一种固液样本核酸保存液制备方法与流程

本发明属于固液样本核酸制备技术领域，具体涉及一种固液样本核酸保存液制备方法。

背景技术：

核酸是以核苷酸为基本单位的生物信息大分子，是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，是生命的最基本物质之一，核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简称rna)和脱氧核糖核酸(简称dna)，是由核糖、磷酸、堿基组成。

从新鲜组织细胞中提取核酸时，由于各种原因若不能马上处理样品，即使-70℃保存样品中的核酸也不稳定容易降解，而液气保存既昂贵又不方便。

为了免去使用液氮或超低温冰箱的不便，有效地解决样品保存及运输的问题，为此我们提出一种固液样本核酸保存液制备方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种固液样本核酸保存液制备方法，免去使用液氮或超低温冰箱的不便，有效地解决样品保存及运输的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种固液样本核酸保存液制备方法，所述制备方法如下：

步骤一：材料准备：枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、纯水、抑菌剂、酸度调节剂；

步骤二：将枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、抑菌剂置于带有搅拌器的容器中，并向容器中加入纯水，得到混合液；

步骤三：向上述混合液中加入酸度调节剂，搅拌混合均匀，调节ph值，加入纯水定容，获得核酸保存液。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述核酸酶抑制剂为invitrogensuperase·rnase抑制剂、rnaseout重组rnase抑制剂、rnasecurernase灭活试剂和rnase抑制剂中的一种或几种。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述抑菌剂为山梨酸钾。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述酸度调节剂为乳酸、柠檬酸、磷酸、聚丙烯酸中的一种。

作为本发明的一种优选的技术方案，所述步骤三中，拌混合均匀，调节ph值为3.5-4.5。

作为本发明的一种优选的技术方案，制备的保存液室温保存，发生沉淀，在37℃下加热溶解。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)标本在4℃或室温长时间保存，其中的核酸不会降解，免去使用液氮或超低温冰箱的不便，有效地解决了样品保存及运输的问题；

(2)简化了制备工艺，延长了保质期。

附图说明

图1为本发明的制备流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种固液样本核酸保存液制备方法，包括如下步骤：

步骤一：材料准备：枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、纯水、抑菌剂、酸度调节剂；核酸酶抑制剂为invitrogensuperase·rnase抑制剂；抑菌剂为山梨酸钾；

步骤二：将枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、抑菌剂置于带有搅拌器的容器中，并向容器中加入纯水，得到混合液；酸度调节剂为乳酸；

步骤三：向上述混合液中加入酸度调节剂，搅拌混合均匀，调节ph值为3.5，加入纯水定容，获得核酸保存液；有助于提高形成的核酸保存液中的各组分混合的均匀性；有助于延长核酸的保存时间；

本实施例中，优选的，制备的保存液室温保存，发生沉淀，在37℃下加热溶解。

样品取出与使用：

保存在-20℃或-80℃的样品取出后，在室温下融化；

从保护液中取出后用滤纸吸去残液细胞：高速度离心，收集细胞沉淀；

全血样品：加入一倍体积预冷pbs缓冲液，离心收集细胞并用缓冲液洗一次；

病毒样品：直接加入裂解液；

rna保护液不影响后续核酸提取，组织细胞取出后可用rnatrip(cat#1010)裂解，并可以配合各种常见核酸提取试剂盒和用户自备试剂使用，例如trlzol.rnazol.rnatrip提取试剂盒、酚抽法以及利用oligo(dt)原理的mrna抽提试剂盒。

实施例2

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种固液样本核酸保存液制备方法，包括如下步骤：

步骤一：材料准备：枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、纯水、抑菌剂、酸度调节剂；核酸酶抑制剂为rnaseout重组rnase抑制剂；

步骤二：将枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、抑菌剂置于带有搅拌器的容器中，并向容器中加入纯水，得到混合液；酸度调节剂为柠檬酸；

