一类用作DPP-IV抑制剂的吡唑并嘧啶结构的化合物及应用的制作方法

一类用作dpp-iv抑制剂的吡唑并嘧啶结构的化合物及应用
技术领域
1.本发明涉及一类用作dpp-iv抑制剂的吡唑并嘧啶结构的化合物及应用。


背景技术：

2.近年来，随着经济的高速发展和工业化进程，生活方式的改变和老龄化进程加快，糖尿病已成为21世纪全球最严重的公共卫生问题之一。根据国际糖尿病联合会公布的数据显示，到2017年全球糖尿病患者已经达到4.25亿，预计到2045年，这一数字将增加到6.29亿。
3.根据2018年evaluate发布的报告，全球糖尿病市场在2017年达到了创纪录的444亿美元规模，这其中dpp-iv抑制剂及复方的销售额已达到120亿美元，占据了糖尿病用药市场的27％。据预计，到2024年全球糖尿病市场将达到595亿美元，成为仅次于抗肿瘤药物的第二大药物市场。对比国际市场，国内糖尿病治疗药物使用格局大相径庭，根据2017年医院处方用药系统对糖尿病药物的统计，胰岛素约占三分之一，其次双胍类约占百分之二十，是使用最广泛的非胰岛素降糖药，此外传统的α-糖苷酶抑制剂、磺酰脲类、格列奈类、噻唑烷二酮类仍占据较大的处方份额，合计达到45％以上，而新型的dpp-iv抑制剂和glp-1受体激动剂的占比还极低。这主要是由于前些年dpp-iv抑制剂价格偏高，且不享受医保，令国内很多患者望而却步。随着2017年dpp-iv抑制剂进入医保目录，相信其市场份额将会有显著提升。考虑到dpp-iv抑制剂降糖的有效性及安全性，更低的低血糖风险及其对心脏、血脂等的潜在获益，有理由相信dpp-iv抑制剂在中国糖尿病防治中的地位也会越来越重要，成为糖尿病口服治疗药物中的主力军。
4.肠降血糖素在维持体内葡萄糖平衡中起着至关重要的作用，研究发现正常饮食后，人体肠道受到刺激，由回肠和结肠的l细胞分泌的胰高血糖素样肽酶-1(glp-1)及由十二指肠和空肠k细胞分泌的葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(gip)能通过多种途径和机制参与血糖的调控：(1)增加外周肌肉组织对葡萄糖的摄取和利用；(2)抑制肝脏糖异生，减少葡萄糖产生；(3)促进胰岛β细胞增生，增加胰岛素生物合成；(4)根据血糖水平对胰高血糖素的分泌进行调控。二肽基肽酶-iv(dpp-iv)是位于细胞表面的一种丝氨酸蛋白酶，主要表达于胃肠道、肝脏、胰腺、肾脏等，部分以可溶形式存在于循环血液中。glp-1和gip极易被dpp-iv分解为无活性形式，并经肝肾清除，这就使得体内glp-1和gip的半衰期极短(t1/2＝1～2min)。因此，目前通过开发dpp-iv抑制剂，目的在于延长glp-1的半衰期，提高内源性glp-1在血液循环中的浓度，起到调控血糖平衡的作用。通过dpp-iv/glp-1系统来调控血糖平衡具有其它抗糖尿病药物所不具有的优势：1)glp-1促进胰岛素分泌的作用具有葡萄糖浓度依赖性，因此其不易引发低血糖；2)长期使用不会导致体重增加；3)保护胰腺细胞，促进胰岛β细胞的增殖再生，抑制β细胞凋亡。


技术实现要素：

5.本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一类用作dpp-iv抑制剂的吡唑并嘧啶
结构的化合物及应用。
6.本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一类用作dpp-iv抑制剂的吡唑并嘧啶结构的化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下：
[0007][0008]
其中，ar环为被1-5个取代基取代的c
6-c
10
芳基；
[0009]
r1为氢原子、羟基、-or3、-nh2、-nhr3、-nr3r4、硫代吗啉-1,1-二氧化物、取代的吡咯、取代的哌啶或取代的哌嗪；
[0010]
r2为氢原子、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、卤代的c
1-c6烷基、c
6-c
10
芳基或c
4-c
10
杂芳基；
[0011]
r3、r4各自独立地为氢、c
1-c6烷基、c
2-c6烯基或c
2-c6炔基；
[0012]
酰基-c(o)r1的取代位置为嘧啶环上的4位或6位。
[0013]
进一步，所述ar环中的1-5个取代基各自独立地为c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、卤代的c
1-c6烷基、卤素、氰基、氨基、羟基、-nhoh、-nh-o-(c
1-c6烷基)、-nh-(c
1-c6烷基)、-n(c
1-c6烷基)2、-c(o)nh2、-c(o)nh-(c
1-c6烷基)、-c(o)n(c
1-c6烷基)2、-nhc(o)-(c
1-c6烷基)、-nhc(o)-(c
3-c8环烷基)、-n(c
1-c6烷基)c(o)h、-n(c
1-c6烷基)c(o)-(c
1-c6烷基)或-nhc(o)nh2。
[0014]
更进一步，ar环为被1-5个卤素原子取代的苯基。
[0015]
进一步，所述吡咯的取代基、哌啶的取代基或哌嗪的取代基各自独立地为c
1-c6烷基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、卤代的c
1-c6烷基、卤素、氰基、氨基、羟基、-nhoh、-nh-o-(c
1-c6烷基)、-nh-(c
1-c6烷基)、-n(c
1-c6烷基)2、-c(o)nh2、-c(o)nh-(c
1-c6烷基)、-c(o)n(c
1-c6烷基)2、-nhc(o)-(c
1-c6烷基)、-nhc(o)-(c
3-c8环烷基)、-n(c
1-c6烷基)c(o)h、-n(c
1-c6烷基)c(o)-(c
