一种净化海水池塘养殖水体中无机氮磷的海角副球菌LFPH1及其应用的制作方法

本发明属于微生物净化养殖水体技术领域，具体涉及一种净化海水池塘养殖水体中无机氮磷的海角副球菌lfph1及其应用。

背景技术：

2018年我国水产养殖总产量超过5000万吨，占水产品总供给量的78％以上。在水产养殖过程中如果管理不善，残余饲料、养殖代谢物和水生生物残体则会聚集于水体环境中，形成自源性的养殖尾水或污染物。

就养殖水体或其尾水中的潜在污染源而言，主要有氨氮、总无机氮、磷、有机物及污损生物等(徐升，2011；舒廷飞等，2002)。例如，氨氮、亚硝酸盐氮等有害氮素尤其在高密度集约化养殖水体中极易大量积累(周平，2013)，它们也是影响水产养殖生物的主要胁迫因子(tovar,etal.,2000)，具有严重毒害作用，致使养殖对虾抗病机能下降甚至诱发疾病或死亡(姜令绪等，2004)，是水产养殖水环境控制的关键技术环节之一(刘兴国，2011)。而且，养殖尾水若未经处理直接排放进入附近水域，还可能导致附近水域的富营养化，引发水华、赤潮等环境灾害，严重制约水产养殖业可持续发展(刘健等，2017)。

目前常见的尾水处理方法包括物理法、化学法、生物膜法、植物处理法、人工湿地综合处理法等。其中生物法利用特定微生物的生理生态效应去除水体中的潜在污染源，具有环境友好，不易产生二次污染、可持续性强等优点(王战蔚等，2013)。有研究表明，科学利用有益微生物进行养殖水体或尾水处理可取得良好的效果。仇丽等(2002)在对虾育苗水体施用枯草芽孢杆菌，用菌组水体的氨氮和亚硝酸盐氮含量分别下降52.5％和50％。冯俊荣等(2005)用芽孢杆菌和乳酸菌混合制剂净化养殖水体，芽孢杆菌组水体的氨氮和cod去除效果明显，乳酸菌组水体的亚硝酸盐氮去除效果良好。由于硝化菌、反硝化菌相对难以分离纯化，国内外大多数研究者多采用活性污泥来富集培养，较少采用纯菌扩大培养方式，并且形成可规模化应用于水产养殖行业的纯菌制剂产品更是少见报道(杨宁，2003；王娟，2006)。金志刚等(1998)利用活性污泥富集硝化菌，当温度为30℃、ph6.5～8.0、溶氧量高于2.0mg/l时，经过1-13周的富集培养，硝化菌浓度提高了12.5～20倍。秦宇胜等(2015)从北京河道水体富集光合细菌用于河道水体净化，初始总氮为5mg/l、总磷2.5mg/l，结果显示菌株的脱氮率可达70％。虽然行业中的微生物固定化技术备受关注也进行了不少的有益探索和尝试，但目前大多还停留在小规模、小范围的应用实验阶段，还未达到单种微生物定向培育的大规模产业化应用效果。刘伶俐(2012)以固定化方式富集培养硝化菌，结果淡水硝化菌对氨氮的去除速率为0.12mg/g·h，海水菌为0.13mg/g·h。

诚然某些特定的微生物可通过硝化、反硝化作用进行水体的氮素净化，或通过微生物代谢去除水体中的磷(方振东等，2011)。当前已报道的硝化菌主要有硝化杆菌属(nitrobacter)、硝化球菌属(nitrococcus)、亚硝化单胞菌属(nitrosomonas)、亚硝化球菌属(nitrosococcus)、亚硝化弧菌属(nitrosovibrio)等，正如上所述由于硝化菌和反硝化菌大多难以分离纯化，想以单一菌株作为菌种资源进行纯菌扩大培养并进行应用便存在更大难度。因此，针对能有效净化水体无机氮磷的菌种资源进行挖掘并开展相关应用基础研究，以及菌剂产品的开发和产业化应用已成为该领域的新兴热点。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种净化海水池塘养殖水体中无机氮磷的海角副球菌lfph1，该海角副球菌lfph1对养殖水体无机氮磷具有较强的净化能力，且环境适应性良好，对养殖鱼虾无不良影响。