步骤三：向上述混合液中加入酸度调节剂，搅拌混合均匀，调节ph值为4.0，加入纯水定容，获得核酸保存液；有助于提高形成的核酸保存液中的各组分混合的均匀性；有助于延长核酸的保存时间；

本实施例中，优选的，制备的保存液室温保存，发生沉淀，在37℃下加热溶解。

样品取出与使用：

保存在-20℃或-80℃的样品取出后，在室温下融化；

从保护液中取出后用滤纸吸去残液细胞：高速度离心，收集细胞沉淀；

全血样品：加入一倍体积预冷pbs缓冲液，离心收集细胞并用缓冲液洗一次；

病毒样品：直接加入裂解液；

rna保护液不影响后续核酸提取，组织细胞取出后可用rnatrip(cat#1010)裂解，并可以配合各种常见核酸提取试剂盒和用户自备试剂使用，例如trlzol.rnazol.rnatrip提取试剂盒、酚抽法以及利用oligo(dt)原理的mrna抽提试剂盒。

实施例3

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种固液样本核酸保存液制备方法，包括如下步骤：

步骤一：材料准备：枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、纯水、抑菌剂、酸度调节剂；核酸酶抑制剂为rnasecurernase灭活试剂；抑菌剂为山梨酸钾；

步骤二：将枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、抑菌剂置于带有搅拌器的容器中，并向容器中加入纯水，得到混合液；酸度调节剂为磷酸；

步骤三：向上述混合液中加入酸度调节剂，搅拌混合均匀，调节ph值为4.5，加入纯水定容，获得核酸保存液；有助于提高形成的核酸保存液中的各组分混合的均匀性；有助于延长核酸的保存时间；

本实施例中，优选的，制备的保存液室温保存，发生沉淀，在37℃下加热溶解。

样品取出与使用：

保存在-20℃或-80℃的样品取出后，在室温下融化；

从保护液中取出后用滤纸吸去残液细胞：高速度离心，收集细胞沉淀；

全血样品：加入一倍体积预冷pbs缓冲液，离心收集细胞并用缓冲液洗一次；

病毒样品：直接加入裂解液；

rna保护液不影响后续核酸提取，组织细胞取出后可用rnatrip(cat#1010)裂解，并可以配合各种常见核酸提取试剂盒和用户自备试剂使用，例如trlzol.rnazol.rnatrip提取试剂盒、酚抽法以及利用oligo(dt)原理的mrna抽提试剂盒。

实施例4

请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种固液样本核酸保存液制备方法，包括如下步骤：

步骤一：材料准备：枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、纯水、抑菌剂、酸度调节剂；核酸酶抑制剂为rnase抑制剂中；抑菌剂为山梨酸钾；

步骤二：将枸橼酸钠、核酸酶抑制剂、乙底酸二钠、抑菌剂置于带有搅拌器的容器中，并向容器中加入纯水，得到混合液；酸度调节剂为聚丙烯酸；

步骤三：向上述混合液中加入酸度调节剂，搅拌混合均匀，调节ph值为4.5，加入纯水定容，获得核酸保存液；有助于提高形成的核酸保存液中的各组分混合的均匀性；有助于延长核酸的保存时间；

本实施例中，优选的，制备的保存液室温保存，发生沉淀，在37℃下加热溶解。

样品取出与使用：

保存在-20℃或-80℃的样品取出后，在室温下融化；

从保护液中取出后用滤纸吸去残液细胞：高速度离心，收集细胞沉淀；

全血样品：加入一倍体积预冷pbs缓冲液，离心收集细胞并用缓冲液洗一次；

病毒样品：直接加入裂解液；

rna保护液不影响后续核酸提取，组织细胞取出后可用rnatrip(cat#1010)裂解，并可以配合各种常见核酸提取试剂盒和用户自备试剂使用，例如trlzol.rnazol.rnatrip提取试剂盒、酚抽法以及利用oligo(dt)原理的mrna抽提试剂盒。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。