1-c6烷基)、-nhc(o)nh2或-s(o)
2-。
[0016]
进一步，所述化合物或其药学上可接受的盐的结构式如下：
[0017][0018]
其中，x为碳原子或氮原子；n为0或1；a表示吡咯的取代基、哌啶的取代基或哌嗪的取代基。
[0019]
更进一步，所述化合物或其药学上可接受的盐的结构式优选如下：
[0020][0021]
本发明的第二个目的在于提供上述用作dpp-iv抑制剂的吡唑并嘧啶结构的化合物在治疗和/或预防与dpp-iv活性过高或者与dpp-iv过度表达有关疾病的领域的应用，尤
其是在治疗糖尿病、非酒精性脂肪肝及心衰领域的应用。
[0022]
本发明的特点和有益效果在于：
[0023]
本发明的化合物能够有效治疗和/或预防与dpp-iv活性过高或者与dpp-iv过度表达有关的疾病，对dpp-iv具有良好的抑制作用，具有较好的降血糖活性。
具体实施方式
[0024]
以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
[0025]
实施例1
[0026]
化合物1
----
9-((3r，5s，6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羧酸盐酸盐的制备
[0027][0028]
步骤(1)
[0029][0030]
向n-boc-3-氰基-4-哌啶酮(2.24g,10mmol,1.0eq)的乙醇(20ml)溶液中加入水合肼(40mmol，4.0eq)，80℃加热回流反应；tlc检测反应完全，冷却至室温，减压浓缩溶剂，用乙酸乙酯和水萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品
----
白色固体化合物3-氨基-6,7-二氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4h)-羧酸叔丁酯，未纯化直接用于下一步反应；收率89％。
[0031]
步骤(2)
[0032][0033]
向3-氨基-6,7-二氢-2h-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(4h)-羧酸叔丁酯(2.38g,10mmol,1.0eq)的乙酸(20ml)溶液中加入乙酰丙酮酸甲酯(12mmol,1.2eq)，80℃加热回流反应；tlc
检测反应完全，冷却至室温，减压浓缩溶剂，用乙酸乙酯和水萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品，柱层析纯化分离得到两个异构体产物
----
主产物化合物1a和少量的化合物1b；
[0034]
步骤(3)
[0035][0036]
将化合物1a(4.6mmol，1.2eq)溶于三氟乙酸(4.6ml)中，室温反应，tlc检测反应完全；降温到0℃，加入dmac(18.4ml)，再加入三乙胺(3.22ml)，反应10min，调节体系的ph值至碱性；向体系中加入n-[(2r,3s)-2-(2,5-二氟苯基)四氢-5-氧代-2h-吡喃-3-基]氨基甲酸叔丁酯(3.8mmol,1.0eq)，室温反应2h；降温到0℃，分三批加入三乙酰氧基硼氢化钠(5.7mmol,1.5eq)，过夜反应；后处理用乙酸乙酯和水萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品，柱层析纯化分离得到终产物化合物1c；两步收率67％；
[0037]
步骤(4)
[0038][0039]
将化合物1c(3mmol,1.0eq)溶于四氢呋喃：水(4ml:1ml)的混合溶液，加入氢氧化锂(6mmol,2.0eq)，室温过夜反应；tlc检测反应完全，用乙酸乙酯和稀盐酸萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品，柱层析纯化分离得到终产物化合物1d；收率95％；
[0040]
步骤(5)
[0041]
[0042]
将化合物1d(3mmol,1.0eq)溶于4mmol/l的氯化氢二氧六环溶液中，室温过夜反应；后处理减压蒸馏蒸干溶剂，得到黄色固体即为终产物9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羧酸盐酸盐；收率90％。
[0043]
实施例2
[0044]
化合物2
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(1,1-二氧化硫)甲酮的制备
[0045][0046]
步骤(1)
[0047][0048]
将化合物1d(3mmol,1.0eq)溶于dmf(3ml)中，依次加入1,1-二氧化硫代吗啉(3.6mmol,1.2eq)、dipea(6mmol,2.0eq)、hatu(4.5mmol,1.5eq)。室温反应，tlc检测反应完全。后处理用用乙酸乙酯和稀盐酸萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品，柱层析纯化分离得到终产物化合物叔丁基((2r,3s,5r)-2-(2,5-二氟苯基)-5-(2-(1,1-二氧硫代吗啉-4-羰基)-4-甲基-7,8-二氢吡啶基[4”,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-9(10h)-基)四氢-2h-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯。产率73％。
[0049]
步骤(2)
[0050][0051]
