一种新的吲哚生物碱类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001]本发明属于药物技术领域，具体涉及从延胡索的干燥块茎中分离得到的一种具有 治疗乳腺癌作用的吲哚生物碱类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 延胡索为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块茎，是一味古 老的止痛良药，又称玄胡、元胡，为著名的浙八味之一，主产浙江省东阳、磐安一带。延胡索 具有显著的镇痛、镇静和催眠作用，对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病有较好的临床 效果。正因为延胡索效果显著，临床应用广泛，在《中国药典》2010年版中，接近30%的复方 制剂中使用了延胡索。
[0003] 延胡索主要成分为生物碱，主要为叔胺、季胺类生物碱。叔胺类生物碱在原药材中 的量约为0.65%，季铵类生物碱(如延胡索甲素、乙素)约为0.3%。到目前为止，从延胡索中 分离得到的生物碱类成分约有30种。从延胡索的块茎中共提出生物碱10余种，其中经鉴定 的有紫堇碱（Corydaline)、dl_四氢掌叶防己碱（dl-Tetrahydropalmatine)、原阿片碱 (Protopine )、L-四氢黄连碱、dl-四氢黄连碱、L-四氢非洲防己碱、紫堇鳞茎碱 (Corybulbine)、β-高白屈菜碱(β-Homoche-lidonine)、黄连碱(Coptisine)、去氢紫堇碱 (De-hydrocorydaline)，还有紫堇达明碱(Corydalmine即紫堇鳞莖碱）、去氢紫堇达明碱 等。除生物碱外，延胡索中尚含有大量淀粉，少量黏液质、树脂、挥发油，另含无机微量元素。 还含有多糖、羟链霉素(reticulin)、豆留醇、谷留醇、油酸、亚油酸、亚麻酸、延胡索酸、10-二十九碳醇等。
[0004] 延胡索中的生物碱具有很强的镇痛、镇静、降压和抗心律失常作用。目前，很多新 的研究表明，延胡索还具有其他广泛的生理活性，如抗心肌缺血、抗实验性胃溃疡、抗肿瘤、 抗氧化、保肝等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从延胡索的干燥块茎中分离得到的一种具有治疗乳腺 癌作用的吲哚生物碱类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将延胡索的干燥块茎粉碎， 用80~90 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱 和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中 乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用80%乙醇洗脱8个柱 体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中80%乙醇洗脱 浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、35:1、15:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1 和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的 反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱 液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0020] 图3为不同剂量化合物(I)对乳腺癌细胞增殖活力的影响；
[0021] 图4为不同剂量化合物(I)对乳腺癌细胞凋亡的影响。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0025]制备方法：（a)将延胡索的干燥块茎（8kg)粉碎，用85 %乙醇热回流提取（25L X 3 次），合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(359g)和正丁醇萃取 物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积， 再用80 %乙醇洗脱8个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩得80 %乙醇洗脱物浸膏 (138g);(c)步骤(b)中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体 积）、50:1 (8个柱体积）、35:1 (6个柱体积）、15 :1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(32g)用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为25:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(17g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯 的化合物（I)(29mg)。
