用于治疗由失调的血浆激肽释放酶介导的疾病的抗体的腺相关病毒载体递送的制作方法

文档序号:35640587发布日期:2023-10-06 07:05阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种包含经密码子优化的核苷酸序列的重组腺相关病毒(raav)载体,所述raav载体编码包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的全长抗体,并且其中所述经密码子优化的核苷酸序列与seq id no:23-36中的任一者具有至少约75%、80%、85%、90%、95%或大于95%的同一性。

2.如权利要求1所述的raav载体,其中所述经密码子优化的核苷酸序列选自seq idno:23-36中的任一者。

3.如权利要求1所述的raav载体,其中所述经密码子优化的核苷酸序列具有少于约50个cpg位点、少于约40个cpg位点、少于约35个cpg位点、少于约30个cpg位点、少于约25个cpg位点、少于约20个cpg位点、少于约15个cpg位点或少于约10个cpg位点的cpg含量。

4.如权利要求2所述的raav载体,其中所述经密码子优化的核苷酸序列具有约5个cpg位点。

5.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述经密码子优化的核苷酸序列包含接头。

6.如权利要求5所述的raav载体,其中所述接头包括可切割接头。

7.如权利要求5所述的raav,其中所述接头包括不可切割接头。

8.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由单一的启动子控制。

9.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由分开的启动子控制。如权利要求5或6所述的raav载体,其中所述单一的启动子或所述分开的启动子选自遍在启动子、组织特异性启动子或可调节型启动子。

10.如权利要求9所述的raav载体,其中所述组织特异性启动子是肝脏特异性启动子。

11.如权利要求10所述的raav载体,其中所述肝脏特异性启动子包括选自以下的启动子:人转甲状腺素蛋白启动子(ttr)、经修饰的httr(httr mod.)、α-抗胰蛋白酶启动子、肝脏启动子1(lp1)、trm启动子、人凝血因子ix pro/肝转录因子反应性低聚物、lsp、cmv/cba启动子(1.1kb)、cag启动子(1.7kb)、mttr、经修饰的mttr、mttr pro、mttr增强子或碱性白蛋白启动子。

12.如权利要求11所述的raav载体,其中所述肝脏特异性启动子是人转甲状腺素蛋白启动子(ttr)。

13.如权利要求9所述的raav载体,其中所述可调节型启动子是诱导型或可阻遏型启动子。

14.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述载体还包含以下中的一者或多者:5'和3'反向末端重复体、所述序列上游的内含子和顺式作用调节性模块(crm)。

15.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述载体还包含wpre序列。

16.如权利要求15所述的raav载体,其中所述wpre序列是经修饰的。

17.如权利要求16所述的raav载体,其中所述wpre含有mut6delatg修饰。

18.如权利要求14-17中任一项所述的raav载体,其中所述crm是肝脏特异性crm。

19.如权利要求14-18中任一项所述的raav载体,其中所述crm是crm8。

20.如权利要求14-19中任一项所述的raav载体,其中所述载体包含至少三个crm。

21.如权利要求14-19中任一项所述的raav载体,其中所述载体包含三个crm8。

22.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述raav载体包含ires序列。

23.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链和/或重链包含提高所述抗体的半衰期和/或降低所述抗体的效应子功能的一种或多种突变。

24.如权利要求23所述的raav载体,其中所述一种或多种突变包括lala突变(l234a和l235a)和/或nhance突变(h433k和n434f)。

25.如权利要求23或24所述的raav载体,其中所述一种或多种突变包括lala突变(l234a和l235a)。

26.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述aav载体选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9、aav10、aav11或aavrh.10。

27.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述aav载体是aav8。

28.如权利要求27所述的raav载体,其中所述raav载体具有这样的gc含量,其被工程改造成具有与天然存在的aav8约相同的gc含量。

29.如权利要求26或27所述的raav,其中所述raav载体衣壳是经工程改造的。

30.如权利要求29所述的raav,其中所述经工程改造的raav载体包含具有经修饰的氨基酸序列的aav衣壳序列。

31.如权利要求30所述的raav,其中所述经修饰的氨基酸序列包含氨基酸序列的插入、缺失或取代。

32.如权利要求26所述的raav载体,其中所述raav衣壳是天然来源的。

33.如权利要求28所述的raav载体,其中所述raav载体衣壳是aav8。

34.如权利要求6所述的raav载体,其中所述可切割序列是弗林蛋白酶可切割序列。

35.如权利要求34所述的raav载体,其中所述弗林蛋白酶可切割序列之后是接头和2a序列。

36.如权利要求35所述的raav载体,其中所述接头是gsg接头。

37.如权利要求35或36所述的raav载体,其中所述2a序列是t2a、p2a、e2a或f2a序列。

38.如权利要求37所述的raav载体,其中所述2a序列是p2a序列。

39.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述载体还编码分泌信号。

40.如权利要求39所述的raav载体,其中所述分泌信号是天然存在的信号肽。

41.如权利要求39所述的raav载体,其中所述分泌信号是人工信号肽。

42.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链产生能够与血浆激肽释放酶结合的功能性抗血浆激肽释放酶抗体。

43.如权利要求42所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体抑制血浆激肽释放酶的蛋白水解活性。

44.如前述权利要求中任一项所述的raav,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体与所述血浆激肽释放酶活性位点结合。

