin)、表柔比星、博来霉素、卡里奇霉素(calicheamycin)等。

在本发明的另一特定实施方案中，细胞毒性剂选自美登木素生物碱(例如dm1)或单甲基澳瑞他汀(例如mmae)。

dm1是一种细胞毒性剂，是美登素的含巯基衍生物，具有以下结构：

单甲基澳瑞他汀e(mmae)是一种合成抗肿瘤剂，其具有以下结构：

在本发明的又一特定实施方案中，细胞毒性剂选自美登木素生物碱(例如dm1)。

在一个实施方案中，细胞毒性剂通过可切割的键(如二硫键或蛋白酶敏感键)与双环肽连接。在另一个实施方案中，修饰与二硫键相邻的基团以控制二硫键的阻碍，并由此控制细胞毒性剂的切割速率和伴随的释放。

已发表的工作建立了通过在二硫键的任一侧引入空间位阻来修饰二硫键对还原的敏感性的潜力(kellogg等人(2011)bioconjugatechemistry，22，717)。更大程度的空间位阻降低细胞内谷胱甘肽以及细胞外(全身)还原剂的还原速率，从而降低了细胞内外毒素释放的难易程度。因此，可以通过仔细选择二硫键任一侧的阻碍程度，在循环中二硫化物的稳定性(将毒素的不良副作用最小化)与细胞内环境中的有效释放(将治疗效果最大化)之间实现最佳选择。

通过在分子构建体的靶向实体(此处为双环肽)或毒素侧引入一个或多个甲基，可以调节二硫键两侧的阻碍。

在一个实施方案中，细胞毒性剂和接头选自wo2016/067035中描述的那些的任何组合(其细胞毒性剂及其接头通过引用并入本文)。

合成

本发明的肽可以通过标准技术合成制备，然后与分子支架在体外反应。进行此操作时，可以使用标准化学方法。这样可以快速大规模地制备可溶性材料，以用于进一步的下游实验或验证。可以使用诸如timmerman等人(同上)中公开的常规化学方法来完成这样的方法。

因此，本发明还涉及如本文所述选择的多肽或缀合物的制备，其中所述制备任选地包括如下所述的其他步骤。在一个实施方案中，这些步骤在通过化学合成制备的最终产物多肽/缀合物上进行。

当制备缀合物或复合物时，感兴趣多肽中的氨基酸残基可任选被取代。

肽也可以延伸，以并入例如另一个环并因此引入多种特异性。

为了延伸该肽，可以使用正交保护的赖氨酸(和类似物)、使用标准固相或液相化学方法，简单地在其n-末端或c-末端或在环内进行化学延伸。可以使用标准的(生物)缀合技术来引入激活的或可激活的n-或c-末端。备选地，可以通过片段缩合或天然化学连接进行添加，例如，如(dawson等人1994.synthesisofproteinsbynativechemicalligation.science266:776-779)所述，或者通过酶进行添加，例如，使用如(chang等人procnatlacadsciusa.1994dec20；91(26):12544-8或hikari等人bioorganic&medicinalchemistryletters第18卷，第22期，2008年11月15日，第6000-6003页)所述的变位酶(subtiligase)。

或者，可以通过二硫键的进一步缀合来延伸或修饰肽。这具有额外的优点，即在细胞的还原环境中允许第一和第二肽彼此一次解离。在这种情况下，可以在第一肽的化学合成过程中加入分子支架(例如tata)，以便与三个半胱氨酸基团反应；然后可以将另外的半胱氨酸或巯基附加到第一肽的n或c-末端，这样该半胱氨酸或巯基仅与第二肽的游离半胱氨酸或巯基反应，形成二硫键连接的双环肽-肽缀合物。

类似的技术同样适用于两个双环和双特异性大环的合成/偶联，潜在地产生四特异性分子。

此外，可以以相同的方式、使用适当的化学方法、在n-或c-末端或经由侧链偶联而实现其他官能团或效应基团的添加。在一个实施方案中，以不阻断任何一个实体的活性的方式进行偶联。

药物组合物

根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的本文所定义的肽配体或药物缀合物。

通常，本发明的肽配体将以纯化形式与药理学上合适的赋形剂或载体一起使用。通常，这些赋形剂或载体包括水性溶液或醇/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和/或缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠以及乳酸林格氏溶液。如果需要使多肽复合物保持悬浮状态，则合适的生理学上可接受的佐剂可以选自增稠剂，例如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和藻酸盐。

静脉内载体包括液体和营养补充剂以及电解质补充剂，例如基于林格氏葡萄糖的那些。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体(mack(1982)remington'spharmaceuticalsciences，第16版)。

本发明的肽配体可以用作单独施用的组合物或与其他试剂联合施用。这些可以包括抗体、抗体片段和各种免疫治疗药物，例如环孢霉素、甲氨蝶呤、阿德里亚霉素或顺铂和免疫毒素。药物组合物可以包括各种细胞毒性或其他试剂与本发明蛋白质配体结合的“混合物”，或者甚至是根据本发明所选的具有不同特异性的多肽组合，例如使用不同靶配体选择的多肽，无论其在施用之前是否汇集。

根据本发明的药物组合物的施用途径可以是本领域普通技术人员通常已知的任何途径。为了治疗，可以根据标准技术将本发明的肽配体施用于任何患者。可以通过任何合适的方式进行施用，包括肠胃外、静脉内、肌肉内、腹膜内、经皮、经肺途径、或者适当地通过导管直接输注。优选地，根据本发明的药物组合物将通过吸入施用。施用的剂量和频率将取决于患者的年龄、性别和状况、同时施用的其他药物、禁忌症和临床医生要考虑的其他参数。

