一种醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸的方法与流程

1.本发明属于基因编码化合物库构建领域，具体涉及一种醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸的方法。


背景技术：

2.在药物研发中，针对生物靶标的高通量筛选可以帮助我们快速获得先导化合物，但基于单个分子的传统高通量筛选存在化合物库数量有限、时间较长、成本高等缺点。这就限制了先导化合物发现的时效性。而brenner和lerner于1992年创造性地提出可以使用基因编码化合物库技术(delt)来进行生物活性筛选的方法，它结合了分子生物学技术，在分子水平上给每个化合物加上一个dna标签，从而可以通过组合化学的合成方法可在较短的时间内产生多达亿级的化合物库，并且直接将这种dna逐个标记的化合物混合物直接进行生物活性筛选。delt不仅突破了传统高通量生物筛选的高成本与化合物化学空间上的瓶颈，实现了筛选的化合物化学结构空间及数量上的飞跃，而且使用了全新的类似于表型筛选(phenotypic screening)的模式可以同时在多种生物筛选条件下简洁、高效地进行先导化合物的发现。
3.为了能够成功地筛选到与生物标靶蛋白有亲和力的小分子化合物，构建化学结构上的多样性是delt能够成功筛选的重要保障，但由于dna化学结构的特殊性，它只能在一定的条件下(温度、ph、离子浓度、溶剂等)才能稳定，同时运用于基因编码化合物库构建的化学反应还需要较高的产率，因此能够在基因编码化合物库上运用的化学反应的种类十分有限。因此，能够在基因编码化合物库上能够成功应用的化学反应的种类越多，条件越丰富，在进行基因编码化合物库的设计和合成时选择才越多，得到的化合物库的多样性也会越丰富。因此开发出更多能适用于基因编码化合物库的合成方法也是delt领域的重要工作之一。
4.目前，传统的羧基修饰dna的制备方法是采用羧酸-羧酸酯类小分子化合物与氨基修饰的dna缩合反应连接，然后将羧酸酯水解得到羧酸修饰的dna。但这种单一的合成方法获得的羧酸修饰dna的结构有限，进而导致得到的基因编码化合物结构多样性受限。因此，亟需探索新的dna修饰方法。链接有寡聚核酸的醛基化合物可以直接用于许多基因编码库的合成：通过还原胺化反应合成二级胺类或三级胺类化合物；通过wittig/horner-wadsworth-emmons反应合成烯烃类化合物；通过与ohira-bestmann试剂转化为炔烃类化合物；还是合成许多杂环类化合物恶唑，苯并咪唑和色氨酸的合成试剂，而通过将连接有寡聚核酸的醛基化合物上的醛基氧化成羧基的方式得到羧基修饰dna，可进一步扩充delt的化合物结构库，具有非常重要的意义。目前已知的在dna上将醛氧化成羧酸的方法主要是kodadek课题组于2020年报道的pinnick氧化法，该方法官能团兼容性较好且对dna的损伤较小(nicholas g.paciaroni,john m.ndungu and thomas kodadek,solid-phase synthesis of dna-encoded libraries via an“aldehyde explosion”strategy,chem.commun.,2020,56,4656-4659.)。但该方法需要先将醛基化合物和dna固定到特定树
脂上，待反应完成后还需将它们从树脂上脱除下来，实验步骤多，操作比较繁琐，且这种固定在树脂上的基因编码库应用有限。因此更高效、经济的氧化方法有待于被开发。
5.尽管醛氧化成羧酸是传统化学中应用非常广泛的一类氧化反应，但由于dna自身结构的特殊性，传统有机化学中的氧化方法都无法保证dna结构和生物学功能的完整性；尤其是传统的小分子化学中醛基氧化往往涉及氢氧化钠等强碱或高锰酸钾等强氧化剂的使用，对dna结构会造成破坏，无法得到结构完整的寡聚核酸-芳香羧酸产物。因此开发出一种有效的能在dna上将醛氧化成羧酸，且保证dna不被损坏的方法具有非常重要的研究价值。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种在不损坏dna的基础上，将dna上的芳香醛基氧化为芳香羧基的方法。
7.本发明提供了一种醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸的方法，所述方法是以式ii所示寡聚核酸-芳香醛基化合物为原料，在氧化剂、碱的存在下于溶剂中反应，得到式i所示寡聚核酸-芳香羧酸化合物；反应式如下：
[0008][0009]
其中，l是连接单元；
[0010]
ar为取代或未取代的芳环或杂芳环；所述取代的取代基为分子量不超过1000的取代基，所述取代基的个数为1～4个。
[0011]
进一步地，式i化合物、氧化剂、碱的摩尔当量比为：1:(0.1～200):(1～1000)；优选为1:(0.1～100):(10～500)；
[0012]
所述反应的温度为0～90℃，反应时间为1～48小时；优选反应温度为0～80℃，反应时间5～20小时；
[0013]
