二羟基二甲基异色满-3-甲酰-AA,其制备,抗缺血性中风作用和应用的制作方法

二羟基二甲基异色满-3-甲酰-aa,其制备,抗缺血性中风作用和应用
技术领域
[0001]
本发明涉及3种(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa，涉及它们的制备方法，涉及它们对抗缺血性中风发作24小时的治疗作用。因而本发明涉及它们在制备对缺血性中风发作24小时仍然有效的药物中的应用。本发明属于生物医药领域。
技术背景
[0002]
缺血性中风是常见的危害严重的脑血管疾病。缺血性中风以发病率高,致残率高,复发率高和死亡率高为特点,是人类最严重的致死性疾病之一。目前,rtpa是临床公认的治疗缺血性中风的唯一有效药物。然而,rtpa治疗缺血性中风存在两个难以逾越的难题。第一个难题是rtpa对缺血性中风发作4小时以上的患者没有疗效。第二个难题是连续使用rtpa可引起脑,胸腔及腹腔出血。发明对缺血性中风发作4小时以上尤其对缺血性中风发作24小时的患者有效又无出血副作用的药物是脑血管药物研究的热点与前沿。发明人一直注重开发对缺血性中风发作4小时以上尤其对缺血性中风发作24小时的患者有效又无出血副作用的药物。经过3年探索,发明人发现下式3种(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa(式中aa选自l-asp,l-asn和l-ser残基)不仅对缺血性中风发作24小时的大鼠仍然有效而且无出血副作用。根据这个发现,发明人提出了本发明。
[0003]


技术实现要素：

[0004]
本发明的第一个内容是提供(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa(aa为l-asp,l-asn和l-ser残基)。
[0005]
本发明的第二个内容是提供(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa(aa为l-asp,l-asn和l-ser残基)的合成方法，该方法包括：
[0006]
1)在氯化亚砜催化下按标准方法制备d(+)-β-(3,4-二羟基苯基)乳酸苄酯
[0007]
2)d(+)-β-(3,4-二羟基苯基)乳酸苄酯在三氟化硼二乙醚的催化作用下转化成(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸苄酯
[0008]
3)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸苄酯在pd/c催化氢化作用下按标准方法制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸；
[0009]
4)在叠氮磷酸二苯酯，n-甲基吗啉的催化作用下按标准方法制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa-obzl
[0010]
5)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa-obzl催化氢化转化成(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa。
[0011]
本发明的第三个内容是评价(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa对缺血性中风发作24小时的大鼠的治疗作用。
附图说明
[0012]
图1(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-aa的合成路线,式中aa选自l-asp,l-asn和l-ser残基。(i)苯甲醇,socl
2
；(ii)丙酮,bf
3-et
2
o；(iii)h
2
,pd/c,meoh；(iv)aa-obzl,叠氮磷酸二苯酯,n-甲基吗啉,无水四氢呋喃；(v)h
2
,pd/c,meoh。
具体实施方式
[0013]
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0014]
实施例1制备d(+)-β-(3,4-二羟基苯基)乳酸苄酯(1)
[0015]
将91.0ml氯化亚砜缓慢滴加到0℃搅拌的150ml苯甲醇中。滴毕,室温搅拌1h,加55.0g(250mmol)丹参素钠,室温搅拌48h,反应完全。反应混合物减压浓缩,残留物用100ml乙酸乙酯溶解,用饱和nacl水溶液洗(30ml
×
3),用无水na
2
so
4
干燥12h,过滤，滤液减压浓缩,残留物用硅胶柱层析纯化,得20.1g(35％)标题化合物,为黄色油状物。
1
hnmr(300m hz,dmso-d
6
):δ/ppm＝8.75(s,1h),8.67(s,1h),7.31(m,5h),6.61(s,1h),6.58(s,1h),6.42(dd,j
1
＝1.8hz,j
2
＝2.1hz,1h),5.55(d,j＝6.0hz,1h),5.12(s,2h),4.19(q,j
1
＝6.9hz,j
2
＝6.0hz,1h),2.73(qd,j
1
＝8.1hz,j
2
＝5.4hz,2h)；esi-ms(m/e):287[m-h]-。
[0016]
实施例2制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸苄酯(2)
[0017]
将10.0g(30.6mmol)d(+)-β-(3,4-二羟基苯基)乳酸苄酯(1)用104ml丙酮溶解。0℃于搅拌下缓慢向里滴加4.4ml三氟化硼二乙醚。滴毕,室温搅拌4h,化合物1完全消失。反应液减压浓缩,残余物用100ml乙酸乙酯溶解。得到的溶液用饱和nacl水溶液洗(30ml
