一种RGD环肽合成方法与流程

技术特征：

1.一种RGD环肽合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，获取全保护直链肽

1)以Mtt-Lys(Boc)-OH为起始原料，使用活化试剂在Mtt-Lys(Boc)-OH的C端形成活化酯，获得Mtt-Lys(Boc)-NHS；

2)碱性环境下，在Mtt-Lys(Boc)-NHS中加入氨基酸，使Mtt-Lys(Boc)-NHS的活化酯与氨基酸的N端的氨基反应，并形成连接；

3)将氨基酸的羧基以步骤S1的条件活化形成活化酯，并以步骤S2的条件将下一氨基酸的N端连接到上一氨基酸的C端；

4)以H-D-Phe-OMe为终端原料，按照步骤3)将其N端连接到上一氨基酸的C端，获得全保护直链肽；

S2，获取全保护环肽

将全保护直链肽直链肽旋蒸、冻干后，用加入了TFA的DCM溶解，形成酰胺环，获得全保护环肽，按重量份数计，DCM：TFA＝20：1，而后在50℃的条件下油浴回流过夜，最后将全保护环肽旋干；

S3，切割提纯

5)按重量份数计，以TFA：苯甲硫醚：EDT：苯甲醚＝90：5：3：2配置切割液，并将全保护环肽置入其中切割2小时；

6)用冰乙醚析出，离心得到多肽粗肽，而后再用冰乙醚洗3次，去除部分杂质，减压抽干，最后用HPLC纯化得到纯品。

2.如权利要求1所述的RGD环肽合成方法，其特征在于，步骤S2中，获取全保护环肽的方法包括以下步骤：

将全保护直链肽旋蒸、冻干后，用加入了TFA的DCM溶解，TFA在去掉N端Mtt裸露氨酸的同时，能够催化C端甲酯与氨基的反应，形成酰胺环，获得全保护环肽，按重量份数计，DCM：TFA＝20：1，每mmol全保护直链肽溶解在0.5L溶剂中，而后在50℃的条件下油浴回流过夜，最后将全保护环肽减压旋干。

3.如权利要求1所述的RGD环肽合成方法，其特征在于，步骤1)中，包括以下步骤：

将原料、活化试剂HOSU和活化试剂DCC以1：1.01：1.02的重量份数在DCM中反应过夜，合原料的C端形成活化酯，而后抽滤去掉不溶物，并将溶液减压旋干。

4.如权利要求3所述的RGD环肽合成方法，其特征在于，步骤2)中，包括以下步骤：

在碱性环境下，以DCM为溶剂，将步骤1)中的产物与新原料以1：1溶解，滴加PH为8的TEA反应4小时，使上一步的产物的活化酯与新原料的氨基反应，并形成连接，HPLC液相分析为单主峰，减压旋干后得到片段，而后将其加入乙醚搅拌成浊状物，布氏漏斗抽滤，乙醚洗两遍去掉杂质，抽干。

5.如权利要求1所述的RGD环肽合成方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，获取全保护直链肽Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-D-Phe-OMe

1)以Mtt-Lys(Boc)-OH为起始原料，与活化试剂HOSU和DCC以1：1.01：1.02在DCM中反应过夜，使Mtt-Lys(Boc)-OH在C端形成活化酯，获得Mtt-Lys(Boc)-NHS，而后抽滤去掉不溶物，溶液减压旋干得到纯净的Mtt-Lys(Boc)-NHS；

2)在碱性环境下，以DCM为溶剂，将Mtt-Lys(Boc)-NHS与NH2-Arg(Pbf)-OH以1：1溶解，滴加PH为8的TEA反应4小时，使Mtt-Lys(Boc)-NHS的活化酯与氨基酸的N端的氨基反应，并形成连接，HPLC液相分析为单主峰，减压旋干后得到片段Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-OH，而后将其加入乙醚搅拌成浊状物，布氏漏斗抽滤，乙醚洗两遍去掉杂质，抽干；

3)将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-OH与活化试剂HOSU、DCC以1：1.01：1.02在DCM中反应过夜，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-OH在C端形成活化酯，获得Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-NHS，而后抽滤去掉不溶物，溶液减压旋干得到纯净的Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-NHS；

在碱性环境下，以DCM为溶剂，将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-NHS与NH2-Gly-OH以1：1溶解，滴加PH为8的TEA反应4小时，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-NHS的活化酯与氨基酸的N端的氨基反应，并形成连接，HPLC液相分析为单主峰，减压旋干后得到片段Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-OH，而后将其加入乙醚搅拌成浊状物，布氏漏斗抽滤，乙醚洗两遍去掉杂质，抽干；

将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-OH与活化试剂HOSU、DCC以1：1.01：1.02在DCM中反应过夜，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-OH在C端形成活化酯，获得Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-NHS，而后抽滤去掉不溶物，溶液减压旋干得到纯净的Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-NHS；

在碱性环境下，以DCM为溶剂，将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-NHS与NH2-Asp(Otbu)-OH以1：1溶解，滴加PH为8的TEA反应4小时，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-NHS的活化酯与氨基酸的N端的氨基反应，并形成连接，HPLC液相分析为单主峰，减压旋干后得到片段Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-OH，而后将其加入乙醚搅拌成浊状物，布氏漏斗抽滤，乙醚洗两遍去掉杂质，抽干；

4)将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-OH与活化试剂HOSU、DCC以1：1.01：1.02在DCM中反应过夜，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-OH在C端形成活化酯，获得Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-NHS，而后抽滤去掉不溶物，溶液减压旋干得到纯净的Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-NHS；

在碱性环境下，以DCM为溶剂，将Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-NHS与H-D-Phe-OMe以1：1溶解，滴加PH为8的TEA反应4小时，使Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-NHS的活化酯与氨基酸的N端的氨基反应，并形成连接，HPLC液相分析为单主峰，减压旋干后得到全保护直链肽Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-D-Phe-OMe，而后将其加入乙醚搅拌成浊状物，布氏漏斗抽滤，乙醚洗两遍去掉杂质，抽干；

S2，获取全保护环肽

将全保护直链肽Mtt-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly-Asp(Otbu)-D-Phe-OMe旋蒸、冻干后，用加入了TFA的DCM溶解，TFA在去掉N端Mtt裸露氨酸的同时，能够催化C端甲酯与氨基的反应，形成酰胺环，获得全保护环肽，按重量份数计，DCM：TFA＝20：1，每mmol全保护直链肽溶解在0.5L溶剂中，而后在50℃的条件下油浴回流过夜，最后将全保护环肽减压旋干；

S3，切割提纯

5)按重量份数计，以TFA：苯甲硫醚：EDT：苯甲醚＝90：5：3：2配置切割液，并将全保护环肽置入其中切割2小时；

6)用冰乙醚析出，离心得到多肽粗肽，而后再用冰乙醚洗3次，去除部分杂质，减压抽干，最后用HPLC纯化得到纯品的RGD全肽，其结构式如下：