本发明的目的还在于提供上述海角副球菌lfph1在海水池塘养殖水体中的无机氮磷净化方面的应用。

本发明的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种净化海水池塘养殖水体中无机氮磷的海角副球菌lfph1，海角副球菌lfph1(paracoccushomiensislfph1)，保藏名称为海角副球菌lfph1，保藏编号为cctccm20191006，保藏日期为2019年12月4日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉。

本发明的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：上述的海角副球菌lfph1在净化海水池塘养殖水体中的无机氮磷方面的应用。

本发明中海水养殖池塘水体及尾水环境，与工业、生活污水处理工程技术中的水体环境存在巨大差异，有必要以海水养殖水体环境为基础，从中优选获得具有无机氮磷净化功能的土著菌株。并且评估菌株对不同养殖水体环境的适应性、氮磷净化效率、应用安全性等特点，进而研发适宜水产养殖生产实际应用的菌剂产品和应用技术。如果简单地借鉴或照套污水处理工程技术领域的相关细节，而忽视了养殖生物与生产对安全、高效、可持续发展的具体实际需求，那么形成的微生物产品或相关技术则无法切实在海水养殖行业中进行有效的应用推广。目前行业内还未见关于以海角副球菌净化海水养殖水体或尾水中无机氮磷的相关研究报道。

因此，本发明通过在海水集约化养殖池塘环境中分离、筛选得到海角副球菌lfph1，并明确其对养殖水体中的无机氮磷具有明显的去除作用，且对高密度零换水养殖过程中的凡纳滨对虾没有明显不良影响。可将之用作研发水产养殖微生物菌剂产品的备选菌种资源。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

(1)本发明中的海角副球菌lfph1对对虾集约化零换水养殖水体中无机氮磷的去除效果显著，应用过程中应根据水中所需去除氮磷浓度的具体状况确定净化时间和使用频率；

(2)本发明中的海角副球菌lfph1筛选自对虾集约化零换水养殖中后期的水体，具有良好的环境适应性，且对养殖生物无不良影响，适宜大部分的养殖池塘水体应用；

(3)本发明中的海角副球菌lfph1应用于集约化养殖的水质净化调控和尾水氮磷的去除均可达到良好的应用效果，有利于大幅减少养殖生产过程中的水体更换，还可不必配置价格昂贵的水质净化设备，能为今后研发或实施养殖水环境定向调控技术，推动实现生态环保的绿色高效健康养殖产业发展提供技术支持。

附图说明

图1是实施例3中海角副球菌lfph1在灭菌养殖池塘水中的生长曲线；

图2是实施例3中海角副球菌lfph1在不同盐度下水体磷酸盐浓度的变化；

图3是实施例3中海角副球菌lfph1在不同盐度下水体氨氮浓度的变化；

图4是实施例3中海角副球菌lfph1在不同盐度下水体亚硝酸氮盐浓度的变化；

图5是实施例3中海角副球菌lfph1在不同盐度下水体tin浓度的变化；

图6是实施例3中海角副球菌lfph1在不同ph下水体磷酸盐浓度的变化；

图7是实施例3中海角副球菌lfph1在不同ph下水体氨氮浓度的变化；

图8是实施例3中海角副球菌lfph1在不同ph下水体亚硝酸盐氮浓度的变化；

图9是实施例3中海角副球菌lfph1在不同ph下水体tin浓度的变化；

图10是实施例3中海角副球菌lfph1在不同温度下水体磷酸盐浓度的变化；

图11是实施例3中海角副球菌lfph1在不同温度下水体氨氮浓度的变化；

图12是实施例3中海角副球菌lfph1在不同温度下水体亚硝酸盐氮浓度的变化；

图13是实施例3中海角副球菌lfph1在不同温度下水体tin浓度的变化。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1净化海水池塘养殖无机氮磷的海角副球菌lfph1的筛选与培养

1、材料准备

1.1、菌源

在广东汕尾红海湾高密度零换水对虾养殖池塘采集养殖50～70天的水样，用选择性培养基平板进行分离培养。

1.2、培养基

(1)选择性液体培养基：ch3coona：1g、酵母膏：1g、mgso4·7h2o：0.4g、nacl：0.1g、cacl2·2h2o：0.05g、nahco3：0.3g、kh2po4：1g、微量元素溶液1ml，以上药品分别溶于蒸馏水中，并定溶至1000ml，ph7.0。