可以冻干本发明的肽配体用于储存，并在使用前在合适的载体中重构。已经表明该技术是有效的，并且可以使用本领域已知的冻干和重构技术。本领域技术人员将认识到，冻干和重构可导致不同程度的活性损失，并且可能必须向上调节水平以进行补偿。

可以施用含有本发明的肽配体或其混合物的组合物以进行预防性和/或治疗性处理。在某些治疗应用中，将足以实现所选细胞群的至少部分抑制、阻碍、调节、杀伤或某些其他可测量参数的量定义为“治疗有效剂量”。实现此剂量所需的量将取决于疾病的严重程度和患者自身免疫系统的一般状态，但通常为每千克体重0.005至5.0mg所选肽配体，更常使用的剂量为0.05至2.0mg/kg/剂量。对于预防性应用，也可以相似或稍低的剂量施用含有本发明的肽配体或其混合物的组合物。

可以将含有根据本发明的肽配体的组合物用于预防和治疗环境，以帮助改变、失活、杀伤或去除哺乳动物中所选的靶细胞群。另外，本文所述的肽配体可在体外或体外选择性地用于从异质细胞集合中杀伤、消除或以其他方式有效地去除靶细胞群。可以将来自哺乳动物的血液与所选的肽配体在体外组合，从而从血液中杀伤或以其他方式从血液中去除不需要的细胞，以根据标准技术返回哺乳动物。

治疗用途

本发明的双环肽具有作为cd137结合剂的特定用途。

cd137是肿瘤坏死因子(tnf)受体家族的成员。它的替代名称是肿瘤坏死因子受体超家族成员9(tnfrsf9)，4-ibb，并由淋巴细胞激活(ila)诱导。cd137可以由活化的t细胞表达，但在cd8+t细胞上的表达程度大于在cd4+t细胞上的表达程度。另外，在炎症部位的树突细胞、滤泡树突细胞、天然杀伤细胞、粒细胞和血管壁细胞上发现了cd137表达。cd137的一种特征性活性是其对活化t细胞的共刺激活性。cd137的交联可增强t细胞增殖、il-2分泌、存活和细胞溶解活性。此外，它可以增强免疫活性以消除小鼠中的肿瘤。

cd137是在tcr激活后诱导的t细胞共刺激受体(nam等人，curr.cancerdrugtargets，5:357-363(2005)；waits等人，annu.rev，immunol.，23:23-68(2005))。除了在活化的cd4+和cd8+t细胞上表达外，cd137还可以在cd4+cd25+调节性t细胞、自然杀伤(nk)和nk-t细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞上表达。已经在抗原呈递细胞(包括b细胞、单核细胞/巨噬细胞和树突细胞)上描述了其天然配体cd137l(watts等人annu.rev.immunol，23:23-68(2005))。在与其配体相互作用时，cd137导致增加的tcr诱导的t细胞增殖、细胞因子产生、功能成熟和cd8+t细胞存活时间延长(nam等人，curr.cancerdrugtargets，5:357-363(2005)，watts等人，annu.rev.immunol，23:23-68(2005))。

cd137l或针对cd137的激动性单克隆抗体(mab)通过cd137的信号传导导致增加的tcr诱导的t细胞增殖、细胞因子产生和功能成熟以及cd8+t细胞存活时间延长。这些作用是由于：(1)nf-κb、c-junnh2末端激酶/应激激活的蛋白激酶(jnk/sapk)和p38丝裂原激活的蛋白激酶(mapk)信号传导通路的激活，和(2)控制抗凋亡和细胞周期相关基因的表达。

在cd137和cd137l缺陷型小鼠中进行的实验还证明了cd137共刺激在产生完全感受态t细胞反应中的重要性。

il-2和il-15活化的nk细胞表达cd137，并且通过激动性mab连接cd137刺激nk细胞增殖和ifn-γ分泌，但不会刺激它们的细胞溶解活性。

此外，cd137刺激的nk细胞可在体外促进活化t细胞的扩增。

根据其共刺激功能，已显示针对cd137的激动剂mab促进心脏和皮肤同种异体移植的排斥、根除已建立的肿瘤、扩大初级抗病毒cd8+t细胞反应并增加t细胞细胞溶解能力。这些研究支持以下观点：cd137信号传导促进t细胞功能，从而增强针对肿瘤和感染的免疫力。

根据本发明的方法选择的多肽配体可以用于体内治疗和预防应用、体外和体内诊断应用、体外测定法和试剂应用等。具有选择的特异性水平的配体可用于在涉及非人动物中进行测试(这需要存在交叉反应)的应用中，或用于诊断应用中(这需要小心控制与同源物或旁系同源物的交叉反应)。在某些应用中，例如疫苗应用中，可以利用对预定范围的抗原引起免疫反应的能力来定制针对特定的疾病和病原体的疫苗。

对于哺乳动物施用，优选具有至少90至95％同质性的基本上纯的肽配体，并且对于药物用途，尤其是在哺乳动物是人时，最优选98至99％或更高的同质性。一旦部分纯化或纯化至所需的同质性，就可将所选择的多肽用于诊断或治疗(包括体外)，或用于开发和进行测定程序、免疫荧光染色等(lefkovite和pernis,(1979和1981)immunologicalmethods，卷i和ii，academicpress，ny)。

