本发明属于水污染检测技术领域，具体来说涉及一种水中大肠菌群酶底物法测定剂，以及对该水中大肠菌群酶底物法测定剂的制备方法。
背景技术：
在水污染检测领域，目前在微生物检测方面主要包含：大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠杆菌三个指标。其中，大肠菌群和耐热大肠菌群是判定水体遭受动物源性粪口污染的重要指标。现有的测定剂能够同时对水中大肠菌群和大肠杆菌进行检测，其配方包括硫酸铵、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁、氯化钠、氯化钙、亚硫酸钠、两性霉素b、邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷、4-甲基伞形酮-β-d-葡萄糖醛酸苷、茄属植物萃取物、n-2-羟乙基哌嗪-n-2-乙磺酸钠盐和n-2-羟乙基哌嗪-n-2-乙磺酸等组分。这种测定剂需要在半乳糖苷酶的酶促反应和葡萄糖醛苷酶的酶促反应间求得平衡，其整体设计较为复杂，且存在颜色反应延后、检测大肠菌群时灵敏度较低的问题。此外，在实践中，需要和检测大肠菌群比检测大肠杆菌的情况更普遍，几乎70％以上的水样本只需检测大肠菌群，或者是在经检测大肠菌群阳性后，再检测大肠杆菌。因此，如何开发出一种新型的水中大肠菌群酶底物法测定剂，能够主要针对水中的大肠菌群进行微生物检测，同时改善检测效率、提高检测灵敏度，是本领域技术人员需要研究的方向。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种水中大肠菌群酶底物法测定，其能够针对水中的大肠菌群进行微生物检测，同时改善检测效率、提高检测灵敏度。
其采用的技术方案如下：
一种水中大肠菌群酶底物法测定剂，其包括以下重量份的组分：8～10份的ph调节剂；9.4～10份的指示剂；5.62～8.14份的抑制剂；3.5～5.8份的生产剂。其中，所述生产剂由0.5～0.8份的tbs缓冲剂和3～5份的大豆卵磷脂构成。
优选的是，上述水中大肠菌群酶底物法测定剂中：所述ph调节剂采用氯化钠。
更优选的是，上述水中大肠菌群酶底物法测定剂中：所述指示剂由0.3～0.5份的邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷、6.3～6.5份的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸和2.8～3.0份的n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸构成。
更优选的是，上述水中大肠菌群酶底物法测定剂中：所述抑制剂由为0.5～0.8份的硫酸镁、5～7份的硫酸铵、0.1～0.3份的羧苄青霉素二钠和0.02～0.04份的硫酸锰构成。
本发明还公开了一种制备上述水中大肠菌群酶底物法测定剂的制备方法。
其包括如下步骤：
s1：分别将ph调节剂和指示剂加热至65℃、直至ph调节剂和指示剂中的水分分别小于5％；
s2：将s1所得ph调节剂和指示剂分别研磨为粉末、直至ph调节剂和指示剂的粉末颗粒分别小于40目；
s3：将s2所得ph调节剂和指示剂搅拌混匀、得ph调节剂和指示剂的混合粉末；
s4：对s3所得混合粉末中投入抑制剂、tbs缓冲剂和大豆卵磷脂、持续搅拌2小时，制得水中大肠菌群酶底物法测定剂干粉型成品。
优选的是，上述水中大肠菌群酶底物法测定剂制备方法中：所述ph调节剂采用氯化钠；所述指示剂由邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸和n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸构成；所述抑制剂由硫酸镁、硫酸铵、羧苄青霉素二钠和硫酸锰构成。
相对于现有技术，本发明能够对饮用水、自来水、污水中的大肠菌群和耐热大肠菌群实现快速检测。同时在试剂配比上剔除了价格昂贵、效期短、不易于存储的4-甲基伞型酮-β-d-葡糖苷酸、茄属植物萃取物等组分，通过添加入易于运输保藏、性价比高的tbs缓冲剂和大豆卵磷脂，降低了使用人员和环境的污染。此外，本产品可在121℃灭菌后按企业要求进行废弃处理。相对于现有产品减少了企业的环保成本。
与现有技术相比，本发明能够有效降低使用人员和环境的污染，针对水中的大肠菌群进行微生物检测，同时改善检测效率、提高检测灵敏度。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将结合各个实施例作进一步描述。
实施例1：
一种水中大肠菌群酶底物法测定剂，其原料包括如下组分：