微量元素溶液：edta：2.5g、znso4·7h2o：10.95g、mnso4·h2o：1.54g、cus04·5h2o：0.39g、cocl2·6h2o：0.2g、feso4·7h2o：7g、谷氨酸：0.02g，以上药品分别溶于蒸馏水中，并定溶至1000ml，ph7.0。

(2)选择性固体平板培养基：在选择性液体培养基的基础上加入琼脂粉20g/l，制备成固体平板培养基。

2、菌株的筛选培养

选取广东汕尾红海湾高密度零换水对虾养殖池塘的中后期养殖水体(养殖50～70天)，将采集的水样以混合纤维素酯滤膜(孔径0.22μm)过滤，再将滤膜置于选择性液体培养基中震荡培养2～6天，温度25～35℃，光照强度2000～6000lx；将培养的菌液在选择性固体平板培养基上进行划线分离单菌落，培养3～5天，挑选不同形态的单菌落，选择生长性能好的菌株。然后把菌株重新接种到选择性液体培养基，30～35℃，光照强度2000～6000lx，100～200rpm进行摇床扩大培养3～5天。把不同的菌液分别添加到调整了氨氮和活性磷酸盐浓度的灭菌养殖水中(以nh4cl调节水体中氨的浓度至10～20mg/l，以kh2po4调节水体中磷酸盐的浓度至15～20mg/l)，30～35℃，光照强度2000～6000lx，100～200rpm进行摇床扩大培养3～5天。选取可有效降低水体中磷酸盐、氨氮、亚硝酸盐氮和总无机氮(tin)浓度的菌株进行菌种鉴定和保种备用。其中，菌株海角副球菌lfph1，在初筛过程中体现了良好的生长性能，且对磷酸盐、氨氮、亚硝酸盐氮和总无机氮(tin)均具有良好的去除效果。

实施例2海角副球菌lfph1的鉴定

本发明对海角副球菌lfph1进行了16srdna分子鉴定，从分子水平，并结合细菌形态学特征及生理生化特性分析确定菌株的种属。16srdna序列分析主要按照以下步骤：

1、细菌基因组dna的提取：

(1)用无菌牙签挑单菌落接种于扩大培养基内培养；

(2)取细菌培养液1.5ml，10000rpm(11,500×g)离心1分钟，尽量吸净上清；

(3)向菌体沉淀中加入200μl缓冲液ga，振荡至菌体彻底悬浮，加入180μl终浓度为20mg/ml的溶菌酶，37℃处理30分钟以上；

(4)向管中加入20μl蛋白酶k溶液，混匀；

(5)加入220μl缓冲液gb，振荡15秒，70℃放置10分钟，溶液变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠；

(6)加220μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，简短离心以去除管盖内壁的水珠；

(7)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱cb3中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm(13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；

(8)向吸附柱cb3中加入500μl缓冲液gd，12000rpm(13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；

(9)向吸附柱cb3中加入700μl漂洗液pw，12000rpm(13,400×g)离心30秒，倒掉废液，吸附柱cb3放入收集管中；

(10)向吸附柱cb3中加入500μl漂洗液pw，12000rpm(13,400×g)离心30秒，倒掉废液，将吸附柱cb3放入收集管中；

(11)将吸附柱cb3放回收集管中，12000rpm(13,400×g)离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱cb3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液；

(12)将吸附柱cb3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50～200μl洗脱缓冲液te，室温放置2～5分钟，12000rpm(13,400g)离心2分钟，将溶液收集到离心管中；

(13)回收的dna片段用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

2、16srdna基因的pcr扩增

16srdna的扩增所采用的细菌通用引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，正向引物(8f)为：5’-agagtttgatcctggctcag-3’；反向引物(1492r)为：5’-ggttaccttgttacgactt-3’。50μlpcr反应体系包括：灭菌双蒸水37μl，引物各1μl，dntps(2.5mmol/l)4μl，tap酶1μl，10×pcrbuffer5μl，dna模板1μl(上述细菌基因组dna的提取中回收的dna)。pcr反应条件：95℃3分钟，95℃1分钟，48℃1分钟，72℃2分钟，共30个循环；72℃10分钟。

