本发明涉及医药技术领域，特别是指由α-细辛脑制备存储产生的杂质Y及其提纯方法和用途。
背景技术：
α-细辛脑最早从南星科植物石菖蒲的挥发油中提取，具有抗心肌缺血、止咳去痰、抗惊厥、抗溃疡、抗癌、抗血小板、抗癫痈等多种药理活性。但由于中药资源有限且其含量很低，成份复杂导致提取纯品困难，同时也极易混入黄梓醚等致癌物质，因此，人工合成成为该原料药的主要来源。
人工合成细辛脑的主要产物为α-细辛脑，即反式-2,4,5-三甲氧基-1-丙烯基苯，副产物为顺式-2,4,5-三甲氧基-1-丙烯基苯，即β-细辛脑。在人工合成细辛脑以及存储过程中发现总有一种蓝色荧光杂质存在，无论以什么原料合成的细辛脑，都存在这种蓝色荧光杂质，似乎将其分离非常困难。国家关于细辛脑药品标准(WS-10001-(HD-0436)-2002)中认定为有害杂质，对其含量作了严格限制，并对其测定方法作了如下规定。检查蓝色荧光物质：取本品适量，精密称定，加醋酸乙酯制成每1ml中含200mg的溶液，照薄层色谱法(中国药典2000年版二部附录V B)试验，吸取50ml点于硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(6︰4)为展开剂，展开后，取出晾干，刮取在紫外光灯(365nm)下呈蓝色荧光斑点(Rf值约0.3～0.5)的硅胶置10ml量瓶中，另在空白处刮取与此斑点相同大小的硅胶置另一10ml量瓶中作为空白对照，加乙醇适量，充分振摇，洗脱后，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心取上清液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录IV A)，在278nm的波长处测定吸收度，不得大于0.20。
国家标准指明存在这一蓝色荧光杂质，但没有指明这一蓝色荧光物质的结构名称，也没有给出杂质允许的绝对含量，只是规定了“在278nm的波长处测定吸收度，不得大于0.20”，这为细辛脑生产、储运过程质量控制带来不便。医药领域经常需要合成分离出高纯度的已知杂质化合物，将杂质化合物作为对照品，用于含有该杂质化合物的药物质量研究和分析检验中，对药物的质量控制十分重要。在进行细辛脑质量检测中发现，有一蓝色荧光物质作为杂质存在或产生于细辛脑及其制剂存储过程中，经查阅相关文献，未见有上述杂质的记载或报道。
李勇飞(李勇飞.简单金属卟啉催化分子氧氧化烯烃的研究[D].湖南：湖南大学，2010.)报道了金属络合物催化分子氧氧化苯乙烯所得到产物几乎全部是苯甲醛，β取代烯烃以及苯环上的甲氧基更有利于分子氧氧化苯乙烯型双键。体系中存在的微量醇、醛、酮、酸以及光照条件都有利于分子氧活化，进而促进分子氧氧化双键反应。
技术实现要素：
本发明提出了由α-细辛脑制备存储过程生成的杂质Y及其提纯方法和用途，该提纯方法具有分离效果好、操作简单、纯度高等优点，适合工业化生产；同时获得的杂质Y的精品可用于分析检测α-细辛脑的纯度和含量，用于控制α-细辛脑原料及其制剂的质量，防止α-细辛脑氧化变质，进而为广大群众的安全用药提供保障。
本发明的技术方案是这样实现的：
由α-细辛脑制备存储产生的杂质Y及其提纯方法和用途，所述杂质Y的结构式为：
优选的，所述杂质Y粗品通过硅胶柱层析分离，选取溶剂A和溶剂B的混合溶剂为洗脱剂，TLC观察淋洗液成分变化，α-细辛脑成分出现后，在365nm紫外光灯下Rf值约0.3～0.5，呈蓝色荧光物质即杂质Y，单独收集含杂质Y成分的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物；剩余物用溶剂C重结晶，真空干燥，得到白色结晶。
优选的，所述的溶剂A为石油醚、正己烷的一种或多种；所述的溶剂B为乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿中的一种或多种。
优选的，所述的混合溶中溶剂A与溶剂B的体积比为1:0.1-1:0.7。
优选的，所述溶剂C为石油醚、正己烷、四氯化碳的一种或多种。
