CD3抗原结合片段及其应用的制作方法

本发明涉及基因工程领域，尤其涉及抗体工程领域。具体而言，本发明涉及抗体，例如多功能抗体，例如针对cd3的抗体，尤其是人源化的抗体，所述抗体的抗原结合片段以及相关用途。

背景技术：

1、cd3是t细胞表面分子，其能够与t细胞表面的t细胞受体结合形成tcr-cd3复合物活化t细胞，在抗原识别和免疫信号传导中起重要作用。cd3抗体广泛应用于移植排斥反应和自身免疫病等的治疗中。已知鼠源cd3抗体如okt3可能导致显著的人抗鼠抗体(hama)反应而不利于在人中使用。因此，需要对这类鼠源抗体进行人源化或其他处理，以降低不良反应。目前避免或减少hama反应的主要途径是使鼠源性单抗人源化或研制完全人源化抗体。例如，可以通过向鼠源抗体引入与人抗体蛋白相同的序列片段，降低hama反应。但是，人类中可能并不存在结构类似的蛋白，从而可能无法进行这样的处理。而且，人源化抗体往往遇到抗体亲和力下降、活力不高、稳定性差或产量低等瓶颈问题而无法获得有效的治疗蛋白。

技术实现思路

1、本发明提供了一种抗体，例如多功能抗体，例如针对cd3的抗体，尤其是人源化的抗体，所述抗体的抗原结合片段以及相关用途。

2、在一些实施方案中，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，特别是人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3，所述抗体包括构架区，分别为fr-h1、fr-h2、fr-h3、fr-h4、fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4，和互补性决定区(cdr)，其中重链可变区的cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3氨基酸序列分别为seq id nos:1、2和3所示的氨基酸序列，或其变体序列，例如cdr-h3的变体序列seq id nos:4-14和190-191所示序列中的任一种，轻链可变区的cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3氨基酸序列分别为seq id n0：26、27和28所示的氨基酸序列，或其变体序列，其中所述人源化抗体的构架区包括下述序列中的一个或多个：

3、a)seq id no：15或16的fr-h1；

4、b)seq id no：17的fr-h2；

5、c)seq id nos：18-24中任一个的fr-h3；

6、d)seq id no：25的fr-h4；

7、e)seq id nos：29-31中任一个的fr-l1；

8、f)seq id nos：32-38中任一个的fr-l2；

9、g)seq id nos：39-42中任一个的fr-l3；和/或

10、h)seq id nos：43-44中任一个的fr-l4。

11、在一些实施方案中，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，特别是人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3，其中所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括下述任一项的序列：

12、a)seq id nos：45-62的氨基酸序列；

13、b)与seq id nos：45-62的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；

14、c)与seq id nos：45-62的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

15、所述轻链可变区包括下述任一项的序列：

16、d)seq id nos：63-73的氨基酸序列；

17、e)与seq id nos：63-73的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；

18、f)与seq id nos：63-73的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

19、在一些实施方案中，本发明提供一种抗体或其抗原结合片段，特别是人源化抗体或其抗原结合片段，所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3，其中所述抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区分别包含选自下组的氨基酸序列：

20、a)seq id nos：46、63；seq id nos：47、63；seq id nos：49、63；seq id nos：50、63；seq id nos：51、63；seq id nos：46、71；seq id nos：47、71；seq id nos：49、71；seq idnos：51、71；seq id nos：52、72；seq id nos：53、72；seq id nos：54、72；seq id nos：55、72；seq id nos：56、72；seq id nos：57、72；seq id nos：58、72；seq id nos：62、72；seq idnos：52、73；seq id nos：53、73；seq id nos：54、73；seq id nos：55、73；seq id nos：56、73；seq id nos：57、73；seq id nos：58、73；seq id nos：61、73；seq id nos：62、73；seq idnos：45、63；seq id nos：48、63；seq id nos：45、64；seq id nos：45、67；seq id nos：48、64；seq id nos：48、67；seq id nos：45、71；seq id nos：48、71；seq id nos：50、71；seq idnos：61、72；seq id nos：60、73；seq id nos：60、72；seq id nos：59、72；

21、b)与a)的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；

22、c)与a)的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

23、在一些实施方案中，本发明提供一种多特异性抗体，优选双特异性抗体，其包含权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及针对其他抗原和/或其他抗原表位的抗体或抗原结合片段，例如相对于对应的非肿瘤细胞而言在肿瘤细胞上过表达的蛋白；肿瘤抗原，如cd38，bcma，pd-l1，slamf7，claudin18.2或cea；病毒；细菌；和/或内毒素。