3、16srdna序列测定

扩增的pcr产物用1.0％琼脂糖凝胶电泳检测，送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。测得其序列(具体如序列表seqidno：1所示)：

tacgggaggcagcagtggggaatcttagacaatgggggcaaccctgatctagccatgccgcgtgagtgatgaaggccttagggttgtaaagctctttcagctgggaagataatgacggtaccagcagaagaagccccggctaactccgtgccagcagccgcggtaatacggagggggctagcgttgttcggaattactgggcgtaaagcgcacgtaggcggactggaaagttgggggtgaaatcccggggctcaacctcggaactgcctccaaaactatcagtctggagttcgagagaggtgagtggaataccgagtgtagaggtgaaattcgtagatattcggtggaacaccagtggcgaaggcggctcactggctcgatactgacgctgaggtgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgaatgccagtcgtcgggttgcatgcaattcggtgacacacctaacggattaagcattccgcctggggagtacggtcgcaagattaaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgcagaaccttaccaacccttgacatcccaggaccgatccagagatggatctttcacttcggtgacctggagacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttcggttaagtccggcaacgagcgcaacccacgtccctagttgccagcattcagttgggcactctatggaaactgccgatgataagtcggaggaaggtgtggatgacgtcaagtcctcatggcccttacgggttgggctacacacgtgctacaatggtggtgacagtgggttaatccccaaaagccatctcagttcggattgtcctctgcaactcgagggcatgaagttggaatcgctagtaatcgcggaacagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccatgggagttggttctacccgacggccgtgcgctaacctttggaggcagcggaccacgtagattccggcgggt。

4、海角副球菌lfph1菌落形态、生理特征

海角副球菌lfph1菌落形态、生理特征见下表1。

表1海角副球菌lfph1菌落形态、生理特征

5、海角副球菌lfph1的鉴定

将该菌16srdna基因序列与genbank中已登录的基因序列进行比对分析，结果显示该菌株为海角副球菌lfph1(paracoccushomiensis)。综合16srdna基因序列分析、生化鉴定，以及形态特质等各项结果。认定菌株lfph1为海角副球菌lfph1(paracoccushomiensis)。查阅有关资料，尚无以海角副球菌(paracoccushomiensis)净化对虾池水体或对虾集约化养殖水体或尾水无机氮磷的研究报道。该菌株已于2019年12月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccm20191006，保藏地址为中国武汉，具体为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学中国典型培养物保藏中心。

实施例3海角副球菌lfph1对海水池塘养殖水体无机氮磷的去除效果

1、菌株的生长

将实施例1获得的菌株海角副球菌lfph1按初始浓度10⁴～10⁶cfu/ml接种至灭菌集约化养殖池塘水体中，2天左右菌量即可增长至1.38×10⁹cfu/ml，其后3～10天内菌量一直稳定在6.5×10⁸cfu/ml～8.8×10⁸cfu/ml数量水平，海角副球菌lfph1的生长曲线如图1中所示。

2、菌株在不同盐度养殖水体中无机氮磷的去除效果

将灭菌的对虾集约化养殖池塘水体(水体盐度25)作为基础测试水体对照，测试过程中不添加海角副球菌lfph1；将以上水体为基础，加菌组以蒸馏水和海盐调节水体盐度为5、10、25、40，把实施例1获得的海角副球菌lfph1按10⁴～10⁶cfu/ml接种至不同盐度的测试水体中，于温度35℃，光照强度2000～6000lx，水体ph值7.0～8.5，100～200rpm进行摇床培养6天，每组测试样品设置4个平行。每2天监测水体中磷酸盐、氨氮、亚硝酸盐氮和总无机氮(tin)浓度的变化状况。盐度5～40时测试期间加菌组的lfph1的监测菌量变动范围为1.2×10⁸cfu/ml～1.5×10⁹cfu/ml。

结果显示：

如图2中所示，当水体盐度为5～40时，加菌组水体第2天的磷酸盐浓度从16.058～18.231mg/l降低至8.113～9.199mg/l，平均去除率为43.6～53.8％，对照组则一直维持在16.397～19.113mg/l的较高水平。

如图3中所示，当水体盐度为5～40时，加菌组氨氮浓度第2天从16.191～19.527mg/l降低至0.561～1.935mg/l，平均去除率为90.1～96.5％，对照组则一直维持在15.013～18.546mg/l的较高水平。

如图4中所示，当水体盐度为10～40时加菌组水体亚硝酸盐氮浓度第2天从9.173～9.870mg/l降低至3.971～5.500mg/l，平均去除率为44.3～56.7％；盐度为5时，其浓度变动范围为7.726～8.286mg/l，去除率平均为19.0％～24.4％。对照组则一直维持在9.501～10.798mg/l的较高水平。