优选的，所述杂质Y粗品的制备方法包括下列四种：
(a)将合成α-细辛脑粗品减压蒸馏，蒸出主馏分α-细细辛脑，残留物用溶剂D浸取，过滤浸取液，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(b)将合成α-细辛脑重结晶母液浓缩至剩原来体积的20％以下，析晶，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(c)将合成α-细辛脑产品溶于溶剂D配制的溶液置于广口瓶中，室温开口放置，随溶剂挥发析出晶体，至剩余溶液体积为原来溶液的20％以下，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(d)将合成α-细辛脑产品溶于溶剂D，加入无机或有机酸，置于广口瓶中，在阳光照射下，慢慢鼓如空气2-10小时，减压浓缩至剩余溶液为原来溶液的20％以下，冷却析晶，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品。
优选的，所述溶剂D为乙醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿的一种或多种。
优选的，所述方法d中，加入无机或有机酸的加入量为合成细辛脑质量的0.01％--5％；加入无机或有机酸为盐酸、硫酸、甲酸、乙酸、对甲基苯磺酸的一种或多种。
一种杂质Y在α-细辛脑原料药及其制剂的质量控制中用途，其特点是，将所述杂质Y用于α-细辛脑原料药及其制剂的杂质检测过程中，所述杂质检测过程是通过气相色谱检测得出杂质浓度与气相色谱的积分面积之间的关系，然后与待检测样品的色谱积分面积进行对比，判断药品质量控制中的杂质含量是否符合要求；
其中，所述气相色谱检测过程中气相色谱条件为：色谱柱型号为30m×0.32mm×0.25μm Agilent HP-5色谱柱，FID检测器，以氮气为载气，流速30mL/min，分流比1:30，进样口温度240℃，柱温180℃，检测器温度为250℃，进样量1μL，氢气流量40mL/min，空气流量300mL/min。
本发明有益效果：
本发明中杂质Y由α-细辛脑制备、存储过程生成的，并且对含有杂质Y粗品通过硅胶柱层析分离得到杂质Y，杂质Y的纯度大于99％，可对α-细辛脑生产、存储过程中杂质进行定性和定量，用于分析检测α-细辛脑的纯度和含量，用于控制α-细辛脑原料及其制剂的产品质量，防止α-细辛脑氧化变质，为患者安全用药提供保障。本发明中杂质Y原料来源于α-细辛脑制备、存贮过程，价格便宜，操作简单、分离效果好、产品质量好，符合市场对产品用途的要求。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提出了由α-细辛脑制备存储过程生成的杂质Y及其提纯方法和用途，所述杂质Y的结构式为：
优选的，所述杂质Y粗品通过硅胶柱层析分离，选取溶剂A和溶剂B的混合溶剂为洗脱剂，TLC观察淋洗液成分变化，α-细辛脑成分出现后，在365nm紫外光灯下Rf值约0.3～0.5(以洗脱剂作展开剂)，呈蓝色荧光物质即杂质Y，单独收集含杂质Y成分的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物；剩余物用溶剂C重结晶，真空干燥，得到白色结晶。
优选的，所述溶剂A为石油醚、正己烷的一种或多种；所述溶剂B为乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿中的一种或多种；由于石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯效果更好，优选溶剂A为石油醚(60-90℃)，溶剂B为乙酸乙酯。
优选的，所述的混合溶剂洗脱剂为溶剂A与溶剂B的体积比为1:0.1-1:0.7，优选1:0.6。
优选的，所述的溶剂C为石油醚、正己烷、四氯化碳的一种或多种，由于石油醚价格更低，优选石油醚(60-90℃)。
优选的，所述杂质Y粗品的制备方法包括下列四种：