×
3),用无水na
2
so
4
干燥12h,过滤,滤液减压浓缩,残留物用硅胶柱层析纯化,得11.4g(80％)标题化合物,为黄色油状物。
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝1.58(s,1h),1.54(s,1h),7.39(m,5h),6.52(s,1h),6.47(s,1h),1.93(s,1h),4.47(m,1h),2.71(m,2h),1.40(m,6h)；esi-ms(m/e):327[m-h]-。
[0018]
实施例3制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸(3)
[0019]
将11.4g(34.8mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸苄酯(2)用60ml甲醇溶解。然后加1.14g pd/c，搅拌均匀，通氢气，室温反应24h,化合物2完全消失。反应液过滤,滤液减压浓缩,得到10.5g(95％)标题化合物,为无色固体。
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝12.60(s,1h),8.82(d,j＝6.9hz,2h),8.66(d,j＝5.4hz,2h),6.52(s,1h),6.46(s,1h),4.34(m,1h),2.68(d,j＝7.2hz,2h),1.37(d,j＝3.8hz,6h)；esi-ms(m/e):237[m-h]-。
[0020]
实施例4制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asp(obzl)-obzl(4a)
[0021]
将952mg(4.00mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸(3)用12ml无水四氢呋喃溶解,加1ml叠氮磷酸二苯酯(dppa),搅拌30min。0℃与搅拌下加1.50g(4.40mmol)asp-(obzl)-obzl。反应液用n-甲基吗啉调ph至8-9。室温搅拌24h,化合物3完全消失。反应液减压浓缩,残余物用100ml乙酸乙酯溶解，依次用1n ch
3
coona水溶液洗(30ml
×
3)，饱和nacl水溶液洗(30ml
×
3)，饱和khso
4
水溶液洗(30ml
×
3)，饱和nacl水溶液洗(30ml
×
3)，用
无水na
2
so
4
干燥12h,过滤,滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化，得810mg(38％)标题化合物，为无色固体。
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝8.87(s,1h),8.70(s,1h),8.14(d,j＝8.4hz,1h),7.33(s,10h),6.52(s,1h),6.44(s,1h),5.10(d,j＝8.4hz,4h),4.87(q,j＝7.8hz,1h),4.20(m,1h),2.97(dq,j
1
＝6.3hz,j
2
＝6.3hz,2h),2.69(s,2h),1.40(d,j＝15hz,6h)；esi-ms(m/e):532[m-h]-。
[0022]
实施例5制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asp(5a)
[0023]
按照实施例3的方法由810mg(1.5mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asp(obzl)-obzl(4a)472mg(88％)标题化合物，为无色固体。mp:136.4-138.2℃；[α]2
d
5＝138.4(c＝0.1,meoh)；ir(cm-1
):3401,2976,1688,1500,1435,1382,1363,1218,1187,1148,1099,873,615；
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝12.73(s,1h),8.82(s,1h),8.65(s,1h),7.87(d,j＝8.10hz,1h),6.53(s,1h),6.48(s,1h),4.59(m,1h),4.20(m,1h),2.75(d,j＝5.40hz,2h),2.70(s,1h),2.56(m,1h),1.43(d,j＝13.5hz,6h)；ft-ms(m/e):352.10541[m-h]-(理论值：352.10324)。
[0024]
实施例6制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asn-obzl(4b)
[0025]
按照实施例4的方法由1.19g(5.00mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸(3)和1.71g(5.50mmol)asn-obzl得到486mg(22％)标题化合物，为无色固体。
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝8.85(s,1h),8.69(s,1h),7.37(s,5h),6.52(s,1h),6.46(s,1h),4.41(m,1h),4.22(m,1h),2.77(m,2h),1.40(s,6h),1.24(m,2h)；esi-ms(m/e):441[m-h]-。
[0026]
实施例7制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-ser-obzl(4c)