8g的氯化钠，0.3g的邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷，6.3g的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸，2.8g的n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸，0.5g的硫酸镁，5g的硫酸铵，0.1g的羧苄青霉素二钠，0.02g的硫酸锰，0.5g的tbs缓冲剂和3g的大豆卵磷脂。
其制备过程如下：
s1：分别将ph调节剂和指示剂加热至65℃、直至ph调节剂和指示剂中的水分分别小于5％；
s2：将s1所得ph调节剂和指示剂分别研磨为粉末、直至ph调节剂和指示剂的粉末颗粒分别小于40目；
s3：将s2所得ph调节剂和指示剂搅拌混匀、得ph调节剂和指示剂的混合粉末；
s4：对s3所得混合粉末中投入抑制剂、tbs缓冲剂和大豆卵磷脂、持续搅拌2小时，随后控制在40℃以下停机放料、制得水中大肠菌群酶底物法测定剂干粉型成品。
取1.5g的实施例1成品投入100ml水样中进行检测。同时，分别以美国爱德士colilert酶底物试剂和美国纽勤colitag酶底物试剂这两款现有产品作为对比例、各取1.5g成品投入100ml水样中进行检测。其检测结果如下表1所示：
表1
实施例2：
一种水中大肠菌群酶底物法测定剂，其原料包括如下组分：
9g的氯化钠，0.4g的邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷，6.4g的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸，2.9g的n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸，0.65g的硫酸镁，5g的硫酸铵，0.2g的羧苄青霉素二钠，0.03g的硫酸锰，0.65g的tbs缓冲剂和3g的大豆卵磷脂。
其制备过程同实施例1。
取1.5g的实施例2成品投入100ml水样中进行检测。同时，分别以美国爱德士colilert酶底物试剂和美国纽勤colitag酶底物试剂这两款现有产品作为对比例、各取1.5g成品投入100ml水样中进行检测。其检测结果如下表2所示：
表2
实施例3：
一种水中大肠菌群酶底物法测定剂，其原料包括组分：
10g的氯化钠，0.5g的邻硝基苯β-d-半乳吡喃糖苷，6.5g的4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸，3.0g的n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-2-乙烷磺酸，0.8g的硫酸镁，7g的硫酸铵，0.3g的羧苄青霉素二钠，0.04g的硫酸锰，0.8g的tbs缓冲剂和5g的大豆卵磷脂。
其制备过程同实施例1、实施例2。
取1.5g的实施例3成品投入100ml水样中进行检测。同时，分别以美国爱德士colilert酶底物试剂和美国纽勤colitag酶底物试剂这两款现有产品作为对比例、各取1.5g成品投入100ml水样中进行检测。其检测结果如下表3所示：
表3
基于上述比对实验证明：
采用实施例1所提供的水中大肠菌群、耐热大肠菌酶底物法测定剂，在对定量阳性菌株进行测试时，测试结果经过16小时生长期，在24小时大肠菌群达到顶峰值并且一直保持至28小时未有变化，与美国爱德士colilert酶底物试剂、美国纽勤colitag酶底物试剂比较可提高效率至少3-4小时。结果均符合国家标准要求(参照标准《hj1001-2018环境水质》)。
采用实施例2所提供的水中大肠菌群、耐热大肠菌酶底物法测定剂，在对定量阳性菌株进行测试时，测试结果经过16小时生长期，在24小时大肠菌群达到顶峰值并且一直保持至28小时未有变化，与美国爱德士colilert酶底物试剂、美国纽勤colitag酶底物试剂比较可提高效率至少3-4小时。结果均符合国家标准要求(参照标准《hj1001-2018环境水质》)。
采用实施例3所提供的水中大肠菌群、耐热大肠菌酶底物法测定剂，在对定量阳性菌株进行测试时，测试结果经过12小时生长期，在16小时大肠菌群达到顶峰值并且一直保持至28小时未有变化，与美国爱德士colilert酶底物试剂、美国纽勤colitag酶底物试剂比较可提高效率至少8小时。结果均符合国家标准要求(参照标准《hj1001-2018环境水质》)。
综上，各实施例相对于对比例，其灵敏度更高，检测结果更贴近事实。
以上所述，仅为本发明的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域技术的技术人员在本发明公开的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书的保护范围为准。