一种比伐芦定杂质的合成方法与流程

本发明涉及一种多肽药物合成领域，是一种人工合成的抗凝血药物，是水蛭素20肽类似物的杂质合成方法。

背景技术：

1、比伐芦定是一种人工合成的抗凝血药物，是水蛭素的20肽类似物，于2000年获准在美国上市。比伐芦定能与凝血酶催化位点和阴离子外结合位点发生特异性结合，直接抑制凝血酶的活性，从而抑制凝血酶所催化和诱导的反应，其作用是可逆的。与普通肝素不同，比伐芦定不需要辅因子来协助其发挥抗凝特性，比伐芦定靶向抑制凝血酶(血小板激动剂)，从而有效降低血小板反应性， 这是一种对接受皮冠状动脉介入治疗的患者非常有益的生物学特性。比伐芦定主要作为抗凝剂用于成人择期经皮冠状动脉介入治疗(pci)。比伐芦定上市剂型为粉针剂，商品名angiomax，规格250mg。

2、比伐芦定在其生产和储存过程中会产生多种杂质，天冬酰亚胺的形成被认为是肽合成中的一个严重副反应，天冬氨酰亚胺的形成既可以是酸又可以是碱催化的，影响固相和液相的反应。为了保证比伐芦定药品的安全性和有效性，必须控制产品中杂质的含量。杂质的发现与合成对于比伐芦定原料药的质量控制具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是为解决现有合成过程中杂质多，纯度和收率低，成本昂贵，操作步骤繁琐等问题，提供一种优化的比伐芦定杂质的合成方法，该方法此方法提高了比伐芦定杂质的粗肽纯度，极大降低纯化的难度，收率也相应得到了提高。

2、为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

3、一种比伐芦定杂质的合成方法，其特点是，所述的比伐芦定杂质序列为：

4、h-d-phe-pro-arg-pro-gly-gly-gly-gly-asp-gly-asp-phe-glu-glu-ile-pro-glu-glu-tyr-leu-oh；通过固相合成法，选择2% dbu/dmf作为脱保护试剂，从碳端到氮端依次按照顺序偶联比伐芦定杂质氨基酸，其中12位选择fmoc-asp(oall)-oh，合成结束后加入2%的dbu/dmf溶液，进行成环操作，最后经裂解沉淀，得到比伐芦定杂质。

5、本发明所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：偶联比伐芦定杂质氨基酸时，20位选择boc-d-phe-oh。

6、本发明所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：合成各个氨基酸所用的缩合剂为dic/hobt，hbtu/hobt/diea，pybop/hobt/diea中的一种或多种。

7、本发明所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：所用的反应溶剂为dcm、dmf、nmp、dmso中的一种或多种组合。

8、本发明所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：采用的裂解试剂为：tfa:tis:h2o=90:5:5。

9、申请人在比伐芦定研发过程中发现，在比伐芦定生产和储存过程中会产生一种天冬酰亚胺类杂质，即比伐芦定残基中11 位gly和12位asn之间发生亲核取代反应形成五元环。本发明将比伐芦定序列的第12位氨基酸fmoc-asn(trt)-oh替换为fmoc-asp(oall)-oh；再按顺序依次固相合成比伐芦定杂质序列的其他位点氨基酸，得到比伐芦定杂质。

10、与现有技术相比，本发明上有以下有益效果：

11、本发明比伐芦定杂质的合成方法操作简单，提高了比伐芦定杂质的粗肽纯度，极大降低纯化的难度，收率也相应得到了提高。

技术特征：

1.一种比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于：比伐芦定杂质的序列为：

2.根据权利要求1所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于，偶联比伐芦定杂质氨基酸时，20位选择boc-d-phe-oh。

3.根据权利要求1所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于，合成各个氨基酸所用的缩合剂为dic/hobt，hbtu/hobt/diea，pybop/hobt/diea中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于，所用的反应溶剂为dcm、dmf、nmp、dmso中的一种或多种组合。

5.根据权利要求1所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于，采用的裂解试剂为：tfa:tis:h2o=90:5:5。

技术总结
本发明公开一种比伐芦定杂质的合成方法，属于多肽合成技术领域。本发明通过固相合成法，选择2%DBU/DMF作为脱保护试剂，从碳端到氮端依次按照顺序偶联比伐芦定杂质氨基酸，比伐芦定杂质的序列为：H‑D‑Phe‑Pro‑Arg‑Pro‑Gly‑Gly‑Gly‑Gly‑Asp‑Gly‑Asp‑Phe‑Glu‑Glu‑Ile‑Pro‑Glu‑Glu‑Tyr‑Leu‑OH；其中12位选择Fmoc‑Asp(OAll)‑OH，合成结束后加入2%的DBU/DMF溶液，进行成环操作，经裂解沉淀，得到比伐芦定杂质。本发明方法，提高了粗肽纯度，极大降低了物料成本和纯化成本。

技术研发人员：杨启萌,周奕
受保护的技术使用者：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16