所述溶剂为水、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇、环己醇、2-氟乙醇、2,2-二氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、六氟异丙醇、苯甲醇、乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、丙三醇、乙醚、环氧丙烷、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、四氢吡喃、1,4-二氧六环、苯甲醚、二甲硫醚、二乙基硫醚、乙二醇二甲醚，乙二醇二乙醚、二乙二醇二甲醚、二乙二醇二乙醚、n-甲基吡咯烷酮、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜、乙腈、丙酮、环己酮、二氯甲烷、氯仿、氯苯、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、吡啶、2-甲基吡啶、3-甲基吡啶、4-甲基吡啶、4-甲氧基吡啶、甲苯、二甲苯、无机盐缓冲液、有机碱缓冲液中的任意一种或几种的混合；优选为四氢呋喃和水的混合；
[0014]
所述碱为碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾、三乙胺、正丁胺、异丁胺、4-二甲氨基吡啶、吡啶、n,n-二异丙基乙胺、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、n,n,n',n'-四甲基乙二胺、1,1,3,3-四甲基胍、n,n-二环己基甲胺、二环己胺、四氢吡咯、无机盐缓冲液(碳酸盐、磷酸盐、硼酸盐)、有机碱缓冲液(三乙基乙酸铵、三羟甲基氨基甲烷)中的任意一种或任意几种的混合；优选为碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾中的一种；
[0015]
所述氧化剂为1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)氯化咪唑、3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基氯化噻唑、3,4-二甲基-5-(2-羟乙基)碘代噻唑、3-苄
基溴化噻唑鎓的任意一种；优选为1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐或3-苄基-5-(2-羟乙基)-4-甲基氯化噻唑。
[0016]
更进一步地，式i化合物、氧化剂、碱的摩尔当量比为：1:100:400；
[0017]
所述反应温度为80℃，反应时间为20小时；
[0018]
所述溶剂为四氢呋喃和水的混合且水的体积分数不低于75％；
[0019]
所述碱为碳酸钾；
[0020]
所述氧化剂为1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。
[0021]
更进一步地，上述dna为单链或双链的寡聚核苷酸链；
[0022]
l为-nhco-或-nhso
2-；
[0023]
ar为取代或未取代的5～6元芳环或5～6元杂芳环；所述取代的取代基为卤素或c1～c3烷氧基，所述取代基的个数为1个或2个。
[0024]
更进一步地，上述取代基为氟、溴或甲氧基。
[0025]
更进一步地，上述l为-nhco-或-nhso
2-，式ii所示化合物是以式ii-a和式ii-b为原料进行反应得到的，反应式如下：
[0026][0027]
其中，r为-cooh或-so2x，x为卤素。
[0028]
更进一步地，上述r为-cooh，所述反应是在碱、缩合剂的作用下于溶剂中进行的；
[0029]
所述式ii-a、式ii-b、碱和缩合试剂的摩尔当量比为1:(50～100):(300～500):(30～70)；
[0030]
所述反应的温度为0～40℃，反应时间为1～24小时；
[0031]
所述反应的溶剂为水、有机溶剂或两者的混合物；
[0032]
或，所述r为-so2x，所述反应是在碱的作用下于溶剂中进行的；
[0033]
所述式ii-a、式ii-b和碱的摩尔当量比为1:(150～250):(200～300)；
[0034]
所述反应的温度为0～40℃，反应时间为1～24小时；
[0035]
所述反应的溶剂为水、有机溶剂或两者的混合物。
[0036]
更进一步地，上述r为-cooh，所述反应是在n,n-二异丙基乙胺、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯的作用下于溶剂中进行的；
[0037]
所述式ii-a、式ii-b、n,n-二异丙基乙胺和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯的摩尔当量比为1:80:400:50；
[0038]
所述反应的温度为20～30℃，反应时间为1小时；
[0039]
所述反应的溶剂为水和dmso的混合物；
[0040]
或，所述r为-so2x，所述反应是在硼酸钠的作用下于溶剂中进行的；
[0041]
所述式ii-a、式ii-b和硼酸钠的摩尔当量比为1:200:250；
[0042]
所述反应的温度为20～30℃，反应时间为1小时；
[0043]
所述反应的溶剂为水和乙腈的混合物。
[0044]
进一步地，式i所示化合物是下列化合物之一：
[0045][0046]
本发明还提供了式i所示寡聚核酸-芳香羧基化合物：
[0047][0048]
其中，l是连接单元；
[0049]
ar为取代或未取代的芳环或杂芳环；所述取代的取代基为分子量不超过1000的取代基，所述取代基的个数为1～4个。
[0050]
进一步地，上述dna为单链或双链的寡聚核苷酸链；
[0051]
l为-nhco-或-nhso2；
[0052]
ar为取代或未取代的5～6元芳环或5～6元杂芳环；所述取代的取代基为卤素或c1～c3烷氧基，所述取代基的个数为1个或2个。
[0053]