如图5中所示，当水体盐度为5～40时加菌组tin浓度第2天从29.910～34.049mg/l降低至7.762～12.664mg/l，平均去除率为62.8～74.0％，对照组则一直维持在27.938～33.156mg/l的较高水平。

可见，海角副球菌lfph1对水体盐度具有良好适应性，可用于盐度5～40的海水养殖水体或尾水的正常生长，并对水体中的磷酸盐、氨氮、tin等具有良好的去除效果；在盐度为10～40时亚硝酸盐氮的去除效果相对较好。总体而言，一般用菌第2天水体氮磷去除效果较好，其后各项氮磷指标均有不同程度的升高，因此，在使用时应注意控制用菌效应时间，或在第3天时重复用菌，以强化或稳定氮磷去除效果。

3、菌株在不同ph养殖水体中无机氮磷的去除效果

将灭菌对虾集约化养殖池塘水体(水体盐度25，ph值为8.0)作为基础测试水体对照，置于35℃下恒温培养，其中不添加海角副球菌lfph1。加菌组则将实施例1获得的海角副球菌lfph1按10⁴～10⁶cfu/ml接种至不同ph值的测试水体中，ph值为分别设置为4、6、8、10，光照强度2000～6000lx，100～200rpm进行摇床恒温35℃培养6天，每组测试样品设置4个平行。每2天监测水体中磷酸盐、氨氮、亚硝酸盐氮和总无机氮(tin)浓度的变化状况。当ph6～10时，加菌组测试期间lfph1的监测菌量变动范围为1.1×10⁸cfu/ml～6.0×10⁸cfu/ml，ph4时菌量为4.1×10⁶cfu/ml～9.7×10⁶cfu/ml。

结果显示：

如图6中所示，当ph8～10时，加菌组水体第2天的磷酸盐浓度从15.933～16.191mg/l降低至11.229～11.422mg/l，平均去除率为28.3～30.6％，对照组则一直维持在15.160～17.738mg/l的较高水平。

如图7中所示，当ph8～10时，加菌组氨氮浓度第2天从18.864～21.578mg/l降低至1.578～1.838mg/l，平均去除率为90.3～92.7％，对照组则一直维持在16.557～19.099mg/l的较高水平。

如图8中所示，ph8时加菌组亚硝酸盐氮浓度第2天从9.909mg/l降低至4.749mg/l，平均去除率为52.1％，其余ph条件下的去除率均小于21.0％；对照组则一直维持在9.396～10.512mg/l的较高水平。

如图9中所示，当ph8～10时，加菌组tin浓度第2天从32.187～34.912mg/l降低至8.748～14.487mg/l，平均去除率为55.0～74.9％，对照组则一直维持在30.575～33.420mg/l的较高水平。

可见，海角副球菌lfph1对水体ph值条件具有一定的选择性，当ph6～10时菌株均可正常生长，在ph8～10时该菌株对水体中的磷酸盐、氨氮、tin均具有良好的去除效果，只有在ph8的中性至弱碱性水体中菌株对亚硝酸盐氮的去除才能取得良好的效果。总体而言，一般用菌第2天水体氮磷去除效果较好，其后各项氮磷指标均有不同程度的升高。因此，在使用时应根据所需净化水质指标的具体要求，选择适宜的ph条件进行应用，同时，还应注意控制用菌效应时间，或在第3天时重复用菌，以强化或稳定氮磷去除效果。

4、菌株在不同温度养殖水体中无机氮磷的去除效果

将灭菌对虾集约化养殖池塘水体(水体盐度25)作为基础测试水体对照，置于30℃下恒温培养，其中不添加海角副球菌lfph1。加菌组则将实施例1获得的海角副球菌lfph1按10⁴～10⁶cfu/ml接种至不同温度的测试水体中，培养温度分别设置为10℃、20℃、30℃、40℃，光照强度2000～6000lx，水体ph值7.0～8.5，100～200rpm进行摇床培养6天，每组测试样品设置4个平行。每2天监测水体中磷酸盐、氨氮、亚硝酸盐氮和总无机氮(tin)浓度的变化状况。当温度20～30℃时加菌组测试期间lfph1的监测菌量变动范围为3.8×10⁸cfu/ml～1.1×10⁹cfu/ml，温度10℃和40℃时菌量略低，监测菌量变动范围为1.5×10⁷cfu/ml～9.5×10⁷cfu/ml。

