短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用的制作方法

文档序号:21198414发布日期:2020-06-23 19:01阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种短小蛇根草opwrky2转录因子的编码序列,其特征在于,所述opwrky2转录因子的核苷酸序列如seqidno.1所示。所述opwrky2转录因子的氨基酸序列如seqidno.2所示。

2.一种多肽,其特征在于,所述多肽的基酸序列如seqidno.2所示。

3.一种重组表达载体,其特征在于,所述重组表达载体包含如seqidno.1所示的核苷酸序列。

4.一种重组表达转化菌株,其特征在于,所述重组表达转化菌株包含如seqidno.1所示的核苷酸序列。

5.根据权利要求1或2所述的短小蛇根草opwrky2转录因子的编码序列在提高短小蛇根草中喜树碱含量的应用。

6.一种利用opwrky2提高短小蛇根草毛状根中喜树碱含量的方法,其特征在于,包括以下步骤:

步骤1、对短小蛇根草的转录组数据库进行分析,从短小蛇根草cdna文库中克隆得到短小蛇根草opwrky2基因的编码序列。

步骤2、将所述opwrky2基因可操作性地连接于表达调控序列,形成含opwrky2基因的植物过表达载体。

步骤3、将含opwrky2基因的植物过表达载体转化发根农杆菌,得到具有所述植物过表达载体的发根农杆菌菌株。

步骤4、利用步骤3中构建的所述发根农杆菌菌株转化短小蛇根草,经抗生素筛选得到抗性毛状根,再经pcr检测为阳性的毛状根株系即为转基因短小蛇根草毛状根。

步骤5、对步骤4中得到的所述转基因短小蛇根草毛状根进行喜树碱含量的测定,进而得到喜树碱含量提高的短小蛇根草毛状根株系。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述步骤3中,采用冻融法进行转入,所述发根农杆菌为c58c1菌株。


技术总结
本发明提供了一种短小蛇根草OpWRKY2转录因子的编码序列及其应用,从短小蛇根草中分离克隆了1071bp的OpWRKY2转录因子的编码框序列;构建了含OpWRKY2基因的植物表达载体并遗传转化短小蛇根草茎段外植体,获得过量表达OpWRKY2基因的短小蛇根草毛状根;利用高效液相色谱法分析转基因毛状根中喜树碱的含量,结果表明过量表达OpWRKY2基因可以促进短小蛇根草毛状根中喜树碱的积累;通过qRT‑PCR分析、凝胶阻滞实验和双荧光素酶报告基因实验,发现OpWRKY2转录因子可以结合和瞬时激活喜树碱合成基因OpTDC1的表达,从而提高喜树碱的积累。本发明方法为生产具有广谱抗癌疗效的喜树碱提供了一种新型优质药源,具有重要的理论意义和潜在的应用价值。

技术研发人员:开国银;张锡晨;武超;郝小龙
受保护的技术使用者:浙江中医药大学
技术研发日:2020.03.03
技术公布日:2020.06.23
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