根据本发明的另一方面，提供了如本文所定义的肽配体或药物缀合物，其用于预防、抑制或治疗cd137介导的疾病或病症。

根据本发明的另一方面，提供了一种预防、抑制或治疗cd137介导的疾病或病症的方法，该方法包括向有此需要的患者施用本文定义的肽配体的效应基团和药物缀合物。

在一个实施方案中，cd137是哺乳动物cd137。在另一个实施方案中，哺乳动物cd137是人cd137(hcd137)。

在一个实施方案中，cd137介导的疾病或病症选自癌症、感染和炎症。在另一个实施方案中，cd137介导的病症或疾病选自癌症。

可以治疗(或抑制)的癌症(及其良性对应物)的示例包括但不限于上皮起源的肿瘤(腺瘤和各种类型的癌，包括腺癌、鳞状癌、移行细胞癌和其他癌)，例如膀胱和泌尿道癌、乳癌、胃肠道癌(包括食道癌、胃(胃)癌、小肠癌、结肠癌、直肠癌和肛门癌)、肝癌(肝细胞癌)、胆囊和胆道系统癌、外分泌胰腺癌、肾癌、肺癌(例如腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管肺泡癌和间皮瘤)、头颈癌(例如舌癌、颊腔癌、喉癌、咽癌、鼻咽癌、扁桃体癌、唾液腺癌、鼻腔癌和鼻旁窦癌)、卵巢癌、输卵管癌、腹膜癌、阴道癌、外阴癌、阴茎癌、子宫颈癌、子宫肌癌、子宫内膜癌、甲状腺癌(例如甲状腺滤泡癌)、肾上腺癌、前列腺癌、皮肤和附属物癌(例如黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、角棘皮瘤、增生性痣)；血液系统恶性肿瘤(即白血病、淋巴瘤)和癌变前血液病以及边缘恶性疾病，包括血液系统恶性肿瘤和淋巴系的相关病症(例如急性淋巴细胞性白血病[all]、慢性淋巴细胞性白血病[cll]、b细胞淋巴瘤如弥漫性大b细胞淋巴瘤[dlbcl]、滤泡性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤和白血病、自然杀伤[nk]细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、毛细胞白血病、意义不明的单克隆丙种球蛋白病、浆细胞瘤、多发性骨髓瘤和移植后的淋巴增生性疾病)、以及血液系统恶性肿瘤和骨髓系的相关病症(例如急性骨髓性白血病[aml]、慢性骨髓性白血病[cml]、慢性骨髓单核细胞性白血病[cmml]、嗜酸性粒细胞增多综合征、骨髓增生异常，例如多发性红细胞增多症、原发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化、骨髓增生综合征、骨髓增生异常综合征和早幼粒细胞白血病)；间充质起源的肿瘤，例如软组织肉瘤、骨或软骨肉瘤，例如骨肉瘤、纤维肉瘤、软骨肉瘤、横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、血管肉瘤、卡波西肉瘤、尤因肉瘤、滑膜肉瘤、上皮样肉瘤、胃肠道间质肿瘤、良性和恶性组织细胞瘤和皮肤纤维肉瘤隆突；中枢或周围神经系统肿瘤(例如星形细胞瘤、神经胶质瘤和胶质母细胞瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、松果体瘤和神经鞘瘤)；内分泌肿瘤(例如垂体瘤、肾上腺肿瘤、胰岛细胞瘤、甲状旁腺肿瘤、类癌肿瘤和甲状腺髓样癌)；眼和附件肿瘤(例如视网膜母细胞瘤)；生殖细胞和滋养细胞肿瘤(例如畸胎瘤、精原细胞瘤、无性细胞瘤、葡萄胎和绒毛膜癌)；和小儿和胚胎肿瘤(例如髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、威尔姆斯肿瘤和原始神经外胚层肿瘤)；或先天性或其他形式的综合症，使患者容易患恶性肿瘤(例如着色性干皮病)。

在另一个实施方案中，所述癌症选自造血系统恶性肿瘤，例如选自：非霍奇金淋巴瘤(nhl)、伯基特氏淋巴瘤(bl)、多发性骨髓瘤(mm)、b慢性淋巴细胞性白血病(b-cll)、b和t急性淋巴细胞性白血病(all)、t细胞淋巴瘤(tcl)、急性髓性白血病(aml)、毛细胞白血病(hcl)、霍奇金淋巴瘤(hl)和慢性髓性白血病(cml)。

本文提到的术语“预防”涉及在诱导疾病之前施用保护性组合物。“抑制”是指在诱导事件之后但在疾病的临床表现之前施用组合物。“治疗”涉及在疾病症状变得明显之后施用保护性组合物。

可使用动物模型系统用于筛选有效预防或治疗疾病的肽配体。本发明促进了动物模型系统的使用，这允许开发可以与人和动物靶标交叉反应的多肽配体，从而允许使用动物模型。

下面参考以下实施例进一步描述本发明。

实施例

材料和方法

肽合成

肽的合成基于fmoc化学方法，使用peptideinstruments制造的symphony肽合成仪和multisyntech的syroii合成仪。使用具有适当侧链保护基团的标准fmoc-氨基酸(sigma，merck)：在每种情况下均使用适用的标准偶联条件，然后使用标准方法进行脱保护。使用hplc纯化肽，并在分离后将它们用1,3,5-三丙烯酰基六氢-1,3,5-三嗪(tata，sigma)修饰。为此，将线性肽用50:50mecn：h2o稀释至约35ml，加入约500μl的100mmtata的乙腈溶液，然后用5ml的1mnh4hco3的h2o溶液引发反应。使反应在rt下进行约30-60分钟，并且在反应完成后冻干(通过maldi判断)。完成后，将1ml的1ml-半胱氨酸盐酸盐一水合物(sigma)的h2o溶液在rt下加入反应中约60分钟，以淬灭任何过量的tata。

冻干后，如上纯化修饰的肽，同时用geminic18柱(phenomenex)代替lunac8，并将酸改变为0.1％三氟乙酸。合并含有正确的tata修饰物质的纯组分，冻干并保存在-20℃储存。

除非另有说明，所有氨基酸均以l-构型使用。

在某些情况下，在与毒素的游离巯基偶联之前，使用以下方法将肽转化为活化的二硫键；将4-甲基(琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯)(100mm)的干dmso(1.25mol当量)溶液加入到肽(20mm)的干dmso(1mol当量)溶液中。将反应充分混合并加入dipea(20mol当量)。通过lc/ms监测反应直至完成。

