本发明涉及微生物检测技术领域，特别涉及一种发酵饲料含菌量的检测方法。
背景技术：
微生物制剂在农业中的应用主要为种植和养殖过程中，在种植上的主要作用表现为促进植物生长、提高植物防病抗病能力、提高肥料利用率、提高植物抗旱、修复土壤、降解农药等；在养殖上的主要作用表现为补充、调整或维持动物肠道内微生态平衡，促进机体肠道吸收和提高宿主免疫水平；它还可以对由于集约化养殖造成的水体环境污染进行调整和修护，保持养殖环境的生态平衡。
由于制备方法的限制，传统的发酵饲料含菌量的浓度通常较低，如生物有机肥微生物制剂的产品的浓度标准一般在0.2亿/g或0.2亿/ml左右。随着发酵饲料的制备工艺的不断完善，产品中的微生物浓度也不断攀升，饲料中微生物密度极大，且饲料不溶于水，当饲料分散在水中的时候微生物溶解在水中，饲料中含有秸秆等植物纤维成分难溶于水，容易悬浮在水中，从而使得饲料中的微生物不能完全分散，如果用现有检测方法进行含菌量检测，培养基上的多个微生物可能会生长成为一个菌落，由此导致菌落数的统计结果大大低于实际值，从而使微生物含量的检测结果低于实际水平。
因此，我们需寻找一种能够将发酵饲料充分分散开保证检测精度的含菌量检测方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于：针对上述存在的问题，提供了一种能够充分分散饲料中的微生物保证检测数据精确度的饲料中微生物检测方法。
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种发酵饲料含菌量的检测方法，包括以下步骤：
(1)饲料取样：将发酵良好的饲料正常发酵3-4d后，开袋将袋内饲料混合均匀，从中称取一定量的饲料；
(2)研磨粉碎：将步骤(1)中称取的饲料用粉碎装置研磨粉碎，用筛子筛选出大颗粒后重复研磨两次；
(3)溶解稀释：将步骤(2)中研磨后的饲料在一定时间内置于无菌三角瓶并加无菌水稀释至刻度线，加入玻璃珠并置于摇床震荡，再进行梯度稀释；(4)取液：使用移液枪抽取步骤(3)中稀释后的饲料溶液，使用移液枪进行反复抽吸后，观察吸入的最高位点，抽吸多次后取吸入最高位点的溶液量置于培养皿中；
(5)培养统计：使用涂布器将饲料溶液涂布均匀，放入恒温培养箱培养，根据菌种不同设置对应菌种所需的温度和培养时间，培养结束后统计菌落数量并记录。
进一步地，在步骤(2)中，所述粉碎装置包括研磨钵和研磨球，通过研磨球将饲料在研磨钵内粉碎，所述筛子为50目。
进一步地，所述研磨钵和研磨球均为不锈钢材质，该研磨球的研磨部位还设有刀片，该刀片的刀口竖直向下设置。
进一步地，在步骤(3)中，所述摇床为翻转摇床，该摇床可进行水浴加热，摇床的深度大于无菌三角瓶的高度，摇床内设有固定无菌三角瓶的机械爪。
进一步地，所述梯度稀释为使用100ml的锥形瓶，取出10ml后置于干净的锥形瓶中，加入无菌水至刻度线，再从中取10ml置于干净锥形瓶中，加水至刻度线后得到稀释液。
进一步地，所述摇床震荡的震荡时间为30min，该摇床震荡时设置的温度为15-20℃。
进一步地，在步骤(4)中，所述移液枪使用前进行刻度线调整回位，并使用精密天平检测移液枪的精确度。
在步骤(5)中，所述涂布器在使用前用酒精灯消毒灭菌，并用高压蒸汽灭菌30min。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
(1)为了解决饲料难溶于水，难以分散的问题，本方案中先将饲料使用磨球底部带有刀片的研磨装置将饲料研磨开，由于饲料中多含有秸秆等成分，直接使用球磨压制较难将其充分破碎，所以在磨球上设置刀片可将其切割开，能够将饲料充分粉碎，是饲料中的微生物也能跟随着饲料的粉碎二分散；
(2)饲料取样的时候选择在正常发酵后的3-4天进行取样是将取样的时间定在饲料发酵含菌量最高的时候，饲料中的含菌量最高时，微生物的密度大，那么分散后测出来的数值更准确，误差会更小，在冬天的时候取发酵4天的饲料样品，在夏天的时候取发酵3天的样品，都是饲料发酵到最佳状态时候的样品；
(3)饲料加入玻璃珠置于摇床中震荡，可以将饲料中的微生物充分分散到水中，微生物在水中分散均匀后，梯度稀释后的饲料溶液中的微生物含量也是均匀的，检测出来的数据才更准确；
(4)取液步骤中将饲料进行反复地抽吸是由于饲料不能完全溶解，容易因饲料悬浮物堵塞移液枪口造成移液数据的不准确，反复抽吸可以将堵塞物排出或吸入，达到最高位点时移液枪吸入的溶液最多，为移液枪的准确吸液量，是检测结果更准确。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下举出优选实施例，对本发明进一步详细说明。然而，需要说明的是，说明书中列出的许多细节仅仅是为了使读者对本发明的一个或多个方面有一个透彻的理解，即便没有这些特定的细节也可以实现本发明的这些方面。