45.如权利要求42-44中任一项所述的raav,其中所述结合阻断血浆激肽释放酶的所述活性位点。

46.如权利要求42-45中一项所述的raav,其中所述结合抑制血浆激肽释放酶的所述活性。

47.如权利要求42-46中任一项所述的raav,其中所述抗体不结合前激肽释放酶。

48.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由相同的载体表达。

49.如权利要求1-47中任一项所述的raav载体,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由不同的raav载体表达。

50.如权利要求1-47中任一项所述的raav,其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由分开的raav载体表达。

51.如前述权利要求中任一项所述的raav载体,其中所述载体还包含5'和3'反向末端重复体(itr)、一种或多种增强子元件和/或多聚腺苷酸尾巴。

52.如权利要求51所述的raav载体,其中所述一种或多种增强子元件选自转录因子结合位点簇和/或wpre序列。

53.一种重组腺相关病毒(raav),所述重组腺相关病毒包含aav8衣壳和包含与seq idno:23-36中的任一者具有至少约75%、80%、85%、90%、95%或大于95%同一性的经密码子优化的核苷酸序列的raav载体,所述载体包含:

54.如权利要求53所述的重组载体,其中所述肝脏特异性启动子包括选自以下的启动子:人转甲状腺素蛋白启动子(ttr)、经修饰的httr(httr mod.)、α-抗胰蛋白酶启动子、肝脏启动子1(lp1)、trm启动子、人凝血因子ix pro/肝转录因子反应性低聚物、lsp、cmv/cba启动子(1.1kb)、cag启动子(1.7kb)、mttr、经修饰的mttr、mttr pro、mttr增强子或碱性白蛋白启动子。

55.如权利要求54所述的重组载体,其中所述肝脏特异性启动子包括所述人转甲状腺素蛋白启动子。

56.如权利要求53-55中任一项所述的重组载体,其中所述crm是肝脏特异性crm。

57.如权利要求53-56中任一项所述的重组载体,其中所述载体包含至少三个crm。

58.如权利要求53-57中任一项所述的raav载体,其中所述载体包含三个crm8。

59.如权利要求53-58中任一项所述的raav载体,其中所述wpre序列是经修饰的。

60.如权利要求53-59中任一项所述的raav载体,其中所述wpre序列是wpremut6delatg。

61.一种治疗有需要的受试者的与激活的激肽释放酶-激肽通路缺乏或失调相关的疾病或病症的方法,所述方法包括施用前述权利要求中任一项所述的重组腺相关病毒载体(raav)。

62.如权利要求61所述的方法,其中所述激活的激肽释放酶-激肽通路缺乏或失调是与c1酯酶抑制剂缺乏相关的疾病或病症。

63.如权利要求61-62中任一项所述的方法,其中所述raav载体是通过静脉内、皮下或经皮施用来施用。

64.如权利要求63所述的方法,其中所述经皮施用是通过基因枪施用。

65.如权利要求61-64中任一项所述的方法,其中与所述激活的激肽释放酶-激肽通路缺乏或失调或c1酯酶抑制剂缺乏相关的所述病症是遗传性血管性水肿(hae)、获得性血管性水肿(aae)、具有正常c1抑制剂的血管性水肿、糖尿病性黄斑水肿、偏头痛、肿瘤学、神经退行性疾病、类风湿性关节炎、痛风、肠道疾病、口腔粘膜炎、神经性疼痛、炎性疼痛、椎管狭窄-退行性脊柱疾病、动脉或静脉血栓形成、术后肠梗阻、主动脉瘤、骨关节炎、血管炎、水肿、脑水肿、肺栓塞、中风、心室辅助装置或支架引起的凝血、头部外伤或肿瘤周围脑水肿、脓毒症、急性大脑中动脉(mca)缺血事件、再狭窄、系统性红斑狼疮肾炎/血管炎或烧伤。

66.如权利要求65所述的方法,其中所述与c1酯酶抑制剂缺乏相关的病症是hae。

67.如权利要求66所述的方法,其中所述hae是i型、ii型或iii型。

68.如权利要求61-67中任一项所述的方法,其中所述raav载体在施用后是游离型的。

69.如权利要求61-68中任一项所述的方法,其中在施用后,所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和轻链组装为功能性抗体。

70.如权利要求69所述的方法,其中所述抗体是igg。

71.如权利要求61-70中任一项所述的方法,其中所述功能性抗血浆激肽释放酶抗体在施用所述raav载体后约2至6周时能够在所述受试者的血浆中检测到。

72.如权利要求71所述的方法,其中所述功能性抗血浆激肽释放酶抗体在施用所述raav载体后约4周时能够在所述受试者的血浆中检测到。

73.一种dna表达盒,其包括经密码子优化的核苷酸序列,所述核苷酸序列编码包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的全长抗体,并且其中所述dna表达盒包含与seq id no:23-36中的任一者具有至少约75%、80%、85%、90%、95%或大于95%同一性的序列。

74.一种递送媒介物,其包括权利要求73所述的dna表达盒。

75.如权利要求74所述的递送媒介物,其选自病毒载体、脂质纳米颗粒或细胞外囊泡。


技术总结
本公开提供了尤其是一种重组腺相关病毒(rAAV)载体,其包含编码抑制血浆激肽释放酶的蛋白水解活性的剂的经密码子优化的核苷酸序列。本公开还提供了一种编码抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的重组腺相关病毒(rAAV)载体。

技术研发人员:J·肯尼斯顿,A·赛瑞金
受保护的技术使用者:武田药品工业株式会社
技术研发日:
技术公布日:2024/1/15
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1