结果显示：

如图10中所示，当水温为20～30℃时，加菌组水体第2天的磷酸盐浓度从15.782～16.246mg/l降低至8.561～8.892mg/l，平均去除率为45.3～45.8％，水温10℃或40℃时，其去除率仅为-4.9～11.1％。对照组则一直维持在14.656～18.234mg/l的较高水平。

如图11中所示，当水温为20～30℃时，加菌组氨氮浓度第2天从19.796～19.859mg/l降低至1.666～2.416mg/l，平均去除率为87.8～91.6％，水温10℃或40℃时，其去除率仅为-40.6～-3.5％。对照组则一直维持在15.745～20.317mg/l的较高水平。

如图12中所示，当水温为20～30℃时，加菌组亚硝酸盐氮浓度第2天从10.443～10.894mg/l降低至0.251～0.534mg/l，平均去除率为95.1～97.6％，水温10℃或40℃时，其去除率仅为-9.7～9.9％。对照组则一直维持在10.566～11.413mg/l的较高水平。

如图13中所示，当水温为20～30℃时，加菌组tin浓度第2天从32.371～34.506mg/l降低至3.903～7.341mg/l，平均去除率为78.7～87.9％，水温10℃或40℃时，其去除率仅为-32.5～-3.9％。对照组则一直维持在30.187～37.539mg/l的较高水平。

可见，海角副球菌lfph1在温度10～40℃时均可正常生长，但相比较而言温度20～30℃时的菌株生长和对水中氮磷的去除效果最优。当在温度为10℃或40℃的过低或过高条件下，虽然菌株还能进行一定程度的生长，但其对氮磷的净化效果已受到明显的影响。由于20～30℃亦多为水产养殖生物的适宜生长温度条件，所以总体而言，海角副球菌lfph1可适用于养殖生产期间的水质调控技术环节，降低海水养殖水体或尾水的无机氮磷浓度。考虑到该菌株一般用菌第2天时水体氮磷去除效果较好，其后各项氮磷指标均有不同程度的升高。因此，在使用时应根据所需净化水质指标的具体要求，选择适宜的温度条件进行应用，同时，还应注意控制用菌效应时间，或在第3天时重复用菌，以强化或稳定氮磷去除效果。

5、菌株lfph1在凡纳滨对虾高密度零换水养殖生产的应用效果

将菌株lfph1在实验室进行扩大培养制备为菌剂后送予广东省陆丰市洋美村的凡纳滨对虾养殖者进行应用。其养殖生产采用高密度零换水的集约化养殖模式，用菌浓度为10⁴～10⁶cfu/ml。一般在放苗15d内适量添加红糖和该菌制剂至水体中，反复使用3～4次。其后养殖期间每10～15d定期添加该菌制剂，并配合其他水环境调控剂，例如，利用生石灰水等使水体总碱度稳定在150～260caco3mg/l范围内，ph值稳定在7.0～8.2。养殖全程利用射流器保持水体流动和强化增氧。

结果显示：该菌制剂的养殖应用效果良好，养殖凡纳滨对虾60天成活率平均为80.8％以上，表明其对养殖生物无明显不良影响。经多次现场监测表明，养殖水体水温28～31℃、盐度25～30、do大于4.5mg/l、ph7.0～7.35，以便携式水质监测试剂盒测定水体的氨氮浓度为0.155mg/l、亚硝酸盐氮0.149mg/l，以上水质条件尤其是氨氮浓度和亚硝酸盐的浓度条件可满足养殖对虾健康生长所需。

本发明不局限于上述特定的实施方案范围内，上述实施方案仅仅是为了能够对本发明的使用过程进行详细地说明，而且有相等功能的生产方法和技术细节也属于本发明内容的一部分。事实上，本领域技术人员根据前文的描述，就能够根据各自需要找到不同的调整方案，这些调整都应在本文所附的权利要求书的范围内。

序列表

<110>中国水产科学研究院南海水产研究所深圳试验基地

中国水产科学研究院南海水产研究所

<120>一种净化海水池塘养殖水体中无机氮磷的海角副球菌lfph1及其应用

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>1093

<212>dna

<213>海角副球菌(paracoccushomiensis)

<400>1

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