缩略语

aad2-氨基己二酸

abu2-氨基丁酸

ac5c氨基环戊烷羧酸

ahp氨基庚酸

aib氨基异丁酸

me-ala甲基丙氨酸

nme-alan-甲基丙氨酸

tbuala叔丁基丙氨酸

api氨基庚二酸

aze氮杂环丁烷

4,4-bpa4,4-联苯丙氨酸

cf3g三氟甲基丙氨酸

cha3-环己基丙氨酸

chgl-环己基甘氨酸

cit瓜氨酸

h-cys高半胱氨酸

dap二氨基庚二酸

fi荧光素

nmeglun-甲基谷氨酸

hgln高谷氨酰胺

hyp羟脯氨酸

hleu高亮氨酸

nle正亮氨酸

nal萘基丙氨酸

nmellen-甲基-异亮氨酸

oic八氢吲哚羧酸

oxa噁唑烷-4-羧酸

pal吡啶基丙氨酸

pen青霉素

pcaphe对氨基甲酰基苯丙氨酸

pcophe对羧基苯丙氨酸

phg苯基甘氨酸

hphe高苯丙氨酸

fphe氟苯丙氨酸

mephe甲基苯丙氨酸

meophe甲氧基苯丙氨酸

tbuphe叔丁基苯丙氨酸

no2phe硝基苯丙氨酸

brphe溴苯丙氨酸

pip哌啶酸

5,5-dmp5,5-二甲基-l-脯氨酸

sar肌氨酸

hse(me)高丝氨酸(me)

tetraz四唑丙氨酸

nmetyrn-甲基酪氨酸

生物数据

1.cd137直接结合测定法

根据wo2016/067035中公开的方法，使用荧光偏振测定法确定本发明的肽对人cd137的亲和力(ki)。用荧光标签(荧光素，fi)标记本发明的肽，并在具有100mmnacl和0.05％吐温ph7.5的50mmhepes中稀释至2.5nm。在与该肽相同的测定缓冲液中以3μm起始滴定cd137蛋白，从而在黑色壁和底部低结合低容量384孔板中，测定25μl总体积中的1nm肽。通常通过添加5μl测定缓冲液、10μlcd137蛋白和10μl荧光肽来建立测定法。cd137蛋白的浓度以1比2系列稀释，从3μm开始给出12种不同的浓度。在配备有fp485520520光学模块的bmgpherastarfs上，在25℃下进行测量，每孔200次闪光，定位延迟为0.1秒。或者，使用配备有fitcfpdualenh镜的envision(perkinelmer)进行测量，设置为30次闪光。每5分钟测量每孔一次，持续60分钟。在孔中没有蛋白质时，在60分钟结束时，针对每个示踪剂确定用于分析的增益。用二次方程将mp拟合到标准1：1结合模型，以生成kd值。在上述测定法中测试了选择的本发明的肽，结果示于表1至3中：

表1：与所选肽的直接结合的结果

表2：丙氨酸扫描结果

表3：与所选肽的直接结合结果

2.cd137biacore实验

(a)胺偶联的cd137靶标测定法说明

进行biacore实验以确定肽与人cd137(acrobiosystems)蛋白结合的ka(m^-1s^-1)、kd(s^-1)、kd(nm)值。稀释cd137蛋白，并使用标准胺偶联程序固定在芯片cm5(#br-1005-30)上。在naacph5.5中将cd137蛋白稀释至10ug/ml，并用于偶联。然后注入乙醇胺使剩余的活性酯失活。

以180ru的cd137蛋白固定cd137蛋白，以产生最大的理论结合反应，其中2500mw的肽约为25ru。当胺偶联时，遵循完全相同的步骤，但不注射蛋白靶标，对参考流通池(fc1或fc3)进行空白固定。测试的肽的起始浓度为300-450nm，并以1/2系列稀释稀释。调节dmso浓度以保持恒定。

肽结合动力学分析如下进行，流速为50μl/min，结合200秒，解离600秒，稳定60秒。使用1：1型biacoret200评估软件拟合双环肽。

在上述测定法中测试了选择的本发明的肽，结果示于表4中：

表4：本发明所选的肽的spr数据

(b)生物素化的cd137靶标测定法说明

进行biacore实验以确定与人cd137蛋白结合的肽的ka(m^-1s^-1)、kd(s^-1)、kd(nm)值。重组人cd137同三聚体(r&d系统)重悬于pbs中，并按照制造商建议的方案使用ez-link^tmsulfo-nhs-lc-lc-生物素试剂(thermofisher)进行生物素化。使用旋转柱将蛋白质脱盐以除去未偶联的生物素，并将其移入pbs中。

为了进行结合分析，使用了biacoret200仪器，利用xanteccmd500d芯片。使用标准胺偶联化学方法，在25℃下，用hbs-n(10mmhepes，0.15mnacl，ph7.4)作为运行缓冲液，将链霉亲和素固定在芯片上。简而言之，以10μl/min的流速注射1：1比例的0.4m1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(edc)/0.1mn-羟基琥珀酰亚胺(nhs)7分钟，活化羧甲基葡聚糖表面。为了捕获链霉亲和素，将蛋白质在10mm乙酸钠(ph4.5)中稀释至0.2mg/ml，并通过将120μl的蛋白质注射到活化的芯片表面上进行捕获。通过注射1m乙醇胺(ph8.5)7分钟来阻断残余的活化基团，并将生物素化的cd137捕获到800-1800ru的水平。将缓冲液交换为pbs/0.05％tween20，并在该缓冲液中制备一系列稀释的肽，最终dmso浓度为0.5％。最高肽浓度为500nm或10μm，再用pbs/0.05％tween20进一步进行6次3倍(500nm)或2倍(10μm)稀释。spr分析在25℃下以90μl/min的流速运行，其中结合60秒，解离100-600秒。在每个循环之后，采用再生步骤(10μl的10mm甘氨酸，ph2)。针对排除dmso的体积效应校正了数据。使用标准处理程序对所有数据进行空白注射和参照表面的双参考，并使用2.0c版scrubber软件(biologic软件)进行数据处理和动力学拟合。使用传质模型拟合数据，并在适当的情况下考虑传质的影响。