将化合物叔丁基((2r,3s,5r)-2-(2,5-二氟苯基)-5-(2-(1,1-二氧硫代吗啉-4-羰基)-4-甲基-7,8-二氢吡啶基[4”,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-9(10h)-基)四氢-2h-吡喃-3-基)氨基甲酸叔丁酯(3mmol,1.0eq)溶于4mmol/l的氯化氢二氧六环溶液中，室温过夜反应，tlc检测反应完全。后处理用乙酸乙酯和饱和碳酸钠溶液萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗产品，柱层析纯化分离得到终产物化合物(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(1,1-二氧化硫)甲酮；产率90％。
[0052]
实施例3
[0053]
化合物3
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮的制备
[0054][0055]
该化合物的合成方法参考实施例2，将实施例2中步骤(1)中的起始原料1,1-二氧化硫代吗啉换成化合物1-甲磺酰基哌嗪，最终得到化合物(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮。
[0056]
实施例4
[0057]
化合物4
----
1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-甲酰胺的制备
[0058][0059]
该化合物的合成方法参考实施例2，将实施例2中步骤(1)中的起始原料1,1-二氧化硫代吗啉换成化合物哌啶-4-甲酰胺，最终得到化合物1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-甲酰胺。
[0060]
实施例5
[0061]
化合物5
----
9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羧酸盐酸盐的制备
[0062][0063]
该化合物的合成方法参考实施例1，将实施例1中步骤(3)中的起始原料换成化合物1b，最终得到化合物9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羧酸盐酸盐。
[0064]
实施例6
[0065]
化合物6
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(1,1-二氧化硫)甲酮盐酸盐的制备
[0066]
[0067]
该化合物的合成方法参考实施例2，将实施例2中步骤(1)中的起始原料9-((3r,5s,6r)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羧酸换成化合物9-((3r,5s,6r)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羧酸，最终得到化合物(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(1,1-二氧化硫)甲酮盐酸盐。
[0068]
实施例7
[0069]
化合物7
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮三氟乙酸盐的制备
[0070][0071]
该化合物的合成方法参考实施例3。
[0072]
实施例8
[0073]
化合物8
----
1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-甲基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羰基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐的制备
[0074][0075]
该化合物的合成方法参考实施例4。
[0076]
实施例9
[0077]
化合物9
----
9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羧酸盐酸盐的制备
[0078][0079]
该化合物的合成方法参考实施例1。
[0080]
实施例10
[0081]
化合物10
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(1,1-二氧化硫)甲酮三氟乙酸盐的制备
[0082][0083]
该化合物的合成方法参考实施例2。
[0084]
实施例11
[0085]
化合物11
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮三氟乙酸盐的制备
[0086][0087]
该化合物的合成方法参考实施例3。
[0088]
实施例12
[0089]
化合物12
----
1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-甲酰
胺盐酸盐的制备
[0090][0091]
该化合物的合成方法参考实施例4。
[0092]
实施例13
[0093]
化合物13
----
9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羧酸盐酸盐的制备
[0094][0095]
该化合物的合成方法参考实施例9。
[0096]
实施例14
[0097]
化合物14
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(1,1-二氧化硫)甲酮盐酸盐的制备
[0098][0099]
该化合物的合成方法参考实施例10。
[0100]
实施例15
[0101]
化合物15
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-苯基-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(4-(甲基磺酰基)哌