[0026] 结构确证：白色粉末;册43頂3显示[]\?^]+为111/2 387.1306，结合核磁特征可得 分子式为C2iH22N2〇2，不饱和度为12。核磁共振氢谱数据δ Η(ppm，DMS〇-d6，600MHz): H-3 (3.29， m)，H-3(3.41，m)，H-5(5.75，m)，Η-6(5· 10，m)，H-9(7.59，d，J = 7.7)，H-10(6.83，t，J = 7.7)，H-ll(7.06，t，J = 7.7)，H-12(6.74，d，J = 7.7)，H-14(5.79，m)，H-15(5.74，d，J = 9.9)，H-17(1.94，d，J = 15.4)，H-17(2.49，d，J=15.4)，H-18(0.68，t，J = 7.4)，H-19(0.92， m)，H-19( 1.01，m)，H-21 (4.28，d，J= 1.5)，16-C02Me(3·71，s)，NH( 10.68，br，s);核磁共振 碳谱数据Sc(ppm，DMS0-d6，150MHz): 166.1(C，2-C)，50.8(CH2,3-C)，145.2(CH，5-C)，108·9 (CH，6-C)，55.6(C，7-C)，134.5(C，8-C)，124.1(CH，9-C)，120.8(CH，10-C)，127.6(CH，11-C)，108.9(CH，12-C)，142.2(C，13-C)，119.1(CH，14-C)，141.8(CH，15-C)，93.4(C，16-C)， 25.0(CH2，17-C)，8.5(CH 3，18-C)，25.8(CH2，19-C)，40.1(C，20-C)，66.1(CH，2hC)，167.9 (C，16-C0 2Me)，50.7 (CH3，16-C02Me);碳原子标记参见图1。IR光谱表明该化合物含有胺基 (3446cm-〇和酯羰基（1726cm-Ο,ΗΜ?谱显示四个芳族共振信号（δΗ6·74,6· 83，7· 06， 7.59)，一个吲哚順〇!11〇.68)，一个酯甲基0!13.71)，四个烯属次甲基信号[6!15.10(111，!1- 6)，5.74((1，了 = 9.9!^，!1-15)，5.75(111，!1-5)，5.79(111，!1-14)]，以及一个乙基侧链[3!10.68(七， 了 = 7.4抱，!1-18)，0.92(111，!1-18)，1.01(111，!1-19)]。130 NMR谱显示了21 个碳信号，包括两个甲 基(一个甲氧基），三个亚甲基，九个次甲基(八个烯属次甲基），以及七个季碳。四个烯属次 甲基质子信号[SH5.75(m，H-5)，5.10(m，H-6)，5.79(m，H-14)，5.74(d，J = 9.9Hz，H-15)]，& 碳信号[δC145·2(C-5)，108·9(C-6)，119·l(C-14)，141·8(C-15)]表明C-5和C-6，C-14和C-l5之间存在双键。HMBC谱中，H-5(δH5·75)与C-2(δC166·l)，C-3(δC50·8)，C-6(δC108·9)，C-7(SC55.6)和C-21 (SC66.1)的相关性验证了上述推论。HMBC谱中，H2-l7(δΗΙ. 94和2.49)与 C-20C166.1)，C-160C93.4)和甲基酯的碳(δ(：167.9)的相关性表明甲基酯基位于C-16位。 R0ESY谱中，Η-21与Me-18,以及Η-21与H-19a的相关性表明了Η-21和C-20位的乙基为α构型。 综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物 如图1所示，立体构型进一步通过Ε⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0027]实施例2:化合物(I)药理作用试验 [0028] 一、材料和仪器
[0029] DMEM/F12高糖培养液购于北京Hyclone公司。改良型RPMI-1640培养基购于北京 Hyclone公司。标准胎牛血清购于天津TBD公司。CCK-8细胞活力检测试剂购于日本株式会社 同仁化学研究所。AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒购于上海炎彬化工科技有限公司。Κ-? 线粒体膜电位探针购于江苏碧云天生物技术研究所。二甲基亚矾 (DMSO) 和磷酸盐缓冲溶 液(PBS)购于Sigma公司产品。化合物（I)自制，制备方法见实施例1，HPLC归一化纯度大于 98% 〇
[0030] -70°C低温冰箱(FormaScientif iclnc ·公司，美国），电子天平（岛津AEL-200型，日 本），超净工作台（SW-CJ-1C型，苏州），恒温振荡器(THZ-C型），高压蒸汽消毒锅(YX-400B 型），C〇2细胞培养箱(Forma Series Π，Thermalelectroncorp ·，美国），恒温水浴锅(BHW2-I 型，国产），倒置相差显微镜(CK40型，Olympus，日本），显微镜(BX51型，Olympus，日本），显微 数码采集系统(DP71型，Oly