在上述测定法中测试了本发明所选的肽，结果示于表5中：

表5：本发明的所选肽的spr数据

3.cd137细胞活性

使用细胞cd137荧光素酶报告基因测定试剂盒(promega)测试了cd137特异性肽的生物活性。该市售试剂盒中的细胞表达萤光素酶，该酶在cd137下游被激活。该测定法可用于评估激动作用(例如cd137配体，cd137l)和拮抗作用(例如双环肽74-01-04-n002)。

promegacd137细胞活性测定法使用nf-кb荧光素酶发光作为jurkat细胞中cd137激活的读数。简而言之，通过解冻fbs并向rpmi-1640中添加1％fbs(promega试剂盒cs196005)制备介质来进行实验。以提供激动作用的浓度而稀释激动剂，使cd137l(r&d系统2295-4l/cf)在rpmi-1640介质中稀释至100nm作为测定法的最终浓度。稀释，然后在无菌96孔板中滴定双环肽。建议的双环肽起始浓度为10μm，100倍过量超过激动剂cd137l。为重复样品准备足够的试剂，然后进行1/3稀释系列稀释。仅包括阳性对照cd137l和双环肽。在水浴中解冻cd137jurkat细胞，然后将500μl细胞加入9.5ml预热的1％fbsrpmi-1640介质中。将50μl细胞/孔添加至白细胞培养板。向细胞中加入12.5μl双环肽(6x终浓度)。然后添加12.5μl激动剂(6x终浓度)作为重复样品或单独加入1％fbsrpmi-1640作为背景对照。

将细胞与cd137l激动剂和双环肽一起在37℃、5％co2下共孵育6h。6h后解冻bio-glo^tm，并在室温下进行测定显色。每孔加入75μlbio-glo^tm，孵育5-10分钟。在pherastar读板器lumplus型号上读取发光信号，使用mars软件增益为3600。通过计算与单独cd137l相比的抑制百分比来分析数据。将数据转换为x＝log(x)，然后绘制log(抑制剂)与反应变量斜率(4个参数)的图，以计算ic50值。

promegacd137细胞报告基因测定法(产品编号cs196008)用于确定肽bcy592(74-01-04-n002；seqidno：189)在抑制天然配体cd137l诱导中的拮抗作用。将cd137测定细胞与三聚体cd137l(r&d系统)+bcy592肽共孵育。将cd137报告基因活性确定为nf-κb启动子驱动的荧光素酶活性。将肽bcy592的作用绘制为相对于测定法中的基线cd137l活性的抑制百分比，并用于确定ic50值。

结果显示在图1中，其中可以看出，对cd137具有特异性的双环肽bcy592可以作为拮抗剂抑制cd137l的活性。该结果表明该肽可用于需要阻断cd137生物活性的情况。众所周知，由于局部免疫细胞驱动的炎症，cd137的活性可引起肝损伤。因此，相信双环肽bcy592(以及据推断本发明的其他双环cd137肽)可以减少cd137-cd137l驱动的炎症，这将降低cd137激动剂的肝毒性。

4.荧光偏振竞争结合测定法

通过荧光标记的cd137结合肽与天然配体cd137l、激动剂抗体乌瑞鲁单抗(urelumab)和乌托米单抗(utomilumab)之间的竞争实验，确定hcd137特异性双环肽的结合位点。乌瑞鲁单抗抗体与一个独特的结合位点结合，而cd137l和乌托米单抗都结合称为配体结合位点的位点。

将竞争激动剂cd137l(r&d系统)、乌瑞鲁单抗和乌托米单抗在20mmhepes、150mmnacl、0.05％p20，ph7.5的测定缓冲液中稀释至最高浓度500-1000nm。在测定法中将人cd137蛋白(acrobiosystems)稀释至500nm终浓度。最后，以1nm添加荧光示踪肽bcy640(74-01-04-n001)。通常通过加入5μl激动竞争剂、10μlcd137蛋白、然后加入10μl荧光肽来建立测定法。在黑壁和底部低结合低容量384孔板中制备了25μl的总体积。在配备有fp485520520光学模块的bmgpherastarfs上，在25℃下进行测量，每孔200次闪光，定位延迟为0.1秒。每5分钟测量一次每孔，持续60分钟。在没有靶蛋白的含有示踪剂的孔中设定增益。将读取60分钟结束时的mp值针对激动剂的浓度作图。mp值的降低表明已知的激动剂和示踪肽之间存在竞争。

结果显示在图2和图3中，其中可见结合cd137的双环(bcy640)结合生理相关表位，这与天然cd137配体(cd137l)和cd137抗体(乌托米单抗)共享该表位。