24、在一些实施方案中，本发明提供一种多肽，包含或选自seq id nos：45-62的氨基酸序列，或与seq id nos：45-62的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或与seq idnos：45-62的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

25、在一些实施方案中，本发明提供一种多肽，包含或选自seq id nos：63-73的氨基酸序列，或与seq id nos：63-73的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或与seq idnos：63-73的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

26、在一些实施方案中，所述人源化抗体与对照抗体相比具有可比的亲和力和提高的生物学活性、热稳定性和/或耐酸性。

27、在一些实施方案中，本发明提供一种多核苷酸，编码本发明的多肽。

28、在一些实施方案中，本发明提供一种抗体，该抗体包括(a)轻链-重链对，该轻链-重链对针对肿瘤细胞或微生物具有特异性；和(b)融合肽，该融合肽包括单链可变片段和单链fc片段，其中该融合肽针对免疫细胞具有特异性。在一些实施方案中，所述单链fc片段包含本文描述的ch2和/或ch3序列，例如具有seq id nos：155-161或192任一项的序列的ch2和/或seq id nos：162-183任一项的序列的ch3。在一些实施方案中，所述融合肽包含本文描述的抗体相应序列或其部分序列，例如所述融合肽包含本文描述的人源化抗体的轻链和/或重链可变区和/或框架区序列。在一些实施方案中，所述融合肽的单链可变片段(scfv)包含本文描述的人源化抗体的scfv。

29、在一些实施方案中，本发明的抗体中的融合肽包括vhs-接头1-vls-铰链1-ch2-ch3-b，重链包括vhm-ch1-铰链2-ch2-ch3-a，轻链包括vlm-cl。

30、在一些实施方案中，本发明的抗体中的所述轻链-重链对特异性结合：

31、a)相对于对应的非肿瘤细胞而言在肿瘤细胞上过表达的蛋白；

32、b)肿瘤抗原，如cd38，bcma，pd-l1，slamf7，claudin18.2或cea；

33、c)病毒；

34、d)细菌；和/或

35、e)内毒素。

36、在一些实施方案中，本发明的抗体中的所述融合肽特异性结合免疫细胞抗原，例如所述融合肽包含特异性结合灵长类如人和/或猴cd3的抗原结合位点，例如所述融合肽包含本文描述的抗体的轻链和重链的可变区。

37、在一些实施方案中，本发明的抗体的融合肽的vh包括选自seq id nos：45-62、74、76、78、80、82、84、86、88任一项的序列；融合肽的vl包括选自seq id nos：63-73、75、77、79、81、83、85、87、89任一项的序列；融合肽的接头1包括选自seq id nos：120-138任一项的序列；融合肽的铰链1和重链的铰链2包括选自seq id nos：139-147任一项的序列；融合肽的ch2和重链的ch2包括选自seq id nos：155-161或192任一项的序列；融合肽的ch3-b包括选自seq id nos：163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183任一项的序列；重链的ch3-a包括选自seq id nos：162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182任一项的序列；重链的vhm包括选自seq id nos：90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、193任一项的序列；重链的ch1包括seq id nos：154的序列；轻链的vlm包括选自seq id nos：91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、194任一项的序列；和/或轻链的cl包括选自seq id nos：148-153任一项的序列。

38、在一些实施方案中，本发明的抗体的融合肽的vh和融合肽的vl分别包含选自下组的氨基酸序列：a)seq id nos：45、63；seq id nos：48、63；seq id nos：48、71；seq id nos：49、63；seq id nos：49、71；seq id nos：51、71；seq id nos：58、72；seq id nos：60、72；seqid nos：60、73；seq id nos：59、72；seq id nos：61、73；seq id nos：62、73；seq id nos：58、72；seq id nos：74、75；seq id nos：76、77；seq id nos：78、79；seq id nos：80、81；seqid nos：82、83；seq id nos：84、85；seq id nos：86、87；seq id nos：88、89；

39、b)与a)的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；

40、c)与a)的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；和/或

41、所述重链的vhm和轻链的vlm分别包含选自下组的氨基酸序列：d)seq id nos：90、91；seq id nos：92、93；seq id nos：94、95；seq id nos：96、97；seq id nos：98、99；seq idnos：100、101；seq id nos：102、103；seq id nos：104、105；seq id nos：106、107；seq idnos：108、109；seq id nos：110、111；seq id nos：112、113；seq id nos：114、115；seq idnos：116、117；seq id nos：118、119；seq id nos：193、194；