更进一步地，上述取代基为氟、溴或甲氧基。
[0054]
更进一步地，上述化合物是下列化合物之一：
[0055][0056]
本发明还提供了上述的合成方法在构建基因编码化合物库中的用途。
[0057]
本发明的有益效果：提供了一种将dna上芳香醛基氧化成芳香羧基的方法，使用特定的氧化剂和碱，在特定温度下进行反应，本发明方法对dna损伤小，普适性好，操作简单，条件温和，能高收率地制得寡聚核酸-芳香羧酸类化合物，为扩大和丰富delt化合物库提供重要基础。
[0058]
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
[0059]
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀c
a～b
烷基表示任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。例如，c
1～6
烷基是指包含1～6个碳原子的直链或支链的烷基。
[0060]“芳环”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)，例如苯环和萘环。所述芳环可以稠合于其它环状基团(包括饱和和不饱和环)，但不能含有杂原子如氮、氧、硫，同时连接母体的点必须在具有共轭的π电子体系的环上的碳原子上。芳环可以是取代的或未取代的。
[0061]“杂芳环”指包含一个到多个杂原子的杂芳族基团。这里所指的杂原子包括氧、硫和氮。例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡唑基、吡咯基、n-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳环。杂芳环可以是任选取代的或未取代的。
[0062]“有机溶剂”包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、戊醇、环己醇、2-氟乙醇、2,2-二氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、六氟异丙醇、苯甲醇、乙二醇、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、丙三醇、乙醚、环氧丙烷、异丙醚、四氢呋喃、2-甲基四氢呋喃、四氢吡喃、1,4-二氧六环、苯甲醚、二甲硫醚、二乙基硫醚、乙二醇二甲醚，乙二醇二乙醚、二乙二醇二甲醚、二乙二醇二乙醚、n-甲基吡咯烷酮、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二甲基亚砜(dmso)、乙腈、丙酮、环己酮、二氯甲烷、氯仿、氯苯、1,2-二氯乙烷、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、吡啶、2-甲基吡啶、3-甲基吡啶、4-甲基吡啶、4-甲氧基吡啶、甲苯、二甲苯。
[0063]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0064]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
[0065]
图1为合成本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物的原料的化学结构。
[0066]
图2为本发明实施例中所用的寡聚核酸-芳香醛基化合物的化学结构。
[0067]
图3为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-1的液相色谱质谱图。
[0068]
图4为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-2的液相色谱质谱图。
[0069]
图5为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-3的液相色谱质谱图。
[0070]
图6为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-4的液相色谱质谱图。
[0071]
图7为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-5的液相色谱质谱图。
[0072]
图8为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-6的液相色谱质谱图。
[0073]
图9为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-7的液相色谱质谱图。
[0074]
图10为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-8的液相色谱质谱图。
[0075]
图11为本发明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-9的液相色谱质谱图。
[0076]
图12为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p1的液相色谱质谱图。
[0077]
图13为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p2的液相色谱质谱图。
[0078]
图14为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p3的液相色谱质谱图。