序列表

<110>拜斯科技术开发有限公司

<120>cd137特异性的双环肽配体

<130>bic-c-p2193pct

<150>1712589.9

<151>2017-08-04

<150>1802934.8

<151>2018-02-23

<150>1805850.3

<151>2018-04-09

<160>267

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>1

cysileglugluglyglntyrcystyrargaspmettyrmetcys

151015

<210>2

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>2

cysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

<210>3

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>3

cysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrtyrcys

151015

<210>4

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>4

cysileglugluglyglntyrcystyrseraspprotyrtyrcys

151015

<210>5

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>5

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>6

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>6

cysileglugluglyglntyrcystyralaasphisglnleucys

151015

<210>7

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>7

cysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrtyrcys

151015

<210>8

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>8

cysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrphecys

151015

<210>9

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>9

cysileglugluglyglntyrcystyralaasphistyrmetcys

151015

<210>10

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>10

cysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrleucys

151015

<210>11

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>11

cysileglugluglyglntyrcystyrseraspprotyrleucys

151015

<210>12

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>12

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrleucys

151015

<210>13

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>13

cysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrmetcys

151015

<210>14

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>14

cysileglugluglyglntyrcyshisalaaspproglnmetcys

151015

<210>15

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>15

cysaspileglyproprotyrcystyrargaspmettyrmetcys

151015

<210>16

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>16

cysaspileglyproprotyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

<210>17

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>17

cysaspglutrpglyleuphecysileprohisseraspcys

1510

<210>18

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>18

cysaspglutrpglyleutyrcysphealahisproaspcys

1510

<210>19

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>19

cysilegluproglyprophecystyralaaspprotyrmetcys

151015

<210>20

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(10)

<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(12)..(12)

<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表y,q或m

<220>

<221>misc_feature

<222>(14)..(14)

<223>xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400>20

cysileglugluglyglntyrcysxaaxaaaspxaaxaaxaacys

151015

<210>21

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表r或a

<220>

<221>x

<222>(12)..(12)

<223>x代表m或p

<400>21

cysaspileglyproprotyrcystyrxaaaspxaatyrmetcys

151015

<210>22

<211>14

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表f或y

<220>

<221>x

<222>(9)..(9)

<223>x代表i或f

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表p或a

<220>

<221>x

<222>(12)..(12)

<223>x代表s或p

<400>22

cysaspglutrpglyleuxaacysxaaxaahisxaaaspcys

1510

<210>23

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>23

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>24

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>24

cysilelysgluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>25

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>25

cysileglulysglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>26

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>26

cysilegluglulysglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>27

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>27

cysileglugluglylystyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>28

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>28

cysileglugluglyglntyrcyslysalaaspprotyrxaacys

151015

<210>29

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>29

cysileglugluglyglntyrcysphealaasplystyrxaacys

151015

<210>30

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>30

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrlyscys

151015

<210>31

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>31

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>32

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>32

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>33

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>33

alacysilelysgluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>34

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>34

alacysileglulysglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>35

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>35

alacysilegluglulysglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>36

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>36

alacysileglugluglylystyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>37

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>37

alacysileglugluglyglntyrcyslysalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>38

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>38

alacysileglugluglyglntyrcysphealaasplystyrxaacys

151015

ala

<210>39

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>39

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrlyscys

151015

ala

<210>40

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>40

cysleuproproglyglntyrcyspheproaspleuleuleucys

151015

<210>41

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(2)..(2)

<223>x代表i,l,m或v

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表e,d,p或s

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表p,e或a

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表p或q

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表y或f

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表y或m

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表m,l或y

<400>41

cysxaaxaaxaaglyxaaxaacystyralaaspproxaaxaacys

151015

<210>42

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>42

alacysileglugluglyglntyrcystyrargaspmettyrmetcys

151015

ala

<210>43

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>43

alacysileglugluglyglntyrcystyrargaspmettyrmetcys

151015

ala

<210>44

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>44

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>45

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>45

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>46

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>46

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrtyrcys

151015

ala

<210>47

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>47

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrtyrcys

151015

ala

<210>48

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>48

alacysileglugluglyglntyrcystyrseraspprotyrtyrcys

151015

ala

<210>49

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>49

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>50

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>50

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>51

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>51

cyslysglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>52

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>52

cysilelysgluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>53

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>53

cysileglulysglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>54

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>54

cysilegluglulysglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>55

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>55

cysileglugluglylystyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>56

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>56

cysileglugluglyglnlyscysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>57

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>57

cysileglugluglyglntyrcyslysalaaspprotyrmetcys

151015

<210>58

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>58

cysileglugluglyglntyrcysphelysaspprotyrmetcys

151015

<210>59

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>59

cysileglugluglyglntyrcysphealalysprotyrmetcys

151015

<210>60

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>60

cysileglugluglyglntyrcysphealaasplystyrmetcys

151015

<210>61

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>61

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprolysmetcys

151015

<210>62

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>62

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrlyscys

151015

<210>63

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<400>63

cysilegluglulysglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

<210>64

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>64

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>65

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>65

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>66

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>66

alacysileglugluglyglntyrcystyralaasphisglnleucys

151015

ala

<210>67

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>67

alacysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrtyrcys

151015

ala

<210>68

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>68

alacysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrphecys

151015

ala

<210>69

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>69

alacysileglugluglyglntyrcystyralaasphistyrmetcys

151015

ala

<210>70

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>70

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrleucys

151015

ala

<210>71

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>71

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrleucys

151015

servalgly

<210>72

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>72

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrleucys

151015

servalgly

<210>73

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>73

alacysileglugluglyglntyrcystyrseraspprotyrleucys

151015

ala

<210>74

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>74

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrleucys

151015

ala

<210>75

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>75

alacysileglugluglyglntyrcyshisalaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>76

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>76

alacysileglugluglyglntyrcyshisalaaspproglnmetcys

151015

ala

<210>77

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>77

alacysaspileglyproprotyrcystyrargaspmettyrmetcys

151015

ala

<210>78

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>78

alaaspileglyproprotyrcystyralaaspprotyrmetcysala

151015

<210>79

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>79

alacysleuaspproglyprophecysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>80

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>80

alacysleuaspgluglyprotyrcysphealaaspprotyrphecys

151015

ala

<210>81

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>81

alacysileasngluglyprotyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>82

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>82

alacysilegluglnglyprophecysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>83