42、e)与d)的至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；

43、f)与d)的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

44、在一些实施方案中，本发明的抗体中：

45、a)融合肽的ch3-b和重链的ch3-a具有形成杵-臼结构的替换对，例如一个ch3结构域上的t366被相对较大的氨基酸残基替换，如酪氨酸(y)或色氨酸(w)替换，另一ch3结构域上的y407被相对较小的氨基酸残基替换，如苏氨酸(t)，丙氨酸(a)或缬氨酸(v)，例如包含表15的一处或多处替换；

46、b)融合肽的ch3-b和重链的ch3-a具有形成离子键的替换对，例如该ch3结构域之一含有一处或多处替换，经在生理条件下有正电荷的氨基酸残基替换，而另一ch3结构域包含一处或多处替换，经一个或多个在生理条件下具有负电荷的氨基酸残基替换，例如该带正电的氨基酸残基为精氨酸(r)，组氨酸(h)或赖氨酸(k)，例如该带负电荷的氨基酸残基可为天冬氨酸(d)或谷氨酸(e)，例如被替换的氨基酸残基包括d356、l368、k392、d399和k409中的一个或多个，例如表16的一处或多处替换；

47、c)融合肽的ch3-b和重链的ch3-a具有形成二硫键的替换对，例如表17的替换；和/或

48、d)融合肽的ch3-b和重链的ch3-a具有导致与蛋白a的结合能力下降的替换，例如一个ch3结构域上的h435和y436分别被替换为精氨酸和苯丙氨酸，如表18所示。

49、在一些实施方案中，本发明的抗体中的fc片段包含选自seq id nos：155-161或192任一项的序列的ch2和/或seq id nos：162-183任一项的序列的ch3。

50、在一些实施方案中，本发明的抗体的该重链或融合肽的重链包含人或者人源化的fc片段，例如人igg fc片段，例如igg1、igg2、igg3、igg4、igg5 fc片段。

51、在一些实施方案中，与野生型抗体比，本发明的抗体的该重链、融合肽的重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换，该替换在该重链和融合肽之间形成杵-臼结构配对。

52、在一些实施方案中，本发明的抗体的该重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换，该替换在该重链和融合肽之间形成盐桥配对。

53、在一些实施方案中，本发明的抗体包括y101，y102，y103，y104，y105，y150-8-3，y150-f8-4，y150-f8-5，y150-f8-6，y150-f8-7，y150-f8-8，y150-f8-9，y150-f8-10，y150-f8-11，y150-f8-12，y150-f8-13、y150-f8-14、y150-f8-15、y150-f9-7、y150-f9-11、y150-f9-12、ms-hcd3-ic15、ms-hcd3-ic16、ms-hcd3-ic17和ms-hcd3-ic18，其中按照融合肽vhs-接头1-vls-铰链1-ch2-ch3-b，重链vhm-ch1-铰链2-ch2-ch3-a，轻链vlm-cl各组分的顺序，

54、y101分别包括seq id nos：45、129、63、142、159、167、106、154、139、159、166、107、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

55、y102分别包括seq id nos：48、129、63、142、159、167、106、154、139、159、166、107、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

56、y103分别包括seq id nos：48、129、71、142、159、167、106、154、139、159、166、107、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

57、y104分别包括seq id nos：49、129、63、142、139、167、106、154、139、159、166、107、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

58、y105分别包括seq id nos：49、129、71、142、139、167、106、154、139、159、166、107、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

59、y150-8-3分别包括seq id nos：45、129、63、141、157、167、90、154、139、157、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

60、y150-f8-4分别包括seq id nos：48、129、63、141、157、167、90、154、139、157、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

61、y150-f8-5分别包括seq id nos：49、129、71、141、139、167、90、154、139、157、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

62、y150-f8-6分别包括seq id nos：51、129、71、141、139、167、90、154、139、157、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

63、y150-f8-7分别包括seq id nos：49、129、71、144、158、167、90、154、139、158、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

64、y150-f8-8分别包括seq id nos：49、129、71、144、161、167、90、154、139、161、166、91、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

65、y150-f8-9分别包括seq id nos：49、129、71、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

66、y150-f8-10分别包括seq id nos：58、129、72、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

67、y150-f8-11分别包括seq id nos：60、129、72、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

68、y150-f8-12分别包括seq id nos：60、129、73、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

69、y150-f8-13分别包括seq id nos：59、129、72、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

70、y150-f8-14分别包括seq id nos：61、129、73、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

71、y150-f8-15分别包括62、129、73、144、161、167、96、154、139、161、166、97、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

72、y150-f9-7分别包括49、129、71、141、139、167、92、154、139、157、166、93、150；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

73、y150-f9-11分别包括49、129、71、144、161、167、92、154、139、161、166、93、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