[0079]
图15为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p4的液相色谱质谱图。
[0080]
图16为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p5的液相色谱质谱图。
[0081]
图17为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p6的液相色谱质谱图。
[0082]
图18为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p7的液相色谱质谱图。
[0083]
图19为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p8的液相色谱质谱图。
[0084]
图20为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p9的液相色谱质谱图。
[0085]
图21为本发明寡聚核酸-芳香羧酸化合物p5与taga连接后的产物p5-1的液相色谱质谱图。
具体实施方式
[0086]
除另有说明外，本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。本发明说明书中所有的“当量”指摩尔当量。
[0087]
1、合成原料dna-nh2[0088]
(1)合成dna-nhfmoc
[0089][0090]
将100纳摩尔hp溶于去离子水配制成1毫摩尔/升的溶液(100微升，100纳摩尔，1当量)。将40当量的起始头片段化合物sm1(市售产品)的dmso溶液(浓度：毫摩尔/升)、250当量ph＝9.47的四硼酸钠(na2b4o7)缓冲液(浓度：250毫摩尔/升)、40当量的4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(dmt-mm)水溶液(浓度：200毫摩尔/升)混合，将该混合物用涡旋振荡器充分混匀。再将上述混合物加入到hp的溶液中，混合均匀后于4℃下反应1小时。反应结束后，向反应液中加入总体积10％的5摩尔/升氯化钠水溶液。然后，继续加入总体积3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应液置于-80℃的冰箱中冷冻2小时。之后，在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液。余下沉淀用去离子水溶解后得到dna-nhfmoc的溶液。
[0091]
(2)合成dna-nh2[0092][0093]
将100纳摩尔dna-nhfmoc溶于去离子水配制成1毫摩尔/升的dna-nhfmoc溶液(100微升，100纳摩尔，1当量)，向其中加入36微升10％的哌啶(piperidine)水溶液，将两者混合均匀后于室温下反应1小时。反应结束后，向反应液中加入总体积10％的5摩尔/升氯化钠水溶液。然后，继续加入总体积3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应置于-80℃的冰箱中冷冻2小时。之后，在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液。余下沉淀用去离子水溶解后得到寡聚核酸-nh2(简写为dna-nh2)的溶液。
[0094]
hp的代表结构为：
[0095][0096]
但需要特别说明的是，本发明方法不仅限于本发明实施例特定的hp结构的dna链，
可以是其它经人工修饰的或未修饰的脱氧核糖核苷酸单体聚合得到的单链或双链的脱氧核糖核苷酸链，链的长度没有限制。
[0097]
3、合成式ii所示化合物的方法
[0098]
3.1、寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-1的合成
[0099][0100]
将20纳摩尔寡聚核酸-nh2溶于去离子水配制成1毫摩尔/升浓度的溶液(20微升，20纳摩尔，1当量)。将80当量羧酸-芳香醛基化合物(200毫摩尔/升dmso溶液，80当量)，400当量n,n-二异丙基乙胺(200毫摩尔/升dmso溶液，400当量)，50当量的2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(200毫摩尔/升dmso溶液，50当量)混合。将该混合物用涡旋振荡器充分混匀。再将上述混合物加入到寡聚核酸-nh2的溶液中，混合均匀后室温反应1小时。反应结束后，向反应液中加入总体积10％的5摩尔/升氯化钠水溶液。然后，继续加入总体积3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应置于-80℃的冰箱中冷冻2小时后，在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液，余下沉淀用去离子水溶解后得到寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-1的水溶液，分子量为5395。通过液相色谱质谱进行检测，检测到相应产物分子量(谱图见图3)。该溶液直接用于下一步反应。其他类似结构的寡聚核酸-芳香醛基化合物原料的合成方法同上，在本发明实施例中，将上述的反应物s1替换为了如图1所示的s3～s9的结构，合成了如图2所示的化合物s1-3～s1-9，谱图见图5～图11。
[0101]