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>83

alacysvalglugluglyprophecysphealaaspprotyrtyrcys

151015

ala

<210>84

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>84

alacysleuaspgluglyprophecyspheseraspprotyrmetcys

151015

ala

<210>85

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>85

alacysaspglutrpglyleuphecysileprohisseraspcysala

151015

<210>86

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>86

alacysaspglutrpglyleutyrcysphealahisproaspcysala

151015

<210>87

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>87

alacysleuaspproglyprotyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

thrphehis

<210>88

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>88

alacysilegluproglyprophecystyralaaspprotyrmetcys

151015

asnargval

<210>89

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>89

alacysilegluproglyprophecystyralaaspprotyrmetcys

151015

asnargval

<210>90

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>90

alacysleugluproglyprotyrcystyralaaspprotyrmetcys

151015

thrhisleu

<210>91

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>91

alacysleuproproglyprotyrcyspheproaspprotyrphecys

151015

ala

<210>92

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>92

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>93

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>93

alacysalaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>94

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>94

alacysilealagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>95

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>95

alacysileglualaglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>96

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>96

alacysilegluglualaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>97

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>97

alacysileglugluglyalatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>98

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>98

alacysileglugluglyglnalacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>99

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>99

alacysileglugluglyglntyrcysalaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>100

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>100

alacysileglugluglyglntyrcysphealaalaprotyrxaacys

151015

ala

<210>101

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>101

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproalaxaacys

151015

ala

<210>102

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>102

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyralacys

151015

ala

<210>103

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>103

alacysalaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>104

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>104

alacysilealagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>105

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>105

alacysileglualaglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>106

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>106

alacysilegluglualaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>107

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>107

alacysileglugluglyalatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>108

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>108

alacysileglugluglyglnalacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>109

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>109

alacysileglugluglyglntyrcysalaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>110

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>110

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>111

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>111

alacysileglugluglyglntyrcysphealaalaprotyrxaacys

151015

ala

<210>112

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>112

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspalatyrxaacys

151015

ala

<210>113

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>113

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproalaxaacys

151015

ala

<210>114

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>114

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyralacys

151015

ala

<210>115

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>115

alacysleuglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>116

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表nle

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>116

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>117

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表chg

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>117

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>118

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表cha

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>118

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>119

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>119

alacysileprogluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>120

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>120

alacysileaspgluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>121

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表aad

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>121

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>122

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表api

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>122

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>123

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>123

alacysilegluproglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>124

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>124

alacysilegluaspglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>125

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(5)..(5)

<223>x代表aad

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>125

alacysilegluxaaglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>126

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(5)..(5)

<223>x代表api

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>126

alacysilegluxaaglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>127

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表sar

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>127

alacysileglugluxaaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>128

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>128

alacysilegluglulysglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>129

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>129

alacysilegluglupheglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>130

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>130

alacysilegluglugluglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>131

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>131

alacysileglugluglnglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>132

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>132

alacysileglugluleuglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>133

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>133

alacysileglugluserglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>134

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表med-ala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>134

alacysileglugluxaaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>135

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表aib

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>135

alacysileglugluxaaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>136

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>136

alacysileglugluglyprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>137

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>137

alacysileglugluglyglnphecysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>138

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表2mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>138

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>139

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表3mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>139

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>140

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>140

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>141

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>141

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>142

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>142

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>143

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>143

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>144

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>144

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>145

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>145

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>146

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表pheg

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>146

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>147

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>147

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>148

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>148

alacysileglugluglyglntyrcyspheglyaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>149

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>149

alacysileglugluglyglntyrcyspheseraspprotyrxaacys

151015

ala

<210>150

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>150

alacysileglugluglyglntyrcyspheproaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>151

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>151

alacysileglugluglyglntyrcysphealaasnprotyrxaacys

151015

ala

<210>152

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表pip

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>152

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>153

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表meala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>153

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>154

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表sar

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>154

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>155

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表aib

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>155

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>156

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>156

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>157

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表hleu

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>157

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>158

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>158

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>159

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>159

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>160

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(11)..(11)

<223>x代表cf3g

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>160

alacysileglugluglyglntyrcysphexaaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>161

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表pcophe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>161

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>162

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表pcaphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>162

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>163

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>163

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproglnxaacys

151015

ala

<210>164

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表2mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>164

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>165

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表3mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>165

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>166

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>166

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>167

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表cit

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>167

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>168

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表4fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>168

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>169

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表tbuala

<400>169

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>170

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表hleu

<400>170

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>171

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>171

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrilecys

151015

ala

<210>172

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表cha

<400>172

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>173

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>173

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrphecys

151015

ala

<210>174

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表2mephe

<400>174

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>175

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表3mephe

<400>175

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>176

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表4mephe

<400>176

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>177

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(2)..(2)

<223>x代表pen

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>177

alaxaaileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>178

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(9)..(9)

<223>x代表pen

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>178

alacysileglugluglyglntyrxaaphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>179

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<220>

<221>x

<222>(16)..(16)

<223>x代表pen

<400>179

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaaxaa

151015

ala

<210>180

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(2)..(2)

<223>x代表hcys

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>180

alaxaaileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>181

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(9)..(9)

<223>x代表hcys

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>181

alacysileglugluglyglntyrxaaphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>182

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<220>

<221>x

<222>(16)..(16)

<223>x代表hcys

<400>182

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaaxaa

151015

ala

<210>183

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表3fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>183

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>184

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表tetraz

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>184

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>185

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(12)..(12)

<223>x代表tetraz

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>185

alacysileglugluglyglntyrcysphealaxaaprotyrxaacys

151015

ala

<210>186

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表hgln

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>186

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspproxaaxaacys

151015

ala

<210>187

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表ahp

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>187

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>188

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表ahp

<400>188

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>189

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>189

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>190

<211>19

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>190

hisgluhiscysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyr

151015

metcysala

<210>191

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>191

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrleucys

151015

ala

<210>192

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>192

alacysleuproproglyprotyrcyspheproaspprotyrphecys

151015

ala

<210>193

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>193

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

<210>194

<211>16

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表nle

<220>

<221>x

<222>(16)..(16)