74、y150-f9-12分别包括49、129、71、144、192、167、92、154、139、192、166、93、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

75、ms-hcd3-ic15分别包括49、129、71、141、159、167、118、154、139、159、166、119、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

76、ms-hcd3-ic16分别包括49、129、71、141、157、167、118、154、139、157、166、119、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

77、ms-hcd3-ic17分别包括49、129、71、141、161、167、118、154、139、161、166、119、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列；

78、ms-hcd3-ic18分别包括58、129、72、141、161、167、118、154、139、161、166、119、148；或者与上述至少一个氨基酸序列具有80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列；或者与上述至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个，更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

79、在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段，可以以小于大约10-8m，例如小于大约10-8m，10-9m、10-10m或更小的kd结合靶标，或以小于大约100nm，例如小于大约10nm、1nm、0.9nm、0.8nm、0.7nm、0.6nm、0.5nm、0.4nm、0.3nm、0.2nm、0.1nm或更小的ec50结合靶标，优选地，所述抗原结合片段选自f(ab’)2、f(ab)2、fab’、fab、fv、fd、scfv。

80、在一些实施方案中，本文提供一种多核苷酸，其编码本文描述的抗体或其抗原结合片段。

81、在一些实施方案中，本文提供一种表达载体，其包含本文描述的多核苷酸。

82、在一些实施方案中，本文提供一种宿主细胞，其包含本文描述的多核苷酸或表达载体。

83、在一些实施方案中，本文提供一种制备本发明的抗体的方法，其包括本文描述的多核苷酸或表达载体引入到宿主细胞中，以制备所述抗体。

84、在一些实施方案中，本文提供一种抗体偶联物，其包含本文描述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分，优选地，所述偶联部分选自纯化标签(如his标签)、细胞毒性剂，可检测的标记，放射性同位素、发光物质、有色物质、酶或聚乙二醇。

85、在一些实施方案中，本文提供一种抗体偶联物，其中所述抗体可以结合治疗剂、药物前体、肽、蛋白、酶、病毒、脂质、生物反应调节剂、药剂或peg。

86、在一些实施方案中，该抗体可以连接至或融合至治疗剂上，该治疗剂可包括可检测标记物，如放射性标记物、免疫调节剂、激素、酶、寡核苷酸、光活性治疗剂或诊断剂、细胞毒性剂，其可为药物或毒素，超声增强剂，非放射性标记物，它们的组合和其他这类本领域已知的成分。

87、在一些实施方案中，通过将其偶联化学发光化合物，该抗体被可检测地标记。然后，通过检测化学反应过程中产生的发光来确定化学发光物标记的抗原结合多肽的存在。特别有用的化学发光物标记化合物的例子有鲁米诺、异鲁米诺、热性(theromatic)吖啶鎓酯、咪唑、吖啶鎓盐和草酸酯。

88、在一些实施方案中，该抗体也可被可检测地标记，使用荧光发光金属如152eu，或其他的镧系标记。这些金属可使用以下金属螯合基团连接到抗体上，如二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)或乙二胺四乙酸(edta)。将多种基团连接至抗体的技术是公知的，参见，例如，arnon等，“monoclonal antibodies for immunotargeting of drugs in cancertherapy”，in monoclonal antibodies and cancer therapy，reisfeld等(编.)，pp.243-56(alan r.liss，inc.(1985)；hellstrom等，“antibodies for drug delivery”，incontrolled drug delivery(第二版)，robinson等(编)，marcel dekker，inc.，pp.623-53(1987)；thorpe，“antibody carriers of cytotoxic agents in cancer therapy：areview”，in monoclonal antibodies’84：biologica]and clinical appl ications，pinchera等(编)，pp.475-506(1985)；“analysis，results，and future prospective ofthe therapeutic use of radiolabeled antibody in cancer therapy”，in monoclonalantibodies for cancer detection and therapy，baldwin等(编)，academic presspp.303-16(1985)，以及thorpe等，“the preparation and cytotoxic properties ofantibody-toxin conjugates”，immunol.rev.(52：119-58(1982))。

89、在一些实施方案中，本文提供一种融合蛋白，其包含本文描述的抗体或其抗原结合片段。

90、在一些实施方案中，本文提供一种药物组合物，其包括本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白，任选地，还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

91、在一些实施方案中，本文提供的药物组合物为适合于口服施用于胃肠道(gi)的剂型，优选地，所述剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂；或所述药物为适合于通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌内注射，病灶内注射的剂型。

92、在一些实施方案中，本文提供一种试剂盒，其包括本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白，优选地，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、发光物质、有色物质、酶。