实施例1
一种发酵饲料含菌量的检测方法，包括以下步骤：
(1)饲料取样：在夏天，将发酵良好的饲料正常发酵3d后，开袋将袋内饲料混合均匀，从中称取一定量的饲料；
(2)研磨粉碎：将步骤(1)中称取的饲料用粉碎装置研磨粉碎，用筛子筛选出大颗粒后重复研磨两次，所述粉碎装置包括研磨钵和研磨球，通过研磨球将饲料在研磨钵内粉碎，所述筛子为50目，研磨钵和研磨球均为不锈钢材质，该研磨球的研磨部位还设有刀片，该刀片的刀口竖直向下设置，摇床为翻转摇床，该摇床可进行水浴加热，摇床的深度大于无菌三角瓶的高度，摇床内设有固定无菌三角瓶的机械爪。
(3)溶解稀释：将步骤(2)中研磨后的饲料在一定时间内置于无菌三角瓶并加无菌水稀释至刻度线，加入玻璃珠并置于摇床震荡，摇床震荡的震荡时间为30min，该摇床震荡时设置的温度为15℃，再进行梯度稀释，梯度稀释为使用100ml的锥形瓶，取出10ml后置于干净的锥形瓶中，加入无菌水至刻度线，再从中取10ml置于干净锥形瓶中，加水至刻度线后得到稀释液；
(4)取液：使用移液枪抽取步骤(3)中稀释后的饲料溶液，使用移液枪进行反复抽吸后，观察吸入的最高位点，抽吸多次后取吸入最高位点的溶液量置于培养皿中，移液枪使用前进行刻度线调整回位，并使用精密天平检测移液枪的精确度；
(5)培养统计：使用涂布器将饲料溶液涂布均匀，放入恒温培养箱培养，根据菌种不同设置对应菌种所需的温度和培养时间，培养结束后统计菌落数量并记录，涂布器在使用前用酒精灯消毒灭菌，并用高压蒸汽灭菌30min。
其中检测稀释及涂布在超净工作台酒精灯附近12cm范围内严格无菌操作，超净工作台要求开照明灯中速通风下工作，超净工作台使用前、后开紫外灯照射20min。75％酒精棉从上到下，从里到外擦拭干净，根据检测菌种类选择适合的培养皿，不得不分菌种统一使用同一种培养皿检测。培养皿准备好后先预培养12小时，之后挑选无污染培养皿进行试验。
实施例2
一种发酵饲料含菌量的检测方法，包括以下步骤：
(1)饲料取样：在冬天，将发酵良好的饲料正常发酵4d后，开袋将袋内饲料混合均匀，从中称取一定量的饲料；
(2)研磨粉碎：将步骤(1)中称取的饲料用粉碎装置研磨粉碎，用筛子筛选出大颗粒后重复研磨两次，所述粉碎装置包括研磨钵和研磨球，通过研磨球将饲料在研磨钵内粉碎，所述筛子为50目，研磨钵和研磨球均为不锈钢材质，该研磨球的研磨部位还设有刀片，该刀片的刀口竖直向下设置，摇床为翻转摇床，该摇床可进行水浴加热，摇床的深度大于无菌三角瓶的高度，摇床内设有固定无菌三角瓶的机械爪。
(3)溶解稀释：将步骤(2)中研磨后的饲料在一定时间内置于无菌三角瓶并加无菌水稀释至刻度线，加入玻璃珠并置于摇床震荡，摇床震荡的震荡时间为30min，该摇床震荡时设置的温度为20℃，再进行梯度稀释，梯度稀释为使用100ml的锥形瓶，取出10ml后置于干净的锥形瓶中，加入无菌水至刻度线，再从中取10ml置于干净锥形瓶中，加水至刻度线后得到稀释液；
(4)取液：使用移液枪抽取步骤(3)中稀释后的饲料溶液，使用移液枪进行反复抽吸后，观察吸入的最高位点，抽吸多次后取吸入最高位点的溶液量置于培养皿中，移液枪使用前进行刻度线调整回位，并使用精密天平检测移液枪的精确度；
(5)培养统计：使用涂布器将饲料溶液涂布均匀，放入恒温培养箱培养，根据菌种不同设置对应菌种所需的温度和培养时间，培养结束后统计菌落数量并记录，涂布器在使用前用酒精灯消毒灭菌，并用高压蒸汽灭菌30min。
其中检测稀释及涂布在超净工作台酒精灯附近10cm范围内严格无菌操作，超净工作台要求开照明灯中速通风下工作，超净工作台使用前、后开紫外灯照射15min。75％酒精棉从上到下，从里到外擦拭干净，根据检测菌种类选择适合的培养皿，不得不分菌种统一使用同一种培养皿检测。培养皿准备好后先预培养12小时，之后挑选无污染培养皿进行试验。
实施例3
在实施例1的基础上，在步骤(1)取样时在发酵后的第二天进行取样，其余实施和实施例1一样。
实施例4
在实施例1的基础上，在步骤(2)中将饲料直接压碎后溶解到水中，其余实施和实施例1一样。
实施例5
在实施例1的基础上，在步骤(4)中使用移液枪直接抽吸移液于培养皿中，其余实施与实施例1一样。
以上实施例检测出来的发酵饲料的含菌量如下表所示：
由以上试验可知，使用本发明使用的检测方法能够充分将饲料中的微生物分散，检测出来的数据更准确，且操作简单，能够广泛适用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。