CD3抗原结合片段及其应用的制作方法

文档序号:34299867发布日期:2023-05-31 14:53阅读:来源:国知局

技术特征:

1.抗体或其抗原结合片段,特别是人源化抗体或其抗原结合片段,所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3,所述抗体包括构架区,分别为fr-h1、fr-h2、fr-h3、fr-h4、fr-l1、fr-l2、fr-l3和fr-l4,和互补性决定区(cdr),其中重链可变区的cdr1和cdr2氨基酸序列分别为seq id nos:1和2所示的氨基酸序列,轻链可变区的cdr1、cdr2和cdr3氨基酸序列分别为seq id no:26、27和28所示的氨基酸序列,

2.抗体或其抗原结合片段,特别是人源化抗体或其抗原结合片段,所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3,其中所述抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区包括下述任一项的序列:

3.抗体或其抗原结合片段,特别是人源化抗体或其抗原结合片段,所述抗体特异性结合灵长类如人和/或猴cd3,其中所述抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述重链可变区和轻链可变区分别包含选自下组的氨基酸序列:

4.多特异性抗体,优选双特异性抗体,其包含权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段,以及针对其他抗原和/或其他抗原表位的抗体或抗原结合片段,例如相对于对应的非肿瘤细胞而言在肿瘤细胞上过表达的蛋白;肿瘤抗原,如cd38,bcma,pd-l1,slamf7,claudin18.2或cea;病毒;细菌;和/或内毒素。

5.多肽,包含或选自seq id nos:45-48和50-62任一项的氨基酸序列,或与seq idnos:45-62的至少一个氨基酸序列具有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列;或与seq id nos:45-48和50-62任一项的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个,更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

6.多肽,包含或选自seq id nos:63-70和seq id no:72任一项的氨基酸序列,或与seqid nos:63-70和seq id no:72任一项的至少一个氨基酸序列具有80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高的氨基酸同一性的氨基酸序列;或与seq id nos:63-70和seq id no:72任一项的至少一个氨基酸序列具有一个或多个(优选一个或几个,更优选1、2或3个)氨基酸差异的氨基酸序列。

7.多核苷酸,编码权利要求5或6的多肽。

8.一种抗体,该抗体包括(a)轻链-重链对,该轻链-重链对针对肿瘤细胞或微生物具有特异性;和(b)融合肽,该融合肽包括单链可变片段和单链fc片段,其中所述单链可变片段包含含有权利要求1-3任一项中定义的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区,该融合肽针对免疫细胞具有特异性。

9.权利要求8的抗体,其中fc片段包含选自seq id nos:155-161或192任一项的序列的ch2和/或seq id nos:162-183任一项的序列的ch3。

10.权利要求8或9任一项所述的抗体,其中融合肽包括vhs-接头1-vls-铰链1-ch2-ch3-b,重链包括vhm-ch1-铰链2-ch2-ch3-a,轻链包括vlm-cl。

11.权利要求8-10任一项所述的抗体,其中所述轻链-重链对特异性结合:

12.权利要求8-11任一项所述的抗体,其中所述融合肽特异性结合免疫细胞抗原,例如cd3,如灵长类如人和/或猴cd3。

13.权利要求8-12任一项所述的抗体,其中该重链或融合肽的重链包含人或者人源化的fc片段,例如人igg fc片段,例如igg1、igg2、igg3、igg4、igg5 fc片段。

14.权利要求8-13任一项所述的抗体,其中与野生型抗体比,该重链、融合肽的重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换,该替换在该重链和融合肽之间形成杵-臼结构配对,例如一个ch3结构域上的t366被相对较大的氨基酸残基替换,如酪氨酸(y)或色氨酸(w)替换,另一ch3结构域上的y407被相对较小的氨基酸残基替换,如苏氨酸(t),丙氨酸(a)或缬氨酸(v),例如包含表15的一处或多处替换。

15.权利要求8-14任一项所述的抗体,其中该重链和/或该融合肽的fc片段包含一处或多处替换,1)该替换在该重链和融合肽之间形成盐桥配对,例如该ch3结构域之一含有一处或多处替换,经在生理条件下有正电荷的氨基酸残基替换,而另一ch3结构域包含一处或多处替换,经一个或多个在生理条件下具有负电荷的氨基酸残基替换,例如该带正电的氨基酸残基为精氨酸(r),组氨酸(h)或赖氨酸(k),例如该带负电荷的氨基酸残基可为天冬氨酸(d)或谷氨酸(e),例如被替换的氨基酸残基包括d356、l368、k392、d399和k409中的一个或多个,例如表16的一处或多处替换,2)该替换在该重链和融合肽之间形成二硫键,例如表17的替换,和/或3)该替换导致fc与蛋白a之间的结合能力显著降低,例如一个ch3结构域上的h435和y436分别被替换为精氨酸和苯丙氨酸。