93、在一些实施方案中，本文提供所述抗体或其抗原结合片段，其用于治疗疾病，或本文描述的抗体或其抗原结合片段用于治疗疾病用途，或本文描述的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗疾病的药物中用途。

94、在一些实施方案中，本文提供的抗体可与其它治疗剂(例如用于治疗肿瘤或癌症的治疗剂)组合使用。

95、在一些实施方案中，本文提供一种试剂盒，其包括本文提供的抗体或其抗原结合片段和药用载体，和使用说明书，以及任选的其它治疗剂(例如用于治疗肿瘤或癌症的治疗剂)。

96、在一些实施方案中，本文提供的组合物和/或试剂盒中，所述抗体或其抗原结合片段与细胞毒性部分、酶、放射性化合物、细胞因子、干扰素、靶标或报告部分缀合。

97、在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段，能够用于治疗疾病如癌症或肿瘤。

98、在一些实施方案中，本文提供所述抗体或其抗原结合片段用于治疗疾病如癌症或肿瘤的用途。

99、在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗疾病如癌症或肿瘤的药物中用途。

100、在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段可以用于治疗疾病如癌症或肿瘤，包括但不限于多发性骨髓瘤，肺癌(如小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺腺癌，肺鳞癌)等。

101、在一些实施方案中，本文提供人源化cd3抗体的方法及所得的人源化序列。该人源化的抗体序列为基础所制备单克隆抗体和多功能抗体，具有合适的亲和力、高稳定性和良好的细胞杀伤能力。

102、在一些实施方案中，本文提供的该人源化cd3抗体与对照抗体如原始抗体sp34以及其他文献所提供的有较高同源性的cd3抗体相比，在多功能抗体的生物学活性及稳定性方面，显示比其他cd3抗体更好的生物学活性和/或稳定性。

103、在一些实施方案中，本文提供一种多功能抗体及制备方法，该抗体包含：(a)轻链-重链对，该轻链-重链对针对肿瘤细胞或微生物具有特异性；和(b)融合肽，该融合肽包含单链可变片段(scfv)和具有ch2结构域和/或ch3结构域的fc片段，其中该融合肽针对免疫细胞具有特异性。

104、在一些实施方案中，本发明抗体的轻链-重链对或vlm-vhm配对针对肿瘤抗原具有特异性。在一些实施方案中，该肿瘤抗原选自：pd-l1，slamf7，cd38和bcma等。在一些实施方案中，该轻链-重链对或vlm-vhm配对针对较对应的非肿瘤细胞而言在肿瘤细胞上过表达的蛋白具有特异性。

105、在一些实施方案中，该轻链-重链对或vlm-vhm配对针对病毒或细菌具有特异性。一方面，该轻链-重链对或vlm-vhm配对针对内毒素具有特异性。

106、在一些实施方案中，该免疫细胞选自t细胞、cik细胞、nkt细胞、b细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、嗜曙红细胞、嗜碱细胞和肥大细胞。

107、在一些实施方案中，该scfv或vls-vhs配对针对以下抗原具有特异性，该抗原包括例如cd3，cd4，cd8，cd40l，cd152，cd16，cd56，cd94，cd158，cd161，cd19，cd20，cd21，cd40。在一些实施方案中，该抗原为cd3。

108、在一些实施方案中，该轻链通过二硫键与该重链或融合重链结合。在一些实施方案中，该重链通过一个或多个二硫键与该融合肽结合。在一些实施方案中，该融合重链1通过一个或多个二硫键与该融合重链2。在一些实施方案中，该重链或融合重链包含人或者人源化的fc片段。在一些实施方案中，该重链或融合重链的fc片段包含人igg fc片段。在一些实施方案中，该融合肽的fc片段包含人或者人源化的fc片段。在一些实施方案中，该融合肽的fc片段包含人igg fc片段。

109、在某些方面，与野生型抗体片段相比，该重链、融合重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换，该替换在该重链和融合肽之间形成杵-臼结构配对(knobs-into-holes)。该配对可显著提高重链和融合肽的异二聚体配对效率。

110、在某些方面，该重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换，该替换在该重链和融合肽之间形成盐桥配对(salt-bridge)。该配对可显著提高重链和融合肽的异二聚体配对效率。

111、在某些方面，该融合肽中的该ch2结构域位于该scfv片段和ch3结构域之间。一方面，该融合肽不包含ch1结构域。

112、在一个实施例中，本技术还提供一种包含上述任一实施例中的抗体的组合物。一方面，载体为药物载体。

113、另一实施例提供了一种复合体，该复合体包含与一个或多个抗原结合的上述任一实施例中的抗体。