<223>x代表dap

<400>194

cysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacysxaa

151015

<210>195

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>195

alacysileproglupheglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>196

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>196

alacysileproglupheprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>197

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>197

alacysilegluglupheprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>198

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>198

alacysileprogluglyprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>199

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>199

alacysxaaproglupheproxaacysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>200

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>200

alacysxaaproglupheglnxaacysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>201

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>201

alacysxaagluglupheproxaacysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>202

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4fphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>202

alacysxaagluglupheglnxaacysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>203

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表hyp

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>203

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>204

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>204

alacysilegluglutrpglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>205

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表aze

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>205

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>206

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表pip

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>206

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>207

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表2nal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>207

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>208

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4meophe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>208

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>209

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>209

alacysileglugluglyglntyrcystyralaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>210

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表aze

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>210

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>211

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表hse(me)

<400>211

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>212

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表nmeile

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>212

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>213

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表aze

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>213

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>214

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表pip

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>214

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>215

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表nmeglu

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>215

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>216

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(5)..(5)

<223>x代表nmeglu

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>216

alacysilegluxaaglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>217

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>217

alacysileglugluaspglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>218

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表nmeala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>218

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>219

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表nmetyr

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>219

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>220

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表hphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>220

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>221

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表2pal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>221

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>222

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表3pal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>222

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>223

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4,4-bpa

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>223

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>224

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表hphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>224

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>225

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表2pal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>225

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>226

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表3pal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>226

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>227

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4pal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>227

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>228

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4,4-bpa

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>228

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>229

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表1nal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>229

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>230

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4tbuphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>230

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>231

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(11)..(11)

<223>x代表nmeala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>231

alacysileglugluglyglntyrcysphexaaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>232

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表5,5-dmp

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>232

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>233

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表hyp

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>233

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>234

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表oic

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>234

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>235

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表oic

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>235

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>236

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表oic

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>236

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>237

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表oxa

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>237

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspxaatyrxaacys

151015

ala

<210>238

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表oxa

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>238

alacysilexaagluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>239

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表oxa

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>239

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>240

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>240

alacysileprogluglyprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>241

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表hyp

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>241

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>242

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>242

alacysileproglualaprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>243

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>243

alacysxaaproglualaprotyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>244

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>244

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>245

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表tbuala

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>245

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>246

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表chg

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>246

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>247

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表ac5c

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>247

alacysxaaglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>248

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>248

alacysileprogluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>249

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>249

alacysileglngluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>250

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>250

alacysilegluproglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>251

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>251

alacysilegluglnglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>252

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>252

alacysilegluglupheglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>253

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>253

alacysilegluglualaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>254

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表ac5c

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>254

alacysileglugluxaaglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>255

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>255

alacysileglugluglyalatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>256

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表aib

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>256

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>257

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表ac5c

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>257

alacysileglugluglyxaatyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>258

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表4mephe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>258

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>259

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(8)..(8)

<223>x代表1nal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>259

alacysileglugluglyglnxaacysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>260

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表2nal

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>260

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>261

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表no2phe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>261

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>262

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表4brphe

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>262

alacysileglugluglyglntyrcysxaaalaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>263

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(11)..(11)

<223>x代表abu

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表nle

<400>263

alacysileglugluglyglntyrcysphexaaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>264

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(15)..(15)

<223>x代表ahp

<400>264

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrxaacys

151015

ala

<210>265

<211>17

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<400>265

alacysileglugluglyglntyrcysphealaaspprotyrmetcys

151015

ala

<210>266

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(2)..(2)

<223>x代表ile,tbuala或chg

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表glu,pro,asp,lys,aad,hyp或oxa

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表glu,lys或aad

<220>

<221>x

<222>(5)..(5)

<223>x代表gly,d-lys,d-ala,l-ala,d-phe,d-glu,d-gln,

d-leu,d-ser或d-trp

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表gln,lys,ala,pro,5,5-dmp,oic,oxa,hyp,aib或

ac5c

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表tyr,phe,3mef,4mef,4ff,2nal,4meophe或4,4bpa

<220>

<221>x

<222>(9)..(9)

<223>x代表phe,lys,4mef,4ff,2fphe,4fphe,4pal,4,4bpa,

4tbuphe,no2phe或4brphe

<220>

<221>x

<222>(10)..(10)

<223>x代表ala或lys

<220>

<221>x

<222>(12)..(12)

<223>x代表pro或lys

<220>

<221>x

<222>(13)..(13)

<223>x代表tyr或lys

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表met,lys,nle,hleu或ahp

<400>266

cysxaaxaaxaaxaaxaaxaacysxaaxaaaspxaaxaaxaacys

151015

<210>267

<211>15

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>x

<222>(2)..(2)

<223>x代表ile或tbuala

<220>

<221>x

<222>(3)..(3)

<223>x代表lys,glu或pro

<220>

<221>x

<222>(4)..(4)

<223>x代表glu或d-lys

<220>

<221>x

<222>(5)..(5)

<223>x代表gly,d-lys,d-phe或d-ala

<220>

<221>x

<222>(6)..(6)

<223>x代表gln,lys或pro

<220>

<221>x

<222>(7)..(7)

<223>x代表tyr或4mephe

<220>

<221>x

<222>(9)..(9)

<223>x代表phe或4fphe

<220>

<221>x

<222>(14)..(14)

<223>x代表met或nle

<400>267

cysxaaxaaxaaxaaxaaxaacysxaaalaaspprotyrxaacys

151015