3.2、寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-2的合成
[0102][0103]
将20纳摩尔寡聚核酸-nh2溶于去离子水配制成1毫摩尔/升浓度的溶液(20微升，20纳摩尔，1当量)，向其中加入200当量磺酰氯-芳香醛基化合物s2(200毫摩尔/升乙腈溶液，200当量)的乙腈水溶液，250当量硼酸钠缓冲溶液(ph＝9.47，250毫摩尔/升水溶液，250当量)。将该混合物用涡旋振荡器充分混匀后室温反应1小时。反应结束后，向反应液中加入总体积10％的5摩尔/升氯化钠水溶液，然后继续加入总体积3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应置于-80℃的冰箱中冷冻2小时后，在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液，余下沉淀用去离子水溶解后得到寡聚核酸-醛基化合物水溶液，分子量为5352。通过液相色谱质谱进行检测，检测到相应产物分子量(谱图见图4)。该溶液直接用于下一步反应。其他类似结构的寡聚核酸-芳香醛基化合物原料的合成方法同上。
[0104]
实施例1、将寡聚核酸-芳香醛基化合物氧化为寡聚核酸-芳香羧酸化合物的方法
[0105]
以寡聚核酸-芳香羧酸化合物p1的合成为例：
[0106][0107]
将1纳摩尔寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-1(1当量，分子量为5395)溶于去离子水，配制成1毫摩尔/升浓度的溶液，并加入100当量1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐溶液的四氢呋喃溶液(100毫摩尔/升，100当量)、400当量碳酸钾的水溶液(200毫摩尔/升，400当量)。将该混合物用涡旋振荡器充分混匀，在80℃下反应20小时，反应结束后再向上述反应液中加入总体积10％的5摩尔/升氯化钠水溶液以及总体积3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应置于-80℃的冰箱中冷冻2小时。之后，在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液，余下沉淀用去离子水溶解后寡聚核酸-芳香羧酸化合物的溶液，分子量为5411。通过液相色谱质谱进行检测，检测到相应产物分子量，说明寡聚核酸-芳香醛基化合物s1-1可被氧化为寡聚核酸-芳香羧酸化合物p1。通过液相色谱质谱检测得反应收率为90％，谱图、产率和分子量见图12。其他寡聚核酸-芳香羧酸化合物的合成方法同上。本发明分别将上述方法中的原料s1-1替换为s1-2～s1-9，制备得到了产物p2～p9，谱图、产率和分子量见图13～图20。
[0108]
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
[0109]
实验例1：醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸寡聚核酸化合物的条件筛选实验
[0110]
以p5的合成为例，对催化剂、碱的种类和反应温度条件进行了筛选，结果如表1所示。
[0111]
表1方法1筛选优化条件a[0112]
[0113][0114]
note
[0115]
a、(1)s5、k2co3、k3po4、cs2co3、lioh、naoh均溶于水，
[0116][0117]
根据表中结果可知，只有在本发明特定的氧化剂、碱和反应温度下，醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸化合物才具有最高的产率。
[0118]
实验例2：醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸寡聚核酸的完整性验证
[0119]
醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸化合物与taga(短链的寡聚核苷酸，两条链的分子量分别为4064、5884)链接
[0120][0121]
步骤：分别将1纳摩尔按照实施例1中方法1、方法2制备的p5溶于去离子水配制成1毫摩尔/升浓度的溶液(1微升，1纳摩尔，1当量)，向其中加入1.2当量的taga(1毫摩尔/升水溶液，1微升，1当量)、1微升10xt4 dna链接缓冲溶液以及4微升t4 dna链接酶。然后将上述溶液混合均匀，室温反应1小时。反应结束后，向反应液中加入总体积10％的5毫摩尔/升氯化钠水溶液，然后继续加入总体积的3倍的无水乙醇，振荡均匀后，将反应置于-80℃的冰箱中冷冻2小时。之后在4000rpm的转速下离心半小时，倒掉上清液。余下沉淀用去离子水溶解后通过液相色谱质谱检测确认产物分子量。实施例1制备反应原料p5和产物p5-1的液相色谱质谱联用仪检测结果见图21。
[0122]
结果发现，醛基氧化合成寡聚核酸-芳香羧酸反应物可以进行dna酶催化偶联反应，说明实施例1合成方法没有对dna部分的结构造成破坏；同时，lcms分析表明该反应产物纯度高、质谱数据能够精确得到与计算值相吻合的实验数值进一步验证了dna良好的结构完整性。
[0123]
综上所述，本发明提供了一种将dna上芳香醛基氧化成芳香羧基的方法，使用特殊的碱、氧化剂，在特定温度下反应，对dna损伤小，普适性好，操作简单，条件温和，能高收率地制得寡聚核酸-芳香羧酸类化合物，为扩大和丰富delt化合物库提供重要基础。