4-(噻吩-2-基)-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(1,1-二氧化硫)甲酮盐酸盐的制备
[0114][0115]
该化合物的合成方法参考实施例2。
[0116]
实施例19
[0117]
化合物19
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-(噻吩-2-基)-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮盐酸盐的制备
[0118][0119]
该化合物的合成方法参考实施例3。
[0120]
实施例20
[0121]
化合物20
----
1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-4-(噻吩-2-基)-7,8,9,10四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-羰基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐的制备
[0122][0123]
该化合物的合成方法参考实施例4。
[0124]
实施例21
[0125]
化合物21
----
9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-(噻吩-2-基)-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羧酸盐酸盐的制备
[0126][0127]
该化合物的合成方法参考实施例17。
[0128]
实施例22
[0129]
化合物22
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-(噻吩-2-基)-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(1,1-二氧化硫)甲酮三氟乙酸盐的制备
[0130][0131]
该化合物的合成方法参考实施例18。
[0132]
实施例23
[0133]
化合物23
----
(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-(噻吩-2-基)-7,8,9,10-四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-基)(4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基)甲酮三氟乙酸盐的制备
[0134][0135]
该化合物的合成方法参考实施例19。
[0136]
实施例24
[0137]
化合物24
----
1-(9-((3r,5s,6r)-5-氨基-6-(2,5-二氟苯基)四氢-2h-吡喃-3-基)-2-(噻吩-2-基)-7,8,9,10四氢吡啶并[4
′
,3
′
:3,4]吡唑并[1,5-a]嘧啶-4-羰基)哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐的制备
[0138][0139]
该化合物的合成方法参考实施例20。
[0140]
本发明实施例1-24所得化合物的h-nmr、hrms的测试结果见表1。
[0141]
表1
[0142]
[0143]
[0144]
[0145]
[0146]
[0147]
[0148][0149]
生物学评价
[0150]
试验1：dpp-iv抑制剂细胞筛选实验
[0151]
试剂：
[0152][0153]
试验方法：
[0154]
取对数生长期caco-2细胞以1
×
105个/ml接种细胞于96孔培养板中，每孔200μl，24h待细胞贴壁后，吸出96孔板中caco-2细胞的培养液，对照组加入新的caco-2细胞培养液，实验组给予不同浓度的化合物处理，每孔200μl。36h后再次吸净96孔板中的各培养液，并用pbs冲洗一次，按照底物15μl、缓冲液85μl的顺序依次加入96孔板中，使每个孔中的总体积为100μl。各孔的反应温度为37℃，反应时间120min。用酶标仪在405nm处测得吸光度od值的大小。细胞筛选结果见表2。
[0155]
表2
[0156]
[0157][0158]
由表2中的试验数据可知，上述化合物对dpp-iv均具有良好的抑制作用。
[0159]
试验2：化合物6的降糖实验
[0160]
试验方法：选用icr小鼠进行实验，实验前一天检测小鼠血糖值，分组，每组7只，禁食8小时后再次检测血糖值，随后各组开始给药，西格列汀给药剂量20.8mg/kg，奥格列汀组给药剂量5.2mg/kg，化合物6给药剂量5.2mg/kg，60分钟后腹腔注射葡萄糖溶液(2g/kg)，于注射后15、30、60、90和120分钟检测血糖值。实验结果见表3。实验结果显示化合物6具有与奥格列汀相当的降糖活性。
[0161]
表3.化合物6的降糖实验结果
[0162][0163]
注：所有数据为平均值
±
sem(n＝7)。*p<0.05vs空白组。
[0164]
药用片剂的制备
[0165]
将实施例制备的化合物6(1g)、乳糖(23g)和微晶纤维素(5.7g)用混合机混合。用滚轴压紧机将所得混合物压制成型，制得薄片状压制物料。用锤式粉碎机将所得薄片状压制物料研磨成粉，使所得粉状物料通过20目筛过筛。将轻质二氧化硅(0.3g)和硬脂酸镁(0.3g)加入到已过筛的物料中，并混合。所得混合产物用制片机压片，制备片剂。
[0166]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。