技术特征：
1.检测海豚链球菌的实时荧光mira引物组，其特征在于，所述引物组由引物1、引物2和探针1组成；所述引物1为如下(a1)或(a2)：(a1)seqidno.1所示的单链dna分子；具体为5
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taaagcattagaagcggctaagaaagaag-3’(a2)将seqidno.1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqidno.1具有相同功能的dna分子；所述引物2为如下(a3)或(a4)：(a3)seqidno.2所示的单链dna分子；具体为5
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caatagttgcttcaagttctgctttttca-3’(a4)将seqidno.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqidno.2具有相同功能的dna分子；所述探针1为如下(a5)或(a6)(a5)seqidno.3所示的单链dna分子，具体为5
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tttccaattcagcttttgtttctgctagtagtttcaaggtctttag-3’；且探针1的5’端第29个碱基上标记i6famdt//idsp//ibhq1dt；(a6)seqidno.3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqidno.3具有相同功能的dna分子，且探针5’端第29个碱基上标记i6famdt//idsp//ibhq1dt。2.检测海豚链球菌的mira-lfd引物组，其特征在于，所述引物组由引物1、引物2和探针2组成；所述的引物1为如下(a1)或(a1)(a1)seqidno.1所示的单链dna分子；具体为5
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taaagcattagaagcggctaagaaagaag-3’(a2)将seqidno.1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqidno.1具有相同功能的dna分子；所述引物2为如下(a3)或(a4)之一的5'末端标记biotin；(a3)seqidno.2所示的单链dna分子；具体为5
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caatagttgcttcaagttctgctttttca-3’(a4)将seqidno.2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与seqidno.2具有相同功能的dna分子；所述探针2为seqidno.3所示的单链dna分子，且在其5'端起第30个碱基上标记idsp，5'末端标记6-fam，3'末端标记为c3spacer。3.含有权利要求1或2所述引物组的实时荧光mira或mira-lfd试剂盒。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，实时荧光mira或mira-lfd反应体系如下：14.7μl的abuffer，1μl的10μm上游引物，1μl的10μm下游引物，0.5μl的10μm探针，2μl的海豚链球菌dna模板，4.55μl的ddh2o以及1.25μl的bbuffer。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，实时荧光mira或mira-lfd扩增反应在温度为42℃，反应时间为20min。6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括配套检测mira扩增产物的核酸检测试纸条；
所述试剂条包括与所述探针标记基团结合的抗体或与所述引物2标记基团结合的抗体。7.一种鉴定或辅助鉴定待测菌是否为海豚链球菌的方法，包括如下步骤：用权利要求1或2所述引物组对待测菌进行mira扩增，检测mira扩增产物；再用侧流层析试纸条检测扩增产物，所述方法为非诊断目的。8.一种鉴定或辅助鉴定待测样本是否感染海豚链球菌或含有海豚链球菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：用上述引物对待测样本进行mira扩增，检测mira扩增产物；再用侧流层析试纸条检测扩增产物；所述方法为非诊断目的，所述mira扩增的模板为待测菌或待测样本的核酸。
技术总结
本发明公开了一种检测海豚链球菌的实时荧光MIRA和MIRA-LFD引物组及检测方法，属于分子生物学领域；所述引物组包括SEQ IDNO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两种方法的灵敏性均为102cfu/ml菌液提取的DNA，远远低于海豚链球菌的发病浓度。因此，本发明的两种方法能快捷、高效、灵敏的检测海豚链球菌，为海豚链球菌的鉴别诊断提供有效技术手段。菌的鉴别诊断提供有效技术手段。菌的鉴别诊断提供有效技术手段。
技术研发人员：齐洁 宋建强 王义芬 贺艳 张全启
受保护的技术使用者：中国海洋大学
技术研发日：2022.12.28
技术公布日：2023/3/7