(a)将合成α-细辛脑粗品减压蒸馏，蒸出主馏分α-细细辛脑，残留物用溶剂D浸取，过滤浸取液，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(b)将合成α-细辛脑重结晶母液浓缩至剩原来体积的20％以下，析晶，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(c)将合成α-细辛脑产品溶于溶剂D配制的溶液置于广口瓶中，室温开口放置，随溶剂挥发析出晶体，至剩余溶液体积为原来溶液的20％以下，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品；
(d)将合成α-细辛脑产品溶于溶剂D，加入无机或有机酸，置于广口瓶中，在阳光照射下，慢慢鼓如空气2-10小时，减压浓缩至剩余溶液为原来溶液的20％以下，冷却析晶，过滤去除滤饼，滤液浓缩至干，得到所述杂质Y粗品。
优选的，所述溶剂D为乙醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿的一种或多种；由于甲醇、乙酸乙酯效果更好，优选甲醇、乙酸乙酯。
优选的，所述方法d中，加入无机或有机酸的加入量为合成细辛脑质量的0.01％--5％；加入无机或有机酸为盐酸、硫酸、甲酸、乙酸、对甲基苯磺酸的一种或多种，由于盐酸、甲酸效果更好，优选盐酸、甲酸。
经研究发现：α-细辛脑溶液在空气中放置过程即可产生杂质Y，杂质Y为α-细辛脑空气氧化产物，活泼氧源于空气氧被溶液中还原物质激活，并氧化α-细辛脑分子中双键产生醛基，反应式为：
一种杂质Y在α-细辛脑原料药及其制剂的质量控制中用途，其特点是，将所述杂质Y用于α-细辛脑原料药及其制剂的杂质检测过程中，所述杂质检测过程是通过气相色谱检测得出杂质浓度与气相色谱的积分面积之间的关系，然后与待检测样品的色谱积分面积进行对比，判断药品质量控制中的杂质含量是否符合要求；
其中，所述气相色谱检测过程中气相色谱条件为：色谱柱型号为30m×0.32mm×0.25μm Agilent HP-5色谱柱，FID检测器，以氮气为载气，流速30mL/min，分流比1:30，进样口温度240℃，柱温180℃，检测器温度为250℃，进样量1μL，氢气流量40mL/min，空气流量300mL/min。
具体实施例
1、杂质Y粗品的制备
(1)由α-细辛脑粗品减压蒸馏后残留物中制备
取合成α-细辛脑粗品450g至1000mL圆底烧瓶中，用减压精馏装置蒸馏，收集173-175℃主馏分(11.5kPa)，待无馏分蒸出，停止蒸馏，冷却残留物，加入80mL甲醇回流10分钟，冷却析晶，过滤除去滤饼，滤液浓缩至干，得到杂质Y粗品14.5克，黑色油状物，通过GC面积归一法测定杂质Y粗品的含量为19.5％。
(2)取合成α-细辛脑重结晶甲醇母液260mL，旋转蒸发浓缩至剩余液体约45mL，冷却析晶，过滤除去滤饼，滤液浓缩至干，得到杂质Y粗品8.8克，黄色油状物，通过GC面积归一法测定杂质Y粗品的含量为6.52％。
(3)将合成α-细辛脑粗品35克和160mL乙酸乙酯溶于广口瓶中，在通风橱中室温开口放置12天，剩余溶液体积约为30mL，过滤除去滤饼，滤液浓缩至干，得到杂质Y粗品5.6克，黄色油状物，通过GC面积归一法测定杂质Y粗品的含量为21.22％。
(4)将合成α-细辛脑粗品30克和150mL甲醇溶于广口瓶中，，加入2mol/L盐酸0.5mL，在阳光照射下，慢慢鼓如空气6小时，旋转蒸发浓缩至剩余液体约25mL，冷却析晶，过滤除去滤饼，滤液浓缩至干，得到杂质Y粗品4.8克，黄色油状物，通过GC面积归一法测定杂质Y粗品的含量为23.50％。
2、杂质Y的精制
