技术特征：
1.一种利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，包括以下步骤：（a）制备狐粪青霉菌（penicillium vulpinum）摇瓶种子培养液采用狐粪青霉菌（penicillium vulpinum）ncc3421(cgmcc no.9094)为发酵菌株，将该菌株的斜面培养物接种于摇瓶种子培养基，于25℃培养，摇床转速220rpm，培养周期48~52h，获得摇瓶种子培养液；其中培养基成分配比及制备为：糊精10.0~20.0g/l、蔗糖20.0~30.0g/l、低温豆饼粉10.0~30.0g/l、蛋白胨5.0~15g/l、高磷有机氮源2~25.0g/l、硫酸铵2.5~10.0g/l、氯化钠2.5~10.0g/l、碳酸钙2.0~4.0g/l，加水定容至1000ml，用氢氧化钠溶液调ph为6.4~6.8，121℃灭菌30min；（b）制备狐粪青霉菌（penicillium vulpinum）一级罐种子液将（a）所制备的摇瓶种子培养液以体积百分比0.3~0.5%的接种量接种于一级种子培养基上，于培养温度22~25℃，罐搅拌功率35~40hz，通气比1:0.8~1.5vvm，罐压0.05
±
0.01mpa，培养周期48~52h，获得一级罐种子液；其中所述一级种子罐培养基按以下方法制得：糊精10.0~20g/l、蔗糖10.0~30g/l、低温豆饼粉15.0~30g/l、玉米浆2.5~5.0g/l、蛋白胨10.0~20g/l、磷酸二氢钾3.0~6.0g/l、氯化钠2.5~5.0g/l、碳酸钙1~2 g /l、消沫剂1~2 ml /l，加水定容至1000ml，用氢氧化钠溶液调ph至6.4~6.8，121℃灭菌30min；（c）制备狐粪青霉菌（penicillium vulpinum）发酵液将（b）所制备的一级罐种子液以体积百分比3~5%的接种量接种于发酵培养基，发酵温度22~25℃，发酵周期120h~180h，发酵培养转速为220~250rpm；罐搅拌功率35~40hz，通气比为1:0.8~1.5vvm，罐压0.05
±
0.01mpa，溶氧浓度保持20~30%以上；其中所述的发酵培养基按以下方法制得：糊精0~40 g/l、蔗糖20.0~30.0g/l、低温黄豆饼粉30.0~45g/l、鱼粉10.0~20g/l、玉米浆16.0~32.0g/l、磷酸二氢钾3.0~6.0g/l、硫酸铵8.0~12.0 g /l、氯化钠2.5~5.0g/l、七水硫酸镁2.0~4.0g/l、前体物质a 0~8.0 g/l、前体物质b 0~8.0 g/l、玉米油15.0~30ml/l、碳酸钙2.0~4.0g/l、消沫剂0~1.0ml/l，加水定容至1000ml，用10%氢氧化钠调ph为6.4~6.8，121℃灭菌30min；其中所述的前体物质a为甲硫氨酸或乙硫氨酸；所述的前体物质b是短链脂肪醇或短链脂肪酸；（d）将（c）制备的发酵液，按照常规分离、收集方法，获得7-羟基丁苯酞溶液。2.根据权利要求1所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，（a）步所述高磷有机氮源为鱼粉或玉米浆。3.根据权利要求1或2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，（c）步骤发酵过程中流加补料，所述的补料为葡萄糖300~450g/l或葡萄糖300~450g/l与甘油1~150g/l的两种组分。4.根据权利要求1或2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，所述摇瓶种子培养基为：糊精10.0g/l、蔗糖20.0g/l、低温豆饼粉15.0g/l、蛋白胨10.0g/l、高磷有机氮源13~23.0g/l、硫酸铵5.0g/l、氯化钠5.0g/l、碳酸钙2.0g/l，加水定容1000ml，用10%氢氧化钠调ph为6.4~6.8，121℃灭菌30min。5.根据权利要求1或2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，所述前体物质a为正亮氨酸、正丁酸、异丁酸、异戊酸中的任意一种或其钠盐。
6.根据权利要求1或2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，所述前体物质b为正丙醇或正丁醇。7.根据权利要求1或2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，所述前体物质a加入量为0.5~8.0g/l；所述前体物质b加入量为0~8.0g/l。8.根据权利要求1所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，（a）步所述高磷有机氮源为鱼粉和玉米浆两种组分，其中鱼粉用量为5.0~10.0g/l、玉米浆用量为8.0~20.0g/l；两种组分的总质量控制在13.0g~23.0g/l。9.根据权利要求2所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，（c）步骤所述的发酵过程中流加补料为：发酵过程中，发酵液ph回升至7.2~7.3时，开始流加补料，补料流速控制在2~4l/h；当发酵液还原糖在1.0%以下时，补料流速控制0.8~2l/h；补料完毕后继续发酵8~12h。10.根据权利要求8所述的利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法，其特征在于，（a）步所述高磷有机氮源为鱼粉8.0g/l、玉米浆15.0g/l。
技术总结
本发明公开了一种利用狐粪青霉菌发酵生产7-羟基丁苯酞的方法。其采用NCC3421菌株，并对摇瓶种子培养液、一级罐种子液以及发酵培养基配方及工艺参数等进行特别设计，尤其是在摇瓶种子培养基中增加鱼粉、玉米浆等高磷有机氮源，缩短了孢子萌发时间，有效改善了种瓶菌丝繁殖活力，使菌种发酵水平得以高效表达，并且在后续的工业放大环节，采用合理的可操作接种量接种技术得以实现。本发明方法大大提高了NCC3421菌株发酵合成7-羟基丁苯酞的产量，其2m3发酵罐规模上发酵水平达到5000
技术研发人员：王耀耀 宋盼 王昂 任风芝 张雪霞 李红珍 郝惠云 王亚莉 李业英 路新华 崔晓兰 张雪莲 李国超
受保护的技术使用者：华北制药集团新药研究开发有限责任公司
技术研发日：2022.08.03
技术公布日：2022/10/4