16.权利要求8-15任一项所述的抗体,其中融合肽的vh包括选自seq id nos:45-48和50-62、74、76、78、80、82、84、86、88任一项的序列;融合肽的vl包括选自seq id nos:63-70、72、75、77、79、81、83、85、87、89任一项的序列;融合肽的接头1包括选自seq id nos:120-138任一项的序列;融合肽的铰链1和重链的铰链2包括选自seq id nos:139-147任一项的序列;融合肽的ch2和重链的ch2包括选自seq id nos:155-161或192任一项的序列;融合肽的ch3-b包括选自seq id nos:163、165、167、169、171、173、175、177、179、181、183任一项的序列;重链的ch3-a包括选自seq id nos:162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182任一项的序列;重链的vhm包括选自seq id nos:90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、193任一项的序列;重链的ch1包括seq id nos:154的序列;轻链的vlm包括选自seq id nos:91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115、117、119、194任一项的序列;和/或轻链的cl包括选自seq id nos:148-153任一项的序列。

17.权利要求8-16任一项所述的抗体,其中融合肽的vh和融合肽的vl分别包含选自下组的氨基酸序列:a)seq id nos:45、63;seq id nos:48、63;seq id nos:48、71;seq idnos:49、63;seq id nos:51、71;seq id nos:58、72;seq id nos:60、72;seq id nos:60、73;seq id nos:59、72;seq id nos:61、73;seq id nos:62、73;seq id nos:58、72;seq idnos:74、75;seq id nos:76、77;seq id nos:78、79;seq id nos:80、81;seq id nos:82、83;seq id nos:84、85;seq id nos:86、87;seq id nos:88、89;

18.权利要求8-17任一项所述的抗体,其中:

19.权利要求8-18任一项所述的抗体,其中所述抗体包括y101,y102,y103,y104,y150-8-3,y150-f8-4,y150-f8-6,y150-f8-10,y150-f8-11,y150-f8-13、y150-f8-14、y150-f8-15、和ms-hcd3-ic18,其中按照融合肽vhs-接头1-vls-铰链1-ch2-ch3-b,重链vhm-ch1-铰链2-ch2-ch3-a,轻链vlm-cl各组分的顺序,

20.权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其以小于大约10-8m,例如小于大约10-8m,10-9m、10-10m或更小的kd结合靶标,或以小于大约100nm,例如小于大约10nm、1nm、0.9nm、0.8nm、0.7nm、0.6nm、0.5nm、0.4nm、0.3nm、0.2nm、0.1nm或更小的ec50结合靶标,优选地,所述抗原结合片段选自f(ab')2、f(ab)2、fab'、fab、fv、fd、scfv。

21.一种多核苷酸,其编码权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

22.一种表达载体,其包含权利要求21所述的多核苷酸。

23.一种宿主细胞,其包含权利要求21所述的多核苷酸或权利要求22所述的表达载体。

24.制备权利要求1-4和8-19任一项所述抗体的方法,其包括将权利要求21所述的多核苷酸或权利要求22所述的表达载体引入到宿主细胞中,以制备所述抗体。

25.抗体偶联物,其包含权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分,优选地,所述偶联部分选自纯化标签(如his标签)、细胞毒性剂,可检测的标记,放射性同位素、发光物质、有色物质、酶或聚乙二醇。

26.融合蛋白,其包含权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

27.一种药物组合物,其包括权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段,权利要求25所述的抗体偶联物,或权利要求26所述的融合蛋白,任选地,还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。

28.权利要求27所述的药物组合物,所述药物组合物为适合于口服施用于胃肠道(gi)的剂型,优选地,所述剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、乳剂、微乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂;或所述药物为适合于通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌内注射,病灶内注射的剂型。

29.试剂盒,其包括权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段,权利要求25所述的抗体偶联物,或权利要求26所述的融合蛋白,优选地,所述试剂盒还包括第二抗体,其特异性识别权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段,权利要求25所述的抗体偶联物,或权利要求26所述的融合蛋白;任选地,所述第二抗体还包括可检测的标记,例如放射性同位素、发光物质、有色物质、酶。

30.权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段,其用于治疗疾病,或权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段用于治疗疾病用途,或权利要求1-4和8-19任一项所述的抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗疾病的药物中用途。

31.权利要求30所述的抗体或其抗原结合片段或用途,其中所述疾病包括癌症或肿瘤,例如多发性骨髓瘤,例如肺癌,如小细胞肺癌,非小细胞肺癌,肺腺癌,肺鳞癌。


技术总结
本文提供人源化和多功能抗体CD3抗体,其中包括的CD3抗体的重链可变区包含SEQ ID NOs:1‑3中任一条的氨基酸序列或其变体序列,轻链可变区包含SEQ ID NOs:26‑28中任一条的氨基酸序列或其变体序列。本申请还提供了一种多功能抗体,该抗体包括(a)轻链‑重链对,该轻链‑重链对针对肿瘤细胞或微生物具有特异性;和(b)融合肽,该融合肽包括单链可变片段和具有CH2结构域和/或CH3结构域的Fc片段,其中该融合肽针对免疫细胞具有特异性。本申请的抗体具有改善的生物学活性、热稳定性和/或耐酸性。

技术研发人员:张敬,方丽娟,严永祥,曾亮,周鹏飞
受保护的技术使用者:武汉友芝友生物制药股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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