LAMP等温扩增试剂的冻干微球及其制备方法以及应用与流程

文档序号:24240876发布日期:2021-03-12 13:15阅读:来源:国知局

技术特征:

1.lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,包括lamp引物组、冻干保护剂以及反应液;

所述lamp引物组包括外引物f3、外引物b3、内引物fip、内引物bip、环引物lf、环引物lb;

所述冻干保护剂包括牛血清蛋白、苏氨酸和peg20000;

lamp引物组、冻干保护剂、反应液的添加的体积份数分别为:7~14份、9~17份、9.2~17.75份。

2.根据权利要求1所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述反应液包括bstdna聚合酶、指示剂、dntps、缓冲剂、mgso4、甜菜碱、逆转录酶,bstdna聚合酶、指示剂、dntps、缓冲剂、mgso4、甜菜碱、逆转录酶的添加的体积份数分别为:0.8~1.5份、0.5~2份、2.5~3.75份、2~4份、1.0~1.5份、2~4份、0.1~0.5份。

3.根据权利要求2所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述反应液还包括dutp和ung酶,dutp和ung酶添加的体积份数分别为:1~2份、0.1~0.5份。

4.根据权利要求2所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述指示剂为sybrgreeni;所述缓冲剂为pcrbuffer。

5.根据权利要求1所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述牛血清蛋白的原始浓度为16.7%(w/v)、苏氨酸的原始浓度为8%(w/v)、peg20000的原始浓度为25%(w/v)。

6.根据权利要求1或4所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述冻干保护剂中牛血清蛋白、苏氨酸和peg20000添加的体积份数分别为:3~5份、3~5份、3~7份。

7.根据权利要求1-3任一项所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球,其特征在于,所述lamp引物组中f3、b3、lf、lb、fip、bip的添加的体积份数分别为0.5~1.0份、0.5~1.0份、1~2份、1~2份、2~4份、2~4份。

8.如权利要求1所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)制备冻干保护剂:取配方量的牛血清蛋白、苏氨酸、peg20000;

2)配制扩增反应体系:取配方量的lamp引物组和反应液,混合得到扩增反应体系;

3)冻干成微球:将冻干保护剂与扩增反应体系混合均匀,逐滴的滴入液氮中速冻成球,之后冷冻干燥,即得。

9.根据权利要求8所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球的制备方法,其特征在于,所述冷冻干燥的程序为:-50~-60℃下进行第一次干燥8~16h,之后在20~30℃下进行二次升华干燥3~4h,即得。

10.如权利要求1所述的lamp等温扩增试剂的冻干微球在lamp等温扩增中的应用。


技术总结
本发明涉及一种LAMP等温扩增试剂的冻干微球及其制备方法以及应用,该LAMP等温扩增试剂的冻干微球,包括LAMP引物组、冻干保护剂以及反应液;所述LAMP引物组包括外引物F3、外引物B3、内引物FIP、内引物BIP、环引物LF、环引物LB;所述冻干保护剂包括牛血清蛋白、苏氨酸和PEG20000;LAMP引物组、冻干保护剂、反应液的添加的体积份数分别为:7~14份、9~17份、9.2~17.75份。LAMP等温扩增试剂的冻干微球可增加检测试剂的稳定性,可常温运输,节约能源和运输成本,且便于分装。

技术研发人员:王云龙;王群智;邵俊影;王欣;林圣博;李强;王丽;王雯丽;王昱堃
受保护的技术使用者:河南智泰生物科技有限公司
技术研发日:2020.11.30
技术公布日:2021.03.12
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