吲哚类生物碱、制备方法及作为降血糖药物的应用与流程

本发明涉及一种生物碱类化合物、制备方法及应用，尤其是一种吲哚类生物碱、制备方法及作为降血糖药物的应用。

背景技术：

中药吴茱萸为芸香科(rutaceae)吴茱萸属(tetradium)植物吴茱萸euodiarutaecarpa(juss.)benth.、石虎euodiarutaecarpa(juss.)benth.var.officinalis(dode)huang或疏毛吴茱萸euodiarutaecarpa(juss.)benth.var.bodinieri(dode)huang的干燥近成熟果实。根据《神农本草经》记载，吴茱萸具有味苦、辛温、有小毒等特性，归肝、脾、胃、肾经，具有助阳止泻、温中止痛、降逆止呕、散寒止痛等功，临床上常用于寒凝疼痛、胃寒呕吐、虚寒泄泻等症状的治疗。迄今为止没有以吴茱萸为原料，提取降血糖活性成份的相关报道。

技术实现要素：

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种吲哚类生物碱、制备方法及作为降血糖药物的应用。

本发明的技术解决方案是：一种吲哚类生物碱，其特征在于结构式如下：

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所述吲哚类生物碱的制备方法，其特征在于按照如下步骤进行：

a.将吴茱萸近成熟果实粉碎，用质量浓度70%的乙醇加热回流提取三次，合并提取液，减压浓缩并回收乙醇，得吴茱萸浸膏；将吴茱萸浸膏用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次等体积萃取，分别减压浓缩得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物；

b.将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按50:1，30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，1:2梯度洗脱；

c.合并石油醚-乙酸乙酯20:1至5:1洗脱流份；

d.将所得洗脱流分经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯按50:1，30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，1:2梯度洗脱，每个梯度收集3个洗脱流份，每个洗脱流份为1l，将依次得到的24个洗脱流分分别记为n1~n24；

e.将洗脱流份n6经反相ods中压柱色谱分离，以甲醇-水梯度洗脱，流速15ml/min，洗脱6h，得到13个洗脱流份，每个洗脱流份为420ml，将依次得到的13个洗脱流份分别记为n6-1~n6-13；

f.将洗脱流份n6-10经反相半制备c18色谱柱hplc分离，甲醇：水=4：1，流速3.0ml/min，得到6个流份分别记为n6-10-1~n6-10-6；

g.将洗脱流份n6-10-3经反相半制备c18色谱柱hplc分离，甲醇：水=4：1，流速3.0ml/min，得单体化合物，即吲哚类生物碱。

所述的吲哚类生物碱作为降血糖药物的应用。

所述的吲哚类生物碱是作为抑制α-葡萄糖苷酶活性药物的应用。

本发明的吲哚类生物碱是从中药吴茱萸中提取，具有对α-葡萄糖苷酶活性抑制活性，可应用于制备降血糖药物。

附图说明

图1是本发明实施例化合物1的hresims谱图。

图2是本发明实施例化合物1的关键¹h-¹hcosy和hmbc相关图。

图3是本发明实施例化合物1的¹hnmr谱图。

图4是本发明实施例化合物1的¹³cnmr谱图。

图5是本发明实施例化合物1的¹h-¹hcosy谱图。

图6是本发明实施例化合物1的hsqc谱图。

图7是本发明实施例化合物1的hmbc谱图。

具体实施方式

本发明的制备方法依次按照如下步骤进行：

a.将吴茱萸近成熟果实粉碎，用质量浓度70%的乙醇加热回流提取三次，合并提取液，减压浓缩并回收乙醇，得吴茱萸浸膏；将吴茱萸浸膏用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次等体积萃取，分别减压浓缩得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物；

b.将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按50:1，30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，1:2梯度洗脱，每个梯度收集32l；

c.合并石油醚-乙酸乙酯20:1至5:1洗脱流份；

d.将所得洗脱流分经硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯按50:1，30:1，20:1，10:1，5:1，2:1，1:1，1:2梯度洗脱，每个梯度收集3个洗脱流份，每个洗脱流份为1l，将依次得到的24个洗脱流分分别记为n1~n24；

e.将洗脱流份n6经反相ods中压柱色谱分离，以甲醇-水梯度（10:90~90:10）洗脱，流速15ml/min，洗脱6h，得到13个洗脱流份，每个洗脱流份为420ml，将依次得到的13个洗脱流份分别记为n6-1~n6-13；