实施例1：取上述杂质Y粗品制备方法(1)所得样品1.5克，用65mL 100-200目硅胶粉填充层析柱，以石油醚(60～90℃)：乙酸乙酯体积比＝1：0.67为洗脱剂，TLC(GF254硅胶板，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝6/4)观察淋洗液成分变化，单独收集在紫外光灯(365nm)下呈蓝色荧光斑点(Rf值约0.3～0.5)的物质，即杂质Y的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物。剩余物用石油醚(60～90℃)重结晶，真空干燥，得到0.24克杂质Y精品，白色针状固体，熔点111.5-113℃，通过GC面积归一法测定杂质Y精品含量为99.35％。
结构解析：核磁共振氢谱数据：1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δppm 10.34(s，1H)，7.35(s，1H)，6.51(s，1H)，3.99，3.94and 3.90(s，3×3H)，红外吸收谱数据：IR吸收峰(波数)：3410、、2970、、2930、1600、1517、1660、1470和1360cm-1，高分辨质谱：[M+H]+：理论值197.1999，测量值：197.2140。进而推断出杂质Y的结构式为：
实施例2：取上述杂质Y粗品制备方法(2)所得样品2.2克，用95mL 100-200目硅胶粉填充层析柱，以正己烷：二氯甲烷体积比＝1:0.55为洗脱剂，TLC(GF254硅胶板，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝6/4)观察淋洗液成分变化，单独收集在紫外光灯(365nm)下呈蓝色荧光斑点(Rf值约0.3～0.5)的物质，即杂质Y的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物。剩余物用正己烷重结晶，真空干燥，得到0.11克杂质Y精品，白色针状固体，熔点111.8-113.5℃，通过GC面积归一法测定杂质Y精品含量为99.65％。
实施例3：取上述杂质Y粗品制备方法(3)所得样品2.0克，用80mL 100-200目硅胶粉填充层析柱，以正己烷：乙酸乙酯体积比＝1:0.6为洗脱剂，TLC(GF254硅胶板，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝6/4)观察淋洗液成分变化，单独收集在紫外光灯(365nm)下呈蓝色荧光斑点(Rf值约0.3～0.5)的物质，即杂质Y的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物。剩余物用正己烷重结晶，真空干燥，得到0.33克杂质Y精品，白色针状固体，熔点111.3-113.5℃，通过GC面积归一法测定杂质Y精品含量为99.45％。
实施例4：取上述杂质Y粗品制备方法(4)所得样品2.5克，用110mL 100-200目硅胶粉填充层析柱，石油醚(60～90℃)：乙醇体积比＝1:0.1为洗脱剂，TLC(GF254硅胶板，展开剂：石油醚/乙酸乙酯＝6/4)观察淋洗液成分变化，单独收集在紫外光灯(365nm)下呈蓝色荧光斑点(Rf值约0.3～0.5)的物质，即杂质Y的淋洗液，蒸除溶剂，冷却，得到剩余物。剩余物用石油醚(60～90℃)重结晶，真空干燥，得到0.45克杂质Y精品，白色针状固体，熔点111.2-113.2℃，通过GC面积归一法测定杂质Y精品含量为99.21％。
实施例5：杂质Y在α-细辛脑GC检测中的应用
检测条件：色谱柱为Agilent HP-5(30m×0.32mm×0.25μm)，FID检测器，以氮气为载气，流速每分钟30mL，分流比1:30，进样口温度240℃，柱温180℃，检测器温度为250℃，氢气流量40mL/min，空气流量300mL/min。
取α-细辛脑适量，加入少量的杂质Y精品，用乙酸乙酯配制成50mg/mL的溶液，进样量1μL，GC分离效果良好，杂质Y相对保留时间为5.842分钟。
通过上述GC检测得出杂质Y浓度与GC的积分面积之间的关系，然后与检测样品的GC积分面积进行对比，推断出样品中杂质Y含量，进而判断药品质量控制中的杂质Y含量是否符合质量要求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。