[0027]
按照实施例4的方法由1.10g(4.60mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-羧酸(3)和1.85g(5.06mmol)ser-obzl得到437mg(23％)标题化合物，为无色固体。
1
hnmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝8.84(s,1h),8.68(s,1h),7.70(d,j＝7.80hz,1h),7.34(s,1h),6.54(s,1h),6.46(s,1h),5.28(t,j＝5.10hz,1h),5.16(q,j
1
＝12.9hz,j
2
＝5.40hz,2h),4.46(m,1h),4.26(d,j＝8.70hz,1h),3.87(m,1h),3.74(m,1h),2.68(m,2h),1.43(d,j＝11.6hz,6h)；esi-ms(m/e):414[m-h]-。
[0028]
实施例8制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asn(5b)
[0029]
按照实施例3的方法由486mg(1.10mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-asn-obzl(4b)得220mg(57％)标题化合物，为无色固体。mp:174.9-176.9℃；[α]2
d
5＝63.6(c＝0.1,meoh)；ir(cm-1
):3465,3429,2974,2513,1715,1629,1516,1447,1293,1225,1187,1146,1097；
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝12.64(s,1h),8.75(d,j＝8.40hz,2h),7.91(d,j＝8.40hz,1h),7.45(s,1h),6.97(s,1h),6.53(s,1h),6.48(s,1h),4.54(q,j
1
＝5.40hz,j
2
＝2.40hz,1h),4.19(dd,j
1
＝3.00hz,j
2
＝8.10hz,1h),2.69(m,4h),1.42(d,j＝10.1hz,6h)；ft-ms(m/e):351.12163[m-h]-(理论值：351.12705)。
[0030]
实施例9制备(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-ser(5c)
[0031]
按照实施例3的方法由437mg(1.05mmol)(r)-6,7-二羟基-1,1-二甲基异色满-3-甲酰-ser-obzl(4c)得314mg(92％)标题化合物，为无色固体。mp:123.6-124.3；[α]2
d
5＝188.6(c＝0.1,meoh)；ir(cm-1
):3310,2974,2932,2893,1731,1650,1520,1446,1289,1220,1187,1146,1102,869,831,786；
1
h nmr(300mhz,dmso-d
6
):δ/ppm＝8.85(s,1h),8.69(s,
1h),7.55(d,j＝8.10hz,1h),6.54(s,1h),6.48(s,1h),4.30(m,2h),3.81(dd,j
1
＝3.90hz,j
2
＝7.20hz,1h),3.69(dd,j
1
＝7.80hz,j
2
＝3.00hz,1h),2.74(d,j＝13.5hz,1h),2.59(d,j＝11.4hz,1h),1.43(d,j＝10.6hz,6h)；ft-ms(m/e):324.10381[m-h]-(理论值：324.10833)。
[0032]
实施例10评价化合物5a-c对缺血性中风发作24小时大鼠的治疗作用
[0033]
雄性sd大鼠(280
±
20g)用10％水合氯醛(4ml/kg)腹腔注射麻醉。在大鼠的颈部正中部竖直开约2cm长切口,沿胸锁乳突肌内侧缘分离出右颈总动脉,颈外动脉及颈内动脉。用无创动脉夹分别夹闭颈内动脉开口处和颈总动脉近心端,结扎颈外动脉的远心端,在颈外动脉剪一小口,松开颈总动脉近心端的动脉夹,取10μl血入1ml离心管。之后,再用无创动脉夹夹闭颈总动脉的近心端。将离心管中的血常温放置30分钟使凝固,然后-20℃过夜使转变为结实的血凝块。取出液凝块,加1ml生理盐水,用钢铲把血凝块捣成均匀的细小血栓块与生理盐水的悬液。将血栓块悬液转移至1ml注射器内。松开大鼠颈总动脉近心端的动脉夹,将1ml血栓块悬液缓慢从大鼠颈外动脉向近心端经过颈内动脉注入大鼠的大脑。然后结扎颈外动脉近心端,打开颈内动脉和颈总动脉处的动脉夹,恢复血流。大鼠苏醒24小时后按zealonga方法评定神经功能缺损程度。0分表示无任何神经功能缺失体征,1分表示未损伤侧前肢不能伸展,2分表示向未损伤侧行走,3分表示向未损伤侧转圈成追尾状行走,4分表示意识障碍无自主行走,5分表示死亡。按照得分将大鼠均匀分组。各组大鼠每天口服1次生理盐水(3ml/kg/d)或化合物5a-c的生理盐水溶液(剂量为100nmol/kg/天)。连续口服3天,每天评分。根据评分计算各组大鼠死亡率＝5分只数/总只数
×
100％；显效率＝最后一天评分低于给药前评分但不为0的只数/总只数
×
100％；治愈率＝最后一天评分为0的只数/总只数
×
100％。数据见表1。结果表明,化合物5a-c治疗的大鼠的死亡率为零,远低于生理盐水治疗的大鼠的死亡率,而化合物5a-c治疗的大鼠的治愈率50％,远远高于生理盐水治疗的治愈率。可见,本发明有突出的技术效果。
[0034]
表1化合物5a-c治疗的中风24小时大鼠的神经生物学评分
[0035]
[0036]