f.将洗脱流份n6-10经反相半制备c18色谱柱hplc分离，甲醇：水=4：1，流速3.0ml/min，得到6个流份分别记为n6-10-1~n6-10-6；

g.将洗脱流份n6-10-3经反相半制备c18色谱柱hplc分离，甲醇：水=4：1，流速3.0ml/min，得单体化合物1。

一.化合物1的结构测定：

化合物1为白色粉末。

化合物1的hresims谱图、h-¹hcosy和hmbc相关谱图、¹hnmr谱图、¹³cnmr谱图、¹h-¹hcosy谱图、hsqc谱图及hmbc谱图分别如图1~图7所示。

化合物1的核磁共振氢谱和碳谱数据如表1所示。

表1

注：¹³c-nmr（600mhz，dmso-d6），¹h-nmr（150mhz，dmso-d6）

根据(+)-hr-esimsm/z372.1327[m+na]⁺(calcdforc20h19n3nao3,372.1319)结合核磁共振数据确定其分子式为c20h19n3o3（图1）。化合物1的¹hnmr谱显示存在一个邻位二取代的苯环[δh7.47(d,j=8.4hz,h-16)，7.79(td,j=8.4,1.2hz,h-17)，7.32(td,j=7.8,1.2hz,h-18)和8.09(dd,j=7.8,1.2hz,h-19)]，一个abx取代苯环[δh7.21(d,j=2.4hz,h-9)，6.73(dd,j=8.4,2.4hz,h-11)和7.23(d,j=8.4hz,h-12)]，一个烯氢信号[δh7.17(d,j=1.8hz,h-2)]，两个脂肪族亚甲基信号[δh4.21(m,h-5)和2.95(m,h-6)]，一个氮甲基信号[δh3.55(s,nch3-14)]，一个甲氧基信号[δh3.76(s,och3-10)]以及一个可交换的质子[δh10.68(s,nh-1)]共振信号（表1）。¹³cnmr谱显示与以上基团相对应的碳信号外，还有四个sp²杂化的碳信号[δc123.5(c-2),150.3(c-3),110.7(c-7)和161.1(c-21)]（表1）。根据以上数据推测该化合物具有一个吲哚环和一个喹唑酮环，利用2dnmr实验和图谱解析对其结构进行了进一步确定。通过hsqc谱解析，对nmr谱中氢原子及其相连的碳原子信号进行了准确归属。在¹h-¹hcosy谱中，同核质子偶合相关信号h-11/h-12，结合hmbc谱中，nh-1与c-7,c-8和c-12，h-9与c-7,c-11和c-13，h-2与c-8和c-13，h-12与c-8和c-10，och3-10与c-10的两键或三键异核远程相关信号以及它们的化学位移，表明化合物1的结构中存在c-10被甲氧基取代的吲哚单元（图2）。在¹h-¹hcosy谱中，同核质子偶合相关信号h-16/h-17/h-18/h-19，结合hmbc谱中，h-19与c-21和c-15，h-16与c-21和c-18，h-17与c-19，nch3-14与c-3和c-15的两键或三键异核远程相关信号以及它们的化学位移，表明化合物1的结构中存在n-14被甲基取代的喹唑酮单元（图2）。在¹h-¹hcosy谱中，同核质子偶合相关信号h-5/h-6，结合hmbc谱中，h-5与c-3，c-7和c-21，h-6与c-2和c-8的两键或三键异核远程相关信号以及它们的化学位移，表明化合物1结构中喹唑酮单元与吲哚单元分别连在c-5和c-6上（图2）。因此，综合以上波谱数据，确定了化合物1的结构式如下，为吲哚类生物碱。

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二.本发明化合物1对α-葡萄糖苷酶活性抑制活性评价

采用96孔板筛选体系，先加80μl磷酸钾缓冲液（ph6.8），再加入α-glucosidase（0.1u/ml）10μl，加入不同浓度（10、20、30、50、100μm）药物（化合物1）溶液10μl，并设置空白对照，37℃恒温10min，然后加入pnpg（2.5mmol/l）20μl，37℃恒温反应15min，最后加入40μl的na2co3溶液（1mol/l）终止反应，于405mm波长下测定吸光度值（a值），并用graphpadprism6计算得到ic50值，ic50=23.92±0.81μm。

结果表明本发明的生物碱化合物1显示了对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制作用。